携带Lipocalin2基因的腺病毒对结肠癌细胞SW620的体外抑制作用

目的探讨携带Lipocalin2基因的腺病毒对结肠癌SW620细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡的作用。方法以不同浓度梯度的腺病毒作用于体外培养的结肠癌SW620细胞,通过MTT法检测腺病毒对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,透射电镜观察细胞凋亡时的超微形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 MTT实验显示携带Lipocalin2基因的腺病毒可抑制SW620细胞的生长,显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状,透射电镜下观察发现细胞体积缩小,细胞核固缩,核内染色质凝集,并附于一侧核膜的边缘,内质网扩张,空泡形成增多,出现明显的凋亡现象。流式细胞仪可检测到SW620细胞凋亡率明显增加,呈时间及浓度依赖性。结论携带Lipocalin2基因的腺病毒能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制SW620细胞的生长。     

孕激素对人子宫内膜癌细胞体外增殖、凋亡的影响

目的探讨孕激素对人子宫内膜癌细胞对体外增殖及凋亡的影响。方法体外培养子宫内膜癌细胞,采用流式细胞仪观察不同浓度孕酮对细胞周期及凋亡率的影响、光学显微镜检测其形态学变化、MTT比色法观察不同浓度孕酮对细胞增殖的作用。结果流式细胞仪分析,实验组G_0/G_1期上升,S期下降,细胞凋亡率上升;光镜可观察到细胞凋亡的形态学改变;MTT结果显示,随着孕酮浓度的增加,其对细胞生长的抑制作用明显增强,与对照组比较,差异有显著性,且具有剂量依赖性。结论孕酮抑制子宫内膜癌细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

熊果酸对HL60细胞作用机制的初步研究

目的探讨熊果酸在体外对急性早幼粒白血病HL60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用体外细胞培养技术,荧光显微镜观察细胞结构变化、MTT法观察细胞生长抑制作用、流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化。结果 MTT法证实熊果酸对HL60细胞具有增殖抑制和杀伤效应,并呈浓度和时间依赖性。显微镜下可见HL60细胞出现典型凋亡细胞形态学改变。流式细胞仪检测细胞周期阻滞于G0/G1期。结论熊果酸在体外可抑制急性早幼粒白血病HL60细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

雷公藤内酯醇联合奥沙利铂抗人结肠癌细胞SW480增殖的体外研究

目的观察雷公藤内酯醇（Triptolide,TPL）和奥沙利铂（Oxaliplatin,L-OHP）单用及联合应用对人结肠癌细胞SW480体外增殖的影响,初步探讨其作用机理。方法 MTT法检测L-OHP和TPL单用和联合对人结肠癌细胞株SW480增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期改变。结果 TPL和L-OHP联合应用对SW480细胞的增殖有协同抑制作用。流式细胞仪检测发现细胞阻滞于S期,G2/M期细胞减少及出现凋亡峰;结论实验证实TPL和L-OHP联合应用能协同抑制SW480细胞增殖,其作用机理有可能是通过阻滞细胞周期引起的。     

雷公藤红素通过活性氧诱导结肠癌SW620细胞凋亡

目的:探讨雷公藤红素(celestrol)诱导KRAS驱动的结肠癌SW620细胞产生凋亡的作用和机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和台盼蓝拒染法检测细胞增殖;免疫印迹法检测蛋白表达;流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡、细胞周期、线粒体膜电位;荧光显微镜检测细胞内活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)。结果:雷公藤红素明显抑制SW620细胞的增殖活性;雷公藤红素下调SW620胞内的p-Akt、NF-κB、Survivin表达,激活caspase-7、caspase-3 和PARP;雷公藤红素增加SW620细胞内的ROS、降低线粒体膜电位、阻滞细胞周期于G₂/M期和诱导凋亡。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制雷公藤红素引起的上述作用。结论:通过诱导细胞内ROS的累积导致细胞内线粒体膜电位的下降进而触发细胞发生凋亡是雷公藤红素诱导SW620细胞凋亡的作用机制之一。     

