改进型左侧精索静脉曲张对大鼠睾丸酶及增殖细胞核抗原的影响

Objective To evaluate the effects of improved left varicocele (ELV) on testis enzymes and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in rats. Methods ELV models of SD rats were established by the improved method in 21 SD rats, and another 15 were included in a sham operation group as controls. At the 3rd month, the activity of LDH, SDH and G6PDH was measured by colorimetry. The concentration of the PCNA was determined by enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA). Results The activity of LDH and G6PDH (8. 17 ± 3. 47), (34. 00 ± 16. 29) U/mg in left testes of experimental group was reduced remarkably as compared with that in right testes (12.69 ±3.97), (78.03 ± 25. 28) U/mg and control group (11. 98 ± 2. 26) , (54. 88 ± 20. 87) U/mg (P < 0. 05). The activity of SDH was reducd remarkably in left testes of experimental group ( 1. 22 ±0. 41 ) U/mg as compared with that in control group (1.74 ± 0.43) U/mg (P < 0.05), but there was no significant difference between the left and right testes ( 1.62 ±0. 56) U/mg in experimental group. The concentration of PCNA was reduced in left testes of experimental group (669. 10 ±205. 39) mU/ml as compared with that in right testes (800. 81 ± 172. 02) mU/ml and control group (776. 81 ± 231. 72) mU/ml, but there was no significant difference (P > 0. 05). Conclusion The reduction of LDH, SDH and G6PDH and the changes of PCNA in improved ELV may play an important role in the development of subfertility.     

改进型左侧精索静脉曲张对大鼠睾丸酶及增殖细胞核抗原的影响

Objective To evaluate the effects of improved left varicocele (ELV) on testis enzymes and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in rats. Methods ELV models of SD rats were established by the improved method in 21 SD rats, and another 15 were included in a sham operation group as controls. At the 3rd month, the activity of LDH, SDH and G6PDH was measured by colorimetry. The concentration of the PCNA was determined by enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA). Results The activity of LDH and G6PDH (8. 17 ± 3. 47), (34. 00 ± 16. 29) U/mg in left testes of experimental group was reduced remarkably as compared with that in right testes (12.69 ±3.97), (78.03 ± 25. 28) U/mg and control group (11. 98 ± 2. 26) , (54. 88 ± 20. 87) U/mg (P < 0. 05). The activity of SDH was reducd remarkably in left testes of experimental group ( 1. 22 ±0. 41 ) U/mg as compared with that in control group (1.74 ± 0.43) U/mg (P < 0.05), but there was no significant difference between the left and right testes ( 1.62 ±0. 56) U/mg in experimental group. The concentration of PCNA was reduced in left testes of experimental group (669. 10 ±205. 39) mU/ml as compared with that in right testes (800. 81 ± 172. 02) mU/ml and control group (776. 81 ± 231. 72) mU/ml, but there was no significant difference (P > 0. 05). Conclusion The reduction of LDH, SDH and G6PDH and the changes of PCNA in improved ELV may play an important role in the development of subfertility.     

改进型实验性左侧精索静脉曲张的建立及其对大鼠卵泡刺激素及抑制素B的影响

目的:探讨改进型实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对大鼠血清卵泡刺激素(FSH)及抑制素B(InhB)的影响。方法:利用改进的方法建立青春期SD大鼠左精索静脉曲张的模型30只;假手术组SD大鼠30只作对照组。术后3个月,取大鼠血清,ELISA法分别检测FSH、InhB的浓度。结果:实验组大鼠血清中FSH浓度[(37.56±9.72)ng/ml]与对照组[(26.69±5.33)ng/ml]相比升高,具有统计学意义(P<0.05);而实验组大鼠血清中InhB的浓度[(349.93±99.48)pg/ml]与对照组[(768.83±146.96)pg/ml]相比下降,具有统计学意义(P<0.05)。结论:改进型ELV致FSH升高及InhB下降,这些变化可能是影响生育能力的机制之一。     

