白花丹醌对人肝星状细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:研究白花丹醌对瘦素(Leptin)刺激体外培养人肝星状细胞株HSC-LX2凋亡及相关蛋白表达的影响,以探讨其抗肝纤维化作用的机制.方法:体外培养HSC-LX2,将其分为以下几组:空白对照组、Leptin对照组、秋水仙碱组、2、8、16μmol/L白花丹醌组.瘦素刺激24h,药物与细胞共孵育24h后,应用流式细胞仪Annexin/PI双染方法检测细胞凋亡,透射电镜观察HSC-LX2凋亡形态学变化,免疫组织化学法检测HSC-LX2凋亡基因p53、Bax、Bcl-2的蛋白表达.结果:细胞流式术结果显示,白花丹醌作用HSC-LX224h,HSC凋亡率明显增加,白花丹醌8、16μmol/L组和秋水仙碱组HSC凋亡率均显著高于空白对照组和Leptin对照组(5.21±0.41,8.10±0.63,10.1±1.08vs1.40±0.13,2.85±0.21,均P<0.01).透射电镜结果,空白对照组细胞形态清晰,细胞膜、核膜完整,胞质内细胞器清晰,染色质均匀,细胞表面微绒毛;药物组可见少量坏死细胞和许多不同程度的凋亡细胞,体积变小,核膜消失,胞质浓缩,胞质内出现大量空泡,细胞核染色质固缩,可见核碎裂,细胞表面微绒毛...     

胆红素对肝星状细胞-T6增殖及细胞周期的影响

[目的]观察胆红素对肝星状细胞(HSC)-T6增殖及细胞周期影响.[方法]将培养细胞分成正常组和胆红素不同浓度(10 μmol/L、30 umol/L、50 /μmol/L、70 μmol/L、100 μmol/L)干预组,采用MTT法观察胆红素对HSC-T6增殖的影响,流式细胞仪观察各组细胞周期的变化.[结果]①不同浓度胆红素对HSC-T6均有促进增殖作用,且呈一定的量效关系,与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.05);②10 μmol/L、50 μmol/L、100 μmol/L浓度胆红素作用HSC-T6后,G0/G1期减少,S期增加,G2/M期增加,与正常组比较均P＜0.05.[结论]胆红素对HSC-T6均有促进增殖作用.     

丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖、活化及凋亡的影响

肝纤维化的发生机制主要是肝内细胞外基质（ECM）合成与降解失衡，表现为ECM大量沉积，肝星状细胞（HSC）在此过程中起关键作用。在肝纤维化恢复期，HSC的减少不是由于其表型从活化状态向静息状态转变，而是由于细胞凋亡的结果。本研究采用猪血清腹腔注射诱导免疫性肝纤维化大鼠模型，通过对结蛋白和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）染色及TUNEL法来观察丹芍化纤胶囊对HSC增殖、活化和细胞凋亡的影响。     

姜黄素对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的　观察姜黄素对体外培养肝星状细胞 (HSC)增殖与凋亡的影响。方法　不同浓度姜黄素处理HSC株HSC T6 ,MTT法检测细胞增殖 ,流式细胞仪、透射电镜和琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果　在 2 0～ 10 0 μmol/L浓度范围内 ,姜黄素可剂量依赖性地抑制HSC增殖 (P <0 .0 1)。 2 0、4 0、6 0 μmol/L姜黄素处理HSC 2 4h后 ,细胞周期分析发现S期细胞减少 ,G2 /M期细胞显著增加 (P <0 .0 1) ;流式细胞术检测到明显的亚G1峰 ,各组的凋亡指数 (% )分别是 15 .3± 1.9,2 6 .7± 2 .8,37.6± 4 .4 ,与对照组 (1.9± 0 .6 )相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;4 0 μmol/L姜黄素作用 12、2 4、36、4 8h ,凋亡指数 (% )分别是 12 .0± 2 .4、2 6 .7± 3.5、33.8± 1.8和 4 9.3± 1.6 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;透射电镜观察到细胞皱缩、核染色质浓缩沿核膜排列和凋亡小体形成等 ;琼脂糖凝胶电泳可见到明显的DNA梯带形成。结论　姜黄素可显著抑制HSC增殖 ,使细胞周期停滞于G2 /M期 ,并诱导其凋亡 ,其作用具有时间和剂量依赖性     

