纳米微粒光敏剂光动力治疗结肠癌的实验研究

目的探讨普通光敏剂profrinⅡ纳米化后光动力疗法（PDT）对结肠癌的生长抑制作用。方法超声乳化法构建profrinⅡ纳米微粒，建立人结肠癌LOVO细胞裸鼠种植瘤模型，把荷瘤裸鼠分为对照组：不注射光敏剂，不用激光照射；纳米微粒光敏剂组：注射profrinⅡ纳米微粒悬液，不用激光照射；普通光敏剂PDT组：注射profrinⅡ后3h，激光照射30min；纳米微粒光敏剂PDT组：profrinⅡ纳米微粒悬液注射后3h，激光照射30min。经小鼠尾静脉注入profrinⅡ纳米微粒（30mg／kg体重），光敏化3h后用半导体激光仪垂直照射肿瘤30min（能量密度9J／cm^2）。然后连续观察肿瘤体积的变化及荷瘤裸鼠生存时间，瘤体苏木精-伊红染色病理分析。结果纳米微粒光敏剂PDT组在治疗后早期产生明显的抑制肿瘤增殖作用，瘤体组织坏死，腺腔样结构解离破坏，微血管坏死，血栓形成。纳米微粒光敏剂PDT组与对照组和纳米微粒光敏剂组相比，延命率提高65．2％和58．3％（P〈0．05），抑瘤率增加87．9％和87．5％（P〈0．05）；与普通光敏剂PDT组相比，延命率提高18．8％（P〈0．05），抑瘤率增加56．0％（P〈0．05）。结论纳米微粒光敏剂PDT可明显抑制裸鼠结肠种植瘤生长，延长荷瘤裸鼠生存期。     

干扰素α抑制裸鼠人结肠癌肝转移的实验研究

目的　研究干扰素α对结肠癌生长和转移的抑制作用。方法　完整结肠癌组织块裸鼠结肠肠壁原位种植 ,建立类似于临床的结肠癌转移模型。种植后第 7天开始腹腔内注射生理盐水 (对照组 ) ,5 -氟尿嘧啶 ( 5 FU组 ) ,干扰素α 2b(IFNα 2b组 ) ,5 FU和干扰素α 2b配伍使用 (合用组 ) ,共用 8周。第 9周处死裸鼠 ,测定肿瘤重量、抑瘤率、肿瘤微血管密度和肝转移情况。结果　对照组、5 FU组、干扰素α 2b组和合用组的瘤重依次为 ( 1.5 3± 0 .78)g ,( 0 .87± 0 .5 9)g ,( 0 .81± 0 .43 )g和( 0 .2 3± 0 .0 9)g ,抑瘤率依次为 0 % ,43 .1% ,47.1%和 84.9%。肝脏转移率依次为 85 .7% ,78.6% ,2 1.4%和 0 %。干扰素α组和合用组的微血管密度明显低于其他各组。结论　干扰素α通过抗肿瘤血管生成 ,能明显抑制结肠癌的生长和肝转移 ,且和细胞毒性药物合用疗效更明显。     

光动力治疗人胆管癌细胞荷瘤裸鼠的实验研究

目的研究光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对人胆管癌荷瘤裸鼠的治疗效果,探讨其抗肿瘤性、安全性及腹腔注射和瘤内注射光敏剂两种不同给药途径疗效的差异。方法人胆管癌细胞QBC939接种于Balb/c裸小鼠皮下,建立荷瘤动物模型。以血卟啉衍生物(HpD)作光敏剂,采用腹腔内和瘤内注射2种不同给药方式,后以波长630 nm的激光照射肿瘤组织,观察PDT后肿瘤体积变化和病理改变。结果接受光动力治疗的两组肿瘤生长速度明显减慢,瘤内局部注射给药组疗效与腹腔给药组差异无统计学意义(P>0.05);组织学检查见肿瘤组织有广泛坏死,各组裸鼠心、肝、肺、肾组织切片未见病理性结构改变。结论HpD,PDT对人胆管癌荷瘤裸鼠的肿瘤组织有杀伤作用,使肿瘤生长减慢;HpD-PDT杀伤胆管癌移植瘤的深度可达0.8cm;在本实验光照条件下的PDT治疗是安全的。     