Palomo和改良Palomo曲张精索内静脉结扎术对大鼠同侧睾丸的影响

目的 评估PMomo曲张精索内静脉结扎术(PV)和改良Palomo曲张精索内静脉结扎术(MPV)对大鼠同侧睾丸的影响.方法 检测实验性左侧精索静脉曲张(ELV)组(9只)、PV组(10只)、MPV组(8只)、和对照组(8只)大鼠左侧睾丸的Johnsen's评分、生精小管的超微结构、和生殖细胞凋亡指数(AJ).结果 对照组Johnsen's评分(9.46±0.52)显著高于ELV组(7.72±0.31,P＜0.05)和PV组(2.86±0.31,P＜0.01),与MPV组(9.42±0.63)比较差异无统计学意义(P＞0.05);对照组AI(2.21±1.15)显著低于ELV组(5.32±1.23,P＜0.05)和PV组(9.26±1.98,P＜0.01),与MPV组(2.32±1.18)比较差异无统计学意义(P＞0.05);ELV和PV组生精小管的超微结构明显异常.结论 MPV可以修复ELV所导致的同侧睾丸的损伤,PV则使损伤进一步加重.     

大鼠精索静脉曲张模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及其IL-1和NO含量的变化

目的:研究大鼠左侧精索静脉曲张(VC)模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及白细胞介素-1(IL-1)和一氧化氮(NO)含量的变化。方法:选用雄性SD大鼠60只,均选择左侧精索静脉作为研究对象,建立VC模型。将大鼠随机分为3组:假手术组(SO)15只,VC后高位结扎组(VCT)组15只和VC模型对照组30只。模型对照组中随机选取15只大鼠作为VC1组,余下15只大鼠作为VC2组,分别测定VC1组和SO组、VC2组和VCT组大鼠精液质量及睾丸组织中IL-1和NO的含量并加以比较,采用TUNEL检测睾丸生精细胞凋亡情况。结果:所有大鼠均建模成功,VC1组精子浓度[(1.54±1.16)×10~6/ml]和精子活力[(44.23±15.46)%]均显著低于SO组[2.80±1.62)×10~6/ml、(72.34±12.62)%](P0.05),VCT组精子浓度[1.82±1.34)×10~6/ml]和精子活力[(51.21±12.62)%]较VC2组有显著提高[(1.04±1.21)×10~6/ml、(39.23±13.21)%](P0.05)。大鼠左侧睾丸NO[(0.172±0.030)ng/ml]、IL-1[(1.468±0.080)mg/ml]含量VC1组明显高于SO组[(0.134±0.021)ng/ml、(0.782±0.079)mg/ml](P0.05),VC2组左侧睾丸NO[(0.198±0.020)ng/ml]、IL-1[(1.994±0.090)mg/ml]含量明显高于VCT组[(0.141±0.010)ng/ml、(0.781±0.036)mg/ml](P0.05),而右侧睾丸2组比较差异无显著性(P0.05),而且NO与IL-1含量之间呈正相关关系(r=0.492,P0.01)。VC1组大鼠双侧睾丸生精细胞大量凋亡,左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05),SO组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01);VCT组大鼠左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05);VC2组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05);2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。VC2组、VCT组组内同侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),但VC2组、VCT组2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。结论:VC致睾丸组织中NO和IL-1含量升高,并加重睾丸生精细胞凋亡,可能是其致睾丸损伤、影响睾丸生精功能障碍的原因之一。     

实验性精索静脉曲张对大鼠睾丸和附睾中血管内皮生长因子及其受体1表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸、附睾中血管内皮生长因子(VEGF)及其受体fms样酪氨酸激酶(Flt-1)蛋白表达的影响。方法:建立青春期雄性SD大鼠ELV模型,采用免疫组化SP法检测VEGF和Flt-1在ELV组及假手术对照组睾丸、附睾组织中的表达变化。结果:VEGF和Flt-1蛋白在ELV组和对照组大鼠睾丸、附睾中均有表达,其定位和表达量具有细胞特异性和区域特异性。经图像分析和统计检测显示,ELV2周和4周组双侧睾丸和附睾中VEGF蛋白的表达与相应对照组比较均显著增加(P<0.01和P<0.05);ELV2周组双侧睾丸和附睾中Flt-1蛋白的表达与相应对照组比较也显著增加(P<0.01和P<0.01),但4周时在双侧睾丸和左侧附睾中Flt-1蛋白的表达显著下降(P<0.01和P<0.05),而右侧附睾未见明显差异(P>0.05)。结论:实验性精索静脉曲张可造成青春期大鼠睾丸、附睾中VEGF和Flt-1的表达量变化,该变化可能会影响精子的发生和成熟,因而可能是VC引起男性生育力下降甚至不育的原因之一。     

