ALK4对心肌梗死后心肌纤维化的影响和作用机制

目的研究ALK4在心梗后心肌纤维化中的作用及分子机制。方法利用ALK4~(+/-)小鼠和野生型C57BL/6小鼠构建心梗模型,通过天狼星红染色检测纤维化,用WB、Real-time PCR、免疫组化技术检测梗死边缘区α-SMA、collagen1a-1、CTGF的表达,探讨ALK4在心梗后心肌纤维化中的作用。分离及培养原代ALK4~(+/-)小鼠心脏成纤维细胞,在低氧刺激下(1%O2)研究ALK4对心脏成纤维细胞增殖、分化和分泌合成功能的影响。结果心梗后第28天,梗死边缘区ALK4蛋白表达水平升高,ALK4敲除后则显著少其表达。与野生型同窝对照小鼠(WT)相比,ALK4~(+/-)小鼠梗死后生存率提高[ALK+/-(77.1)%vs WT(54.3)%,P0.05],心脏功能改善[LVEF:ALK+/-(48.5±3.5)%vs WT (29.3±3.8)%,P0.05;FS:ALK+/-(24.5±2.2)%vs WT (13.9±1.9)%,P0.05],梗死边缘区心肌纤维化减少[ALK+/-(32.1±2.0)%vs WT(22.5±2.2)%,P0.05]。细胞实验中,ALK4敲除则显著抑制低氧刺激下心脏成纤维细胞增殖[ALK4~(+/-)(2.68±0.23) vs W(1.86±0.42),P0.05]、分化[ALK4~(+/-)(2.72±0.21) vs WT(1.43±0.31),P0.05]和分泌合成[ALK4~(+/-)(9.87±0.74) vs WT(4.13±1.31),P0.05]。ALK4~(+/-)敲除抑制低氧下Smad3的磷酸化水平[ALK4~(+/-)(1.64±0.17) vs WT(2.79±0.32),P0.05]而不影响Smad4表达量。结论 ALK4表达抑制可显著抑制心梗后心肌纤维化,改善心室功能和生存率以及钝化心脏成纤维细胞对低氧刺激的反应,其作用主要通过抑制Smad3/4信号通路。     

急性脑血管病的心电图分析

目的:探讨急性脑血管病的心电图特征和产生原因及其与临床的关系。方法:回顾性对88例急性脑血管病患者的心电图资料进行对比分析,找出其心电图表现的主要特征及其与临床表现的相关性。结果:88例脑血管病患者中心电图有异常改变者71例,占81%,主要表现为复极异常及心肌损害,其次表现为心律失常,心电图异常的发生率与患者意识障碍程度呈正相关,心电图变化与患者预后无明显关系,脑出血性疾病比脑缺血性疾病对患者的心脏影响大。结论:急性脑血管患者的心电图异常发生率高,主要表现为复极异常及心肌损害。这可能与患者的中枢神经系统病变受损及高血压病史有关。     

ALK7在高糖诱导的心肌成纤维细胞转化及Ⅰ型胶原合成中的作用

目的 研究高糖诱导的心肌间质纤维化(心肌成纤维细胞表型转化以及胶原分泌)过程中活化素受体样激酶7(ALK7)的作用。方法 体外高糖培养大鼠心肌成纤维细胞,免疫荧光法观察成纤维细胞表型转化, real time PCR法检测心肌成纤维细胞ALK7和Ⅰ型前胶原mRNA的表达水平,ELISA法检测心肌成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原水平,Western blotting法测定心肌成纤维细胞ALK7蛋白的表达水平;siRNA抑制ALK7表达,再次观察高糖对心肌成纤维细胞表型转化及上述各因子表达的影响。结果 高糖刺激心肌成纤维细胞转化为肌成纤维细胞;高糖促进Ⅰ型胶原mRNA 和蛋白的表达(P＜0.05);高糖促进成纤维细胞ALK7 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05); ALK7 siRNA 抑制ALK7的表达后,高糖促进心肌成纤维细胞转化及合成Ⅰ型胶原的作用下降(P＜0.05)。结论 ALK7参与了高糖诱导的心肌成纤维细胞表型转化及合成Ⅰ型胶原的代谢过程。     

