遮荫影响半夏DNA甲基化的MSAP分析

半夏为天南星科药用草本植物,其块茎入药,为我国一种常见的大宗中药材,市场需求量大。半夏在生长过程中遭遇高温强光易倒苗减产,遮荫可有效缓解半夏的倒苗,进而提升其块茎产量,但相关调控机制并不明确。DNA甲基化作为生物响应环境变化的一种自我修饰方式,常参与调控植物的生长发育。该研究以宿半夏为实验材料,选取自然光下生长的半夏为对照组,90%遮荫处理的半夏为实验组,对其基因组DNA甲基化进行甲基化敏感扩增多态性(MSAP)分析。结果表明,20对选扩引物共检测到617个基因位点,其中光照组占311个、遮荫组为306个。光照组和遮荫组中发生甲基化的位点分别占58.2%,71.57%,甲基化位点中全甲基化比率分别为27.65%,29.41%,表明遮荫显著诱导半夏基因组甲基化水平的提升。另外,相比光照组,遮荫促进32.51%的基因发生甲基化,同时诱导了16.25%基因去甲基化。该研究揭示了遮荫处理条件下半夏基因组的DNA甲基化变异水平,为进一步从表观遗传水平探析遮荫调控半夏生长的机制奠定了初步的理论基础。     

四倍体菘蓝基因组DNA甲基化的甲基化敏感扩增多态性分析

目的 分析四倍体菘蓝Isatis indigotica基因组DNA甲基化水平和模式.方法 采用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP)方法,对四倍体菘蓝基因组DNA的甲基化水平和模式进行分析.结果 筛选36对MSAP选择性引物进行扩增,共得到1733条清晰的条带.二倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为24.05％,四倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为23.70％.检测到83个(4.86％) CCGG位点在四倍体菘蓝基因组中发生了DNA甲基化模式的改变,其中37个(2.13％)位点发生了超甲基化,36个(2.08％)位点发生了去甲基化.结论 二倍体和四倍体菘蓝在CCGG位点上存在胞嘧啶甲基化状态的改变.     

温度对菘蓝基因组DNA甲基化的影响

目的:分析高温对菘蓝基因组DNA甲基化模式的影响。方法:采用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitiveamplification polymorphism,MSAP)方法,筛选36对选择性引物进行扩增。结果:扩增共得到1 612条清晰的带纹,共检测到82(5.1%)个CCGG位点在高温胁迫后发生了甲基化状态的改变,其中58(3.6%)个位点发生了超甲基化,24(1.5%)个位点发生了去甲基化。结论:温度是调节菘蓝基因组DNA甲基化模式的一个重要环境因子。     

醇型和酮型广藿香DNA甲基化的MSAP分析

目的使用MSAP技术对2种化学型广藿香Pogostemon cablin的基因组DNA进行甲基化分析。方法使用甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP)技术检测2种化学型、共计197个广藿香样本的DNA甲基化程度。结果 4类MSAP位点信息的Shannon多态性指数的最高值或较高值均在阳春、德庆、高州大垌、禄步、广宁5个产地中产生;石牌广藿香(酮型)与其余产地的广藿香(醇型)形成2个分支;广藿香居群间的变异所占百分比远大于居群内变异所占百分比,达60.66%;共筛选出10条石牌产地与其余产地的差异性片段并进行测序分析,其中一条属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族。结论可通过MSAP技术在不同来源的样品中鉴别出石牌产地的广藿香;广藿香不同化学型的形成与其DNA甲基化水平有着密切的联系,尚需更进一步的研究。     

半夏多倍体复合体及其细胞地理学研究

目的：为了查清半夏种质资源遗传背景，对16个省市地区的27个不同地理居群的染色体构成和细胞地理分布进行系统的调查。方法：采用细胞学和细胞地理学方法。结果：半夏是由七倍体（2n=7x=91）、八倍体（2n=8x=104）、九倍体（2n=9x=117）和十倍体（2n=10x=130）构成的多倍体复合体，并初步查清了它们的细胞地理分布。同时还发现少数的半夏非整倍体系列（2n=92,103,105, 115）。结论：半夏不论是自然居群或人工栽培产区，都存在严重的遗传分化和倍性混杂现象。应对不同倍性半夏的毒性和化学成分分析后选择优良的多倍体进行规范化种植。     

连作对穿心莲基因组DNA甲基化的影响

目的:探究连作条件下穿心莲基因组DNA的甲基化水平及模式变化情况。方法:结合甲基化敏感扩增多态性(methylation-sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术和液相色谱-质谱(LC-MS/MS)法对3个连作年限(0,1,2年)穿心莲基因组DNA的甲基化水平及模式进行分析。结果:LC-MS/MS测定的连作0~2年穿心莲基因组DNA甲基化水平为13.91%,12.72%,10.26%,MSAP测定的结果则为10.16%,9.64%,8.98%,两者均表明穿心莲基因组DNA的甲基化水平与连作年限呈现负相关,即DNA甲基化水平随着连作时间的延长而逐渐下降。MSAP技术对DNA甲基化模式分析也显示,穿心莲基因组DNA的CCGG位点在连作过程中主要发生了去甲基化。结论:连作条件下,穿心莲基因组DNA的甲基化水平和模式发生改变并以此来响应连作胁迫。     

