糖肾平通过TGF-β1-Smad2/3-ILK信号通路干预高糖＋LPS诱导足细胞上皮间质转分化的分子机制研究

也页目的：探讨糖肾平对高糖环境下脂多糖（ lipopolysaccharide,LPS）刺激足细胞上皮间质转分化的影响,并探讨其作用机制。方法：以体外培养大鼠肾小球足细胞为研究对象,以高糖（25 mmol/L）、LPS（1μg/mL）刺激足细胞建立模型,分为正常组、高糖组、高糖＋LPS组、厄贝沙坦组、抑制剂组、糖肾平小、中、大剂量组。采用Western blotting及RT-PCR方法检测足细胞中转化生长因子-β1（ transforming growth factor-β1,TGF-β1）、Smad2/3、整合素连接激酶（ integrin-linked kinase, ILK）、CD2相关蛋白（CD2AP）、α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）的表达水平。结果：与正常组比较,高糖组和高糖＋LPS组足细胞TGF-β1、ILK、α-SMA蛋白及其mRNA表达明显增加（P〈0.01）,P-Smad2/3蛋白及Smad2/3 mRNA表达明显增加（P〈0.01）,CD2AP蛋白及其mRNA表达明显减少（P〈0.01）;与高糖＋LPS组比较,厄贝沙坦组足细胞P-Smad2/3、α-SMA蛋白表达明显减少（P〈0.01）,TGF-β1蛋白表达减少（P〈0.05）,TGF-β1,Smad2/3,α-SMAmRNA表达明显减少（P〈0.01）,ILK mRNA表达减少（P〈0.05）,CD2AP蛋白及其mRNA表达明显增加（P〈0.01）;糖肾平大、中、小各剂量组足细胞TGF-β1蛋白表达明显减少（P〈0.01）,糖肾平大剂量组足细胞TGF-β1 mRNA表达减少（P〈0.05）,小、中剂量组表达明显减少（P〈0.01）;糖肾平小、中、大各剂量组足细胞P-Smad2/3蛋白及Smad2/3mRNA表达均明显减少（P〈0.01）;糖肾平小、大剂量组足细胞ILK mRNA表达减少（P〈0.05）,中剂量组表达明显减少（P〈0.01）;糖肾平大剂量组足细胞α-SMA蛋白及其mRNA表达减少（P〈0.05）;糖肾平小、中、大各剂量组足细胞CD2AP蛋白及其mRNA表达均明显增加（P〈0.01）。结论：糖肾平能够降低足细胞TGF-β1、ILK蛋白及mRNA表达,降低P-Smad2/3蛋白及Smad2/3 mRNA表达,升高足细胞标志物CD2AP蛋白及mRNA表达,降低间充质细胞标志物α-SMA蛋白及mRNA表达,通过抑制TGF-β1-Smad2/3-ILK信号通路的激活减少足细胞转分化,保护足细胞,可能是其防治糖尿病肾病的作用机制之一。     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾脏疾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

目的：观察厄贝沙坦（irbesartan）对糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease,DKD）大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子（nephrin和 podocin）表达的影响,探讨厄贝沙坦对DKD的防治作用。方法以高脂高糖喂养8周联合小剂量链脲佐菌素（30 mg/kg）建立DKD大鼠模型,将 DKD大鼠模型随机分为2组：厄贝沙坦组及模型对照组;另设正常对照组。厄贝沙坦组给予厄旦沙坦（50 mg·kg-1·d-1）,另外2组每日给予等量0.9%生理盐水灌胃。各组于治疗前及药物干预后第4、8、12周周末检测大鼠血糖浓度和尿微量白蛋白量;观察大鼠体质量、肾重、肾肥大指数、血清尿素氮、肌酐、总胆固醇、三酰甘油变化;光镜观察肾脏病理改变;应用免疫组化技术观察足细胞相关蛋白 nephrin、podocin肾组织分布与表达;采用 Western blot技术测定肾皮质 nephrin、podocin 蛋白的表达。结果应用厄贝沙坦干预后与DKD对照组相比,大鼠的尿微量白蛋白总量、肾肥大指数、血糖、尿素氮、血肌酐较模型对照组明显降低（P〈0.05）,体质量增加（P〈0.05）,病理改变减轻,nephrin和 podocin蛋白表达增加（P〈0.05）。结论厄贝沙坦能上调 nephrin和 podocin的表达水平,降低尿微量白蛋白排泄,延缓DKD的进展。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病代谢指标及裂孔膜蛋白nephrin的影响