三七总皂甙对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的作用及机制

目的 探究三七总皂甙(Panax notoginseng saponins,PNS)对ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的作用及其相关分子机制.方法 8周龄雄性C57BL/6J-ApoE-/-小鼠(用含21％脂肪、19.5％酪蛋白和1.25％胆固醇的饲料喂养)随机...     

心电图T波形成机制及异常的临床意义

T波改变是心电图波形分析中最常见的表现,目前T波形成机制尚不完全清楚.T波改变按产生机制分为:原发性、继发性和电张调整性T波改变,每种T波改变临床意义不同,在分析心电图改变的临床意义时必须结合临床综合分析.@@一、T波形成机制目前关于T波形成机制主要有心室跨壁复极离散与心室整体复极离散两种观点.     

敲除Annexin A7基因的小鼠早期胚胎心肌细胞钙稳态正常

目的:研究Annexin A7在早期胚胎发育过程中对钙平衡调节的作用. 方法: 利用钙成像技术和膜片钳技术检测敲除Annexin A7小鼠的早期胚胎心肌细胞的钙平衡以及相应的离子通道的特性. 结果: 在胚胎心肌细胞发育的早期,敲除Annexin A7小鼠胚胎心肌细胞的静息钙(340/380荧光比例 0.78±0.02)、钙峰值(340/380荧光比例1.28±0.05)和正常细胞的值相似;动作电位(APD90 242.7±43.7 ms、最大去极化电位56.8±1.7 mV)以及L-型钙电流密度(14.1±2.5 pA/pF)和正常细胞的相似,并且钙电流能被碳酰胆碱减小(51.7±8)%,也和正常细胞相似. 结论: 敲除Annexin A7基因的小鼠早期胚胎心肌细胞具有正常的钙稳态以及正常的离子通道.     

细颗粒物PM2.5对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响及机制

目的本实验旨在探讨细颗粒物PM2. 5(particulate matter,PM2. 5)对Apo E基因敲除(Apo E-/-)小鼠(动脉粥样硬化模型小鼠)的影响及作用机制。方法将32只8周龄的雄性Apo E-/-小鼠按随机数字表法分为正常对照组(n=16)和PM2. 5组(n=16)两组,分别给予高脂饲料喂养同时PM2. 5组气管滴注PM2. 5的生理盐水混悬液(30 mg/(kg/d)),对照组气管滴注同等剂量的生理盐水。8周后评价小鼠心脏功能;测定全血中的PM2. 5浓度,血清中血糖、血脂水平及炎性因子水平;降支全动脉油红O染色、主动脉根部MOVAT染色评估斑块面积;实时荧光定量PCR法检测降主动脉中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein associated phospholipase A2,Lp-PLA2)、NAD(P) H氧化酶亚单位p22phox和p47phox的水平。结果 PM2. 5组小鼠全血中重金属成分含量升高(P0. 05),心脏功能无明显改变(P 0. 05),血糖血脂水平无明显差异(P0. 05),血清炎症因子水平显著升高(P0. 05),动脉粥样硬化斑块显著增大(P0. 05),IL-6、TNF-α、Lp-PLA2、p22phox和p47phox的表达水平显著升高(P0. 05)。结论 PM2. 5暴露能够促进Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化的进展,其机制可能与炎症反应和氧化应激有关。     

α7烟碱型乙酰胆碱受体基因敲除小鼠牙髓炎模型的构建

目的:构建α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotine acetylcholine receptor,α7 nAChR)基因敲除小鼠牙髓炎模型,为研究α7 nAChR在牙髓炎发生发展过程中的作用机制提供实验模型.方法:取16只α7 nAChR基因敲除(knock out,KO)小鼠和16只野生型(wide type,...     

