半合成新抗生素——抗生素89—07的合成和结构测定

以庆大霉素Ｃ１８为母核，采用保护合成法，将其二脱氧链霉胺（２－ＤＯＳ）１－Ｎ位上的１个氢原子用１个乙基取代，得到半合成新抗生素８９－０７，经ＩＲ、ＵＶ、ＭＳ、＾１Ｈ－ＮＭＲ、＾１３Ｃ－ＮＭＲ、ＤＥＰＴ、＾１Ｈ－＾１Ｈ－ＣＯＳＹ、＾１３Ｃ－＾１Ｈ－ＣＯＳＹ等测试证实抗生素和中间体的分别与１－Ｎ－乙基ＣＭＣ１ａ和３，２，６，－三－Ｎ－乙酰基ＧＭＣ１ａ（Ｐ１），３，２，６，－三－乙酰基１－Ｎ－乙基ＧＭＣ     

抗生素89－07效价的微生物检定法

试验了抗生素８９－０７对４种检定菌的敏感性，比较了不同培养基和缓冲液对抑菌圈的影响，考核了３种检定菌的效价测定数据，测试了标准曲线的直线范围浓度，据此确定了采用１号培养基，ＩＶ号缓冲液和枯草芽孢杆菌６３５０１为检定菌的抗生素８９－０７微生物检定法。     

抗生素89－07的体内抗菌作用

抗生素８９－０７对７种１２株临床分离菌株感染小鼠的体内保护实验结果显示：静脉或皮下注射抗生素８９－０７对所试菌感染小鼠有良好的疗效，其中对金葡球菌９２－１９８感染小鼠的ＥＤ５０静脉和皮下注射分别为４．０８和２．０６ｍｇ／ｋｇ；对大肠杆菌９０－２０分别为０．８３和１．６０ｍｇ／ｋｇ；对绿脓假单胞茵９２－２８分别为４．０７和３．７９ｍｇ／ｋｇ，其体内抗菌作用优于同类抗生素中的庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素，与奈替米星相近，尤其对庆大霉素耐药菌株仍有较强的作用。     

新氨基糖苷类抗生素89－07抗生素后作用研究

选用活菌记数法测定抗生素８９－０７体外抗生素后作用，对照药为庆大霉素，实验结果表明大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２、９０－０２０和绿脓假单胞菌ＡＴＣＣ２７８５３、９３－３７４对抗生素８９－０７和庆大霉素均敏感（ＭＩＣ范围为０．５～２ｍｇ／Ｌ）。抗生素８９－０７对４株实验菌２个药物浓度（４ＭＩＣ，１ＭＩＣ）的ＰＡＥ分别为２．３８±０．０９和０．６５±０．０６、１．８７±０．０７和０．３６±０．０９、２．９３±０．１５和０．４５±０．１１、１．２６±０．０９和０．４５±０．０６ｈ，庆大霉素分别为１．８４±０．１７和０．３１±０．０４、１．８５±０，０８和０．２４±０．０４、２．５６±０．１１和０．２７±０．０５、１．０４±０．１１和０．３８±０．０６ｈ。两药相应的ＰＡＥ值相比在统计学上的意义根据细菌不同而不同，与ＭＩＣ无明显关系；两药高低２个浓度的ＰＡＥ值则均有显著差异（Ｐ＜０．００１）。     

新抗生素89—07对小鼠感染的保护效果

小鼠分别感染金葡球菌、肺炎杆菌、大肠杆菌和绿脓假单胞菌，以抗生素８９－０７与奈替米星、庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素进行药效比较。结果表明：抗生素８０－０７对金葡球菌、肺炎杆菌、大肠杆菌和绿脓假单胞菌的保护效果略逊于ＮＴＬ，而比ＧＭ和ＡＭＫ优越或相似。     

用HPLC（OPA柱前衍生）外标法测定抗生素89－07

建立了一种用ＨＰＬＣ法测定抗生素８９－０７含量的分析方法。采用ＯＰＡ柱前衍生，紫外３３０ｎｍ检测。流动相为甲醇：水：冰醋酸＝３７５：１０５：２０（含０．０２ｍｏｌ／Ｌ庚烷磺酸钠）．经Ｃ１８柱，使抗生素８９－０７与杂质组份分离。用外标法测定抗生素８９－０７含量，标准曲线为：Ｙ＝－２．５８ｘ１０－３＋２．１９ｘ１０－６Ｘ（峰面积）．ｒ＝０．９９７３，平均回收率１０１．４６％，用于测定抗生素８９－０７成品获得满意结果。     

抗生素89－07的胚胎毒和致畸研究

于ＳＤ怀孕大鼠的致畸敏感期（怀孕６～１５ｄ）抗生素８９—０７２０、４０和８０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）ｉｖ连续１０ｄ，实验结果表明母鼠毒性症状出现在８０和４０ｍｇ组，主要表现为母鼠在给药的１～４ｄ（怀孕的６～９ｄ）其平均体重增长低于对照组（Ｐ＜０。０５）且８０ｍｇ组有１只母鼠死亡，７只母鼠呼吸急促，步态异常。但各剂量组均未见有胎仔生长迟缓，外形异常，内脏组织及骨骼检查变异等症状。因此抗生素８９－０７是不具有发育毒性的药物。     

