质粒PIJ702转化天蓝淡红链霉菌SIPI1482菌种的条件研究

天蓝淡红链霉菌ＳＩＰＩ１４８２是一株蒽环类抗生素柔红霉素的产生菌，在建立该菌种基因工程研究所需的载体宿主系统的研究中，发现从变青链霉菌分离的质粒ＰＩＪ７０２不能直接转化ＳＩＰＩ１４８２菌种，经排除ＳＩＰＩ１４８２菌种自身内含质粒，试验了热休克衰减ＤＮＡ酶活性，不同时间培养的菌丝体制备的原生质体，ＰＥＧ１０００的浓度以及硫链丝菌素选择时间等因素对ＰＩＪ７０２转化ＳＩＰＩ１４８２菌种的影响，证实上述绪     

塞替派诱发人支气管上皮细胞恶性转化的基因突变

目的　了解药物致癌过程中的基因突变情况。方法　利用以塞替派为致癌原诱导永生化人支管上皮细胞 (ＢＥＡＳ 2Ｂ)发生恶性转化建立的癌前转化细胞 (ＢＥＡＳ ＴＥ)以及从软琼脂上筛选到了克隆化多倍体细胞 ,沿转化细胞代龄进行了转化进程中ｐ5 3、ｐ16和Ｋｉ ｒａｓ基因突变情况的动态观察。结果　ｐ5 3、Ｋｉ ｒａｓ基因存在多位点、ｐ16基因单位点的的碱基突变。结论　ｐ5 3和Ｋｉ ｒａｓ基因的多位点突变是塞替派诱导细胞转化过程中发生的重要分子事件 ,ｐ16基因非编码区单个碱基的缺失是细胞转化过程中的次要分子事件塞替派诱发人支气…     

对羟基苯乙酰胺合成工艺改进

对羟基苯乙酰胺合成工艺改进申永存，邹淑静（武汉化工学院制药教研室，湖北４３００７４）ＩＭＰＲＯＶＥＤＳＹＮＴＨＥＳＩＳＯＦｐ－ＨＹＤＲＯＸＹＰＨＥＮＹＬＡＣＥＴＡＭＩＤＥ￥ＳＨＥＮＹｏｎｇ－Ｃｕｎ；ＺＯＵＳｈｕ－Ｊｉｎｇ（ＷｕｈａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅ...     

对羟基苯甲醛的氧化合成

对羟基苯甲醛的氧化合成王立新，唐强，蒋耀忠（中国科学院成都有机化学研究所，成都６１００４１）ＳＹＮＴＨＥＳＩＳＯＦｐ－ＨＹＤＲＯＸＹＢＥＮＺＡＬＤＥＨＹＤＥＢＹＯＸＩＤＡＴＩＯＮ￥ＷＡＮＧＬｉ－Ｘｉｎ；ＴＡＮＧＱｉａｎｇ；ＪＩＡＮＧＹａｏ－Ｚｈｏｎｇ...     

血液中唾液酸的提取及结晶纯化

血液中唾液酸的提取及结晶纯化高剑峰，冯万祥（华东理工大学生化研究所，上海２００２３７）ＩＳＯＬＡＴＩＯＮＡＮＤＣＲＹＳＴＡＬＬＩＺＡＴＩＯＮＯＦＳＩＡＬＩＣＡＣＩＤＦＲＯＭＰＩＧＢＬＯＯＤ￥ＧＡＯＪｉａｎ－Ｆｅｎｇ；ＦＥＮＧＷａｎ－Ｘｉａｎｇ（Ｅａｓ...     

表达结核杆菌不同分泌蛋白的DNA疫苗保护效力的差异

作者用质粒载体ｐＪＷ４３０３构建了分别表达结核杆菌分泌蛋白ＭＰＴ６４、Ａｇ８５Ｂ和ＥＳＡＴ－６的 ＤＮＡ疫苗 ＤＮＡ－６４、 ＤＮＡ－８５Ｂ和ＤＮＡ－Ｅ６。分别用上述ＤＮＡ疫苗免疫Ｃ５７Ｂ１／６小鼠,并以亲代ｐＪＷ４３０３作为阴性对照。免疫后４周用有毒力Ｈ３７ＲＶ株（约１００个活菌）通过气溶胶攻击,４周后取肺匀浆作活菌计数;在免疫后不同时间取血清用ＥＬＩＳＡ测特异性抗体;取部分小鼠淋巴结和脾细胞作淋巴细胞增殖试验及测细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）应答和γ干扰素（ＩＦＮ－γ）分泌细胞。 结果显示,ＤＮＡ－６…     