ALK抑制剂在NSCLC中的耐药机制及逆转策略的研究进展

间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂是目前治疗NSCLC伴ALK阳性的有效药物,然而,耐药性的产生严重限制了其临床应用。本文对ALK抑制剂耐药产生的主要机制如二次基因突变、基因扩增、旁路通路激活等进行了简要介绍,并对联合用药、开发新型PROTAC降解剂等逆转耐药策略进行了综述,以期为ALK抑制剂药物的未来发展提供参考。     

Kcnq1基因敲除对大鼠左心室和甲状腺功能的影响

目的探讨敲除钾电压门控通道亚家族Q成员1（potassium voltage-gated channel subfamily Q member 1, Kcnq1）对大鼠左心室结构和功能及甲状腺功能的影响。方法利用CRISPR/Cas9技术对大鼠的Kcnq1基因进行定点插入突变,构建Kcnq1纯合敲除大鼠模型。利用小动物超声成像系统检测大鼠的左心室结构和功能的变化。采用PowerLab测定大鼠心电图。通过ELISA检测Kcnq1敲除后大鼠血清中促甲状腺激素（thyrotropin, TSH）、游离三碘甲腺原氨酸（free triiodothyronine, FT3）和游离甲状腺素（free thyroxine, FT4）的含量变化。通过腹腔注射左旋甲状腺素（levothyroxine, L-T4）,观察L-T4替代治疗对Kcnq1-/-大鼠的治疗作用。结果超声成像检测结果表明,9月龄Kcnq1-/-大鼠收缩末期室间隔厚度和左心室后壁厚度均显著减小（P<0.05）;左心室收缩末期内径和左心室收缩末期容积显著增大（P<0.05）;左心室射血分数和缩短分数显著下降（P<0.01）。心电图结果显示,Kcnq1-/-大鼠QT间期延长,并伴有心率减慢。ELISA结果表明,Kcnq1-/-大鼠血清中FT4和FT3含量均明显降低（P<0.05）,TSH的水平未明显变化。Kcnq1-/-大鼠腹腔注射L-T4替代治疗2周后,与野生型相比,左心室后壁厚度显著增加（P<0.05）;左心室收缩末期内径显著降低（P<0.05）;左心室射血分数和缩短分数有所增加;同时,Kcnq1-/-大鼠的QT间期缩短,血清中FT3和FT4的水平增加。结论Kcnq1基因的敲除引起大鼠左心室功能的减弱和QT间期延长,并且其甲状腺功能减退;进行L-T4替代治疗后,能一定程度改善大鼠左心室的功能。     

TRPV1和ASIC3基因敲除小鼠的寿命观察

目的：观察酸敏感离子通道亚基3（ASIC3,又名ACCN3）基因敲除ASIC3-/-小鼠、香草酸瞬时受体亚型I（TRPV1）基因敲除TRPV1-/-小鼠的生存曲线,为进一步繁殖使用该品系小鼠提供参考。方法选用105只基因敲除小鼠,其中ASIC3-/-鼠44只,TRPV1-/-鼠61只。观察正常喂养两种小鼠500d以内的生存情况,并绘制生存曲线,进行生存分析。结果ASIC3-/-小鼠与TRPV1-/-小鼠随着时间的延长,生存概率降低,经比较TRPV1-/-小鼠的生存概率优于ASIC3-/-小鼠的生存概率,两种小鼠的生存时间存在统计学差异,（P＝0.004,P＜0.01）,两种小鼠中不同性别之间的生存曲线无显著学差异。结论TRPV1-/-小鼠的生存概率优于ASIC3-/-小鼠的生存概率。而两种鼠不同性别之间的生存概率则基本相当。     

