肾癌中原癌基因EphB4及其蛋白表达的研究

目的：研究人肾癌组织中EphB4基因及其蛋白的表达及其在肾癌发生、发展中的作用和临床意义。方法：取液氮保存的原发性肾癌新鲜标本40例,相应癌旁组织（阴性切缘）40例,正常肾脏组织30例,采用半定量逆转录PCR（RTPCR）和免疫组化SP法检测EphB4基因及其蛋白表达水平,并结合临床病理资料进行分析。结果：EphB4基因在肾癌组织和癌旁组织中都表达,且癌旁表达低于肿瘤表达,差异有统计意义（P〈0．05）;正常肾脏组织不表达（P〈0．01）;40例肾癌标本中,25例EphB4蛋白表达阳性,阳性率为62．5％,40癌旁组织中,10例EphB4蛋白表达阳性,阳性率为25．0％;两者有显著差异性（P〈0．05）。EphB4蛋白的表达与患者的性别、年龄无关（P〉0．05）,但与肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度、淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。结论：原癌基因EphB4及其蛋白在人肾癌组织中过度表达,且与肾癌的发生,发展相关,可能成为肾癌预后的侯选标志物之一。     

肝细胞癌中SFRP1和APC基因启动子甲基化与其mRNA的表达

目的探讨肝细胞癌（HCC）中SFRP1和APC基因启动子甲基化状态及其mRNA表达的关系。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术，检测30例肝细胞癌（HCC组）及相应的癌旁组织（癌旁组）和10例正常肝组织（正常对照组）中SFRP1及APC基因启动子甲基化状态和mRNA的表达水平，分析甲基化与某些临床参数与mRNA表达的关系。结果HCC组、癌旁组及正常对照组中的SFRP1和APC基因启动子甲基化率分别是11／30，4／30，0／10和14／30，5／30，0／10；HCC组明显高于其余两组（P〈0．05）。SFRP1基因启动子甲基化与临床资料无关（P〉0．05）；APC基因启动子甲基化与年龄（〈60）岁和癌肿无假包膜有关（P〈0．05）。HCC组SFRP1基因mRNA表达明显低于其余两组（P〈0．05），各组APC基因mRNA表达差异无显著性。两基因甲基化之间无相关性。结论SFRP1和APC基因启动子甲基化与HCC的形成和进展有关，但HCC组织中基因甲基化与mRNA表达的关系尚不明确。     

转移抑制基因Kiss-1和KAI-1在胃癌组织中表达的原位杂交研究

目的研究胃癌及其癌旁组织Kiss-1和KAI-1转移抑制基因信使核糖核酸（Kiss-1mRNA和KAI-1 mRNA）的表达水平及其临床意义。方法将49例胃癌组织和20例癌旁组织常规制作石蜡包埋切片．用Kiss-1 mRNA和KAI-1 mRNA染色方法作为原位杂交染色法。结果胃癌组织中Kiss-1 mRNA和KAI-1 mRNA表达阳性率明显低于癌旁组织（P〈0．01）；正常至轻度不典型增生癌旁组织两者Kiss-1 mRNA和KAI-1 mRNA表达阳性率及其评分明显高于中至重度不典型增生病例（P〈0．05，P〈0．01）。侵袭深度T1～T2、区域淋巴结无转移、第1站淋巴结转移及无远处转移的胃癌Kiss-1 mRNA和KAI-1 mRNA表达阳性率及其评分明显高于侵袭深度T3～T4、区域淋巴结有转移、第2站或第3站淋巴结转移及有远处转移的病例（P〈0．05，P〈0．01）；但两者的表达与胃癌其他临床病理特征无明显关系。胃癌组织中Kiss-1 mRNA表达评分与KAI-1 mRNA表达评分呈密切正相关（r=0．53，P〈0．01）。结论Kiss-1 mRNA和KAI-1 mRNA表达可能是反映胃癌侵袭和转移潜力及预后的重要生物学标记物，对胃良性病变者检测Kiss-1 mRNA和／或KAI-1 mRNA可能对早期发现及预防胃癌发生有重要临床意义。     