基于MSAP技术的不同栽培生产区域宁夏枸杞DNA甲基化多态性分析

宁夏枸杞在我国不同栽培产区环境中,发生了明显的表观遗传变异和分化.为探讨我国不同栽培产区宁夏枸杞DNA甲基化水平和模式的差异及变化规律,该文利用荧光标记辅助的甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitive amplified polymorphism,MSAP)技术,对我国主要栽培产区宁夏银川平原、内...     

花叶型与艾叶型乌头叶片基因组DNA甲基化修饰的MSAP分析

建立乌头叶片DNA甲基化MSAP分析方法,并对不同形状的乌头叶片DNA甲基化修饰位点进行MSAP分析。以花叶型、艾叶型乌头不同部位叶片为实验材料,考察乌头叶片MSAP双酶切反应时间,筛选适宜的选择性扩增引物,并通过计算6%丙烯酰胺凝胶电泳图泳道和条带统计分析叶片甲基化修饰差异。结果 150 ng乌头叶片DNA MSAP双酶切反应体系在37℃条件下,酶切16 h较充分;使用25对筛选出的适宜性引物进行乌头基因组的MSAP选择性扩增,总共获得273个电泳条带,其中无甲基化或单链内甲基化228条,双链内甲基化条带27条,单链外甲基化条带18条,总甲基化率达16.48%;花叶型与艾叶型乌头总甲基化率稍有差异,分别为15.36%,14.34%,并各自获得8条、6条基因组甲基化修饰差异的核苷酸片段,占其总条带数的3.00%,2.26%。通过研究可为乌头植株的分子鉴定、良种选育与栽培,以及乌头的遗传演化等提供新思路。     

丹参DNA甲基化MSAP分析条件的建立和优化

以丹参叶片为材料,利用MSAP技术检测丹参基因组DNA甲基化差异,对MSAP体系中的预扩增、选择性扩增体系及电泳时间进行了优化。结果表明MSAP最佳反应体系为酶切反应:HpaII/MspI 10 U,EcoR I 10 U;最佳预扩增体系为25μL反应体系中,含rTaq酶0.2μL、Mg2+2.0μL、模板DNA 2.0μL、dNTPs 2.0μL和上下游引物E00/HM00各1.5μL;最佳选择性扩增体系为25μL体系中,含rTaq酶0.2μL、Mg2+2.0μL、预扩增稀释100倍产物2.0μL、dNTPs 2.0μL和上下游引物各1.0μL;最佳电泳时间为5h。该检测方法方便快捷,为进一步深入研究分析丹参DNA甲基化地域差异奠定了基础。     

半夏种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析

目的分析半夏种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法应用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对21份半夏种质资源进行检测。结果29个引物共得到162条扩增DNA片段,其中123条(75.9%)的片段具多态性,揭示了半夏居群间较丰富的遗传多样性。利用UPGMA法进行聚类分析表明,所有材料可划分为3类,根据RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论半夏种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异。RAPD标记可作为构建半夏DNA指纹图谱的有效工具。     

半夏毒针晶的致炎作用研究

目的探讨半夏毒针晶引起的刺激性炎症的机体表现及对相关炎症介质的影响。方法采用小鼠毛细管通透性实验、小鼠腹腔炎症实验及大鼠足跖肿胀实验,考察不同剂量半夏毒针晶的致炎效应及其量-效关系,并测定相关炎症介质的量。结果半夏毒针晶混悬液可使小鼠腹腔毛细血管通透性增加,腹腔渗出液中炎症介质前列腺素E2(PGE2)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)的量增加;亦可引起大鼠足跖肿胀,并在一定剂量范围内表现为典型的量-效关系,还可使大鼠致炎足跖中炎症介质PGE2、环氧合酶-2(COX-2)的量显著增加。结论半夏毒针晶刺激性毒性在机体内表现为炎症反应。     

阜南产半夏的质量研究

目的对阜南产半夏的质量进行研究。方法分别测定4个产地半夏中游离、水解氨基酸和麻黄碱,采用高效液相色谱法对4个产地半夏的甲醇和酸性乙醇提取物的成分进行比较,用薄层色谱法对4个产地半夏的石油醚提取物的成分进行比较。结果阜南产半夏所含氨基酸总量和种类以及麻黄碱与其他产地半夏基本一致,甲醇提取物和石油醚提取物的主要成分与其他产地半夏一致,酸性乙醇提取物的一些微量成分与其他产地半夏有所差异。结论阜南产半夏品质与其他3个产地的半夏基本相同。     