目的:观察化瘀通络中药对糖尿病肾病(DN)大鼠代谢指标和裂孔膜蛋白nephrin表达的影响,探讨化瘀通络中药防治DN的可能作用机制。方法:将40只大鼠随机分为空白对照组10只、造模组30只,造模组高糖高脂饲料喂养1个月,采用一次性腹腔注射链尿佐菌素的方法复制糖尿病模型,成模大鼠随机分为中药组、西药对照组(厄贝沙坦组)、模型组,中药组和厄贝沙坦组分别给予相应药物,各组于第3天、4周、8周、16周测24 h尿蛋白,16周末处死大鼠,全自动生化分析仪检测血肌酐、尿素氮、尿酸。光镜观察肾脏病理改变情况,采用免疫组织化学法检测nephrin的表达并进行半定量分析,RT-PCR法检测nephrin mRNA表达情况。结果:与模型组相比,第16周末中药组24 h尿蛋白、肌酐等各项指标均有明显改善,差异具有统计学意义(P0.05);与厄贝沙坦组同时间点比较,第8周末中药组24 h尿蛋白明显升高(P0.05),第16周末中药组24 h尿蛋白降低(P0.05);第16周末nephrin半定量分析结果显示中药组较模型组表达明显增加(P0.05);中药组nephrin mRNA的表达较模型组明显增强(P0.05),两治疗组之间该项指标差异无统计学意义(P0.05)。结论:化瘀通络中药可以减少蛋白尿,保护肾功能的作用可能与上调足细胞裂孔膜蛋白nephrin的表达有关。     

雷公藤内酯醇干预高糖影响小鼠肾脏足细胞Nephrin蛋白表达的研究

目的：通过观察雷公藤内酯醇（triptolide,TP）及对照药物缬沙坦（valsartan,Val）干预高糖环境培养的足细胞肾小球足细胞裂孔隔膜（GPSD）核心蛋白nephrin的表达,来深入探讨雷公藤治疗糖尿病肾病（DN）蛋白尿的分子生物学机制。方法：（1）将培养成熟的足细胞分为对照组1、对照组2、模型组、雷公藤内酯醇干预组及缬沙坦干预组（干预组均设低、中、高3个剂量）,培养24h后以RT-PCR法检测各组足细胞nephrin mRNA的表达。（2）将培养成熟的足细胞设为对照组、模型组、雷公藤内酯醇干预组及缬沙坦干预组,培养24h后行间接免疫荧光法检测nephrin蛋白的表达。结果：（1）与模型组相比,不同剂量TP和Val组均能提高nephrin mRNA表达（P〈0.05）,并且中剂量TP组和高剂量Val组效果最好（P〈0.05）。（2）与对照组相比,间接免疫荧光法可见模型组nephrin表达下降。经TP和Val干预24h后,TP和Val组足细胞nephrin蛋白的表达均有一定程度提高。结论：雷公藤内酯醇和缬沙坦均能上调高糖诱导的足细胞nephrin的表达下降,这可能是雷公藤及缬沙坦在临床上有效治疗DN蛋白尿的机制之一。     

厄贝沙坦治疗糖尿病肾病大鼠蛋白尿作用机制

目的 研究厄贝沙坦治疗糖尿病肾病(DN)蛋白尿作用机制.方法 应用链脲佐菌素建立大鼠糖尿病肾病模型,成模大鼠随机分为模型对照组(M)、厄贝沙坦干预组(I),另设正常对照组(C).各组干预12周后,分别检测:①血糖、血肌酐、24h尿蛋白定量等;②肾脏病理、电镜以及免疫组化分析;③实时定量RT-PCR分析.结果 与正常组比较,模型组大鼠24h尿蛋白含量显著增加,肾小球基底膜增厚,足细胞nephrin、podocin表达显著减少,通过厄贝沙坦干预治疗,上述指标改善(P＜0.05),且蛋白尿的程度与nephrin、podocin表达呈负相关(P＜0.05).结论 厄贝沙坦可通过拮抗DN大鼠的足细胞损害;减少其尿蛋白.     

