薯蓣皂苷元对肿瘤坏死因子诱导的单核细胞组织因子表达的抑制作用研究

目的：研究薯蓣皂苷元对肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导的THP-1细胞中组织因子（TF）促凝活性及表达的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：采用TNF-α（10ng．mL^-1）诱导THP-1细胞活化,采用改良的发色底物法测定TF的促凝活性;应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）测定TF的mRNA表达;Westernblotting分析TF蛋白及相关信号通路激酶表达水平。结果：薯蓣皂苷元（0．01,0．1和1μm01．L^-1）预处理,可浓度依赖性地抑制TNF．6c诱导的TF促凝活性,经计算其Ic50为0．25μm01．L^-1;薯蓣皂苷元明显抑制TNF-d诱导的TFmRNA和蛋白表达。同时,著蓣皂苷元1gm01．L^-1对于TNF-α诱导的5～30minNF-κB／p65、IKKB、Akt、ERK和JNK的激活,也有一定的抑制作用。结论：薯蓣皂苷元可明显抑制TNF-α诱导的THP-1细胞TF的活性及表达,其机制可能与下调NF-κB／p65,IKKβ、Akt、ERK和JNK的磷酸化有关。     

小檗碱抑制组织因子活性和静脉血栓形成的实验研究

目的 研究小檗碱体内外对抑制组织因子(tissue factor,TF)活性和静脉血栓形成的影响.方法 采用肿瘤坏死因子-a(TNF-α)活化人单核细胞株THP-1细胞模型,应用发色底物法测定TF的促凝活性,Western blotting检测TF蛋白表达,考察小檗碱体外对TF的作用;采用下腔静脉结扎致小鼠血栓模型,考察小檗碱体内给药对血浆TF活性及血栓形成的影响.结果 TNF-α(25 ng/mL)作用5 h能明显诱导THP-1细胞TF表达和活性增强,小檗碱(10～1 000 nmol/L)明显抑制TNF-α诱导的TF蛋白表达和促凝活性的增强,其IC50约25.71 nmol/L;阳性药姜黄素1 000 nmol/L也具有明显抑制作用.小檗碱(1、10、100 mg/kg)单次ig给药,显著或非常显著降低下腔静脉结扎6 h致血栓模型小鼠升高的血浆TF促凝活性,并可明显减少血栓干、湿质量,阳性药华法林钠片1 mg/kg也有明显抑制作用.结论 小檗碱体内外给药均显著降低TF促凝活性及其蛋白表达,并可抑制TF相关的静脉血栓形成.     

麝香配伍乳香对小鼠前列腺抗原诱导的单核细胞分泌炎症因子的调控作用

目的:探讨不同浓度麝香配伍乳香含药血浆(DP-MO)对单核细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10水平的影响,了解麝香配伍乳香在治疗前列腺炎中抗炎作用的机理。方法:制备小鼠脾脏单核细胞,细胞培养后分加入2.5%、5%、10%、20%浓度的DP-MO预处理1 h后,加入小鼠前列腺抗原(PAgs)诱导活化单核细胞。阳性对照组加入脂多糖(LPS)处理。阴性对照组加入等体积DMEM完全培养基。培养96 h后收集各组上清,ELISA法检测单核细胞分泌的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10的水平。结果:与空白对照组比较,经PAgs刺激诱导后,各组小鼠单核细胞的炎症因子释放增加,除IL-10的升高明显低于阳性对照LPS组外,其他TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8均明显增高;2.5%DP-MO预处理后,虽然炎症因子有改变的趋势,但与PAgs组比较,差异无统计学意义(P0.05);随着DP-MO浓度增加,对TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8降低及IL-10升高作用更明显,呈剂量依赖性改变,在20%DP-MO预处理后,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8分别降低了74.4%、56.0%、76.6%、70.5%,IL-10上升了236.1%。结论:DP-MO具有直接抑制前炎症因子产生的作用,其中对IL-1β的抑制作用最强;可促进IL-10的升高,从而抑制单核巨噬细胞释放炎症介质,减少PAgs诱导活化导致的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的分泌释放。     

