板蓝根体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型作用

目的探讨板蓝根5个化学部位体外抗单纯疱疹病毒型(HSV-Ⅰ)的活性及作用机制。方法利用Hep-2细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,测定板蓝根不同化学部位抑制HSV-Ⅰ对Hep-2细胞感染的作用;以治疗指数(TI)为评价指标,比较各部位抗病毒活性强弱。结果板蓝根各部位均有抑制HSV-Ⅰ生物合成作用,其中部位活性最强,TI为8.2;部位对HSV-Ⅰ有直接灭活作用;各部位均不能阻止HSV-Ⅰ侵入细胞。结论板蓝根在体外主要通过抑制生物合成而发挥抗HSV-Ⅰ作用。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型DNA疫苗的构建

目的 构建表达单纯疱疹病毒1型糖蛋白D的DNA疫苗。方法 采用聚合酶链式反应（PCR），从HSV-1基因组中扩增出gD基因，插入中间载体pGEM-T，然后克隆入真核表达载体pcDNA3.1，构建重组质粒pLy-D，经部分测序和限制性内切酶分析证实，将pLy-D转染Cos-7细胞，并肌肉接种ICR小鼠。用免疫组化和ELISA方法分别检测gD蛋白表达及小鼠血清中的特异性抗体。结果 转染的Cos-7细胞中有gD蛋白的表达；经三次肌肉免疫接种的小鼠血清中有特异性HSV-1抗体产生，结论 本研究构建的重组质粒pLy-D能够在哺乳动物细胞中表达目的蛋白，免疫接种后可以诱导动物产生免疫反应。     

单纯疱疹病毒DNA疫苗的初步研究

目的：探讨含有HSV—2糖蛋白D全基因序列的重组质粒作为DNA疫苗的可能性。方法：采用PCR方法获得HSV—2gD片段，构建含HSV—gD片段的重组质粒pcDNA3-gD。重组质效作为DNA疫苗免疫小鼠，观察其对小鼠的免疫效果及保护作用。结果：重组质粒pcDNA3-gD免疫小鼠后产生特异性抗体；可保护小鼠免受HSV—2的致死性攻击(存活率达75％)。结论：重组质粒pcDNA3-gD能诱导小鼠产生特异性免疫反应，可以作为HSV的候选DNA疫苗。     

单纯疱疹病毒2型泛素化新型DNA疫苗构建

目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)早期表达蛋白感染细胞蛋白(ICP)27强制泛素化的DNA疫苗表达质粒。方法利用聚合酶链反应(PCR)技术从人基因组DNA和HSV-2基因组中分别扩增出泛素全长基因和HSV-2、ICP27 377-459,PCR鉴定后酶切连接获得融合基因片段,插入真核表达质粒pcDNA3．1载体中,构建出重组真核表达质粒Ub-ICP-pcDNA3．1,并对其进行测序鉴定。结果构建的重组质粒Ub-ICP-pcDNA3．1克隆基因插入方向正确,与预期序列完全一致。结论成功构建了HSV-2早期表达蛋白ICP27强制泛素化DNA疫苗。     

单纯疱疹病毒2型疫苗的研究进展

单纯疱疹病毒（HSV）是人类病毒性疾病中常见的病毒,有HSV-1和HSV-2两种血清型。HSV-2感染是一种极为普遍的传染性疾病,主要感染外生殖器和躯干下部皮肤,引起生殖器疱疹和新生儿疱疹以及宫颈癌的发生。最近研究发现HSV-2能够增加人免疫缺陷病毒（HIV）的感染率。     

单纯疱疹病毒I型DNA疫苗的构建(英文)

目的　构建表达单纯疱疹病毒 1型糖蛋白D的DNA疫苗。方法　采用聚合酶链式反应 (PCR) ,从HSV 1基因组中扩增出 gD基因 ,插入中间载体pGEM T ,然后克隆入真核表达载体pcDNA3 .1 ,构建重组质粒 pLy D .经部分测序和限制性内切酶分析证实。将pLy D转染Cos 7细胞 ,并肌肉接种ICR小鼠。用免疫组化和ELISA方法分别检测gD蛋白表达及小鼠血清中的特异性抗体。结果　转染的Cos 7细胞中有 gD蛋白的表达 ;经三次肌肉免疫接种的小鼠血清中有特异性HSV 1抗体产生。结论　本研究构建的重组质粒 pLy D能够在哺乳动物细胞中表达目的蛋白 ,免疫接种后可以诱导动物产生免疫反应     