抗生素89—07效价的微生物检定法

试验了抗生素８９－０７对４种检定菌的敏感性，比较了不同培养基和缓冲液对抑菌圈的影响，考核了３种检定菌的效价测定数据，测试了标准曲线的直线范围浓度，据此确定了采用１号培养基，ＩＶ号缓冲液和枯草芽孢杆菌６３５０１为检定菌的抗生素８９－０７微生物检定法。     

抗生素89—07的体内抗菌作用

抗生素８９－０７对７种１２株临床分离菌株感染小鼠的体内保护实验结果显示；静脉或皮下注射抗生素８９－０７所试菌感染小鼠有良好的疗效，其中对金葡球菌９２－１９８感染小鼠的ＥＤ５０静脉和皮下注射分别为４．０８和２．０６ｍｇ／ｋｇ；对大肠杆菌９０－２０分别为０．８３和１．６０ｍｇ／ｋｇ。     

抗生素89－07多次给予大鼠的毒性

抗生素８９－０７按每天３０、１００和１８０ｍｇ／ｋｇｉｐ给予大鼠，连续９０天，共检测７项血液学指标，１０项生化指标及２０多种组织脏器，给药后头２周内，１８０ｍｇ组部分动物出现行走缓慢，有３只动物死于给药后１７～２１天。３０天测定时，１００和１８０ｍｇ组的肌酐和尿素氮含量升高。病理组织学检查仅见肾小管上皮细胞呈水泡样变和混浊肿胀及散在性的坏死，１８０ｍｇ组比１００ｍｇ组重。上述变化停药后均呈恢复趋势。本试验揭示抗生素８９－０７的主要毒性靶器官是肾脏，１００ｍｇ以上剂量是中毒和致死剂量，３０ｍｇ以下剂量属基本安全剂量。     

抗生素89—07小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验

用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，检查抗生素８９－０７的遗传效应，根据小鼠ＬＤ５０，选择１０、２０、４０ｍｇ／ｋｇ三个剂量组，一次静脉给予。给药２４ｈ时采样制作标本。镜检结果经统计表明三个剂量组与阴性对照组相比嗜多染红细胞微核无明显增加。表明小鼠微核试验为阴性。抗生素８９－０７不是一个断裂剂。     

新氨基糖苷类抗生素89—07体外抗菌作用研究

用琼脂二倍稀释法研究了抗生素８９－０７的体外抗菌作用。共测定临床分离菌１１０６株。其中革兰氏阴性杆菌７８０株，革兰氏阳性球菌３２６株。６种氨基糖苷类、２种β－内酰胺类与１种喹诺酮类抗菌药物用作对照。     

抗生素89－07对中国仓鼠细胞的正向突变

用哺乳动物培养细胞基因突变试验评价抗生素８９－０７诱发中国仓鼠卵巢（ＣＨＯ）细胞正向突变能力。在加和不加代谢活化系统中，抗生素８９－０７浓度为２０、４０、８０ｍｇ／ｍｌ，其突变率均在ＣＨＯ细胞自发突变率０～２０／１０６范围之内。     

抗生素89—07围产期毒性试验

ＳＤ大鼠怀孕的第１５天开始直至产后第２８天连续皮下给予抗生素８９－０７１００、２００和４００ｍｇ／（ｋｇｄ）。结果４００ｍｇ／（ｋｇｄ）组有１只母鼠于产后第７天死亡，但对妊娠期及泌乳期母鼠的平均体重增长无影响（Ｐ＞０．０５），对母鼠的妊娠期、产仔数、活仔数也无影响（Ｐ＞０．０５），同样剂量下Ｆ１代仔鼠断乳后的平均体重增长（Ｐ＞０．０５），Ｆ１代的发育指标、反射发育、感觉运动协调以及生殖功能均无影响（Ｐ＞０．０５），因此抗生素９８－０７是不具有围产期毒性的药物。     

大鼠肌注抗生素89－07、阿米卡星和庆大霉素肾毒作用的比较

抗生素８９－０７、庆大霉素、阿米卡星按每天５０、１００、１５０ｍｇ／ｋｇ，ｉｍ给予大鼠。分别于给药后５、１０、１５天处死动物，取样作肾功能和肾脏光镜形态学检查，比较评价了３种氨基糖苷类抗生素的肾脏毒性，ｉｍ庆大霉素１００ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）以上剂量的动物，给药后７天就出现死亡，５０ｍｇ组随给药时间的延长，肾功能异常的指标逐渐增多，肾小管上皮细胞也由个别散在性的坏死发展到大片状和广泛性的严重坏死。抗生素８９－０７和阿米卡星５０ｍｇ组，仅见个别肾功能指标异常，肾小管上皮细胞仅见混浊肿胀等变性，即使是１００ｍｇ组的肾小管上皮细胞坏死的程度也没有庆大霉素５０ｍｇ组严重。上述结果表明，抗生素８９—０７的肾毒作用明显比庆大霉素轻。