清热活血方对β2-糖蛋白诱导的抗心磷脂抗体产生的影响及机理研究

目的:观察清热活血方对β_2-糖蛋白(β_2-GPI)诱导的抗心磷脂抗体(aCL)产生的影响,探讨清热活血方对抗磷脂抗体综合征(APS)的治疗作用及可能的作用机制。方法:4周龄的30只雌性昆明种小鼠被随机分为3组:A组(用药组)、B组(模型组)、C组(正常对照组);A组用清热活血方5g/(kg·d)灌胃;14d后,A、B两组多部位皮下注射β_2-GPI;检查血清aCL、外周血T细胞亚群和IL-2生物活性。结果:A组各周血清aCL OD值均较B组有不同程度降低(P<0.01)。与B组相比,A组可明显降低T_H/T_s比值(P<0.01),可使不同稀释度的IL-2活性明显降低(P<0.01)。经双变量直线分析,T_H/T_S比值和IL-2生物活性呈正相关(P<0.01)。结论:清热活血方可抑制β_2-GPI诱导的aCL的产生,其作用机理可能是抑制T_H/T_S比值和IL-2生物活性的升高。     

抗CCP抗体、RA33抗体和IgG－Rf因子在类风湿性关节炎中的诊断价值

目的：探讨抗环瓜氨酸肽抗体（抗-CCP）、RA33抗体和类风湿因子IgG-Rf对类风湿性关节炎（RA）的临床诊断价值。方法：选择RA患者65例、非BA患者50例健康体检者50例,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗CCP抗体、抗RA33抗体,应用免疫透射比浊法检测IgG-Rf。结果：抗CCP抗体、RA33抗体和IgG-Rf对RA诊断的敏感性分别为58．5％、33．9％、75．4％;特异性分别为98．O％、97．0％、81．0％。结论：抗CCP抗体、RA33抗体对RA诊断的特异性优于RF（P〈0．05）,可作为RA诊断的特异性血清学指标;RF与抗CCP抗体和RA33抗体同时检测用于RA的诊断是临床的最佳选择。     

黄芩苷磷脂复合物在动物体内的组织分布和抗肝损伤活性

 目的研究黄芩苷磷脂复合物在大鼠体内的组织分布和在小鼠体内的抗肝损伤活性。方法建立一种新的HPLC方法,以黄芩苷及其与磷脂的物理混合物为对照,测定黄芩苷磷脂复合物在灌胃给药后不同时间在大鼠的心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、脂肪、脑及血浆中的药物含量;采用四氯化碳致小鼠急性肝损伤的病理模型,设置黄芩苷和物理混合物两个给药对照组,考察黄芩苷磷脂复合物高、中、低3个剂量对小鼠血清中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活性的影响。结果黄芩苷磷脂复合物在大鼠体内的分布特性与黄芩苷类似,在各脏器组织中均有分布,但在胃、肾脏和血浆中的分布相对较多;抗肝损伤活性实验结果表明,黄芩苷磷脂复合物随剂量增加其抑制酶活性的作用增强,复合物的低剂量对GPT的活性具有显著性降低作用,中、高剂量则有非常显著的降低作用。结论黄芩苷磷脂复合物增加了黄芩苷在胃肠中的吸收并增强了药效。     

玉屏风散加味联合阿司匹林干预RSA合并血清阴性APS及对D-二聚体，PagT的影响

目的:观察玉屏风散加味联合阿司匹林治疗复发性流产(RSA)合并血清阴性抗磷脂抗体综合征(SN-APS)的临床疗效,为临床治疗提供参考。方法:选取2016年12月至2018年3月就诊于南京中医药大学附属医院生殖医学科的109例RSA合并SN-APS的患者进行分组研究,按照随机数字法分为空白组、对照组与观察组。空白组从孕前给予叶酸片安慰治疗,1片/次,1次/d。对照组于孕前给予阿司匹林1片/次,3次/d;丹参片4片/次,3次/d;叶酸片1片/次,1次/d治疗。观察组则于孕前给予玉屏风散加味口服,每次150 m L,2次/d,联合阿司匹林1片/次,3次/d,叶酸片1片/次,1次/d治疗,3组患者均试孕1年,并于妊娠后加用阿司匹林1片/次,3次/d,地屈孕酮1片/次,3次/d,分别观察至孕13周,流产则停药,对3组患者妊娠率、流产率、治疗前后凝血指标、中医证候评分以及流产月份等数据进行统计比较。结果:观察组治疗后在凝血指标D-二聚体,血小板聚集率(Pag T),中医证候评分(易感冒、自汗、恶风、神疲、乏力、腰膝酸软)较治疗前明显改善,且治疗后观察组凝血指标低于空白组(P 0. 05),中医证候积分低于对照组与空白组(P 0. 05),对照组治疗后凝血指标较治疗前明显降低(P 0. 05);观察组治疗后流产率、超出流产月份之流产率低于空白组(P 0. 05),对照组治疗后流产率明显低于空白组(P 0. 05)。结论:西药联合单味中药或中药复方干预均能提高该类患者的保胎疗效,结合中药复方可多靶点地调节机体免疫平衡,减缓血栓形成,改善中医证候,疗效更为突出,但确切疗效需要更大样本验证。而保胎至超过流产月份或许并不能改变妊娠结局,故保胎治疗应至少维持至早孕期结束。     