睾丸固定术对隐睾患儿血清抗苗勒管激素及抑制素B的影响研究

目的:研究单侧隐睾固定术前后血清抗苗勒管激素(AMH)及抑制素B(INHB)的变化。方法:选取单侧隐睾患儿58例行隐睾下降固定术(隐睾组),健康男性同龄儿童32例为对照组,在术前和术后6个月分别测量两组儿童阴茎长度、阴茎周径及隐睾侧睾丸体积,检测血清AMH及INHB水平。结果:隐睾组术前血清AMH(102.80±17.35)ng/ml、INHB(70.24±5.73)pg/ml与对照组血清AMH(108.76±13.64)ng/ml、INHB(77.72±5.94)pg/ml比较均明显下降,差异有统计学意义(P0.05);隐睾组术后6个月血清AMH(109.76±17.25)ng/ml、INHB(75.76±5.94)pg/ml与对照组血清AMH(108.03±14.13)ng/ml、INHB(77.63±5.99)pg/ml比较,均无显著性差异(P0.05);隐睾组术前阴茎长度(2.05±0.23)cm、阴茎周径(3.91±0.23)cm、隐睾侧睾丸体积(0.45±0.02)ml与对照组阴茎长度(2.11±0.22)cm、周径(3.99±0.20)cm、睾丸体积(0.46±0.02)ml比较,均无显著性差异(P0.05);隐睾组术后6个月阴茎长度(2.09±0.23)cm、阴茎周径(4.00±0.25)cm、隐睾侧睾丸体积(0.45±0.02)ml与对照组阴茎长度(2.16±0.22)cm、周径(3.98±0.19)cm、睾丸体积(0.45±0.02)ml比较,均无显著性差异(P0.05);隐睾组手术前、术后6个月血清AMH分别为(102.80±17.35、109.76±17.25)ng/ml、INHB分别为(70.24±5.73、75.76±5.94)pg/ml,两者比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:血清AMH和INHB可用于评价睾丸固定术疗效,睾丸固定术能减少隐睾对睾丸功能的影响。     

实验性精索静脉曲张对青春期大鼠睾丸、附睾精子结合抗原11 mRNA及其蛋白异构体表达的影响

目的:研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对青春期大鼠睾丸和附睾中精子结合抗原11(SPAG11)mRNA及其蛋白异构体SPAG11E表达的影响,并探讨其与精索静脉曲张导致男性不育的关系。方法:40只SD大鼠随机分为ELV2周组、4周组,假手术对照2周组、4周组,每组10只。ELV组行部分结扎左肾静脉建立青春期SD大鼠ELV模型,假手术对照组仅显露左肾静脉过程,但不结扎。应用RT-PCR和免疫组化法(n=5)检测SPAG11 mR-NA及SPAG11E蛋白在ELV2周组和ELV4周组及各自对照组大鼠双侧睾丸、附睾中的表达变化。结果:RT-PCR结果显示,SPAG11基因376bp的特异扩增产物仅见于大鼠附睾组织中。免疫组化结果显示,SPAG11E蛋白主要与睾丸生精上皮的圆形和长形精子细胞的顶体泡和顶体、睾丸间质细胞的胞质相结合;在附睾管上皮主细胞胞质和顶部静纤毛中表达。对RT-PCR的相对吸光度值和免疫组化的灰度值进行统计学分析显示:①左侧附睾ELV2周和4周组SPAG11 mRNA和SPAG11E蛋白的表达与各自右侧组及各自对照组比较均有显著减弱(P<0.05或P<0.01);左侧附睾ELV4周组SPAG11mRNA与SPAG11E的表达较ELV2周组显著减少(P<0.05或P<0.01);右侧附睾ELV4周组SPAG11E的表达也较ELV2周组显著减少(P<0.01);②两实验组双侧睾丸SPAG11E蛋白的表达与相应对照组比较均未见明显差异(P>0.05),且在ELV2周组和ELV4周组之间该蛋白的表达也无显著性差异(P>0.05)。结论:SPAG11是特异表达于附睾的基因,在大鼠睾丸和附睾中均可见其蛋白异构体SPAG11E免疫阳性反应,其定位及表达水平具有细胞特异性和区域特异性,而且SPAG11 mRNA及SPAG11E蛋白在ELV模型鼠附睾中的表达发生了明显变化,这提示SPAG11不仅可能在大鼠精子发生、成熟过程中发挥重要作用,还可能与精索静脉曲张所致的男性不育相关。     