内源性光动力疗法对人结肠癌SW480细胞cAMP和cGMP的影响

目的观察内源性光动力疗法（photodynamic therapy，PDT）对人结肠癌SW480细胞环-磷酸腺苷（cAMP）和环-磷酸鸟苷（cGMP）的影响。方法将SW480细胞分为4组：对照组、光照组、δ氨基酮戊酸（ALA）组、内源性PDT（ALA-PDT）组，用放射免疫法检测光照后30、60、90及120min各组细胞的cAMP和cGMP的浓度。结果cAMP浓度在监测时间内，ALA-PDT组在30min时最高，明显高于其余各组相应时相及同一组内其余时相（P均〈0．001）；在60、90及120min时与其它各组相应时相比较，差异均无统计学意义；其余各组在监测时间范围内，组间及组内不同时相间差异均无统计学意义。cGMP浓度在各组细胞的组间及同组内不同时相间差异均无统计学意义。结论内源性PDT在杀伤肿瘤细胞的同时，SW480细胞也能通过细胞内cAMP浓度的瞬时升高产生保护作用，抑制细胞凋亡。     

光动力疗法及其在膀胱肿瘤治疗中的研究

光动力疗法(Photodynamic Therapy,PDT)是近20年来随着激光医学、内镜技术、药物代谢动力学等的发展而兴起的一种新的膀胱肿瘤治疗方法。自1993年加拿大等发达国家正式批准PDT用于膀胱肿瘤的临床治疗以来,PDT逐渐成为膀胱肿瘤综合治疗中的一种不可缺少的手段。本文就其作用原理     

X射线激发Cu-Cy介导的光动力对人结肠癌细胞的杀伤作用研究

目的:探讨X射线激发Cu-Cy介导的光动力对人结肠癌SW620细胞的体外杀伤效应及其作用机制。方法:用不同浓度(0~100 mg/L)Cu-Cy联合或不联合低剂量X线照射处理SW620细胞后,采用CCK8法检测并光镜观察细胞的生长活性;JC-1染色检测线粒体膜电位;Annexin V FIFC/PI双染法检测细胞的凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及自噬相关蛋白LC3B、P62的表达;透射电镜观察细胞的超微结构。结果:与空白对照SW620细胞(0 mg/L Cu-Cy,无X线照射),Cu-Cy联合X线照射处理的SW620细胞生长活性明显降低,并呈一定的浓度依赖性(部分P0.05),且细胞凋亡率明显升高、线粒体膜电位下降细胞的比例明显增加、Bax与LC3B-II蛋白表达明显升高,Bcl-2与P62蛋白表达明显降低(均P0.05)、细胞内自噬体增多;单纯X射线照射和单加Cu-Cy处理的SW620细胞以上指标均无明显改变。结论:X线激发Cu-Cy介导的光动力能有效抑制人结肠癌SW620细胞体外生长活性,机制可能与其诱导细胞凋亡和自噬有关。     

光动力治疗裸鼠胰腺癌及其机理的实验研究

目的 探讨在裸鼠胰腺癌瘤内注射光敏剂血卟啉衍生物（HpD）、竹红菌甲素（HA）及2－丁胺－2－去甲氧基竹红菌甲素（2－BA－2－DMHA）后，光动力治疗（PDT）的效果及其作用机理。方法 将人胰腺癌细胞株SW1990接种到裸鼠皮下，建立胰腺癌动物模型，而后将光敏剂HpD、HA及2－BA－2－DMHA注射入肿瘤，再用激光照射肿瘤局部，观察PDT治疗胰腺癌的效果。另以第Ⅷ因子为标记，采用免疫组化LSAB法研究肿瘤血管损伤的情况。结果 PDT对胰腺肿瘤有明显杀伤作用，能使胰腺肿瘤生长速度明显减慢。免疫组化染色明显，PDT可引起血管内皮细胞损伤和血管结构破坏。结论 PDT对胰腺癌有治疗作用，血管损伤是其杀伤肿瘤的重要途径。     

光动力疗法在抗肿瘤血管方面的应用

光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)是一种正在快速发展中的治疗恶性肿瘤的新技术,它具有对靶组织选择性高、正常组织损伤小等优点。本文从光动力的历史和反应基本原理出发,对PDT的最新进展:抗血管光动力疗法(antiangiogenic-PDT)作一综述。     