半夏类药材研究概况

半夏作为一种传统的中药材，具有很好的药用价值。近年来，由于半夏资源匮乏，市场上出现了以其它半夏类药材代替半夏使用的现象。本文对半夏类药材就其生药学、化学成分、药理及毒性的研究情况作简要综述，以便进一步对它们进行比较研究提供参考，同时本文还就半夏类药材的研究前景提出自己的一些看法。     

中药半夏及其伪品的鉴定

目的:鉴别半夏真伪,以达到用药安全。方法:通过药材性状、显微鉴别、薄层色谱法、紫外扫描法进行鉴别。结论:半夏伪品及混淆品不能替代正品,使用时必须准确鉴别,以避免误用。     

半夏工厂化育苗技术体系研究初探

目的建立一套半夏工厂化育苗体系,实现半夏的快速繁殖,解决半夏生产因用种而造成的退化问题。方法探讨了外植体诱导、植物生长调节物质质量浓度、光照条件及继代周期对丛生芽增殖的影响。结果外植体的诱导以MS 6-BA(4~5)mg/L NAA0.2mg/L培养基为宜。组织培养中生长调节物质质量浓度为NAA0.2mg/L 6-BA2mg/L、转接时组织块带两个或两个以上芽时,半夏生长状况最好。结论采用工厂化育苗技术可进行半夏的快速繁殖,为保护和持续利用这一重要药材资源提供有效途径。     

赫章半夏土壤环境质量分析与评价

目的 对赫章半夏种植基地土壤污染现状进行评价,旨在为半夏规范化种植基地建设提供科学依据.方法 应用单项污染指数法和综合污染指数法进行评价.结果 该地区土壤的各种污染物的污染指数均小于1,污染水平低于国家标准.结论 赫章半夏种植基地的土壤质量完全符合<中药材生产质量管理规范>(GAP)的相关要求.     

半夏的病毒危害及脱毒快繁技术研究

目的确定病毒病对半夏植株生长的危害,通过组织培养手段对病毒进行脱毒技术研究。方法采取高温钝化结合茎尖培养的方法,用多种激素诱导茎尖成苗、长根及增殖等。结果用6-BA1.0~2.0mg/L、NAA0.2mg/L诱导成苗可有效地脱去病毒;6-BA2.0mg/L附加适量的NAA和GA3可促进珠芽增殖及试管苗的生长速度;IAA0.2~0.5mg/L可促进半夏根系的发育;6-BA2.0mg/L、GA30.2mg/L配以适当质量浓度的2,4-D和NAA可促进叶片愈伤组织形成丛生苗。结论对半夏病毒病的脱毒率达到80%,脱毒植株叶片的内部结构排列有序、清晰可见。     

半夏珠芽萌发动态及其影响因子的研究

目的研究半夏P inellia terna ta珠芽的萌发动态及其影响因子,为阐明半夏珠芽的生产应用和珠芽发育生物学提供依据。方法利用完全随机实验设计研究半夏珠芽的萌发动态以及珠芽大小、不同覆土深度、土壤干湿度和不同来源对半夏珠芽萌发和半夏生长的影响。结果四川南充半夏珠芽播种约14 d开始萌发,23 d萌发率达60%以上,29 d完成萌发。直径≥8 mm的珠芽的萌发率显著高于5 mm≤直径<8 mm的珠芽;两种覆土深度10和20 mm对半夏珠芽的萌发和半夏幼苗的生长没有显著性影响;保持土壤湿润的珠芽萌发率显著高于土壤见干见湿的珠芽;从播种到23 d时,四川南充半夏的珠芽萌发率极显著高于山西新绛半夏的珠芽,随后二者的萌发率没有显著性差异。另外发现不同来源的半夏珠芽在萌发时叶形会发生变化。结论培育大的珠芽对半夏繁育有重要意义,保持土壤湿度对提高萌发率和促进半夏幼苗生长有重要作用,不同来源的半夏珠芽具有不同的萌发特点和生长特性,应重视半夏不同品系的筛选。     

不同种除草剂在半夏种植中的初步筛选及其应用研究

目的研究如何减轻半夏Pinellia ternata(Thunb.)B re it种植中所遇到的杂草危害,为大规模田间种植的高产稳产提供保证,以降低投入,实现利润最大化。方法利用完全随机实验设计研究不同种除草剂的除草效果、产生的药害,提出合理除草优化组合。结果乙草胺在禾本科杂草除草效果上有显著优势,药害较低;乐邦综合除草有效率接近90%,效果好时间长;克无踪除草迅速但产生药害也很大。结论前1年生地除草使用克无踪,第2年春播后喷施乙草胺,杂草多发地点施用1次施田补,第1次倒苗后喷洒乐邦。熟地春季使用1次乙草胺,夏季使用1次乐邦即可。