芍药苷ApoE-/-对小鼠血脂及主动脉斑块的影响

[目的]观察芍药苷对ApoE^-/-小鼠血脂及主动脉斑块形成的影响。[方法]6周龄ApoE^-/-雄性小鼠经普通饲料饲养4周,髙脂饲料饲养12周后,随机分为ApoE^-/-模型组及芍药苷60 mg/kg、30 mg/kg剂量组,相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠作为空白对照组。药物干预12周后,检测血脂的变化,并测量主动脉弓部、胸段、腹段斑块面积。[结果]ApoE^-/-模型组甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）显着高于C57BL/6J组（P<0.01）,芍药苷60 mg/kg、30 mg/kg组的血脂水平显着低于ApoE^-/-模型组（P>0.05,P<0.01）,并且不同程度减小主动脉各段斑块的面积。[结论]芍药苷具有降脂和抑制主动脉斑块形成的作用,表明芍药苷具有抗动脉粥样硬化作用。     

ApoE-/-高脂模型小鼠肝脏转录组铁死亡潜在分子网络互作的初步探讨

目的：对ApoE^-/-高脂模型小鼠肝脏中铁死亡相关差异基因的生物过程和信号通路进行分析,构建肝脏内铁死亡的分子调控网络,从转录水平揭示高脂血症的发病机制。方法：C57BL/6J小鼠7只作为空白对照组,ApoE^-/-小鼠7只作为模型组,对照组和模型组分别给予普通饲料和高脂饲料,16周后检测小鼠的甘油三酯(triglyceride,TG)、胆固醇(cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL-C)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL-C)血清水平,并对肝脏取材进行HE染色及转录组分析。应用Graph-Pad Prism 8.0.2软件分析铁死亡相关差异基因分布情况,通过STRING11.0平台构建蛋白-蛋白相互作用网络模型,DAVID数据库进行GO生物功能富集和KEGG通路富集,Cytoscape的ClueGO插件对铁死亡相关差异基因的功能及代谢通路进行可视化分析。结果：与对照组TG(1.19±0.09)、TC(2.31±0.15)、LDL-C(0.29±...     

六味地黄方通过上调肠道雌激素受体改善绝经后ApoE-/-小鼠脂代谢异常研究

目的?应用双侧卵巢去势的ApoE-/-小鼠建立绝经后脂代谢异常模型,探究六味地黄方(LW)能否通过调节肠道雌激素受体改善绝经后脂代谢异常。方法?正常饮食的C57/B6小鼠为对照组(n=6),高脂饮食并接受假手术的ApoE-/-小鼠为假手术对照组(n=6),高脂饮食并接受双侧卵巢去势的的ApoE-/-小鼠为模型组(n=6),模型小鼠接受4.5?g/kg (n=6)或9.0?g/kg (n=6)的六味地黄方治疗90?d。生化法检测小鼠血清中总胆固醇（TC）、甘油三酸酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）及高密度脂蛋白（HDL-C）水平,HE染色检测小鼠肝脏脂质损伤,油红染色检测小鼠肝脏脂质堆积,免疫荧光染色检测小鼠空肠雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、ABCG5、ABCG8、PI3K p110β及p-AKT的表达水平,免疫化学染色检测小鼠空肠NPC1L1的表达水平,Western blot法检测小鼠空肠NPC1L1、ABCG5及ABCG8的表达水平。结果?六味地黄方可降低模型小鼠血清TC、TG及LDL-C水平,升高HDL-C水平（P<0.05~0.01）;同时,六味地黄方可显著降低模型小鼠的肝脏脂质损伤和脂肪堆积（P<0.05~0.01）。六味地黄方显著增加模型小鼠空肠内降低的ERα和ERβ水平（P<0.05~0.01）。六味地黄方显著降低模型小鼠空肠中NPC1L1的表达水平（P<0.05）,并上调ABCG5和ABCG8的表达水平（P<0.01）。六味地黄方显著增加模型小鼠空肠内PI3K p110β及p-AKT的表达水平（P<0.05~0.01）。结论?六味地黄方可以显著改善绝经后ApoE-/-小鼠脂代谢异常,其机制与六味地黄方调节肠道胆固醇的吸收和外排有关。上调肠道雌激素受体表达和肠道PI3K/AKT信号可能是六味地黄方调节肠道胆固醇吸收和外排的机制。      

