斑马鱼：一种造血系统的遗传学研究模型动物

斑马鱼是研究脊椎动物器官发育和人类疾病的重要遗传学模型动物之一。它具有独特的生理特征：如体积小、生殖周期短、生殖能力强、体外受精且胚胎发育透明等特点，适宜于作大规模的突变筛选。斑马鱼已成为造血系统研究的重要的模式生物体。     

MYCN转基因斑马鱼对造血调控因子的影响

目的:通过热激活启动子条件性过表达鼠源性MYCN基因,建立生殖系稳定转染的斑马鱼系,以研究MYCN基因对造血调控因子转录的影响。方法:构建携绿色荧光蛋白"报告基因"的MYCN质粒,显微注射到斑马鱼胚胎单细胞期,通过荧光筛选出F0代,继而建立生殖系稳定转染的转基因鱼系。通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)及血涂片论证MYCN基因的过表达及其对造血调控因子的影响。结果:在256条嵌合表达的性成熟F0代斑马鱼中,鉴定发现有18条(7.0%)显示转基因阳性,其中雄鱼8条,雌鱼10条。同时,RFQ-PCR及外周血涂片均显示,转基因斑马鱼F1和F2代均发生明显的造血分化障碍,造血关键调控因子scl、mpo、gata1基因表达量明显下降。结论:斑马鱼在基因研究中具有直观及规模化优势,特别适用于单一基因的研究,MYCN基因产物可显著抑制红系生成和造血分化。     

斑马鱼异种异体急性髓系白血病模型的建立

目的:探讨利用人急性髓系白血病干细胞和斑马鱼建立斑马鱼白血病模型,为白血病的研究及治疗药物的筛选提供更为直接的体外研究模型和体内实验依据。方法:利用MitoRed染料对白血病干样细胞KG-1a细胞进行标记,然后通过显微注射法把KG-1a细胞植入斑马鱼胚胎的卵黄囊中,观察移植后斑马鱼胚胎的大体存活状态、细胞在斑马鱼体内的增殖和扩散转移;应用组织学切片观察移植后细胞对斑马鱼组织器官的侵袭作用。结果:KG-1a细胞植入斑马鱼胚胎的卵黄囊后,MitoRed标记的KG-1a细胞数目随时间延长而增多并逐渐扩散至整个腹腔,体外计数结果也显示植入细胞明显增殖,表明植入的白血病干细胞能够在斑马鱼体内存活,增殖并扩散。进一步的研究显示,在斑马鱼肝脏组织发现有白血病细胞的浸润,HE染色提示浸润细胞具有KG-1a细胞核型特征。结论:异种异体的人急性髓系白血病干细胞KG-1a可以植入斑马鱼体内并成功建立斑马鱼的白血病模型。该模型的建立可为白血病的研究及治疗药物的筛选提供一种更为直接高效的体外研究平台。     

斑马鱼毒性检测方法的优化及应用研究

目的：通过优化斑马鱼急性毒性检测方法,检测和分析辅酶Q、低聚果糖、双酚A对斑马鱼的毒性作用,探讨其在食品安全性检测与评价中的应用前景。方法优化试验用斑马鱼的基本条件、非水溶性和水中溶解度较低的受试物的处理要求和斑马鱼急性毒性试验条件,观察和记录斑马鱼在不同浓度的辅酶Q、低聚果糖、双酚A的试验溶液中暴露48h的毒性反应和死亡情况,检测和分析不同浓度的辅酶Q、低聚果糖、双酚A对斑马鱼的毒性作用。结果斑马鱼在剂量为100～1000mg/L的辅酶Q试验溶液中饲养48h,未发现斑马鱼有任何毒性反应,辅酶Q对斑马鱼的48hLC50为大于1000mg/L;斑马鱼在剂量为100～1000mg/L的低聚果糖试验溶液中饲养48h,未发现斑马鱼有任何毒性反应,低聚果糖对斑马鱼的48hLC50为大于1000mg/L;斑马鱼在剂量为10mg/L的双酚A试验溶液饲养3h后开始出现毒性反应,在剂量为8mg/L的双酚A试验溶液饲养6h后开始出现毒性反应,在剂量为6mg/L的双酚A试验溶液饲养12h后开始出现毒性反应,双酚A对斑马鱼的48hLC50为7.15mg/L。结论本研究显示优化的斑马鱼急性毒性检测方法能够快速检测食品和食品污染物的急性毒性,其在食品安全性检测与评价中将有较好应用前景。     