榄香烯衍生物诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

目的研究榄香烯衍生物(榄香烯哌嗪)对人宫颈癌细胞HeLa体外增殖的抑制作用及其作用机制。方法采用SRB法考察榄香烯哌嗪对多种人癌细胞体外增殖的抑制作用。普通光学显微镜及荧光显微镜观察榄香烯哌嗪对HeLa细胞形态的影响,利用流式细胞仪检测HeLa细胞凋亡及细胞周期变化情况。结果榄香烯哌嗪对HeLa、HepG2、SGC-7901及Bel-7402细胞有较强的体外增殖抑制作用。光学显微镜和荧光显微镜观察榄香烯哌嗪10μmol.L-1处理的HeLa细胞,细胞体积变小、细胞核皱缩致密,可见凋亡小体。此外,榄香烯哌嗪可将HeLa细胞阻滞于G0/G1期,且随药物作用时间延长或剂量增加,DNA直方图上可见渐强的SubG1峰。结论榄香烯哌嗪可诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡,且具有细胞周期阻滞作用。     

三氧化二砷体外对人EGFR T790M肺腺癌细胞抑制作用的研究

目的观察三氧化二砷对在体外对EGFR T790M突变非小细胞肺癌H1975细胞的生长抑制作用。方法运用MTT法检测三氧化二砷对H1975细胞增殖抑制,流式细胞仪检测细胞周期变化。倒置显微镜观察三氧化二砷作用下细胞形态变化。结果不同浓度的三氧化二砷在体外均能明显抑制H1975细胞的增殖,且具有时间和浓度依赖性,与浓度和时间呈正比。倒置显微镜观察发现三氧化二砷具有诱导H1975细胞出现核固缩、染色质凝集等凋亡形态改变。流式细胞仪检测提示细胞周期停留在G0/G1期。结论三氧化二砷在体外能抑制EGFRT790M突变肺癌细胞增殖、诱导调亡和改变细胞周期的作用。     

TNP-470对人结肠癌Lovo细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的　探讨TNP 4 70对体外培养的人结肠癌Lovo细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法　采用MTT法检测TNP 4 70对体外培养的Lovo细胞的生长抑制作用 ,流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡百分率。结果　TNP 4 70对Lovo细胞生长具有抑制作用 ,并存在量效和时间依赖性。流式细胞仪分析表明 :G0 /G1期细胞百分率上升 ,S期细胞百分率下降 ,增值指数 (PI)下降 ,凋亡率上升 ,电镜下可见典型的细胞凋亡形态改变。结论　TNP 4 70对Lovo细胞的增殖具有抑制作用 ,其机制与细胞周期阻滞和凋亡有关     

苦马豆素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡作用机制的实验研究

目的:探讨SW体外诱导人胃癌细胞株SGC7901凋亡的机制。方法:应用MTT法确定SW对体外培养的SGC7901细胞的作用剂量,通过流式细胞术及凋亡相关调控基因p53、cmyc、Bcl2的检测对细胞凋亡及细胞周期的测定,观察SW对胃癌细胞SGC7901增殖周期的影响以及抑制肿瘤细胞增殖的方式,同时利用激光共聚焦显微镜对细胞内Ca2 浓度的监测,研究SW与细胞内Ca2 超载的关系。结果:SW体外抗SGC7901细胞的完全致死剂量为6.2μg·ml-l,高于0.05μg·ml-l时抑制作用明显(P<0.05),其LC50为0.84μg·ml-l;经SW0.5～1.5μg·ml-l处理24h可引起凋亡抑制基因p53、Bcl2的明显下降、凋亡促进基因cmyc的明显升高以及肿瘤细胞内Ca2 超载,最终诱导SGC7901细胞凋亡。实验还证实SW主要作用于肿瘤细胞的S期,使瘤细胞主要积聚在S期。结论:SW通过多种途径诱导细胞凋亡可能是其发挥抗癌作用的重要机制。     

氧化苦参碱诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的实验研究

目的　研究氧化苦参碱对MCF 7细胞的诱导凋亡作用机制。方法　用光学显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果　实验显示氧化苦参碱作用于体外培养的MCF 7细胞可诱导发生凋亡 ,凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化等 ;DNA电泳可见DNA梯形条带 ;激光共聚焦显微镜示DNA含量下降 ,流式细胞仪检测sub G1峰在G1期前出现 ,S期细胞比例增高。结论　氧化苦参碱对体外培养MCF 7细胞生长有抑制作用 ,机制与通过阻止细胞周期的进程 ,启动细胞自身调控程序 ,诱导肿瘤细胞凋亡有关     