大鼠精索静脉曲张氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能的影响

目的:探索精索静脉曲张(VC)大鼠模型中氧化应激介导附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1损伤及对附睾功能影响。方法:将45只体重220～235 g的SD大鼠随机分为假手术组(单纯暴露并分离左肾静脉)、实验组(部分缩窄左肾静脉并充分结扎精索静脉侧支)和治疗组[造模术后给予150 mg/(kg·d)维生素E灌胃60 d],每组各15只。模型构建后60d分别观察左侧附睾组织学改变,采用qPCR、免疫组化染色、免疫荧光染色及Western印迹等检测左侧附睾上皮连接蛋白ZO-1及连接相关蛋白表达水平,同时检测附睾组织超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性,丙二醛(MDA)、α葡糖苷酶含量以及精子活力指标。结果:与假手术组相比,实验组左侧附睾上皮结构紊乱,上皮细胞数量减少,可见部分上皮细胞脱落至附睾管腔。qPCR检测claudin11、β-catenin、JAM-A、cadherin12、ZO-1等多个连接蛋白表达,结果显示除实验组较假手术组ZO-1表达明显下调外(P0.05),其余蛋白均无显著差异。免疫组化染色、免疫荧光染色Western印迹结果显示,与假手术组相比,实验组ZO-1表达明显降低(P0.05);经维生素E治疗后,治疗组ZO-1表达较实验组明显升高(P0.05)。实验组较假手术组大鼠附睾组织中MDA明显升高[(1.21±0.18)nmol/mg protein vs(0.41±0.05)nmol/mg protein,P0.05)],SOD[(298.62±67.84)U/mg protein vs(814.65±73.64)U/mg protein,P0.05)]、T-AOC[(0.24±0.04)nmol/mg protein vs(0.84±0.07)nmol/mg protein,P0.05)]、α葡糖苷酶[(5.82±1.24)U/mg protein vs(11.72±2.72)U/mg protein,P0.05)]明显降低;经维生素E干预后,治疗组SOD [(497.73±48.03)U/mg protein]、T-AOC[(0.42±0.06)nmol/mg protein]、α葡糖苷酶[(9.11±1.91)U/mg protein]较实验组明显回升(P0.05),MDA[(0.69±0.12)nmol/mg protein]明显下降(P0.05)。附睾精子活力检测,实验组较假手术组前向运动精子百分率明显降低[(31.33±6.32)%vs(71.21±5.21)%,P0.05],经维生素E干预后治疗组[(60.68±5.31)%]明显提高(P0.05)。结论:精索静脉曲张通过氧化应激导致附睾上皮紧密连接蛋白ZO-1表达下调,附睾功能损伤。抗氧化剂维生素E能有效改善精索静脉曲张附睾氧化应激水平,促进ZO-1表达上调,改善附睾功能。     