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者昼夜心室复极参数变化研究

背景阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）是一种常见的睡眠呼吸疾病,越来越多的研究表明OSAHS与心血管疾病具有显著相关性,是心律失常、高血压、冠心病等心血管疾病的独立危险因素,但其具体机制仍未完全阐明。相关证据表明,Tp-e间期、QT间期和Tp-e/QT等心室复极参数可能与心律失常甚至心源性猝死有关。然而截止到目前,对OSAHS相关心律失常及心电参数变化的研究相对较少。目的研究OSAHS患者昼夜心室复极参数变化。方法选取2020年6月至2021年7月在郑州大学第一附属医院接受多导睡眠监测、符合纳入及排除标准的OSAHS患者159例,并根据疾病的严重程度进一步分为轻-中度OSAHS组（78例）与重度OSAHS组（81例）;选取51例未患疾病的健康者为对照组。测量并计算所有参与者的日间和夜间Tp-e间期、QT间期、Tp-e/QT。结果对照组与轻-中度OSAHS组、重度OSAHS组之间的日间Tp-e间期、夜间Tp-e间期、日间Tp-e/QT、夜间Tp-e/QT比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。日间Tp-e间期、夜间Tp-e间期、日间Tp-e/QT、夜间Tp-e/QT在三组间有逐渐延长的趋势（P<0.05）;三组日间及夜间QT间期比较,差异无统计学意义（P>0.05）。OSAHS患者日间静息状态及夜间阻塞性呼吸暂停期的Tp-e间期、QT间期、Tp-e/QT比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;夜间阻塞性呼吸暂停期的Tp-e间期、QT间期、Tp-e/QT均较日间静息状态有所延长,差异有统计学意义（P<0.05）。OSAHS患者夜间Tp-e间期（rs=0.221,P=0.005）、夜间Tp-e/QT（rs=0.298,P<0.001）均与AHI呈正相关。结论OSAHS患者夜间阻塞性呼吸暂停期心室复极参数较日间静息状态下延长,昼夜变化显著,为今后OSAHS合并心律失常的研究提供了新的思路。     

养阴活血方对高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠Treg/Th17失衡及动脉粥样硬化的影响

探讨养阴活血方(YHF)对高脂饮食诱导的ApoE^-/-小鼠Treg/Th17失衡及动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响。小鼠给予高脂饮食诱导AS,YHF低剂量(18 g/kg,以生药计)、YHF高剂量(36 g/kg,以生药计)灌胃给药20周进行干预。油红O脂肪染色法观测主动脉斑块面积变化;生化分析血脂水平;流式细胞术检测外周血Treg、Th17比例;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)、免疫组化(IHC)及Western blot检测主动脉Foxp3、RORγt mRNA及蛋白表达。分离小鼠脾脏CD4⁺T细胞并用anti-CD3/CD28活化,再经LPS刺激和YHF干预后,qRT-PCR与免疫荧光(IF)检测CD4⁺T细胞Foxp3、RORγt表达。结果显示,YHF显著减小主动脉斑块面积,降低血脂水平,增加Treg/Th17比值;上调主动脉Foxp3表达而下调RORγt表达;且在体外上调CD4⁺T细胞Foxp3表达而下调RORγt表达。本研究表明,YHF可以调节高脂饮食诱导的ApoE^-/-小鼠Treg/Th17比例失衡,减弱LPS对CD4⁺T细胞的炎性刺激影响,从而改善AS。     