RNAi对大肠癌SW620细胞survivin基因的影响

目的：探讨RNAi（RNA interference）对survivin在大肠癌细胞SW620表达的影响及siRNA干扰后诱导肿瘤survivin表达降低的机制。方法：构建survivin特异性的RNA封闭性载体survivinl通过培养大肠癌细胞SW620，survivin封闭性载体转染SW620细胞；Hoechest染色大肠癌细胞，通过荧光显微镜观察细胞形态学情况；流式细胞仪分析肿瘤细胞的凋亡情况。结果：DNA测序证实表达质粒构建成功，转染后的大肠癌细胞核明显可见凋亡小体；流式细胞仪分析大肠癌细胞系SW620的凋亡率survivinl为10．03％。结论：RNAi能够下调survivin，并促进大肠癌细胞系SW620的细胞凋亡。     

姜黄素联合伊立替康对结肠癌SW620细胞的体外抑制作用

目的研究姜黄素增强伊立替康对结肠癌SW620细胞的体外抑制作用,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞凋亡的影响,比较细胞凋亡率;采用蛋白质印记法检测不同质量浓度伊立替康和姜黄素单用或联合用药对SW620细胞内拓扑异构酶I蛋白表达水平的影响。结果伊立替康和姜黄素单用均对SW620细胞增殖具有抑制作用,呈浓度和时间相关性。5、50μg/mL伊立替康分别与0~30μg/mL姜黄素联合处理SW620细胞12、24、48 h均具有协同抑制细胞活性的作用,且呈浓度和时间相关性。高质量浓度比低质量浓度的伊立替康与姜黄素联合用药抑制效果显著(P0.01)。0、20μg/mL姜黄素分别与0、5、50μg/mL伊立替康联合处理SW620细胞12、24、48 h,姜黄素可以增强伊立替康诱导的SW620细胞凋亡率。20μg/mL姜黄素联合5、50μg/mL伊立替康显著上调了SW620细胞内拓扑异构酶-Ⅰ蛋白的表达,协同诱导了SW620细胞内拓扑异构酶-Ⅰ蛋白的表达。结论伊立替康联合姜黄素可以协同增强对SW620细胞活性的抑制作用,协同诱导SW620细胞凋亡,其作用机制可能与伊立替康、姜黄素上调拓扑异构酶-Ⅰ表达有关。     

雄黄抑制宫颈癌细胞株增殖和诱导凋亡的体外研究

目的:体外研究中药雄黄主要成分As4S4对子宫颈癌细胞株Hela细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法:以As4S4不同浓度(7.5、15、30、60mg/L),分12h,24h,36h,48h,60h处理Hela细胞,用光镜观察细胞变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;用DNA梯状电泳(DNA ladder)检测凋亡的发生。结果:不同浓度(7.5、15、306、0 mg/L)的As4S4处理的Hela细胞,细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效和量效关系,差异有非常显著性(P<0.01);As4S4诱导Hela细胞的凋亡率为(8.13±1.13)%~(62.36±4.42)%,与对照组比较(2.84±1.88)%,差异有极显著性(P<0.01),并呈浓度依赖性;DNA ladder呈梯状条带。结论:雄黄体外对宫颈癌细胞株Hela细胞具有增殖抑制和促进凋亡作用。     

丙戊酸钠逆转组蛋白低乙酰化水平对肝癌细胞侵袭转移的体外实验研究

目的探讨丙戊酸钠(VPA)逆转组蛋白低乙酰化水平对体外培养的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞体外侵袭、转移能力的影响及其可能的作用机制。方法流式细胞仪(FCM)分析不同浓度VPA对SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期的影响;分别采用划痕试验,Transwell侵袭小室和细胞-基质黏附试验测定细胞体外迁移、侵袭和黏附能力;Western blot观察不同浓度VPA处理后HPA和PCNA蛋白的表达变化。结果 VPA诱导SMMC-7721细胞凋亡,阻滞细胞于G2/M期,抑制细胞增殖。VPA试验组细胞的侵袭、迁移能力以及黏附能力均显著低于对照组(P<0.05)。随浓度和时间增加,VPA能明显降低HPA和PCNA蛋白表达。结论 VPA可通过逆转染色体组蛋白低乙酰化水平,显著抑制肝癌细胞增殖,降低肝癌细胞侵袭、迁移和黏附能力。下调HPA和PCNA表达可能是其发挥作用的主要机制之一。     