bach1和bach2在斑马鱼早期发育中的表达分析

目的研究bach1和bach2基因在斑马鱼早期发育中的表达规律。方法以不同发育时期的野生型斑马鱼胚胎和幼体为材料,采用地高辛标记的反义RNA探针以及整体原位杂交技术确定两个基因在斑马鱼早期发育中的表达特征。结果在斑马鱼早期胚胎发育过程中bach1,和bach2基因在整个胚胎都有表达,48hpf后其表达区域则主要集中到头部和内脏。结论bach1和bach2基因可能在斑马鱼的早期发育以及脑部和肝脏形成中发挥作用。     

阿霉素对斑马鱼心脏毒性的评估及机制探索

目的 :通过观测阿霉素致斑马鱼胚胎产生心脏毒性的表型,及联用右丙亚胺保护剂,建立实验室心脏毒性药物评价及研究的模型。方法:选择受精后24 h的AB系野生型斑马鱼胚胎,分别暴露于不同浓度的阿霉素中后,选择心脏毒性表型最明显的阿霉素浓度,将其分别联用或不联用右丙亚胺作用48 h。在斑马鱼胚胎发育至受精后72 h时,在显微镜下观察其心血管系统的形态学改变,记录心率变化,并分别抽提斑马鱼胚胎RNA,检测心脏发育相关基因及氧化、抗氧化相关指标。结果:随着阿霉素浓度的升高,斑马鱼出现了如胚胎发育畸形、心包水肿等改变,且死亡率升高,心脏毒性表型最明显的阿霉素浓度为64.40μmol/L,而联用右丙亚胺(130.47μmol/L、260.93μmol/L)则可有效挽救阿霉素对斑马鱼心脏的毒性作用,并可分别将其胚胎生存率由35%显著提升至90%和88.3%(P<0.001),而右丙亚胺可有效清除丙二醛并恢复SOD活性。结论:成功建立了斑马鱼评价心脏毒药物的模型。阿霉素对斑马鱼胚胎的心脏毒性呈浓度依赖性增加,且与斑马鱼胚胎死亡率亦呈正相关,而右丙亚胺则可有效挽救阿霉素致斑马鱼胚胎的心脏毒性,并降低其死亡率,且此作用与斑马鱼心脏发育相关基因无关,但与氧化及抗氧化通路有明显的相关性。     

模式生物斑马鱼在肝脏疾病研究中的应用

肝脏作为机体一个重要的代谢器官,在糖脂代谢和能量稳定的调节中发挥着重要作用。同时,其又是多种疾病如感染、自身免疫性疾病、代谢性疾病和肿瘤等疾病的靶器官。目前已建立了人类肝脏疾病的相关体外细胞模型,但鉴于模式生物在疾病研究中的优势,果蝇、线虫、爪蟾、小鼠、大鼠及斑马鱼等模式生物得到了广泛的应用。其中,斑马鱼由于饲养简单、繁殖快、产卵量高、胚胎透明、体外发育及可进行发育和遗传学分析等优点,作为新兴的模式生物,在人类     

现代社会病与护理科学(21)

十六、生殖社会病(一) 生殖社会病系指由于人类生殖在质量和数量方面所出现的社会和医学问题,是生殖社会医学的主要研究内容之一,生殖是人类繁衍的基础,没有生殖就没有人类社会。生殖对人类社会的发展与进步是绝对重要的。然而,没有社会控制的生殖,没有计划生育,则生殖又会成为社会的沉重负担和人类的巨大灾难。     

长链非编码RNA uc.299在心脏发育中的作用

目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)uc.299在P19细胞分化及斑马鱼心脏发育中的作用,探讨其与心脏发育之间的关系。方法:体外实验中,通过sh RNA沉默uc.299后,检测对P19分化的影响;在体实验中,对斑马鱼受精卵显微注射uc.299反义寡核苷酸,观察对斑马鱼心脏发育的影响。结果:与对照组相比,沉默uc.299对P19细胞分化有明显的抑制作用,心肌细胞跳动频率降低,各心肌标志物表达水平有明显下调。斑马鱼实验表明,沉默uc.299可造成斑马鱼心脏明显水肿。结论:沉默uc.299可影响P19分化和斑马鱼心脏发育,表明uc.299对维持心脏正常发育具有一定作用。     

斑马鱼:人类血液疾病的良好模型

斑马鱼(zebrafish,Danio rerio)又名蓝条鱼、花条鱼等,原产于南亚热带,观赏鱼,属鲤科短担尼尔属.一百多年前,由于其胚胎透明,易于观察与操作,斑马鱼成为研究胚胎形成与发育的经典模型.     