人参总皂甙诱导人内皮细胞和单核细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人内皮细胞和单核细胞表达粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的影响,及其与人粒单系血细胞发生调控的关系。方法：采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。检测内皮细胞和单核细胞中GM—CSF的表达。结果：经TSPG诱导制备的内皮细胞和单核细胞条件培养液中富含GM—CSF样活性,能显著促进人粒单系造血祖细胞的增殖分化;TSPG能显著促进内皮细胞与单核细胞的GM-CSF蛋白和mRNA表达。结论：TSPG可能通过直接和间接途径促进造血诱导微环境中的内皮细胞和单核细胞合成和分泌GM—CSF,进而促进血细胞生成。     

乌拉尔甘草不同外植体愈伤组织的诱导及影响因子研究

目的:探讨影响乌拉尔甘草愈伤组织诱导的因素,建立乌拉尔甘草愈伤组织培养方法.方法:采用组织培养法,比较不同外植体、光照、植物生长物质种类及其配比对乌拉尔甘草愈伤组织诱导和生长的影响.结果:不同外植体中,下胚轴愈伤组织诱导率最高(平均 94%),且发生最早,愈伤化程度高,筛选出下胚轴是诱导愈伤组织最佳外植体,在MS+6-BA(1.0～2.0)mg/L+NAA(0.5～1.0)mg/L培养基上,愈伤组织可分化产生不定芽;2,4-D诱导产生非胚性愈伤组织,一定浓度的6-BA与NAA配合,诱导产生胚性愈伤组织;光照影响愈伤组织的诱导及生长.结论:不同外植体、激素含量及光照是影响乌拉尔甘草愈伤组织诱导和生长的主要因子.     

类风湿因子、抗核周因子、抗核抗体检测对类风湿关节炎的临床意义

类风湿关节炎（RA）是一种全身性免疫性疾病,属Ⅲ型变态反应,病因迄今仍不十分清楚,所以给其实验诊断上带来一定难度川。RA的诊断常依赖临床症状及x线为依据,但无早期意义,易失去早期的治疗时机,所以其实验室检验是非常重要的。由于RA与自身免疫反应密切相关,患者血清中可出现多种自身抗体,所以其实验室检验主要是测定患者血清中的自身抗体,如类风湿因子（RF）、抗核周因子（APF）、抗核抗体（ANA）、肿瘤坏死因子（TNF—α）、白细胞介素-6（IL-6）等。本文就几种常见的检测方法（RF、APF、ANA）进行一下分析,给临床诊断提供实验依据。     

急性心肌梗死患者直接介入后无复流与血浆组织因子及组织因子途径抑制物的关系

目的通过测定急性心肌梗死(AMI)患者的血浆组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)水平在直接经皮冠状动脉成形术(PCI)前后的变化,研究两者与直接介入后无复流的关系。方法选择急诊行PCI的AMI患者53例,用ELISA法检测患者PCI术前、术后即刻、术后24 h外周静脉血TF、TFPI水平。根据有无复流分为无复流组与再灌流组,比较2组不同时点TF、TFPI水平的变化。结果 PCI前、PCI后即刻、PCI后24 h无复流组血浆TF、TFPI水平均明显高于再灌流组(P均<0.01);PCI后即刻,2组TF水平均较术前明显升高(P均<0.01);PCI后24 h,TF水平无复流组比术前高(P<0.05),再灌流组与术前比较差异无统计学意义(P>0.05);PCI前后2组TFPI水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 AMI患者直接进行PCI手术,发生无复流现象与血浆TF水平呈正相关,TFPI具有阻止血栓形成的作用,也可防治无复流现象。     

初复发翼状胬肉相关因子检测及汉防己甲素作用观察

目的通过检测初、复发翼状胬肉组织块分泌的相关因子并作为观察指标,了解汉防己甲素（Te-trandrine,Tet）对翼状胬肉病变的作用。方法收集初、复发翼状胬肉和正常球结膜组织块进行体外培养,并将初、复发翼状胬肉组织各分为无药组和药物干预组,后者加10-5 mol.L-1的Tet作用48 h。ELISA法检测上清液中血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth Factor,VEGF）、白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）的含量。结果 （1）初发翼状胬肉无药组的组织上清夜VEGF含量较初发翼状胬肉药物干预组及正常结膜组高（P〈0.05）,而初发翼状胬肉药物干预组与正常结膜组的VEGF含量相当（P〉0.05）。复发翼状胬肉组织无药组的VEGF含量低于正常结膜组织。（2）初、复发翼状胬肉无药组上清液中IL-1β的含量与正常结膜组相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 Tet对初发翼状胬肉组织中VEGF的分泌有抑制作用,而VEGF可能与初发翼状胬肉血管的形成及病情进展密切相关。VEGF在复发翼状胬肉中的作用及IL-1β在翼状胬肉中的作用尚需进一步研究。     