EGFL7和VEGF在肾透明细胞癌血管生成及转移中的相关性研究及临床意义

目的：探讨表皮生长因子样结构域7（EGF_1ikedomain7,EGFL7）、血管表皮生长因子（vascularen—dothelialgrowthfactor,VEGF）在肾透明细胞癌中的表达及其与肾癌血管生成和转移的关系。方法：选取87例行根治性肾切除的肾透明细胞癌患者癌及癌旁组织标本,采用免疫化学SP法检测EGFL7、VEGF的表达,并计数血管内皮细胞表面抗原（CD34）标记的血管密度（MVD）;同时选取46例癌及癌旁组织标本,采用RT—PCR检测EGFL7mRNA的表达。结果：EGFL7和VEGF阳性表达率及MVD值在癌组明显高于癌旁组（P〈O．05）,且EGFL7、VEGF与MVD在肾透明细胞癌组织中的表达呈正相关,并与肿瘤分级、分期显著相关（P〈0．05）;EG—FL7mRNA阳性表达率明显高于癌旁组织（P〈O．05）,并与肿瘤分级、分期相关（P〈O．05）。结论：肾透明细胞癌组织中EGFL7、VEGF的表达与肾癌血管生成有关,两者可能协同肿瘤新生血管的生成。     

载脂蛋白M在结直肠癌组织中的表达及其临床病理相关性

目的探讨载脂蛋白M（apoM）在结直肠癌组织中表达水平的变化及其临床相关性。方法采用荧光定量PCR检测20例结直肠癌组织及其癌旁组织中apoM的mRNA表达：采用免疫组织化学方法检测7例正常肠黏膜、6例肠炎组织、10例肠息肉、20例结直肠癌及其癌旁组织中apoM的蛋白表达水平。结果apoMmRNA在结直肠癌组织和癌旁组织中均有表达．前者相对表达量显著低于后者（0．05±0．01比0．19±0．05,P〈0．05）。无淋巴结转移者apoMmRNA表达水平显著低于有淋巴结转移者（P〈0．01）。结直肠癌组织中apoM蛋白表达中位分值为5．50．显著低于癌旁组织（10．5,P〈0．05）、肠炎组织（9．75,P〈0．05）、肠息肉组织（11．0,P〈0．01）及正常黏膜组织（10．5,P〈0．05）。未见结肠癌组织中apoM蛋白水平与患者临床病理特征有关（P〉0．05）。结论载脂蛋白apoM在肠癌组织中的mRNA及蛋白水平较正常组织及良性病变组织显著降低。结直肠癌组织中apoMmRNA表达水平与淋巴结转移有关。     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体mRNA在肝癌中的表达及其意义

目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体的4种受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在肝细胞癌肝组织中的表达状况。方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测40例人肝细胞癌组织、相应癌旁肝组织、23例正常人肝组织中DR4、DR5、DcR1、DcR2的mRNA表达率及表达水平。结果 （1）40例肝癌组织、癌旁组织、23例正常肝组织DR4、DR5的mRNA的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）40例癌旁组织、23例正常肝组织DcR1、DcR2表达水平明显高于40例肝癌组织（P〈0．05）；（3）DR4和DR5mRNA在肝细胞癌组织中表达水平与患者的年龄，肿瘤大小，有无包膜，分级程度，AFP水平，HBsAg，有无肝硬化有关系。结论 肝癌组织中存在TRAIL受体的表达，与其在正常肝组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．05）；DR4、DR5表达水平与肝癌的病理状况有关系。     

肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白表达的研究

目的实验证明乙酰肝素酶在多种恶性肿瘤中有高表达，并可能在恶性肿瘤细胞侵袭及转移中发挥重要作用。本研究探讨肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白表达水平及其与肾癌发生、发展和转移的关系。方法应用荧光定量逆转录聚合酶链式反应和免疫组化Envision二步法分别检测30例新鲜肾癌和癌旁正常组织中乙酰肝素酶mRNA的表达水平及62例石蜡包埋肾癌组织中乙酰肝素酶蛋白的表达水平。结果乙酰肝素酶mRNA在肾癌中阳性表达11例（36．7％），乙酰肝素酶蛋白在肾癌中阳性表达15例（24．2％），其表达率与肿瘤的病理分级、临床分期和淋巴结转移有相关性（P〈0．05）。结论乙酰肝素酶基因和蛋白的异常表达可作为肾癌发生和发展的预后参数。     

人垂体瘤转化基因在非小细胞肺癌组织中的表达

目的 从mRNA和蛋白质水平探讨人垂体瘤转化基因（hPTTG）表达和非小细胞肺癌（NSCLC）的关系，为肺癌基因诊断和基因治疗的研究提供理论依据。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测38例肺癌组织和癌旁正常肺组织中hPTTG mRNA的表达，再应用免疫组织化学方法和Western blot检测肺癌组织中hPTTG蛋白的表达，同时对实验对象进行随访资料生存分析，绘制生存率曲线，探讨与肺癌患者生存时间的关系。结果 RT-PCR显示肺癌组织中hPTTG mRNA表达明显高于癌旁正常肺组织（P〈0．05），不同类型和不同分化程度肺癌组织中hPTTG mRNA水平差异有统计学意义（P〈0．05），Ⅲ期肺癌组织中hPTTG mRNA表达明显高于Ⅰ期＋Ⅱ期（P〈0．05）；免疫组织化学显示肺癌组织中hPTTG蛋白表达明显高于癌旁正常肺组织（P〈0．05）；腺癌组织中hPTTG蛋白表达高于鳞癌组织；Western blot显示肺癌组织中hPTTG蛋白表达明显高于癌旁正常肺组织；生存分析方法显示hPTTG mRNA高表达者生存时间短于低／无表达者（P〈0．05，n=36）；用噻唑蓝（MTT）比色法观察生长曲线检测数据表明hPTTG的反义RNA表达载体转染组细胞的增殖明显比对照组细胞和空载体转染组细胞缓慢。结论 hPTTG表达增加与NSCLC发生、发展、浸润及转移有关，可作为判断NSCLC生物学行为的参考指标；hPTTG的反义RNA表达载体对SPC-A1肺癌细胞株的生长具有一定的抑制作用。     

Dicer表达与肾透明细胞癌发生及转移的关系

目的：探讨Dicer在肾透明细胞癌发生及转移中的作用。方法：选取正常肾小管上皮细胞株HKC、非转移性肾透明细胞癌细胞株769P、转移性肾透明细胞癌细胞株Caki-1以及36例肾透明细胞癌手术标本（其中11例已发生远处转移）和相应癌旁正常肾组织,应用实时定量PCR和Western blot方法检测Dicer在肾透明细胞癌细胞株和组织中mRNA和蛋白的表达情况,并分析Dicer的mRNA水平与临床病理资料的关系。结果：和正常肾小管上皮细胞株HKC相比;Dicer的mRNA水平在肾透明细胞癌细胞株769-P和Caki-1中均降低（P〈0．001）,而转移性肾透明细胞癌细胞株Caki-1比非转移性肾透明细胞癌细胞株769-P表达水平更低（P〈0．001）;和癌旁正常肾组织相比,Dicer的mRNA水平在‘肾透明细胞癌手术标本中明显降低（P〈0．001）,且已发生远处转移的。肾癌标本比未发生远处转移的肾癌标本表达水平更低（P=0．04）;Dicer在细胞株和组织中的蛋白水平的变化与mRNA水平的变化一致（P〈0．001）;Dicer的mRNA水平在不同年龄、性别、组织学分级、肿瘤大小及T分期组间无统计学差异（P〉0．05）。结论：Dicer表达降低可能在。肾透明细胞癌的肿瘤发生中发挥作用,且其表达的进一步下降可能与肾透明细胞癌的远处转移有关。     