单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA疫苗的免疫研究

目的　构建新型单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA疫苗 ,鉴定其在哺乳细胞中的表达 ,检测其激发动物产生免疫反应的能力。方法　RT -PCR鉴定gD基因在COS - 7细胞中的表达 ,ELISA检测血清中中和抗体水平 ,用病毒攻击后检测其保护效率。结果　pVAX -gD能在COS- 7细胞中表达 ,并可激发免疫动物产生高滴度中和抗体 ,有效保护动物免受致死量病毒的攻击。结论　构建的新型单纯疱疹DNA疫苗是一株很有希望的人用生殖器疱疹疫苗     

CD40L在M2型巨噬细胞类型转换中的作用

 目的 检测不同CD40L表达水平的脾细胞对巨噬细胞表型和功能的影响,探讨通过调控CD40L的表达改变巨噬细胞的类型。方法 贴壁分离正常BALB/c小鼠的腹腔巨噬细胞。将腹腔巨噬细胞或经IL-4刺激的腹腔巨噬细胞,分别与体外培养2日后获得的CD40Llow脾细胞和Ionomycin与PMA诱导的CD40Lhigh脾细胞共孵育,24h后检测M1和M2型巨噬细胞相关基因的表达,并以硝酸还原酶法检测NO分泌水平。结果 与CD40Llow脾细胞共孵育的巨噬细胞CCL22、Fizz1和Ym1表达水平较高,但只分泌较低水平的NO,而与CD40Lhigh脾细胞共孵育的巨噬细胞表达较高水平的CCL3并分泌高水平的NO,而且CD40Lhigh脾细胞可使M2型巨噬细胞表型相关基因明显下调。结论 CD40Lhigh脾细胞使巨噬细胞倾向于M1型极化,并且能使M2型巨噬细胞向M1型转换。     

潜伏相关转录体对单纯疱疹病毒的再激活作用

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)属于α疱疹病毒科,有HSV-1和HSV-2两个血清型.HSV-1病毒主要感染唇、口、眼、脑等部位,可引起眼结膜炎、致死性脑炎等疾病,而HSV-2病毒则感染腰以下部位,主要引起生殖器疱疹(genital herpes,GH)[1].HSV病毒感染之所以成为世界性的医学难题,其易潜伏特性是症结所在.     

黄芪水煎液抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的实验研究

目的 研究黄芪抗Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)的作用。方法 在人胚肺二倍体细胞系统中,采用对病毒所致细胞病变的抑制实验,观察黄芪水煎液抗HSV-I的药效。结果 黄芪水煎液的半数抑制浓度为0.98µg/ml,最小有效浓度为1.95µg/ml,治疗指数为128。结论 黄芪有较显著的抗HSV-Ⅰ作用,且对细胞毒性低。     

单纯疱疹病毒II型感染对生殖道上皮细胞间紧密连接和单核细胞趋化性影响的初步研究

目的探讨人类单纯疱疹病毒II型（HSV-2）感染对生殖道上皮细胞间紧密连接的影响及对单核细胞的趋化作用。方法通过以人子宫内膜腺癌细胞（HEC-1-A）小室培养模型为基础建立生殖道体外单层细胞致密层模型,低剂量HSV-2感染后（MOI=0.1）,检测体外细胞活力;通过检测跨膜电阻判断细胞间紧密连接程度的变化;采用Westernblot、荧光定量PCR法观察细胞紧密连接蛋白ZO-1、E-cadherin和Occuldin的表达情况;通过单核细胞趋化反应实验来检测感染HSV-2的HEC-1-A细胞培养上清液的趋化效应。结果与阴性对照组（Mock组）相比,HSV-2（MOI=0.1）感染使HEC-1-A单层细胞致密层跨膜电阻逐渐降低,且在感染中后期下降明显（P＜0.01）,而细胞活力无显著变化（均＞80%）;随着HSV-2病毒感染,ZO-1蛋白表达水平逐渐降低,在感染60h,该蛋白表达水平最低,而其mRNA表达水平无显著变化（P＞0.05）,E-cadherin和Occuldin均无显著变化（均P＞0.05）;HSV-2感染HEC-1-A后的细胞上清液可诱导单核细胞产生明显的趋化反应（P＜0.01）。结论低剂量HSV-2持续感染可降低HEC-1-A单层细胞致密层跨膜电阻,破坏细胞间紧密连接,很可能与下调ZO-1表达水平相关;感染后的细胞上清液可产生某种特殊的趋化分子介导免疫细胞向感染区域迁移浸润。     