海螵蛸提取物对脲酶活性的抑制作用初探

目的:研究海螵蛸提取物对脲酶活性的抑制作用。方法:采用系统分离法即有机溶剂提取海螵蛸粉末,残渣再以热水浸提得到海螵蛸中的水提多糖,水提后残渣以氢氧化钠碱溶液获得碱提多糖,采用pH增值法首次探索了海螵蛸多糖等提取物对脲酶活性的体外抑制作用。结果:海螵蛸中多糖等有机物质对脲酶活性有一定的抑制作用。其中水提多糖和碱提水溶性多糖对脲酶活性的抑制作用较大,抑制率分别达到了70%以上,有机溶剂提取物中乙醚层和乙酸乙酯层提取物对脲酶活性的抑制作用在60%以上。结论:传统海洋中药海螵蛸中含有多糖等有机物质,以期对脲酶活性抑制作用的探索性研究为海螵蛸的临床应用机制和中成药开发提供一定的理论依据。     

尿CTGF检测对早期糖尿病肾病的诊断意义及保元胶囊的干预作用

[目的]通过检测1~3期糖尿病肾病(DN)患者尿结缔组织生长因子(CTGF)水平变化,探讨其对早期DN的诊断意义,及保元胶囊早期防治DN的可能作用机制。[方法]选择本院门诊或住院的1~3期DN患者为研究对象,并设正常对照组。治疗3个月后,检测用药前后各组患者尿CTGF、尿白蛋白排泄率(UAER)、血清肌酐(SCr)、尿肌酐(Ccr)水平变化。[结果]与1期DN组比较:2期DN组患者尿CTGF、SCr水平均明显升高(P0.05)、而UAER水平无统计学意义(P0.05),3期DN组患者尿CTGF、UAER、SCr水平均明显升高(P0.01),两组Ccr水平均明显降低(P0.01)。2、3期DN组患者治疗后,尿CTGF、UAER水平均明显降低(P0.01),Ccr水平均明显升高(P0.01)。[结论]尿CTGF的检测对诊断早期DN具有重要价值,保元胶囊可降低DN患者尿CTGF水平,这可能是其对早期DN患者肾功能保护作用的机制之一。     

基于因子分析的高血压病证候要素研究

[目的]研究不同危险程度的高血压病患者中医症状、舌脉象及证候要素分布。[方法]收集129例单纯高血压病与296例高血压病合并血脂异常和(或)糖尿病患者的四诊信息,保留出现率≥5%的四诊信息,采用因子分析提取公因子,由2名神经内科主任医师对公因子辨证,作为高血压病的证候要素。[结果]经因子分析发现22个公因子,分别是火、痰、瘀、风、气、血、阴、阳虚,单纯高血压病以气虚(16.28%)、火(15.50%)、瘀血(15.50%)为主要证候要素,高血压病合并糖尿病和(或)血脂异常以火(18.92%)、痰(17.23%)、瘀血(14.19%)为主。[结论]高血压病证素不外乎虚实两端,高血压病由相对低危到中高危,始终以火与瘀血为主。     

怡心饮对糖尿病心脏病大鼠心肌CTGF-mRNA和MCP-lmRNA表达的影响

目的观察怡心饮对糖尿病心脏病大鼠心脏单核趋化因子1（MCP-1）和结缔组织生长因子（CTGT）mRNA表达的影响。方法运用高糖高脂饲料加链脲佐茵素腹腔注射建立大鼠2型糖尿病心肌病模型,分为怡心饮高剂量组、怡心饮低剂量组、生脉饮对照组、正常组、模型组。灌胃治疗8周后,观察糖尿病心肌病大鼠的心脏单核趋化因子1和结缔组织生长因子mRNA的表达,以及血清结缔组织生长因子的变化,分析其减轻大鼠心肌病变的机制。结果怡心饮能明显降低大鼠心肌单核趋化因子1和结缔组织生长因子ITIRNA表达,降低大鼠血清结缔组织生长因子含量。结论怡心饮对糖尿病大鼠心肌病变有一定的改善作用,其作用机制可能与降低单核趋化因子1和结缔组织生长因子mRNA的表达有关。     