VES对人胃癌细胞中细胞周期调控因子蛋白表达的影响

本研究采用免疫细胞化学方法检测了维生素Ｅ琥珀酸酯（ＶＥＳ）处理人胃癌（ＳＧＣ－７９０１）细胞４８小时后某些细胞周期调控因子及细胞凋亡调控基因的蛋白表达。结果表明ＶＥＳ能明显抑制ＳＧＣ－７９０１细胞的ｐ１６、ｐ５３、ｐ２１和ＰＣＮＡ的蛋白表达并均有明显的剂量－效应关系。以ｐ１６的降低作用最为明显，依次顺序为ｐ２１、ｐ５３和ＰＣＮＡ。与此相反，在ＶＥＳ处理后ｃ－ｆｏｓ蛋白表达被明显诱导。上述结果提示在离体试验条件下ＶＥＳ具有潜在的抗癌作用。     

高剂量EEP方案治疗晚期胃癌39例报告

以鬼臼乙叉甙 (Ｅｔｏｐｓｉｄｅ ,Ｖｐ 1 6 )、阿霉素 (Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ,ＡＤＭ)和顺铂 (Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ,ＰＤＤ)组成的ＥＡＰ方案是迄今为止治疗晚期胃癌疗效最高的方案 ,但由于该方案骨髓抑制严重 ,限制了其应用。我院自 1 994年 1月至 1 998年 1 2月应用高剂量ＥＥＰ(Ｖｐ 1 6 ,ＥＰＩ,ＰＤＤ)方案 ,Ｇ ＣＳＦ支持治疗晚期胃癌 ,现报告如下。一、材料与方法1 .病例选择 :病例入选标准为年龄 1 8～ 75岁 ,病理学诊断为胃癌 ,ＴＮＭ分期为Ⅲｂ和Ⅳ ,未行手术或仅行姑息性减瘤手术 ,且有可测量病灶 ,ＫＰＳ≥ 5 0’ ,心肺肝…     

用HPLC法测定米中烯菌灵的残留量

用ＨＰＬＣ法测定米中烯菌灵的残留量ＤｅｔｅｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｉｄｕａｌｉｍａｚａｌｉｌｉｎｒｉｃｅｂｙＨＰＬＣ陈家华ＣｈｅｎＪｉａｈｕａ（上海商检局，上海２００００２）（ＳｈａｎｇｈａｉＩｍｐｏｒｔａｎｄＥｘｐｏｒｔＣｏｍｍｏｄｉｔｙＩｎｓｐ...     

肺癌中MTS1／p16和p53基因产物表达与细胞增殖的关系

应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学方法研究６２例肺癌组织中ｐ１６蛋白和ｐ５３蛋白的表达情况，并进行增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）检测，计算细胞增殖指数（ＰＩ）。结果显示６２例肺癌组织中ｐ１６蛋白和ｐ５３蛋白阳性率分别为５８．１％和５９．７％。腺癌ｐ１６蛋白的阳性率明显高于小细胞癌；ＰＩ分级不同者ｐ１６蛋白表达不同。淋巴结转移阳性组蛋白的表达高于阴性组；不同ＰＩ分级中ｐ５３蛋白的表达不同。提示ｐ１６蛋白低表达和ｐ５     

Construction of plasmid vectors from Streptomyces kasugaensis plasmids, pSK1 and pSK2

Streptomyces kasugaensis G3 was transformed by pIJ702 DNA carrying the thiostrepton-resistance gene at a frequency of 2 X 10(5) transformants/micrograms DNA, but it was found that the introduced pIJ702 was very unstable in this strain. This result led us to make useful vectors using the stable plasmids resident in S. kasugaensis. The Bcl I-fragment, containing the thiostrepton-resistance gene obtained from pIJ702, was inserted into the pSK1 and pSK2 plasmids isolated from S. kasugaensis. Two composite plasmids, pSK11-1 (8.0 Md) and pSK21-1 (4.8 Md), were isolated from the thiostrepton-resistant transformants of strain Ge. The constructed pSK11-1 consisted of the entire pSK1 molecule and the thiostrepton-resistance gene fragment. pSK21-1 consisted of the large Bcl I-fragment of pSK2 (4.1 Md) and the same thiostrepton-resistance gene. These plasmids were stably maintained in S. kasugaensis G3. Small derivatives of these composite plasmids were prepared by restriction enzyme cleavage and self-ligation, and several unique insertion sites were also constructed in these small plasmids. By analysis of the physical maps of these plasmids, the essential regions of pSK1 and pSK2 were determined from their DNA segments to be 2.5 Md in pSK11-1 and 1.9 Md in pSK21-1. pSK21-B5, one of these plasmid vectors, showed a wide host range in the genus Streptomyces and was stably maintained in all streptomycete species tested, except S. kasugaensis M338.     