培养的人胎盘细胞能被HSV-2感染

单纯疤疹病毒-2型(HSV-2)是某些新生儿先天性畸形和自发性流产的原因。为评估HSV-2感染人胎盘的可能性,用培养的人胎盘细胞被该病毒感染。敏感的抗补体免疫荧光(ACIF)法显示,感染的胎盘细胞有强烈的核荧光。故推测,HSV-2在体内有时可能先感染胎盘组织后再感染胎儿。     

CD40配体对汉黄芩素抗肿瘤作用的影响及其机理探讨

目的 探讨重组可溶性CD40配体（recombinant soluble CD40 ligand, rsCD40L）对汉黄芩素诱导的抗肿瘤作用的影响及其作用机理。方法 采用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测rsCD40L与汉黄芩素共处理对卵巢癌细胞株SKOV3的细胞毒作用;吖啶橙/溴化乙锭双重染色后荧光显微镜下观察处理后细胞形态学改变;采用Western blot检测细胞凋亡相关分子caspase-8、caspase-3、多聚ADP核糖聚合酶的变化,在此基础上,加入caspase抑制剂Z-VAD-FMK和肿瘤坏死因子α （tumor necrosis factor α, TNF-α）中和抗体,采用LDH释放实验,进一步检测阻断这些信号通路对肿瘤细胞死亡的影响。结果 rsCD40L可增强汉黄芩素对SKOV3细胞的杀伤作用(P<0.05)。随着汉黄芩素剂量的增加,对肿瘤细胞的杀伤作用也随之增强(P<0.05)。经rsCD40L与汉黄芩素共处理的SKOV3细胞呈现典型的凋亡形态学改变;caspase信号通路被显著活化,且caspase抑制剂Z-VAD-FMK可抑制增强的细胞毒作用。TNF-α中和抗体也可抑制这一增强的细胞毒作用。结论 rsCD40L可增强汉黄芩素诱导的肿瘤细胞死亡,其机理与增强肿瘤细胞凋亡及诱导TNF-α的自分泌有关,提示将rsCD40L和汉黄芩素合用具有潜在的抗肿瘤作用价值。     

CD40、CD40L和sCD40在B细胞恶性血液肿瘤中的作用

CD40、CD40L和sCD40作为重要的信号分子,在诱导抗原呈递细胞、T细胞的活化与肿瘤免疫中发挥着重要作用。该文探讨这三种分子在急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤等疾病中的发病机制,以及多种CD40结合药物,如CD40L三聚体（CD40LT）、CD40单抗和CD40L阳性细胞目前作为免疫治疗药物在血液肿瘤治疗中的临床意义。     

CD40-CD40L与OX40在急性髓性白血病中的表达意义

目的:检测在急性髓性白血病细胞中CD40、CD40L、OX40的表达并探讨其临床意义.方法:应用流式细胞仪检测46例未经治疗的初诊急性髓性白血病患者骨髓单个核细胞表面CD40、CD40L、OX40的表达,分为四组:仅表达CD40的患者组(①组)、表达CD40+CD40L+OX40-的患者组(②组)、三种抗原全部表达组(③组)和全部不表达组(④组).利用SPSS统计软件分析.结果:在有高白细胞表现的患者中,②组的发病率(100%)最高;在有血小板减少表现的患者中,①组的发病率(100%)最高;在有脾大表现的患者中,④组的发病率(6.7%)最低.结论:CD40的单独表达可能使白血病患者血小板的降低更加严重,而当合并CD40L表达时,会减少血小板低下的发生率.CD40的表达能增加患者伴有脾大表现的可能性.     