苦参碱对大鼠肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的研究苦参碱对体外培养肝星状细胞(HSC)增殖与凋亡的影响,探讨苦参碱抗肝纤维化作用机制。方法用0.125、0.25、0.5mgml的苦参碱分别处理HSC细胞系rHSC99和肝细胞株HL770224h后,MTT比色法检测细胞增殖,AnnexinVFITCPI双染色流式细胞分析法检测早期细胞凋亡,TUNEL法原位检测DNA断裂,透射电镜观察形态改变。结果①苦参碱对HSC增殖有明显的抑制作用,且作用呈剂量依赖性;苦参碱对肝细胞增殖有促进作用,但促增殖作用不随浓度增加而增强。②AnnexinVFITCPI双染色流式细胞分析:对照组、苦参碱0.125mgml组、0.25mgml组、0.5mgml组凋亡率分别为0.99%±0.45%、5.00%±0.98%、13.6%±2.19%、17.2%±2.17%,差异有显著性(F=63.14,P<0.05)。苦参碱处理组细胞TUNEL检测发现DNA断裂,透射电镜下见核仁消失,染色质浓缩并凝聚成团块状,沿核膜排列。结论苦参碱可抑制HSC增殖、诱导HSC凋亡,可能是其抗肝纤维化机制之一。     

肾上腺髓质素对大鼠肝星状细胞表达细胞周期蛋白的影响

目的探讨肾上腺髓质素(ADM)对活化肝星状细胞(HSC)表达细胞周期蛋白的影响。方法采用不同浓度的ADM对HSC-T6细胞进行干预12h、24h和48h。采用MTT法检测HSC-T6细胞增殖;采用SABC法检测细胞增殖核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期素依赖性激酶抑制因子P21waf1的表达。结果在ADM10-7mol/L浓度下作用12h,24h,48h,细胞生长抑制率逐渐增加(分别是7.88%,17.58%,18.79%);在ADM10-7mol/L作用24h时,HSC的PCNA、cyclin D1和P21waf1表达的平均光密度分别为0.387±0.023、0.454±0.029和0.508±0.011,而对照组分别为0.246±0.030、0.209±0.014和0.401±0.033(t值分别为5.149、5.752和5.299,P<0.05),差异有显著性。相关性分析表明,PCNA和cyclinD1的变化呈正相关趋势(r=0.834,P<0.05),而PCNA和P21waf1呈负相关趋势(r=-0.770,P<0.05),cyclinD1和P21waf1呈负相关趋势(r=-0.796,P<0.05)。结论肾上腺髓质素可抑制HSC-T6细胞增殖。ADM作用HSC可能通过调控HSC的细胞周期,抑制PCNA和cyclinD1表达,促进P21waf1表达,从而发挥抑制HSC增殖作用。     

肝星状细胞活化与细胞周期调控

肝星状细胞活化是肝纤维化形成的中心环节，目前尚未能完全阐明其复杂机制，近年研究发现该过程与细胞周期调控紊乱有密切关系。现对近年来HSC活化和肝纤维化时HSC细胞周期调控研究作一综述。     

肝星状细胞活化与细胞周期调控

肝星状细胞活化是肝纤维化形成的中心环节,目前尚未能完全阐明其复杂机制,近年研究发现该过程与细胞周期调控紊乱有密切关系。现对近年来 HSC活化和肝纤维化时 HSC细胞周期调控研究作一综述。     

肝星状细胞凋亡机制研究进展

研究肝星状细胞凋亡的机制对高选择地诱导肝星状细胞凋亡进而控制或逆转肝纤维化具有重要的意义,近年来发现多条信号通路、多种细胞因子可通过不同机制诱导肝星状细胞凋亡。     

粉防己碱对大鼠静止期肝星状细胞细胞周期的影响

目的观察粉防己碱对大鼠静止期肝星状细胞（HSCs）细胞周期的影响及机制。方法分离正常大鼠HSCs,培养48 h后给予粉防己碱（1.6μmol/L）和（或）TGF-β1（5μg/L）处理3 d。流式细胞仪检测细胞周期分布;应用RT-PCR法检测Cyclin D1、Cyc-lin E、p21WAF1/CiP1和p27Kip1表达;使用Western blot法检测Cyclin D1和PPARγ蛋白水平。结果粉防己碱使G0/G1期和G2/M期细胞增多,S期细胞数显著减少,抑制TGF-β1介导的G0/G1期细胞含量下调和S期细胞含量升高,上调p21WAF1/CiP1mRNA表达,抑制Cyclin D1而维持PPARγ蛋白在一定水平。结论在静止期HSC中,粉防己碱通过抑制Cyclin D1、上调p21WAF1/CiP1和维持PPARγ表达使HSCs出现G0/G1期停滞和S期向G2/M期转换加速。     