CD40分子在肾癌组织中的表达研究

目的探讨肾癌组织中CD40分子的表达与癌发生浸润转移的关系。方法用免疫组织化学二步法（Envision法）对甲醛固定石蜡包埋的肾细胞癌组织（32例）和癌旁组织（10例）中CD40的表达情况进行研究，并分析CD40分子表达水平与肾癌临床分期、病理分级和发生淋巴结转移的相关性。结果CD40在肾细胞癌组织中表达的阳性率为87．5％，与肾癌癌旁组织组相比，具有显著性差异（P〈0．01）；CD40的阳性过度表达与肿瘤临床分期、病理组织学分级和淋巴结转移显著相关（P〈0．05）。结论CD40分子在肾癌中的异常表达可为肾癌的诊断、治疗及指导预后提供实验依据，并为进一步研究肾癌的生物学，尤其是为抑制Fas和TNFR介导的细胞凋亡与基因治疗肾细胞癌打下基础。     

bcl-2、cyclinD1、P27~(kip1)在肾癌中的表达及相关性

目的探讨bcl-2、cyclinD1、p27kip1 mRNA水平在肾细胞癌(RCC)中的表达及其意义。方法采用RT-PCR半定量方法检测42例肾癌患者(透明细胞癌33例,非透明细胞癌9例)癌组织和10例正常肾组织中bcl-2、cyclinD1、p27kip1 mRNA的表达情况。结果 42例肾癌标本中bcl-2 mRNA、cyclinD1 mRNA表达的中位值(分别为0.56、0.65),均显著高于正常肾组织(分别为0.13、0.15)(P0.05);而p27kip1mRNA在肾癌中表达的中位值0.46,显著低于正常组织(0.86)(P0.05)。在肾癌临床分期中bcl-2在Ⅰ+Ⅱ期肾癌组织中表达高于Ⅲ+Ⅳ期(P0.05),cyclinD1在Ⅰ+Ⅱ期肾癌组织中表达低于Ⅲ+Ⅳ期(P0.05),p27kip1 mRNA表达量随着临床分期的升高而降低(P0.05);bcl-2、cyclinD1在非透明细胞癌组中表达量分别为0.39±0.18、0.55±0.08,低于透明细胞癌组的0.58±0.19、0.66±0.08(P0.05),p27kip1在透明细胞癌组和非透明细胞癌组中表达量(P0.05)无差异。偏相关分析示P27kip1与cyclinD1之间相关系数为-0.57(P0.01),p27kip1与bcl-2之间相关系数为0.44(P0.01);而cyclinD1与bcl-2之间相关系数为-0.06,无相关性(P0.05)。结论 bcl-2、cyclinD1高表达和p27kip1低表达与肾癌的发生、发展有密切关系;检测bcl-2、cyclinD1、p27kip1 mRNA可作为诊断肾癌的参考指标;p27kip1与cyclinD1负相关、与bcl-2正相关,而cyclinD1与bcl-2之间无相关性。     

P63蛋白在肾盂移行上皮细胞癌和肾细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨P63基因在肾盂移行细胞癌（renal transitional cell carcinoma，RTCC）和肾细胞癌（renal cell carcinoma，RCC）组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学SP法检测40例RTCC、50例RCC、10例正常肾组织中P63的表达，并分析P63表达与RTCC及RCC病理分级、临床分期、病理类型间的关系。结果正常。肾组织、RTCC、RCC中P63的阳性表达率分别为30％（3／10）、95％（38／40）、0％（0／50），组间差异有统计学意义（P〈0．01）；RTCC组中G1级与G2级P63的强阳性、中度阳性表达率显著高于G3级（P〈0．05）；Ta-T1期以P63强阳性为主（66．7％），随RTCC浸润程度的增加，P63染色强度逐渐减弱；T2期P63强阳性表达率为42．9％，T3-T4期降至0；RCC组中，所有肿瘤无论组织类型、级别、分期，P63表达均呈阴性。结论P63在RTCC中高表达，与RTCC病理分级、临床分期密切相关；P63可能参与RTCC的发生、发展，是评估RTCC预后的潜在因素之一；P63在RCC中不表达，可作为将RTCC从RCC中鉴别出来的有用指标之一。     