藏红花素对糖尿病所致睾丸组织损伤保护作用的研究

[目的]研究藏红花素(Crocin)对实验性2型糖尿病大鼠睾丸组织并发症损伤的保护作用。[方法] 100只SD大鼠按体质量随机分为正常对照组、模型对照组、藏红花素25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)组,每组20只,灌胃给药,疗程12周;采用链脲佐菌素(STZ)连续3 d腹腔注射30 mg/(kg·d)的方法制备实验性2型糖尿病大鼠模型。测定各组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)和糖化血红蛋白(GHb)水平,称量大鼠体质量、睾丸质量后计算睾丸指数,测定血清睾酮含量;采用苏木精-伊红(HE)染色对睾丸组织进行病理学检查,通过透射电镜观察睾丸组织超微结构改变;末端脱氧核苷酰基转移酶介导dUTP切口末端标记法(TUNEL)观察睾丸组织细胞凋亡状况。[结果]经藏红花素50～100 mg/(kg·d)治疗12周,2型糖尿病大鼠FBG显著降低、FINS显著升高、GHb显著降低(P0.05或P0.01);体质量、睾丸指数和血清睾酮含量显著升高(P0.05或P0.01)。经藏红花素治疗12周,糖尿病大鼠睾丸组织曲细精管萎缩、生精细胞脱落、生精细胞数量减少等病理学改变以及细胞核固缩、染色质块状浓集、线粒体减少等超微结构改变均明显改善;睾丸组织凋亡细胞数量明显减少,细胞凋亡指数(AI)显著降低(P0.05或P0.01)。[结论]藏红花素能够有效抑制糖尿病大鼠睾丸组织损伤,其机制可能与其降低血糖作用有关。     

调节组织因子功能的中药有效成分研究进展

组织因子(tissue factor,TF)是凝血级联反应的关键启动因子,在生理性止、凝血过程及多种病理性血栓形成、炎症反应、肿瘤血管发生及转移中起关键作用,干预TF途径已经成为心血管疾病治疗的新靶点,并可能为肿瘤、败血症等多种疾病的防治提供新的策略。从中草药中寻找对TF有调节作用的活性成分,对于发现防治TF相关重大疾病的先导化合物继而研制创新药物具有重要意义。综述了近5年的相关研究进展,以供参考。     

白蒺藜有效组分对自发性高血压大鼠心肌结缔组织生长因子表达的影响

目的观察白蒺藜有效组分对自发性高血压大鼠心肌结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响,探讨白蒺藜有效组分改善心室重构的可能作用机制。方法 32只14周龄雄性自发性高血压大鼠随机分为模型组、卡托普利组、白蒺藜组、联用组,每组8只,同周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常对照组。用药组分别给予卡托普利30mg.kg-1.d-1,白蒺藜有效组分15mg.kg-1.d-1,白蒺藜有效组分15mg.kg-1.d-1＋卡托普利30mg.kg-1.d-1,模型组及对照组采用等量0.9%NaCl溶液,连续灌胃8周。采用尾动脉容积法测定血压;分离左心室,透射电镜观察心肌超微结构;RT-PCR法检测心肌转化生长因子β1（TGFβ1）、CTGF mRNA含量变化。结果与Wistar大鼠比较,14周龄SHR大鼠收缩压明显升高（P〈0.01）。8周后,模型组大鼠收缩压明显较14周龄时明显升高（P〈0.05）,通过透射电镜对心肌超微结构观察提示,22周龄SHR出现明显的心肌纤维化;且模型组TGFβ1及CTGF mRNA较正常组表达明显增加（P〈0.05）。与模型组比较,白蒺藜组收缩压明显下降（P〈0.01）,并可明显改善心肌超微结构,显著下调TGFβ1及CTGF mRNA水平（P〈0.05）。卡托普利和白蒺藜联用可明显下调TGFβ1mRNA水平（P〈0.05）。结论自发性高血压大鼠心室肌TGFβ1及CTGF表达明显增加,白蒺藜有效组分可显著抑制TGFβ1及CTGF基因表达水平,从而保护高血压病所致的靶器官损伤。     

调节血栓中组织因子表达的中药有效成分研究进展

组织因子(tissue factor,TF)亦称为组织凝血活酶,是生理性止、凝血过程及多种病理性血栓形成的启动因子,在动脉粥样硬化、系统性炎症、心绞痛、弥散性血管内凝血、肿瘤的血管发生与转移等多种疾病的形成中发挥重要作用。寻找以TF为靶点的抗凝、抗血栓药物具有重要的理论和现实意义,概述了近年来对血栓形成中TF表达具有调节作用的中药有效成分的研究进展。