HTNV重组核蛋白及其单抗建立HFRS-MacELISA试剂研究

[目的]利用重组汉坦病毒核蛋白及其单克隆抗体的酶标记物建立IgM捕获ELISA诊断试剂.[方法]制备、纯化重组核蛋白抗原和抗核蛋白单抗并进行辣根过氧化物酶标记,在抗人μ链包被板中结合四甲基联苯胺一过氧化氢(TMB/H2O2)酶底物系统,从血清中检测肾综合征出血热早期特异性IgM抗体,并与免疫荧光抗体法(IFA)进行比较.[结果]检测用经典免疫荧光抗体法确认的42份阳性血清和42份阴性血清,结果2种试剂检测结果差异无统计学意义.[结论]用重组汉坦病毒核蛋白及其单克隆抗体的酶标记物建立IgN捕获ELISA诊断试剂可用于肾综合征出血热的早期IgM抗体检测.     

汉坦病毒核蛋白及其单抗标记物在建立ELISA试剂中的应用

[目的]利用重组汉坦病毒核蛋白及其单克隆抗体的酶标记物建立IgM捕获ELISA诊断试剂。[方法]制备、纯化重组核蛋白抗原和抗核蛋白单抗并进行辣根过氧化物酶标记，在抗人μ链包被板中结合四甲基联苯胺-过氧化氢（TMB／H2O2）酶底物系统，从血清中检测肾综合征出廊热早期特异性IgM抗体，并与免疫荧光抗体法（IFA）进行比较。[结论]检测42份可疑HFRS病人血清，ELISA法和IFA法均阳性的20份，均阴性的19份；ELISA法阴性、IFA法阳性的1份，ELISA法阳性、IFA法阴性的2份，2种方法的差异无统计学意义（配对x^2=0．08，P〉0．05）。[结论]用重组汉坦病毒核蛋白及其单克隆抗体的酶标记物建立IgM捕获ELISA诊断试剂可用于HFRS的早期IgM抗体检测。     

汉坦病毒核蛋白在免疫荧光诊断技术中的应用

目的从国内生产肾综合征出血热（HFRS）疫苗Z10株中克隆汉坦病毒核蛋白基因,应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统使其在昆虫细胞中表达,制成抗原片,用于检测血清中汉坦病毒抗体.方法从汉坦病毒Z10株感染细胞上清液中提取病毒RNA,应用RT-PCR方法扩增S基因,与穿梭质粒连接并转化大肠杆菌,得到重组穿梭质粒.将其转化含杆状病毒基因组的大肠杆菌,筛选出含S基因的重组杆状病毒DNA的大肠杆菌,提取重组杆状病毒DNA转染昆虫细胞,应用ELISA法及间接免疫荧光法检测重组蛋白的抗原性.结果用RT-PCR方法扩增得到S基因,筛选出的重组杆状病毒感染细胞sf9,制成抗原片.此抗原片仅与HFRS阳性患者血清起反应,而与正常人及其它发热患者血清不起反应.检测浙江省各医院送检的97份疑似肾综合征出血热患者血清及36份正常人血清,与传统的抗原片比较,阳性符合率为100%.结论可以应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统表达汉坦病毒重组蛋白.以此制备的抗原片,可用于患者血清中汉坦病毒抗体检测,具有特异性强、敏感性高,试剂制备简单、安全,为诊断肾综合征出血热提供新的途径和手段.     

汉坦病毒重组蛋白检测血清中特异性IgA抗体动态变化的研究

目的探讨重组蛋白检测血清中特异性IgA抗体的动态变化及其诊断价值。方法用杆状病毒表达的汉坦病毒重组核蛋白(rNP)和糖蛋白(rGP)为抗原,检测14例61份急性期SEO型病人系列血清中的特异性IgA抗体,寻找肾综合征出血热(HFRS)病人IgA抗体的动态变化规律。结果几乎所有HFRS病人早期即有强烈的IgA应答,尤其是针对rNP的抗体出现早且滴度高,抗rGP出现亦早,但滴度偏低。结论应用rNP和rGP为抗原,在发病早期检测IgA抗体,具有较好的特异性诊断价值,特别是对HFRS早期临床表现不典型的病例。     

双抗原夹心法ELISA在肾综合征出血热诊断中的应用

目的建立一种敏感、特异的检测肾综合征出血热(HFRS)血清总抗体的双抗原夹心法ELISA。方法应用重组汉坦病毒(HV)NP抗原e1.3S作为包被抗原和e6-119-HRP作为酶标抗原建立双抗原夹心法ELISA,检测血清总抗体,并与间接免疫荧光法(IFA)相比较。结果共检测188份人血清和378份鼠血清标本,2种方法的总符合率为97.70%。以IFA为参照标准,双抗原夹心法ELISA的敏感性为97.54%,特异性为97.87%。结论双抗原夹心法ELISA检测HFRS血清总抗体具有很高的敏感性和特异性,适用于大规模的流行病学调查。     