CD40/CD40L基因及其多态性与动脉粥样硬化的研究进展

CD40/CD40配体(CD40L)是一对互补的跨膜糖蛋白,表达于免疫细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、血小板等多种细胞上,参与免疫、炎症、高凝等多种病理生理状态的调控。大量研究表明:当发生动脉粥样硬化时,CD40与CD40L结合活化后进入细胞,激活包括核转录因子NF-κB在内的下游信号通道,上调促炎和促血栓形成基因的表达,在动脉粥样硬化的发生发展以及斑块破裂诸多环节中发挥重要作用。CD40/CD40L是沟通免疫、炎症、高凝状态三者间的桥梁,可能是防治心血管疾病的重要靶点。     

腺病毒介导 HSV-2 gD 基因修饰的树突状细胞疫苗制备

目的：生殖器疱疹尚无彻底治愈的方法。研制有效的生殖器疱疹病毒疫苗是预防和治疗HSV-2感染的关键,文中探讨制备腺病毒介导的HSV-2 gD基因修饰的树突状细胞（ dendritic cell , DC）疫苗的可行性。方法将HSV-2 gD蛋白基因克隆到质粒载体Shuttle-2,重组质粒酶切鉴定、测序鉴定后构建重组腺病毒pAdeno-HSV-2 gD。分离小鼠骨髓DC细胞, pAdeno-HSV-2 gD转染DC细胞后用流式细胞术检测DC表型,用免疫组化法、RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot 方法检测HSV-2 gD的表达情况。结果以HSV-2病毒DNA为模板,采用gD基因引物扩增出相应的目的片段。琼脂糖凝胶电泳显示,PCR产物gD基因同预期的大小一致（1182 bp）。 pAdeno-gD DNA用脂质体法转染293细胞10 d,反复冻融获得pAdeno-HSV-2 gD重组腺病毒,活性为4×1010 IU／mL。流式细胞仪检测结果显示：成熟DC和腺病毒感染后DC,CD40含量为（74．2±3．9）％、（81．3±3．1）％,CD80含量为（73．9±4．1）％、（80．4±2．9）％,CD86含量为（76．1±5．5）％、（83．7±3．9）％,均较不成熟DC的CD40、CD80、CD86含量[（9．7±0．5）％、（7．5±1．2）％、（5．2±1．1）％]升高（P＜0．01）。 pAdeno-HSV-2 gD-DC和细胞因子刺激诱导成熟的DC细胞表面分子表达差异无统计学意义（P＞0．05）。 RT-PCR、免疫组织化学方法证明HSV-2 gD能在DC细胞内表达,表达产物的SDS-PAGE和Western blot分析发现,在相对分子质量为43000处有外源蛋白表达,与预期蛋白条带一致。结论成功制备了pAdeno-HSV-2 gD-DC疫苗。     

CD40、CD40L和sCD40在B细胞恶性血液肿瘤中的作用

CD40、CD40L和sCD40作为重要的信号分子,在诱导抗原呈递细胞、T细胞的活化与肿瘤免疫中发挥着重要作用.该文探讨这三种分子在急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤等疾病中的发病机制,以及多种CD40结合药物,如CD40L三聚体（CD40LT）、CD40单抗和CD40L阳性细胞目前作为免疫治疗药物在血液肿瘤治疗中的临床意义.     

急性髓性白血病中CD40-CD40L与OX40的表达与Bcl-2和Bcl-xL表达的相关性分析

目的:探讨在急性髓性白血病(AML)中,CD40、CD40L、OX40抗原的表达与白血病相关基因Bcl-2和Bcl-xL表达的相关性.方法:根据流式细胞仪检测结果将46例未经治疗的初诊急性髓性白血病患者分为四组:仅表达CD40的患者组(①组)、表达CD40+CD40L+OX40-的患者组(②组)、三种抗原全部表达组(③组)和全部不表达组(④组),利用RT-PCR方法检测46例患者骨髓单个核细胞Bcl-2、Bcl-xL mRNA的表达,利用SPSS统计软件分析.结果:①组、④组Bcl-2、Bcl-xL的表达水平低于②、③组的表达水平.结论:在CD40与CD40L同时表达时,可以提高白血病细胞Bcl-2和Bcl-xL的表达.     

Expression of CD40 and CD40L on Peripheral Blood Mononuclear Cells in Patients with Condyloma Acuminatum

The initiation,development and transforma-tion of condyloma acuminatum(CA)bear a closerelation to the cellular i mmune function ofhost[1-3].The CD40and CD40ligands,a couple ofi mportant costi mulatory molecules of the specifici mmune systemin vivo,play an i mportant role inthe activation of Tlymphocytes and the secretionof effective cytokines.To obtaintheinformation a-bout the expression level and explore the clinicalsignificance of CD40and CD40L on peripheralblood mononuclear cells(PMBC…