大黄素对HSC-T6细胞增殖及细胞周期影响的研究

目的 研究大黄素干预对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)增殖和细胞周期的影响，探讨其抗肝纤维化的具体机制。方法 应用大鼠肝星状细胞株伪传代培养，采用不同浓度大黄素进行干预，观察各组细胞在形态学、增殖程度、细胞周期、增殖细胞核抗原(PCNA)表达等多方面的变化。结果 ①5-15Mg／L浓度大黄素干预24h后，对T6细胞的增殖产生显著的抑制效应，同时免疫组化显示PCNA标记指数随着药物浓度的增高其表达阳性率反而逐渐降低。②大黄素同时能够对T6细胞的细胞周期产生阻滞作用，随着浓度的增高，C0／G1期细胞比例逐渐上升。结论 大黄素在体外对于HSC-T6的增殖具有明显的抑制作用，而这种作用可能是通过改变了T6细胞正常的细胞周期来实现的。     

氧化苦参碱对肝星状细胞增殖抑制和促凋亡作用的影响

[目的]研究氧化苦参碱对体外乙醛造模后的肝星状细胞（HSC）增殖抑制及促凋亡作用的影响,探讨该药抗酒精性肝纤维化的作用机制。[方法]选取乙醛造模后HSC-T6为体外模型,以四甲基固氮唑盐（MTT）法分别检测800、400、200、100ug／ml浓度氧化苦参碱药物血清对HSC-T6作用48h后的抑制情况,找出最佳含药浓度;根据以上结果,以流式细胞仪检测HSC-T6的促凋亡作用。[结果]800ug/ml氧化苦参碱对HSC-T6细胞生长的抑制率最高,达到51．31％,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。碘化丙啶染色流式细胞分析：800ug／ml药物血清作用HSC-T6,其在G0／G1、apop期细胞比例较模型组明显上升,S期细胞明显下降。[结论]氧化苦参碱可明显抑制HSC-T6增殖和诱导其调亡。     

miR-1908对人内脏前体脂肪细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响

目的研究miR-1908对人内脏前体脂肪细胞（HPA-v）增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响。 方法体外培养HPA-v脂肪细胞,并根据实验分为抑制剂组（转染经化学修饰的miR-1908-5p抑制剂）、空载体组（转染空载体）、对照组（未进行任何处理），CCK8（Cell Counting Kit-8）法用于检测细胞的增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期、Tunnel法检测细胞凋亡情况。 结果CCK8结果显示miR-1908抑制剂组的吸光度（OD）值（0.61±0.07）明显低于对照组（1.01±0.05）（P<0.05），抑制miR-1908具有抑制HPA-v脂肪细胞增殖的作用；Tunel结果表示miR1908抑制剂组凋亡率（0.27±0.03）%明显大于对照组（0.13±0.05）%（P<0.05）；流式细胞测定的结果为G0/G1期细胞增加（与对照组相比，P<0.05），表明抑制miR-1908表达可能通过诱导HPA-v脂肪细胞G0/G1期阻滞抑制HPA-v脂肪细胞增殖。 结论下调miR-1908表达能明显抑制人内脏前体脂肪细胞增殖，诱导细胞凋亡及改变细胞周期分布。     

Decorin对肝星状细胞和肝细胞周期的影响

目的探讨decorin对肝星状细胞(HSC-T6)和肝细胞(L-02)生长抑制的作用机制.方法细胞培养,经dccorin处理后用流式细胞仪分析细胞周期的变化.结果Decorin使细胞周期发生明显改变.G1期细胞百分率明显增加,S期细胞百分率降低G2期细胞百分率减少甚至缺失(P＜0.05,P＜0.01).结论Decorin对肝星状细胞(HSC-T6)和肝细胞(L-02)有细胞周期阻滞作用,通过细胞周期阻抑可以抑制细胞生长.     