津力达对高脂诱导的胰岛素抵抗ApoE-/-小鼠骨骼肌甘油三酯相关酶的影响

目的 探究津力达对高脂诱导的胰岛素抵抗ApoE^-/-小鼠骨骼肌甘油三酯相关基因的影响。方法 将8只雄性C57BL/6J小鼠设为正常组(A组);40只雄性ApoE^-/-小鼠喂养16周后分为模型组(B组)、罗格列酮组(C组)、 津力达低剂量组(D组)、津力达中剂量组(E组)、津力达高剂量组(F组),开始灌胃给药,连续8周。采用酶法、BCA蛋白浓度法测定骨骼肌TG含量;OGTT评价小鼠的胰岛素抵抗程度; RT-PCR和Western blot测定小鼠骨骼肌HSL、ATGL、PPARγ mRNA和蛋白表达。结果 津力达能够不同程度降低小鼠的FBG、TC、TG和LDL-C,升高HDL-C;下调FIns水平,提高ISI,明显改善小鼠糖耐量异常;津力达能够不同程度的上调小鼠HSL、ATGL、PPARγ mRNA和蛋白表达。结论 津力达能够通过调节骨骼肌甘油三酯相关酶的表达,改善高脂诱导的ApoE^-/-小鼠的胰岛素抵抗。     

apoE-/-小鼠颈总动脉斑块Fractalkine与TLR4的表达

目的 探讨apoE^-/-小鼠动脉粥样硬化斑块不规则趋化因子fractalkine与Toll样受体4(TLR4)的表达及其关系。方法 24只apoE^-/-小鼠平均分为三组:普通饮食组、高脂饮食组、阿伐他汀干预组。12周后实验结束,检测动物血脂、颈总动脉斑块面积和血管狭窄率,评价AS病变严重程度。最后,应用免疫组织化学方法检测斑块内fractalkine和TLR4的表达情况。结果 高脂饮食组颈总动脉AS斑块面积和血管狭窄率分别是普通饮食组的近4倍和3倍多;而药物干预组二者均降低,但只有血管狭窄率减少有统计学差异[(35.27±3.84)vs.(27.02±2.69), P<0.05];斑块处fractalkine、TLR4的表达在高脂饮食组升高[(3.24±0.96)vs. (10.69±2.11)、(1.29±0.57) vs (9.32±1.02)],经阿伐他汀干预后表达均下降[(10.69±2.11) vs (5.73±1.30)、(9.32±1.02) vs (3.32±0.51),(P<0.05)] 结论 在apoE^-/-小鼠AS斑块内,fractalkine和TLR4呈协同性表达,两者之间可能存在某种分子机制,并在AS的发病过程中发挥重要作用。     

调肝导浊方对apoE-/-小鼠血脂及主动脉斑块面积的影响

[目的] 观察调肝导浊方对apoE^-/-小鼠血脂及主动脉斑块的影响。[方法] 将apoE^-/-小鼠随机分成模型组和调肝导浊组并予以高脂饮食12周,C57BL/6L小鼠作为对照组给予普通饮食,12周后,检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)的水平;油红O染色评估主动脉斑块的范围;小动物超声仪检测主动脉的斑块面积及狭窄程度。[结果] 模型组与对照组相比,TC、TG、HDL-C、LDL-C均升高(P<0.05或P<0.01);调肝导浊组与模型组相比,LDL-C水平降低(P<0.05),TC、TG、HDL-C无明显差异。油红O染色显示模型组的斑块范围最大,其次是调肝导浊组,最后是对照组。B超结果显示与对照组相比,模型组主动脉的斑块面积及狭窄程度明显增大(P<0.01);调肝导浊方干预后,斑块面积减小(P<0.05),狭窄程度明显减轻(P<0.01)。[结论] 调肝导浊方可以降低apoE^-/-小鼠的血清LDL-C水平,减少主动脉的斑块面积,并改善血管的狭窄程度。