Survivin和Bcl-2调节槲皮素诱导的A549细胞凋亡

目的研究槲皮素诱导肺腺癌细胞A549凋亡,探讨survivin和Bcl-2在槲皮素诱导A549细胞凋亡中的调节作用。方法分别采用MTT法、荧光染色、流式细胞仪和免疫细胞化学观察了槲皮素对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、细胞周期和蛋白表达的影响。结果槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,槲皮素能使肺腺癌A549细胞周期阻滞于G0/G1期,且A549细胞survivin和Bcl-2蛋白表达同时下降,而caspase-3活性升高。结论槲皮素能诱导A549细胞凋亡,其机制可能是使肺腺癌A549细胞周期阻滞于G0/G1期,并同时下调survivin和Bcl-2蛋白的表达,直接激活caspase-3而诱导A549细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导体外多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的探讨三氧化二砷（ATO）体外对多发性骨髓瘤（MM）增殖凋亡、粘附分子、细胞因子的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测ATO对骨髓瘤细胞株U266抑制作用,求出其IC50,膜联蛋白V（Annexin-V）检测凋亡并进行细胞周期分布分析,流式细胞术检测细胞间粘附分子的表达强度,RT—PCR检测CXCR4、c-Myc、Rb、Bax／bcl—XL（Bcl-2家族基因）、RANK—L、CyclinD1及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达。结果ATO在体外可抑制U266细胞的增殖,且呈现剂量和时间依赖性。ATO可使骨髓瘤细胞分裂阻滞于G0／G1期,并促进U266发生早期凋亡。经ATO作用后U266细胞高表达CD11a等粘附分子。U266细胞高表达CXCR4、bcl—XL和c-Myc基因,经ATO作用后其表达显著下调。U266处理前后均未检测到Rb、CyclinD1、VEGF、Bax,尤其是RANK—L基因的表达。结论ATO通过下调c-Myc和bcl—XL基因促进U266细细胞凋亡,并使G0／G1期细胞分裂阻滞,影响粘附分子表达,并可能通过CXCR4影响归巢。     

Effect of curcumin on proliferation and cycle of human ECa-109 cells

OBJECTIVE To investigate the mechanism of curcumin on Inhibition of cell proliferation and apoptosis induction in esophageal cancer cells.METHODS Eca-109 cell growth inhibiting rates induced by curcumin were investigated by using CCK-8 assay.Eca-109 cell growth inhibiting rates induced by curcumin were investigated by using DNA gel electrophoresis for detection of DNA Ladder,electron microscopy observation technology for detection of ultrastructure and automatic fluorescence microplate reader.RESULTS Curcumin can inhibit cell proliferation growth inhibition rate had increased in a dose-and time-dependent manner.Caspase 3 activity assay detected that OD value with 20 μmol·L-1,40 μmol·L-1 of curcumin for 24 h,compared with the control group,the difference was statistically significant(P<0.05).Electron microscopy showed that curcumin can damaging cellular ultrastructure.CONCLUSION Curcumin can damage cellular ultrastructure of Eca-109 cells,Inhibit cell proliferation and induce its apoptosis.     

二烯丙基二硫诱导K562细胞凋亡及与G2 / M期阻滞关系研究

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用细胞计数法、形态学观察、MTT分析法、AO／EB染色、流式细胞术探讨DADS对K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果1．DADS在10-80mg-L。范围内,对K562细胞的抑制作用呈剂量一时间依赖效应。2．DADS浓度在10-80mg．L-1。时作用K562细胞24h后,凋亡率逐渐升高,差异有统计学意义（p〈0．05或P〈0．01）。3．不同浓度DADS作用于K562细胞24h后,K562细胞阻滞于G2／M期。结论DADS有抑制K562细胞增殖和促进K562细胞凋亡的作用,其作用的可能机制与k562细胞阻滞于G2／M期有关。