斑马鱼:人类血液疾病的良好模型

斑马鱼(zebrafish,Danio rerio)又名蓝条鱼、花条鱼等,原产于南亚热带,观赏鱼,属鲤科短担尼尔属.一百多年前,由于其胚胎透明,易于观察与操作,斑马鱼成为研究胚胎形成与发育的经典模型.     

MYCN转基因型斑马鱼系岩藻糖转移酶基因谱表达的研究

目的研究岩藻糖转移酶在髓系白血病的发生与发展中的作用。方法应用实时定量逆转录-聚合酶链反应检测具髓系白血病表型的MYCN转基因型斑马鱼系岩藻糖转移酶基因（DFs）表达。结果 MYCN转基因型斑马鱼系岩藻糖转移酶7/8/9/10/11（DF7/8/9/10/11）表达量与野生型斑马鱼相比显著改变（t=-32.756、8.405、12.719、34.673、27.113,P〈0.05）;岩藻糖转移酶1/2（DF1、2）表达量的差异无统计学意义（t=-1.651、-0.244,P〉0.05）。结论在MYCN转基因型斑马鱼系中,岩藻糖转移酶的表达与髓系白血病的发生与发展存在相关性。     

鱼藤素对斑马鱼胚胎毒性的作用

背景:以模式生物斑马鱼构建生物模型,易于开展活体实验。目的:探讨了不同鱼藤素浓度对斑马鱼胚胎发育的影响。方法:不同鱼藤素浓度作用于斑马鱼胚胎,分别在受精后48,72h观测其表型变化,受精后72h统计其胚胎孵化率。结果与结论:鱼藤素在0.1μmol/L浓度以下对斑马鱼胚胎发育无影响,0.2μmol/L浓度延缓斑马鱼胚胎发育,0.3μmol/L浓度以上抑制了斑马鱼胚胎发育,使胚胎致死。结果表明,鱼藤素高浓度使胚胎致死,低浓度延缓胚胎发育。     

斑马鱼:人类血液疾病的良好模型

斑马鱼(zebrafish,Danio rerio)又名蓝条鱼、花条鱼等,原产于南亚热带,观赏鱼,属鲤科短担尼尔属.一百多年前,由于其胚胎透明,易于观察与操作,斑马鱼成为研究胚胎形成与发育的经典模型.     

鱼藤素对斑马鱼胚胎毒性的作用

背景：以模式生物斑马鱼构建生物模型,易于开展活体实验。目的：探讨了不同鱼藤素浓度对斑马鱼胚胎发育的影响。方法：不同鱼藤素浓度作用于斑马鱼胚胎,分别在受精后48,72h观测其表型变化,受精后72h统计其胚胎孵化率。结果与结论：鱼藤素在0.1μmol/L浓度以下对斑马鱼胚胎发育无影响,0.2μmol/L浓度延缓斑马鱼胚胎发育,0.3μmol/L浓度以上抑制了斑马鱼胚胎发育,使胚胎致死。结果表明,鱼藤素高浓度使胚胎致死,低浓度延缓胚胎发育。     

健脾益气摄血方对辛伐他汀诱导斑马鱼出血模型的止血效果研究

目的:观察健脾益气摄血方对辛伐他汀诱导斑马鱼出血的止血效果并与清热凉血方比较。方法:用辛伐他汀0.5μmol/L处理AB系斑马鱼24 h,建立斑马鱼出血模型,在严格盲态实验条件下,在最大非致死量范围内,应用不同浓度实验药物处理出血斑马鱼,以出血减少率、止血率为主要观察指标,以类似脾气虚特点的血流量、血流量改善率与运动速度、运动改善率为附加指标,综合评价健脾益气摄血方的干预效果。结果:实验药物B1在浓度为500和1 000μg/ml时出血斑马鱼的出血率分别为30%和15%,止血率分别为60%和80%;实验药物B2在浓度为500和1 000μg/ml时出血斑马鱼出血率分别为45%和40%,止血率分别为40%和47%。表明在降低斑马鱼出血率与止血效果两方面实验药物B1优于实验药物B2。在相等浓度下,在提高出血斑马鱼血流量与血流量改善率两方面实验药物B1优于实验药物B2。在相等浓度下,在促进斑马鱼运动速度与提高斑马鱼运动改善率方面实验药物B1优于实验药物B2。结论:健脾益气摄血方对辛伐他汀诱导的斑马鱼出血有良好的止血效果,并能够改善出血斑马鱼血流量与提高运动速度,为健脾益气摄血方治疗脾不统血证提供了实验依据。     