控制体重对肥胖型多囊卵巢综合征患者的疗效观察

目的探讨肥胖型多囊卵巢综合征(PCOS)患者控制体重的疗效。方法选择BMI≥25的多囊卵巢综合征患者122例,随机分成二甲双胍联合达英-35对照组与体重控制实验组,治疗6个月后观察两组体重指数、内分泌代谢指标及妊娠结局。结果 (1)对照组与实验组治疗后代谢指标LH、TT、CHO、TG、LDL及FPG、1hPG、GAUC、FINS、HOMA-IR均较治疗前显著下降,具有统计学意义(P0.05)。(2)实验组患者BMI[(24.39±2.13)kg/m2]、FINS[(7.94±2.41)mU/L]、1hINS[(93.32±40.32)mU/L]、2hINS[(65.27±32.34)mU/L]、IAUC[(129.69±35.37)mU/L·h]较药物对照组[分别为(26.02±2.05)kg/m2、(15.02±2.11)mU/L、(136.32±62.31)mU/L、(99.27±70.34)mU/L、(193.98±98.75)mU/L·h]下降明显(P0.05),差异有统计学意义。(3)实验组月经恢复率(75.00%vs.54.72%,P0.05)及排卵率(64.58%vs.43.40%,P0.05)优于对照组。结论控制体重能有效改善患者糖脂代谢异常,尤其是胰岛素敏感性增加,总疗效优于复合药物治疗。     

Effects of experimental varicocele require neither adrenal contribution nor venous reflux

Experimental left varicocele (ELV) is known to induce bilateral changes in the rat testis that, where comparisons are possible, are similar to the changes induced by unilateral varicocele in the human. In the present study, we have determined whether or not left adrenal products are important to the changes induced by ELV and whether or not reflux of left renal vein content occurs in the ELV rat. In the first study, testicular blood flow and temperature were studied in control animals and those with ELV, left adrenalectomy (LAX), or ELV + LAX. Control left and right testicular blood flow (33.6 +/- 0.8 and 33.6 +/- 1.5 ml./min./100 gm. tissue respectively) was significantly elevated by ELV (to 39.9 +/- 0.9 and 41.2 +/- 2.7 ml./min./100 gm. tissue, respectively) and the difference between abdominal and testicular temperatures (delta T) was significantly reduced. Control delta T's for right and left testes were 3.2 +/- 0.2C and 3.2 +/- 0.2C, respectively, and right and left delta T's for ELV animals were 2.0 +/- 0.3 degrees C and 2.0 +/- 0.3C, respectively. These blood flow and temperature changes also occurred when ELV animals were subjected to simultaneous LAX. Additionally, when 85Sr-labelled microspheres were infused into the left renal vein, they did not appear in either left or right testes of ELV animals. We conclude that there is no evidence for reflux down the spermatic vein in ELV in rats and adrenal products do not reach the testis via this route after being secreted into the renal vein. We raise the suggestion that the same may be true in the human.     

精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡与caspase-3蛋白的表达

目的:探讨caspase-3在精索静脉曲张大鼠生精细胞中的表达及其与生精细胞凋亡的关系。方法:雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组(SOG)、30 d术后组(PG1)、60 d术后组(PG2),每组8只。建立左精索静脉曲张模型,TUNEL法检测生精细胞凋亡,免疫组化SABC法检测caspase-3表达。结果:SOG、PG1、PG2大鼠左、右侧睾丸每生精小管截面caspase-3阳性细胞数分别为0.117 5±0.012 9、0.246 3±0.042 1、0.293 8±0.051 1及0.165 0±0.019 2、0.253 8±0.021 9、0.277 5±0.034 3。与SOG相比,PG1和PG2组大鼠双侧睾丸生精细胞caspase-3表达均增加,差异有显著性(P=0.011 5及P=0.014 4)。结论:精索静脉曲张可能是大鼠生精细胞caspase-3表达增加且生精细胞凋亡增多的机制之一。     