Fas配体诱导淋巴细胞凋亡与肾癌免疫攻击作用

目的　探讨Fas配体 (FasL)诱导淋巴细胞凋亡与肾癌免疫攻击作用的关系。　方法　采用免疫组化技术检测 4 4例肾癌组织FasL表达及肿瘤周围浸润淋巴细胞 (TIL)凋亡情况 ,并应用肾癌细胞株 786 0、GRC 1与JurkatT淋巴细胞共培养检测T细胞凋亡率。SP法检测Ki6 7表达 ,评价肾癌预后。　结果　 (1) 4 4例肾癌组织FasL表达阳性率 4 6 .5 % ,高于正常肾组织的 2 3.2 % ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。随肾癌分期增加 ,FasL表达阳性率增加。肾癌FasL表达率与Ki6 7表达率呈显著正相关 (r =0 .93,P <0 .0 1)。 (2 )肾癌组织TIL凋亡率为 33.9% ,高于正常肾组织的3.5 % ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。肾癌FasL表达率与TIL凋亡率呈显著正相关 (r =0 .96 ,P <0 .0 1)。 (3) 786 0FasL表达率 18.6 % ,GRC 1表达率 2 .3% ,二者差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。Ju rkat细胞与 786 0细胞共培养的凋亡率 14 .9% ,与GRC 1共培养的凋亡率 1.3% ,二者差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。中和抗体NOK 2中和 786 0细胞FasL后 ,与之共培养的Jurkat细胞凋亡率显著减少 (P <0 .0 1)。　结论　肾癌组织FasL表达增高 ,以此诱导淋巴细胞凋亡 ,实现对宿主的免疫攻击。     

STAT3及其磷酸化在食管鳞癌组织中的表达及其意义

目的 检测食管鳞癌组织中信号转导子和转录激活子3( STAT3)在mRNA、蛋白质和蛋白质磷酸化3种水平的表达,探讨其在食管鳞癌发生、发展、浸润、转移中的作用。方法 检测43例食管鳞癌组织中的STAT3 mRNA、STAT3和磷酸化STAT3( pSTAT3)的表达,并与相应癌旁正常食管组织作对照研究,分析STAT3 mRNA、STAT3和pSTAT3的表达与临床病理参数的关系。结果 43例实验样本中(1)食管鳞癌组织中STAT3 mRNA相对表达强度比值(1.43±0.59)较癌旁组织的比值(0.98±0.47)明显增高(P＜0.05);(2)食管鳞癌组织中STAT3、pSTAT3表达(2.16±0.39、1.40±0.15)也都显著高于癌旁组织(1.87±0.29、1.25±0.13,P＜0.05);(3)食管鳞癌组织中STAT3mRNA、STAT3和pSTAT3在肿瘤不同分化级别中表达差异有统计学意义,分化级别越低,表达水平越高(P＜0.05),并与肿瘤分化级别呈负相关(-1 ＜r＜-0.301,P＜0.05);它们在TNM分期中Ⅲ期组的表达均高于Ⅰ～Ⅱ期组(P＜0.05),伴有淋巴结转移组表达也都高于无淋巴结转移组(P＜0.05),并与两者呈正相关(两者均为0.301 ＜r＜1,P＜0.05);但未发现它们在性别、年龄、家族史、吸烟史中差异有统计学意义(P＞0.05)。结论 食管鳞癌组织中STAT3磷酸化异常激活后,导致STAT3mRNA、STAT3和pSTAT3的高表达,与食管鳞癌的分化、浸润、转移相关。     

Localized renal-cell carcinoma: detection of abnormal cells in peritumoral tissue