肾综合征出血热抗体快速诊断试剂盒的应用研究

[目的]评估所研制的肾综合征出血热(HFRS)抗体快速诊断试剂盒在临床诊断和血清流行病学调查中应用的可行性.[方法]在6个不同疫区省份应用HFRS快速诊断试剂盒(胶体金法)检测患者血清中IgM和IgG抗体.在福建省抽选有代表性的18个县市作为调查地区,用双抗原夹心ELISA法检测鼠血清中抗汉坦病毒(HV)抗体,分析鼠间HFRS流行情况.[结果]此试剂盒可同时检测HFRS患者血清中IgM和IgG抗体,已通过国内6省的临床应用评价.以间接免疫荧光试验(IFA)及ELISA为参照标准,其敏感性为98.1%,特异性为97.9%,总符合率为98.0%;福建省HFRS疫区主要以家鼠型为主,主要分布在闽北及东南沿海地区.[结论]HFRS抗体快速诊断试剂盒提供了早期快速检测的新方法,已成为商品化并向全国推广.双抗原夹心法ELISA可用于监测鼠间带病毒状况和人间疫情动态,为控制HFRS的流行提供依据.     

抗体制备ELISA试剂诊断肾综合征出血热

目的研究汉坦病毒重组抗原及其单克隆抗体制备双抗夹心酶联免疫吸附（ELISA）试剂早期诊断肾综合征出血热（HFRS）.方法将汉坦病毒76118株S1.3kb基因克隆于pET28a质粒,诱导大肠埃希菌表达出48kd的汉坦病毒核蛋白抗原.以此抗原免疫Balb/c小白鼠,取其B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,小鼠腹腔接种,制备单克隆抗体.用重组抗原及其单克隆抗体,制备ELISA诊断试剂,并与美国产汉坦病毒重组抗原ELISA诊断试剂和间接免疫荧光法（IFA）比较.结果自产重组抗原及其单克隆抗体制备的双抗夹心ELISA试剂与美国产抗原ELISA试剂在87例HFRS和56例非HFRS诊断中完全吻合.结论自产ELISA试剂可用于早期诊断HFRS,且意义重大.     

深圳地区流行性出血热疫点鼠类汉坦病毒血清学调查研究

目的了解深圳地区肾综合征出血热疫点鼠形动物汉坦病毒的带毒情况和抗体水平,为本市肾综合征出血热的预防和控制提供科学依据。方法用酶联免疫吸附(ELISA)法检测鼠血清汉坦病毒Ig M抗体和Ig G抗体,并用汉坦病毒定量试剂盒测定汉坦病毒总抗体浓度。结果深圳地区肾综合征出血热疫点的鼠种主要为褐家鼠(占50.82%)和臭鼩鼱(占47.51%)。鼠类汉坦病毒Ig M抗体和Ig G抗体阳性率分别为10.5%和16.6%。鼠形动物血清汉坦病毒总抗体浓度为(54.98±9.87)pg/ml。结论深圳地区褐家鼠具有较高的汉坦病毒感染率和抗体水平,同时臭鼩鼱在疫点鼠中的比例较大,并可携带汉坦病毒。应加强肾综合征出血热疫点的灭鼠和后续监测工作。     

2013年抚顺市肾综合征出血热主要传染源鼠类的抗原抗体水平监测分析

目的了解抚顺市肾综合征出血热的主要传染源鼠类的带毒情况和抗体水平。方法用间接免疫荧光方法检测HFRS抗原,鼠血清用ELISA法检测汉坦病毒(HV)特异性Ig G抗体。结果抚顺市2013年间共捕鼠421只,鼠种以褐家鼠、黑线姬鼠和大林鼠为主,检出IFAT阳性17份,平均带毒率为4.04%。鼠血清HFRS抗体阳性率为12.59%。结论通过对2013年抚顺市肾综合征出血热的主要传染源鼠类的带毒情况和抗体水平监测分析,了解抚顺市肾综合征出血热潜在流行情况,为肾综合征出血热防控提供依据。     

自制汉坦病毒N蛋白IgM直接捕捉ELISA诊断试剂盒的初步评价

目的初步评价应用自制辣根过氧化物酶（HRP）标记汉坦病毒（HV）重组N蛋白（rNP）的rNP-IgM直接捕捉ELISA诊断试剂盒。方法考核该试剂盒的特异性和稳定性;比较其与同类商品试剂盒的临床检测结果,以评估检测血清抗HV-IgM的敏感性。结果（1）该试剂盒仅与抗HV-IgM阳性血清发生反应,而与抗水痘病毒-IgM（抗VZV-IgM）、抗流行性乙型脑炎病毒-IgM（抗JEV-IgM）、抗登革热病毒-IgM（抗DV-IgM）、抗手足口EV71病毒-IgM（抗EV71-IgM）阳性血清均无反应;试剂盒放置37℃3d,检测血清抗HV-IgM的活性,无明显降低。（2）在120例临床疑似肾综合征出血热的144份血清中,2种试剂盒仅对12例的12份血清抗HV-IgM检测结果不一致,其中8例的首份血清,该试剂盒阳性,商品试剂盒阴性（第2份血清2种试剂盒均阳性）;3例的首份血清（未采到第2份血清）,该试剂盒为临界值,商品试剂盒阴性;另1例的首份血清该试剂盒阳性,商品试剂盒阴性（2种试剂盒第2份血清和第3份血清均阳性）。结论实验室研制的捕获法ELISA抗HV-IgM诊断试剂盒具有良好的特异性、稳定性和敏感性,适于HV感染的临床诊断和流行病学监测。