新型抗肿瘤抗生素C1027生物合成相关基因克隆的研究

Ｃ１０２７是由球孢链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｌｏｂｉｓｐａｒｕｓ）Ｃ１０２７产生的一种新型大分子肽类抗肿瘤抗生素。以ｐＩＪ７０２为载体，变青链霉菌（Ｓ．ｌｉｖｉｄａｎｓ）ＴＫ５４为宿主，建立球孢链霉菌Ｃ１０２７总ＤＮＡ的随机克隆文库。以Ｃ１０２７阻断变株ＡＦ４０和ＡＦ４４为互补对象，分别与随机克隆文库中的重组菌株进行共培养，经过抗菌和抗瘤活性检测，发现重组菌株Ｎｏ．２８与阻断变株ＡＦ４４，重组菌株Ｎｏ．７４、Ｎｏ．１０１与阻断变株ＡＦ４０分别进行共培养能恢复变株的生物活性，并且ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示：变株辅基蛋白的分泌得以恢复，证明重组质粒ｐＩＪ２８、ｐＩＪ７４和ｐＩＪ１０１所含插入片段与Ｃ１０２７生物合成相关。重组菌株Ｎｏ．７４和阻断变株ＡＦ４０的共培养产物经纯化以后，紫外光谱检测证明３４５ｎｍ处有Ｃ１０２７的特征吸收峰     

透明颤菌血红蛋白基因的克隆及其在林可链霉菌中的表达

目的通过将透明颤菌血红蛋白基因vgb克隆到林可链霉菌染色体黑色素生物合成基因m elC位点,使m elC基因被破坏失活,vgb基因实现表达同时提高林可霉素产量。方法构建大肠杆菌-链霉菌重组质粒pYHT04,通过接合转移实验将重叠延伸PCR得到的具有红霉素抗性基因启动子的透明颤菌血红蛋白基因,以双交换的方式整合进林可链霉菌黑色素生物合成基因m elC中。采用不同装瓶量摇瓶发酵,HPLC检测发酵液中林可霉素含量。结果重组菌株颜色变浅,CO结合差光谱显示在420 nm处有明显吸收峰,随着装瓶量的增加重组菌株发酵液中林可霉素效价与对照菌株相比降低幅度较小。结论重组菌株m elC基因失活不能继续合成黑色素,vgb基因得到表达并表现出生物学功能,限氧条件下重组菌株发酵液中林可霉素效价高于对照菌株,有希望应用于工业发酵生产。     

应用双亲株灭活原生质体融合法选育林可霉素高产菌株

目的：选育高产优质林可霉素产生菌。方法：将林可霉素产生菌S78－1^#,N65-2^#的原生质体分别热灭活和紫外灭活，并将两种灭活原生质体用PEG融合，从融合株中筛选高产优质菌种。结果：获得82－201^#融合株，其摇瓶效价分别较N65－2^#,S78-2^#提高17％和52％，且色素分泌少，传代稳定性强。结论：双亲株灭活原生质体融合选育林可霉素高产菌株是值得推广的一种选育方法。     

hPARP-1蛋白缺陷细胞株建立及生长特性

目的建立hPARP-1蛋白缺陷细胞株，观察该缺陷所引起的生物学效应。方法用构建的hPARP-1基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体（pEGFP-C1-P）转染人胚肺成纤维细胞（HLF），用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中hPARP-1基因的表达水平。同时观察转染细胞生长形态，绘制生长曲线，用流式细胞术观察细胞周期，软琼脂培养法鉴定转染细胞恶性程度。结果pEGFP-C1-P载体在转染细胞内可较稳定表达，hPARP-1蛋白缺陷细胞株hPARP-1基因的蛋白表达水平比HLF下降了47％，比绿色荧光蛋白载体（HLFC）低45％，HLFC比HLF仅少3％。转染后hPARP-1蛋白缺陷细胞生长形态、生长速度无明显变化，软琼脂培养未见细胞集落。hPARP-1缺陷细胞生长形态无明显变化，细胞倍增时间为0．89d．与HLF细胞0．93d接近，软琼脂培养未见细胞集落。结论成功建立和鉴定了hPARP-1蛋白缺陷细胞株，在正常生长环境中，该缺陷不足以单独引起可观察的生长特性改变。     

应用原生质体融合法选育林可霉素高产菌株

将林可霉素产生菌N65—2^#、S78—1^#的原生质体分别热灭活和紫外灭活，并将灭活原生质体用PEG融合，从中获得92-201^#融合株，其摇瓶效价分别较N65—2^#、S78—1^#提高17％、52％，且色素分泌少，传代稳定性强。     