丹参酮ⅡA对兔纤维环细胞能量代谢的保护作用

[目的]考察丹参酮ⅡA(TSⅡA)对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的兔纤维环细胞能量代谢障碍的保护作用.[方法]藻酸盐串珠立体培养兔纤维环细胞,将细胞分为7组,在培养过程中加入不同浓度的药物:A组为空白对照不加入药物,B组加入4 μg/ml TSⅡA,C组加入10ng/ml IL-1β,D～G组在给予10 ng/mlIL-1β同时分别加入0.5、1、2和4 μg/ml TSⅡA.于培养3 d后行Na+-K+-ATP酶活性检测、,琥珀酸脱氢酶活性检测、MTT法细胞增殖情况检测以及细胞凋亡的流式细胞仪检测.[结果]G组Na+-K+-ATP酶活性(3.23±0.28U/mgprot)较C组(1.118±0.15U/mgprot)明显增高(P<0.01),与A组接近(3.57±0.15 U/mgprot)(P>0.05).G组琥珀酸脱氢酶活性(12.48±0.97U/mgprot)较c组(3.03±0.60 U/mgprot)明显增高(P<0.01),与A组接近(14.24±1.56 U/mgprot)(P>0.05).G组MTT试验吸光度(0.77±0.06)较C组(0.31±0.07)明显增高(P＜0.01),随着TSⅡA浓度的升高,D～G组吸光度随着TsIIA上升而上升.G组细胞死亡细胞比例和凋亡细胞比例分别为21.08±1.46%和8.99±0.33%,均显著低c组(43.11±2.7,P<0.01和11.71±0.32,P<0.01).[结论]TSIIA能够减轻IL-1β对纤维环细胞能量代谢的抑制作用,从而改善纤维环细胞的增殖、死亡及凋亡.     

果糖二磷酸锶盐对雷公藤多甙所致的大鼠少精子症的治疗作用

目的:研究果糖二磷酸锶盐(FDP-Sr)对雷公藤多甙(GTW)所致雄性大鼠少精子症的治疗作用。方法:雄性SD大鼠随机分成3组:模型组,FDP-Sr组,正常组,每组10只。模型组灌胃GTW 30 mg/(kg.d)连续40 d造成大鼠少精子症模型;FDP-Sr组经过GTW造模后,灌胃FDP-Sr 200 mg/(kg.d),连续30 d;实验期间正常组则给予蒸馏水。观察3组大鼠的性腺指数(包括睾丸、附睾、包皮腺、精囊腺)、附睾精子数量及活动率、睾丸组织病理形态学,并测定血清睾酮水平,以及睾丸内酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性。结果:睾丸和精囊腺指数(%):正常组:0.71±0.04,0.29±0.04;模型组:0.37±0.04,0.25±0.05;FDP-Sr组:0.45±0.07,0.31±0.06,与模型组相比,显著提高(P<0.05);附睾精子的数量(×106/m l):正常组:59.87±11.28;模型组:11.06±2.53;FDP-Sr组:20.95±4.98,与模型组相比,明显增加(P<0.05);血清睾酮含量(ng/L):正常组:85.31±7.41;模型组:65.33±2.90;FDP-Sr组:75.32±5.34,与模型组相比,明显增加(P<0.05);ACP、LDH、SDH的活性(U/g prot):正常组:95.64±19.27,9 574.73±3 578.06,6.39±1.93;模型组:58.42±12.38,4 820.77±1 535.22,3.48±0.91;FDP-Sr组:83.74±21.30,7 649.01±3 123.02,5.59±1.75,与模型组相比,明显增加(P<0.05)。另外,经FDP-Sr治疗后,睾丸生精上皮损伤明显改善。结论:FDP-Sr对大鼠少精子症有明显改善,其治疗效果与FDP-Sr改善睾丸功能密切相关。     

RNA干扰Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察RNA干扰肝脏Kupffer细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 构建针对大鼠TNF-α基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏缺血再灌注损伤前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或TNF-α shRNA.实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40 min,再灌注6 h检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肝脏Kupffer细胞TNF-α mRNA、血清TNF-α、肝组织中丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6 h后血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Kupffer细胞TNF-α mRNA水平、血清TNF-α水平(56.6±6.7 pg/ml比87.8±8.7 pg/ml和96.5±7.3 pg/ml,P＜0.05)、肝组织中MDA含量(93.4±13.3 nmol/mg比133.5±12.4 nmo1/mg和136.7±13.6 nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高(22.4±4.6 U/mg比12.2±3.1 U/mg和11.4±2.9 U/mg,P＜0.05).结论 RNA干扰Kupffer细胞TNF-α基因的表达可以减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤.     