血卟啉光动力作用杀伤人胆管癌细胞的实验研究

目的研究血卟啉化衍生物（hematoporphyrin derivative，HPD）光动力作用（photodynamic therapy，PDT）对人胆管癌细胞QBC939的杀伤效应：方法以人胆管癌细胞系QBC939为研究对象，采用血卟啉化合物作为光敏剂，半导体激光治疗仪为光源。实验分为对照组（空白对照组、单纯光动力组、单纯光敏剂组）和光动力作用组，以系列浓度的血卟啉经不同强度光照后，用MTT法测定PDT对QBC939细胞的相对抑制率和筛选最佳PDT参数。结果光动力作用组的吸光度（OD值）与对照组间的差异具有统计学意义（P〈0.01），随着HPD浓度的增加和光照强度的增大，光动力作用对细胞的相对抑制率逐渐增大。不同的光敏剂浓度和光照强度间组合能达到相同的抑制率，如以10mg／L HPD经5J／cm^2光照强度或以4mg／L HPD经15J／cm^2光照强度对QBC939均可以达到92％相对抑制率。在最佳光照能量密度条件下，设计三组功率-时间组合，组间没有显著差异。结论1）PDT对人胆管癌细胞QBC939具有明确的杀伤作用，其对细胞的抑制率具有显著的剂量效应关系。光敏剂浓度和光照强度间存在交互关系，从临床角度考虑，采用较低的光敏剂浓度经较大的光照强度照射是理想的PDT治疗方案。2）改变功率时间的组合不会影响光动力对胆管癌细胞杀伤作用，采用在光纤承受范围内的大功率短时间的照射方式可达到安全快捷的目的。     

人结肠癌裸鼠原位种植癌及转移模型的建立

目的 建立人结肠癌裸鼠原位种植瘤模型，为研究结肠癌的转移机制和抗转移治疗提供动物模型。方法 采用人结肠腺癌细胞株SWlll6接种于裸鼠皮下，形成稳定传代的皮下种植瘤。再取该肿瘤组织块原位种植于裸鼠结肠壁，建立类似于临床的结肠癌模型。观察原位种植肿瘤的成瘤率，生长情况，转移率和腹水出现率。结果 原位种植成瘤率为l00％(24／24)，区域淋巴结转移率l00％(24／24)，腹膜转移率为9l.7％(22／24)，肝转移率为75．0％(19／24)，腹水出现率为25．0％(6／24)。荷瘤裸鼠晚期出现消瘦和全身衰竭，中位生存期为l0周。结论 该实验的裸鼠原位种植转移模型的生物学行为与临床病程非常相似，为研究结肠癌转移机制和抗转移治疗提供理想的动物模型。     

5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学对裸鼠人胃癌移植瘤的治疗作用

目的观察5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）介导的光动力学治疗对裸鼠人胃癌移植瘤的治疗作用。探索5-ALA介导的光动力学（PDT）治疗胃癌的可能机制。方法以MGC-803人胃癌细胞制备裸鼠人胃癌移植瘤模型：整体荧光成像系统下观察动物瘤体发出的荧光信号：测量荷瘤对照组、单纯激光组、单纯5-ALA组和5-ALA介导的PDT治疗组治疗后第1、3、7、14、21天的裸鼠肿瘤大小并计算肿瘤体积：末次测量后切除肿瘤行病理检查和透射电镜观察，TUNEL法检测组织细胞凋亡。结果常规方法培养MGC一803人胃癌细胞并接种裸鼠．可以成功制备出裸鼠人胃癌移植瘤的模型：荷瘤裸鼠肿瘤组织在特定波长的荧光激发下可发出特有的红色荧光。荷瘤对照组、单纯激光组、单纯5-ALA组和5-ALA介导的PDT治疗组治疗后第1、3、7、14、21天4组间的肿瘤体积差异有统计学意义（肚1003．086，P=0．000），PDT治疗组明显小于其他3组；病理检查提示．PDT治疗后肿瘤细胞大片凝固性坏死；透射电镜观察提示，PDT治疗组肿瘤组织存在大量死亡细胞及部分凋亡细胞：TUNEL法检测发现，PDT治疗组的肿瘤组织凋亡指数显著高于其他3组（χ^2=18．237．P=0．000）。结论5-ALA介导的PDT对于裸鼠人胃癌移植瘤具有明显的治疗效果．而单纯给予5-ALA或激光辐射对肿瘤无明显抑制作用；肿瘤细胞的坏死及凋亡是5-ALA介导的PDT产生细胞毒作用的重要机制。     