重组汉坦病毒核蛋白的原核表达及纯化

目的 原核表达重组汉滩型病毒(Hantaan virus,HTNV)核蛋白(recombinant HTNV nuclearprotein,rHTNNP)和重组汉城型病毒(Seoul virus,SEOV)核蛋白(recombinant SEOV nuclear protein,rSEONP),并进行纯化.方法 从HTNV PS-6株和SEOV L-99株灭活病毒液中提取总RNA,依据病毒S片段多变区基因序列两端保守序列设计引物,用逆转录PCR法扩增此S基因片段,构建原核表达质粒pET-Trx-his-HTNNP和pET-Trx-his-SEONP,并在大肠埃希菌中诱导表达.表达产物经凝胶电泳初步鉴定和镍柱亲和层析纯化后,用双向免疫扩散试验检测其抗原特异性.结果 重组表达质粒经菌落PCR分析和测序证明构建正确.表达的rHTNNP和rSEONP相对分子质量约为26 000,表达量分别约占菌体总蛋白的30％和20％,主要以可溶性形式表达,且纯度可达约70％.双向免疫扩散试验证实,这2种重组蛋白具有较好的抗原性.结论 成功构建了表达rHTNNP和rSEONP的原核表达质粒,并获得了较高纯度的rHTNNP和rSEONP,为汉坦病毒型别鉴定试剂盒的开发奠定了基础.     

体外导入IL-2R反义RNA表达质粒对小鼠脾细胞活化增殖的影响

目的　观察导入白细胞介素 2受体 (IL 2R)反义RNA真核表达质粒对体外培养的小鼠脾细胞活化增殖的影响及其机制的探讨。方法　用粘附辅助脂质体法把IL 2R反义RNA真核表达质粒转染脾细胞 ,用丝裂原刺激脾细胞活化增殖 ,MTT法检测细胞生长情况。狭线杂交法检测IL 2RmRNA的表达水平 ,流式细胞仪检测IL 2R的蛋白表达水平。结果　转染各重组质粒后 ,脾细胞的生长增殖受到明显抑制 ,且 pcAnti mIL 2Rαβ与 pciAnti mIL 2Rαβ组抑制率较 pcAnti mIL 2Rα及pcAnti mIL 2Rβ组的大 ,pcAnti mIL 2Rα组抑制率较pcAnti mIL 2Rβ的大。转染各重组质粒对NIH3T3细胞生长增殖无影响。转染各重组质粒后IL 2RmRNA及蛋白表达水平明显降低。结论　IL 2R反义RNA能有效抑制体外培养的小鼠脾细胞的生长 ,IL 2Rαβ融合基因反义RNA较α、β单基因反义RNA的抑制率高 ,IL 2Rα反义RNA较 β反义RNA抑制率高。初步推断 ,IL 2R反义RNA抑制细胞生长的作用是特异的 ,只针对功能性表达IL 2R的细胞。反义RNA封闭IL 2R的表达很可能是其抑制脾细胞活化增殖的直接原因     

青霉素高产菌株的理性筛选

以青霉素生产菌种87117#为出发菌种，采用紫外线诱变复合前体动态后处理的方法，结合限氧条件下的摇瓶筛选，从177支前体抗性株中筛出XY-137#高产突变株。该菌株摇瓶效价平均提高了8．8％，且遗传特性稳定，单位菌丝产物合成能力强。XY-137#菌株在百吨罐中经过近百批的生产验证，其放罐效价、发酵指数、罐批产量平均提高了3．83％、5．66%和2．69％。     

阿莫西林-舒巴坦致老年患者急性间质性肾炎2例

2例老年女性患者（年龄80、74岁）分别因慢性支气管炎急性发作和皮肤感染给予阿莫西林-舒巴坦6.0 g加入0.9℅氯化钠注射液250 mL,1次/d静脉滴注。例1于次日出现尿频、尿痛、排尿困难,肉眼血尿2,4 h尿量约400 mL;实验室检查示尿蛋白（＋）,隐血（＋＋＋）;BUN 8.48 mmol/L,SCr 380μmol/L。停用阿莫西林-舒巴坦,改为林可霉素,并给予保护肾功能及对症支持治疗。15 d后24 h尿量1 500 mL,BUN 5.86 mmol/L,SCr 116μmol/L,尿常规正常。例2在药物输注完毕后即出现恶心、呕吐、腰痛、血尿;尿蛋白（＋＋＋）,隐血（＋＋）。停用阿莫西林-舒巴坦,改用林可霉素。症状无好转2,4 h尿量不足200 mL,BUN 11.45 mmol/L,SCr 467μmol/L。行血液透析,林可霉素继续使用,并给予支持及对症治疗。治疗10 d后尿量逐渐增加,22 d后24 h尿量1 200 mL,BUN 7.83 mmol/L,SCr 141μmol/L,尿常规恢复正常。