筋骨草总黄酮对慢性血清病肾炎大鼠自由基损伤的影响

目的：探讨筋骨草总黄酮对慢性血清病肾炎大鼠的治疗作用及其作用机制。方法：采用大鼠改良慢性血清病肾炎模型,于造模第5周末检测尿蛋白,将尿蛋白阳性者随机分为模型组、雷公藤多苷组、筋骨草总黄酮组,另设正常对照组。于造模第6周起开始给药,6周后,测定各组大鼠的24h尿蛋白定量、血生化和血清中SOD、MDA的含量,光镜下观察肾组织病理形态学变化。结果：与模型组相比,筋骨草总黄酮组可显著降低尿蛋白[（38.91±10.62）mg/24hvs（18.28±8.07）mg/24h,P〈0.01],且可明显升高TP、SOD,降低BUN、Scr、TG、TC、MDA（P〈0.05或P〈0.01）;形态学观察也显示筋骨草总黄酮组较模型组损害减轻[（0.196±0.035）vs（0.304±0.059）,P〈0.01]。而筋骨草总黄酮组与雷公藤多苷组相比,可明显提高SOD活性[（0.379±0.042）U/mlvs（0.327±0.063）U/ml,P〈0.05],显著降低TC[（1.63±0.23）mmol/Lvs（1.95±0.37）mmol/L,P〈0.05]、MDA含量[（4.773±0.675）U/mlvs（6.526±2.727）U/ml,P〈0.05];且筋骨草总黄酮组ALT明显低于雷公藤多苷组[（57.60±8.09）U/Lvs（83.40±11.53）U/L,P〈0.01]。结论：筋骨草总黄酮对慢性血清病肾炎大鼠有较好的治疗作用,而提高SOD活性、降低MDA、抑制脂质过氧化反应、减轻自由基损伤等可能是其治疗作用机制之一。     

125I-神经生长因子对人脑胶质瘤细胞株U251的作用

目的 探讨125I-神经生长因子(125I-NGF)对U251细胞的杀伤能力及作用机制.方法 通过噻唑蓝(MTT)试验检测分别以18.5、37.0、74.0、148.0、296.0、592.0、1184.0、1480.0、1850.0、2590.0、3330.0、3700.0 kBq/ml 125I-NGF处理的U251的吸光度值,选择吸光度值趋于最低时最小125I-NGF浓度为其最低有效浓度.采用平板克隆形成试验,比较分别给予完全培养液、592 kBq/mlNa125I、1 mg/L NGF和592 kBq/ml 125I-NGF溶液处理的各组细胞克隆形成率,评价上述因素处理后U251细胞的增殖能力.采用放射自显影技术观察细胞内银颗粒分布,从而反映125I-NGF进入细胞的能力.并通过彗星试验及微核形成试验观察125I-NGF作用后U251细胞DNA的损伤,有明显彗尾及微核形成者DNA损伤严重.通过流式细胞仪检测125I-NGF作用后U251 G0/G1及S期细胞比例变化.结果 125I-NGF的最低有效浓度为592 kBq/ml,在此浓度下,125I-NGF可以有效进入细胞核内并损伤靶细胞DNA,经125I-NGF处理的胶质瘤细胞克隆形成率(0.02±0.01)较对照组(0.33±0.02)明显降低(P<0.01).125I-NGF作用后S期细胞比例(10.69±0.02)较对照组(35.47±0.02)下降,G0/G1期细胞比例(75.10±0.22)较对照组(53.17±0.03)升高(P<0.01).结论 125I-NGF在U251细胞中可以被转运入细胞核内,并可以有效杀伤靶细胞,其杀伤作用主要针对S期胶质瘤细胞.