丹参有效成分抑制HSC-T6细胞增殖作用的研究

目的:研究丹参有效成分对HSC-T6细胞增殖的影响。方法:将复苏后处于对数生长期的HSC-T6单细胞悬液稀释成浓度为2.0×105/ml,并以0.1ml/孔接种,置于37℃、饱和湿度、5%CO2培养箱内培养,24小时后将不同稀释度的丹参有效成分按0.1ml/孔加入培养孔。实验另设培养液空白对照组和细胞对照组。每24小时观察细胞形态及其生长状况,实验第4天弃上清液,以MTT法用酶标仪测定OD值,计算出药物对细胞增殖的抑制率。结果:丹参有效成分1/1、1/2、1/4、1/8、1/16倍稀释浓度时对HSC-T6细胞增殖的抑制率分别为74%、73%、67.4%、63.8%、38.6%、1/32以下浓度则抑制率明显降低。结论:丹参有效成分有明显抑制HSC-T6细胞增殖的作用,且有明显的浓度依赖,在8倍稀释浓度时的抑制率较高且细胞破坏较轻。     

黑米花青素对结肠癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的探讨黑米花青素对结肠癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。 方法利用MTT法和流式细胞分析技术分别观察不同浓度同一时间和相同浓度不同时间,黑米花青素对结肠癌细胞(SW480)在细胞增殖、细胞周期分布和细胞凋亡的影响。 结果黑米花青素对结肠癌细胞的增殖、细胞周期分布和凋亡产生了影响,而且这种作用有浓度依赖性和时间依赖性。 结论黑米花青素可以抑制结肠细胞的增殖、阻滞细胞周期的进展、促进肿瘤细胞的凋亡。     

芒果甙对鼻咽癌细胞系CNE2细胞增殖、凋亡及周期的影响

目的 探讨芒果甙治疗鼻咽癌的可行性.方法 以不同浓度的芒果甙作用于人鼻咽癌CNE2细胞,检测细胞抑制率、凋亡率及细胞周期.结果 芒果甙作用后CNE2细胞抑制率及凋亡率均明显增加,且呈浓度及时间依赖性,P均＜0.05;芒果甙作用72 h后,随药物浓度增加,CNE2细胞出现S期阻滞;浓度＞100 μmol/ L时出现G2/M期阻滞.结论 芒果甙能明显抑制CNE2细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有S期和G2/M期阻滞效应,具有潜在抗肿瘤作用.     

弓形虫ROP16蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨弓形虫Ⅰ型(RH)ROP16蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞增殖、周期及凋亡方面的作用。方法 以空载体(MCF-7-HBLV)和过表达ROP16蛋白的慢病毒(HBLV-RH ROP16)分别感染MCF-7细胞,嘌呤霉素筛选出稳定表达ROP16的细胞株,Real time PCR、Western blot法检测MCF-7细胞中ROP16 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖、周期和凋亡。Western blot法检测细胞周期及凋亡相关蛋白表达。结果 相比MCF-7-HBLV(空载体组)和MCF-7细胞组(对照组),MCF-7-RH ROP16细胞组中ROP16 mRNA和蛋白表达升高;细胞增殖率降低(P<0.01);S期细胞比例、细胞凋亡率升高(P<0.01)。促凋亡因子Bax、P53、Caspase-9、Caspase-3及细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子P21表达增高(P<0.01);抗凋亡蛋白Bcl-2及细胞周期蛋白A1(CyclinA1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达均下降(P<0.01)。结论 弓形虫Ⅰ型(RH)ROP1...     

去甲肾上腺素对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨交感神经递质去甲肾上腺素（NE）对HSC细胞株（CSFC）增殖和凋亡的影响。方法体外培养CFSC,分为以下6组：（1）空白对照组,为单纯CFSC培养;（2）交感兴奋（NE）组;（3）交感抑制（酚妥拉明＋普萘洛尔）组;（4）α肾上腺素受体（AR）阻滞（酚妥拉明）组;（5）β1AR阻滞（CGP20712A）组;（6）β2AR阻滞（ICI118551）组。MTT法测定细胞增殖;TUNEL法观察CFSC凋亡状况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。结果MTT法显示,NE对CFSC具有明显的促增殖作用,加入α-AR、β1AR、β2AR阻滞剂后细胞增殖均受到明显抑制。NE作用于CFSC 24h,TUNEL法显示CFSC的凋亡率显著低于对照组（6.60%±3.05%与12.60%±4.76%,P〈0.05）;加入AR阻滞剂后CFSC凋亡率升高,其中α-AR和β2AR阻滞剂作用最显著。同时,流式细胞仪显示加入NE后CFSC凋亡率也显著降低（2.29%±0.22%与3.06%±0.57%,P〈0.05）;与TUNEL结果一致。NE对细胞形态没有明显影响。结论交感神经递质NE对体外活化的CFSC具有促增殖作用,并且可以抑制CFSC的凋亡,可能主要通过α受体和β2体起作用。