Ultrastructural changes in normal rat colon induced by photodynamic therapy

Despite the fact that photodynamic therapy (PDT) is a promising new technique for the treatment of gastrointestinal tumours, its effect on normal mucosa has so far received little attention. With a view to understanding the changes that occur in normal colon mucosa, we have examined the ultrastructure of normal rat colon mucosa after PDT. Female Wistar rats were treated with dihaematoporphyrin derivative (Photofrin^®) administered i.v. at a concentration of 5 mg kg^?1 body weight. Twenty-four hours after injection lesions were produced using a special device and irradiation was carried out with an argon-ion pumped-dye laser system (λ=630 nm, energy density 150 J cm^?2 and 30 J cm^?2; power density 100 mW cm^?2). At different points of time animals were sacrificed, tissues specimens were removed and a light and ultrastructural examination was carried out. At 90 min after treatment with 30 J cm^?2, superficial epithelial cells showed vacuoles in the basal part and were separating from the basement membrane. Capillaries were engored with erythrocytes and 24h after treatment there was destruction of capillaries and massive haemorrhage into the lamina propria. Immediately after treatment with 150 J cm^?2 there was sloughing of superficial epithelial cells from the basement membrane and crypt cells contained numerous vacuoles. After 24h there was complete necrosis of the mucosa. The action of PDT applied to normal rat colon mucosa is time- and energy-density-dependent and manifests as primary cytotoxic effects on superficial epithelial and crypt cells. Secondarily, there is destruction of the capillary system in the lamina propria, which leads to haemorrhagic necrosis of the mucosa.     

光动力治疗裸小鼠胰腺移植癌的实验研究

目的 研究光动力治疗（ＰＤＴ）对胰腺癌的治疗效果,为胰腺癌寻找有效的治疗手段。方法 接种人胰腺癌细胞ＳＷ１９９０于裸小鼠皮下,建立移植癌模型,以血卟淋衍生物（ＨｐＤ）作为光敏剂,采用腹腔和瘤内局部注射两种不同方式给药,继以波长６３２．８ｎｍ的Ｈｅ－Ｎｅ激光照射肿瘤局部,观察光动力治疗后肿瘤的生长速度和组织形态学变化,并测定了肿瘤组织内脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）的含量,对其治疗机制进行了初步探讨     

�紩�׻��ƶԽ᳦��������ֲ��ģ�͵���Ч�����߻��Ƴ�̽

目的　观察电穿孔技术结合博莱霉素化疗对结肠癌裸鼠移植瘤的抗肿瘤效果 ,探讨其免疫效应机制 ,为其临床应用提供实验依据。方法　 2 0 0 2年 11月至 2 0 0 3年 6月 ,用人结肠癌Lovo细胞系建立结肠癌裸鼠移植瘤模型 ,随机分为电穿孔化疗组 (B E )、单纯化疗组 (B E - )、单纯电击组 (B -E )和阴性对照组 (B -E - ) ,动态观察肿瘤大小 ,7d后处死并取出皮下肿瘤称重 ,观察其组织学改变 ,并用LDH法检测小鼠脾NK、LAK杀伤活性。结果　B E 组移植瘤较其他各组明显缩小 (P <0 0 1) ;B E 组完全缓解 1例 ,部分缓解 7例 ,B -E 和B E -组内各有 1例部分缓解 ,而B -E -组中无一例有效 ,B E 组有效率与其余各组的差异有统计学意义 (P <0 0 1) ;组织学观察也显示B E 组的移植瘤内大片肿瘤细胞坏死、血管损伤和炎细胞浸润 ;各组小鼠的NK和LAK细胞的杀伤活性差异无显著意义 (P >0 0 5 )。结论　电穿孔化疗可显著增强结肠癌裸鼠移植瘤对化疗的敏感性和疗效 ,可能主要与T细胞介导的肿瘤特异性免疫机制有关 ,可成为结肠癌治疗的一种新方法。     

Endoscopic photodynamic therapy in lung cancer

The main purpose of cancer therapy is to treat malignant tissue with the least damage to normal surrounding structures. Photodynamic therapy (PDT) seems to be able to fulfil this simple but fundamental premise.The mechanism of action of the photosensitizer—light system can be summarized in two main points. Chiefly, it seems to be a photodynamic process, with energy transfer from the light to the photosensitizer and from it to the oxygen molecules. Oxygen is excited and becomes singlet oxygen, which is extremely reactive and very noxious for tissues in which it develops. Secondly, a thermal mechanism related to light absorption and consequent temperature rise also seems to be involved in malignant necrosis by PDT.Thirteen males were submitted to endoscopic PDT. A total of 15 treatments were given: 2 patients were submitted to 2 sessions of PDT. Forty-eight hours after HPD administration (72 h in a few cases), the lesions were exposed to a 630 nm light from an argon-dye laser system.The total estimated energy dose delivered to the tumour surface was 90–150 J/cm² in 11 cases. All cases treated responded well and total disappearance was obtained. Median follow-up was 9.5 months (1–20 months) and the estimated energy delivered from 90–600 J/cm². No major complications were reported.     