Summary To spare organ function, partial resection of early diagnosed renal-cell carcinoma (RCC) is applied for well-localized and small-volume RCC with increasing frequency, although recurrence of the tumor in the same kidney is occasionally observed. The aim of the present study was to establish objective prognostic parameters that would allow the selection of tumors suitable for an organ-saving procedure. Of the 160 patients undergoing a radical nephrectomy, 67 were included in this study. In 7/45 patients with lymph-node dissection (15.6%), clinical staging revealed a false-negative lymph-node status. By means of conventional histopathology, multifocality could be demonstrated in 2/67 patients (3%); in 1/67 patients (1.5%), the ipsilateral adrenal gland was unexpectantly tumor-involved. Both tumor tissue and normal peritumoral tissue were examined for the presence of premalignant and tumor cells on the basis of DNA ploidy and of the expression of the tumor-associated G250 antigen, which is specifically expressed at the surface of renal cancer cells. In 40/67 (59.1%) peritumoral tissue specimens, cells with an abnormal DNA content could be observed using automated image analysis. In 12/67 cases (18%), cells obtained from peritumoral tissue also showed an aneuploid DNA histogram; 4/67 (6%) had a tumor-correlated DNA ploidy. Additionally, 38/67 (56.9%) of these tissues, histopathologically classified as normal, contained cells expressing the G250 antigen. These observations were independent of the stage or histological grade of the tumor. These data indicate that classic pathological parameters for tumor staging are insufficient for the detection of multifocality, occurring in more than 15% of cases. Additionally, it was shown that examination of tissue adjacent to the RCC allowed a specific detection of abnormal cells revealing abnormal ploidy or altered expression of tumor-associated antigens as compared with normal renal tissue in nearly 60% of cases investigated. The clinical relevance of this observation remains to be determined.     

肾细胞癌中Mina53的表达及其与临床病理及预后的关系

目的 探讨肾细胞癌组织中Mina53的表达水平及其与临床病理及预后的关系.方法 采用RT-PCR技术测定96例肾细胞癌组织及20例癌旁正常肾组织中Mina53的表达,免疫组化法测定其蛋白水平的表达,分析其结果与临床病理及预后的关系.结果 Mina53平均模板量在肾细胞癌组织中的表达明显高于正常肾组织的表达(P＜0.01),且在Ⅲ期、Ⅳ期肾细胞癌组织中的表达明显高于Ⅰ期、Ⅱ期的表达水平(P＜0.01),Mina53蛋白在肾细胞癌组织中的表达水平明显高于其在正常肾组织的表达水平(P＜0.01);Mina53高表达者的预后较低表达者明显要差(P＜0.01).结论 Mina53基因及蛋白的高表达与肾细胞癌临床病理分期有关,其表达水平越高,预后越差,Mina53有望成为预后判断的新指标.     

基质金属蛋白酶(MMP)9、MMP2 mRNA及基质金属蛋白酶抑制剂2 mRNA在人膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的探讨膀胱移行细胞癌中基质金属蛋白酶（MMP）9、MMP2及基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP2）mRNA表达与膀胱肿瘤恶性程度和侵袭性之间的关系及其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测36例膀胱移行细胞癌及5例正常膀胱组织MMP9、MMP2、TIMP2mRNA的表达。结果MMP9、MMP2mRNA随着肿瘤分级分期的增高，表达明显增强[x^-值（MMP9）G1：1．218，G2：1．681，G3：1．811；T2～T4：1．840，Tis～T1：1．399；P〈0．01；（MMP2）G1：1．323，G2：1．694，G3：2．060；T2～T4：1．950，Tis-T1：1．505；P〈0．01]，且明显高于正常膀胱组织中的表达[互值（MMP9）0．455，（MMP2）0．461；P〈0．01]。TIMP2mRNA随肿瘤分级的增高而明显减少（x^-值：G1：1．489，G2：1．391，G3；0．580；P〈0．01）。结论（1）MMP9、MMP2mRNA的高表达与BTCC的恶性程度呈正相关；（2）TIMP2mRNA的表达与BTCC的恶性程度呈负相关。