BAMBI基因过表达人结肠癌细胞移植斑马鱼致肝转移模型的构建

目的构建BAMBI基因过表达人结肠癌细胞移植斑马鱼肝转移模型,分析斑马鱼肝内转移性结肠癌细胞BAMBI基因表达水平与肝转移发生率的关联性。方法分别构建BAMBI过表达稳转结肠癌细胞株SW620(BAMBI+组)、空载体红色荧光蛋白基因转染结肠癌细胞株SW620(EV组),分别显微注射到受精后第2天转基因斑马鱼Tg(Apo14∶GFP)胚胎卵黄囊(每组各680条),激光共聚焦荧光显微镜观察、拍摄,采用Image J软件测量转移至斑马鱼肝脏内结肠癌细胞红色荧光表达强度,计算肝转移发生率;采用t检验比较BAMBI+组及EV组斑马鱼肝脏内结肠癌细胞红色荧光表达强度及肝转移发生率的差异。结果与EV组相比,激光共聚焦荧光显微观察显示BAMBI+组斑马鱼肝内结肠癌细胞红色荧光表达量显著增加(t=6.247,P=0.003 3);BAMBI+组斑马鱼肝转移发生率与EV组相比显著增加(t=4.276,P=0.012 9)。结论构建了基因修饰人结肠癌细胞移植斑马鱼致肝转移模型,可较好地模拟活体状态的结肠癌肝转移;BAMBI基因可促进异种移植入斑马鱼的结肠癌细胞发生肝转移。     

胰腺酶原基因在混合型卟啉症模型斑马鱼montalcino中表达模式分析

目的探究胰腺酶原基因在混合型卟啉症模型斑马鱼中的表达特征。方法以原卟啉原氧化酶缺陷的混合型卟啉症斑马鱼和野生型斑马鱼为材料,利用胰腺酶原基因RNA探针进行原位杂交,从而确定胰腺酶原基因在突变体和野生型斑马鱼中的表达差异。结果胰腺酶原基因以及胰腺转录因子ptfla在混合型卟啉症斑马鱼中表达水平明显下调,氯高铁血红素处理后可以明显上调胰腺酶原基因以及胰腺转录因子ptfla在突变体中的表达水平。结论血红素调控胰腺酶原基因在混合型卟啉症斑马鱼中的表达。     

基因芯片分析鱼藤素对斑马鱼胚胎发育的影响

背景：鱼藤素具有延缓斑马鱼胚胎发育的作用，但其具体作用机制尚未明确。目的：分析鱼藤素处理斑马鱼胚胎的基因与信号传导通路表达差异。方法：斑马鱼胚胎来自于根据Zebrafishbook中描述的方法养的殖斑马鱼。用0．6pmol／L鱼藤素处理2-细胞期斑马鱼胚胎，以二甲基亚砜孵化液处理2一细胞期斑马鱼胚胎为对照。4hpf时期提取二甲基亚砜组及鱼藤素组总RNA，利用基因芯片技术检测鱼藤素处理斑马鱼胚胎后基因的差异表达，采用实时荧光定量PCR验证基因芯片结果，结合聚类分析及通路分析来探索鱼藤素的作用机制。结果与结论：芯片结果显示，鱼藤素处理斑马鱼胚胎后差异表达上调3倍以上的基因407个，下调的461个。PCR验证结果与芯片结果相符。经KEGG通路分析，涉及14条通路。鱼藤素可能通过干扰细胞的代谢生长及影响其分化起作用。     

2例颅内生殖细胞瘤的脑脊液细胞学诊断

<正>颅内生殖细胞肿瘤的确诊主要依靠患者的临床表现、影像学、脑脊液检查和放疗反应等~([1])。研究表明,脑脊液细胞学对脑生殖细胞瘤的诊断具有重要意义~([2]),但相关报道较少。为探讨颅内生殖细胞瘤患者脑脊液细胞学表现,并为细胞学诊断提供参考,本研究对2例明确诊断为脑内生殖细胞瘤患者的脑脊液细胞学结果进行分析,报告如下。