脆性组氨酸三联体基因转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响

目的 观察脆性组氨酸三联体基因(FHIT)转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响.方法 将重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞(SW480-pRc/CMV2)和正常SW480细胞为对照.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测FHIT基因的mRNA转录水平.以奥沙利铂作用于3组细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞的生长抑制率,用流式细胞仪检测奥沙利铂处理前后各组结肠癌细胞的凋亡率及细胞周期的变化.结果 SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;经奥沙利铂处理后,转染FHIT基因的SW480细胞的凋亡水平与空质粒转染组及结肠癌细胞株组比较明显增高(第2、3、4天A值比较P<0.05),并且FHIT基因与奥沙利铂有轻度的协同促进凋亡作用;同时奥沙利铂处理前后实验组结肠癌细胞的生长周期较对照组均出现了明显的G_0/G_1期阻滞,且细胞的生长抑制率存在浓度和时间依赖性.结论 外源性FHIT基因表达与奥沙利铂协同促进SW480细胞凋亡及细胞周期阻滞,FHIT基因可增加结肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性.     

5-氨基乙酰丙酸光动力治疗裸小鼠胃移植癌的实验研究

目的　探讨以 5 氨基乙酰丙酸 (5 ALA)作为光敏剂对胃癌进行光动力治疗 (ALA PDT)的疗效 ,为胃癌的综合治疗寻找有效的手段。方法　接种胃癌细胞MGC 80 3于裸小鼠皮下 ,建立胃移植癌模型 ,以 5 ALA(10 0mg/kg体重 )作为光敏剂 ,采用瘤内局部注射和口服两种不同方式给药 ,继以波长 63 0nm的激光照射肿瘤局部 ,观察光动力治疗后肿瘤的生长速度和组织形态学变化。结果　接受光动力治疗的两组肿瘤生长速度明显减慢 ,肿瘤表面可见坏死 ,组织学检查见肿瘤组织有广泛坏死 ,两种给药途径 ,其疗效差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　 5 ALA光动力治疗对胃癌有杀伤作用 ,这将为胃癌的综合治疗提供有效的手段。     

PLGA-m-THPC纳米型光敏剂的制备及其光动力治疗肝癌细胞的研究

目的 制备聚乳酸一羟基乙酸共聚物(polylactide-co-glycolide,PLGA)包裹meta-四-(间羟基苯基)二氢卟吩[meta(tetrahydroxyphenyl)chlorin, m-THPC]的纳米型光敏剂,在体外研究其对人肝癌细胞光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)作用.方法 采用o/w的方法制备PLGA-m-THPC纳米微球,扫描电子显微镜下检测其粒径大小.荧光光谱仪检测其在含10%胎牛血清的细胞培养液中的吸收光谱.在人肝癌细胞株Hep G2细胞的培养液内,分别加入不同浓度的PLGA-m-THPC,加红光照射后,观察细胞形态变化,并用细胞计数的方法测定细胞的存活率.结果 PLGA-m-THPC纳米颗粒平均直径为180 nm.PLGA-m-THPC在含血清培养液中的吸收光谱图显示其在652 nm处有一个较强的吸收峰,并随着时间的推移吸光度增强.PLGA-m-THPC进入细胞主要聚集在胞浆,其对Hep G2细胞的光敏杀伤作用随浓度的增加而增强.结论 PLGA-m-THPC具有缓释、生物相容性好及光毒性低等优点,是一种理想的光敏剂.     

光动力治疗诱导人胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究光敏剂血卟啉光动力作用对人胰腺癌细胞Panc-1的体外杀伤效应及其主要机制。方法 将光敏剂浓度、光照剂量两个因素按不同水平分组,以CCK-8实验的OD值为检测指标并转换为细胞存活率,研究两个因素对光动力作用的影响及其规律。在此基础上,依次以透射电镜、荧光显微镜、流式细胞仪测定不同处理强度的光动力作用后细胞凋亡及坏死的特点,探讨光动力杀伤肿瘤细胞的主要机制。结果 随着光敏剂浓度和光照剂量的增加,PDT后Panc-1细胞存活率相应下降,但单独给予光敏剂和光照均不对细胞存活率产生影响。PDT后细胞出现凋亡和坏死,二者比例随光敏剂浓度和光照剂量的增加而增加,但始终表现为凋亡率＞坏死率。结论 血卟啉光动力治疗对人胰腺癌细胞株Panc-1具有明确的杀伤作用,但是光敏剂和激光照射本身并不具有独立的杀伤效应。光敏剂浓度、光照剂量两个影响因素在一定范围内与PDT效应之间成正相关的关系。PDT破坏肿瘤细胞的作用机制主要在于诱导细胞凋亡。