N-乙酰半胱氨酸对糖尿病肾病大鼠足细胞的保护作用

目的：探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞的保护作用。方法：制备DN大鼠模型,将动物随机分为正常对照组、DN组和NAC组。8周后观察尿蛋白排泄量,免疫荧光方法和Western blotting检测肾皮质nephrin和podocin蛋白表达,透射电镜检测足细胞超微结构变化。结果：（1）与正常对照组比较,DN组和NAC组尿白蛋白排泄率增多（P〈0.01）,nephrin和podocin蛋白表达减少（P〈0.01或P〈0.05）和肾脏病理病变明显;（2）与DN组比较,NAC组尿蛋白排泄减少（P〈0.01）,nephrin和podocin蛋白表达较高（P〈0.01或P〈0.05）和足细胞的病变较轻。结论：NAC对DN大鼠肾脏保护作用,其部分机制与上调nephrin和podocin蛋白表达及改善足细胞病变有关。     

中药合剂对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

也页目的：观察中药合剂（ TCM mixture）对糖尿病肾病（ DKD）大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子（ nephrin和podocin）表达的影响,探讨其对DKD的防治作用。方法：高脂高糖喂养8周联合小剂量STZ（30 mg/kg）建立T2DM大鼠模型,将DM模型大鼠随机分为中药合剂治疗组（B）及T2DM模型对照组（A）;另设正常对照组（NC）。各组于治疗前及干预后4、8、12周末检测大鼠血糖浓度及尿微量白蛋白;第12周末称大鼠体重（ BW）、肾重（ KW）,计算肾肥大指数（ KW/BW）,观察血清尿素氮（ BUN）、肌酐（ Scr）、总胆固醇（ TC）、三酰甘油（ TG）变化;光镜观察肾脏病理改变;应用免疫组化技术观察足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin肾组织分布与表达;采用Western blot技术测定肾皮质Nephrin、Podocin 蛋白的表达。结果：应用中药合剂干预后与T2DM模型对照组相比,大鼠的尿微量白蛋白总量、肾肥大指数、血糖、尿素氮、血肌酐较T2DM模型组明显降低（ P〈0.05）,体重增加（P〈0.05）,病理改变减轻,nephrin和podocin蛋白表达增加（P〈0.05）。结论：中药合剂能提高nephrin和podocin的表达,促进足细胞损伤修复,减少尿微量白蛋白的排泄,减缓糖尿病肾病的进展。     

柴芩肾安方对IgA肾病大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

目的：探讨柴芩肾安方对IgA肾病（IgAN）大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响。方法：通过切除单侧肾并反复静脉注射葡萄球菌肠毒素B（SEB）复制大鼠IgAN模型,分为正常组、切肾组、IgAN组、柴芩肾安方组和氯沙坦组。第12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白量（Upr）,观察肾小球形态学和超微结构变化,并采用免疫组化和实时定量PCR法检测肾小球足细胞nephrin蛋白及mRNA的表达。结果：与正常组相比,IgAN组大鼠Upr显著升高（P〈0.01）,肾小球系膜增生,足突融合明显,足细胞nephrin蛋白及mRNA表达均明显下调（P〈0.01）。经柴芩肾安方治疗后上述指标均明显改善,与IgAN组比较差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。结论：柴芩肾安方能减轻IgAN大鼠蛋白尿及肾小球病变,这可能与其恢复肾小球足细胞nephrin表达有关。     

芪地糖肾颗粒通过调节ERK信号通路减轻2型糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的作用研究

目的:观察芪地糖肾颗粒(QDTS)对2型糖尿病肾病(DN)大鼠蛋白尿的治疗作用,并通过对足细胞标志性蛋白nephrin、PCX的表达及细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路活化水平的检测探讨QDTS可能的作用机制。方法:建立2型DN大鼠模型,采用缬沙坦和QDTS干预4周,通过比较各组大鼠的尿微量白蛋白水平来判定疗效。采用WB法检测各组大鼠肾组织中足细胞标志性蛋白nephrin、PCX及ERK、p-ERK的表达水平。结果:与正常组相比,DN模型组的血糖及尿微量白蛋白水平均有显著升高(P 0. 01)。肾组织中nephrin、PCX的表达水平显著降低(P 0. 05),并伴有ERK磷酸化水平的升高(P 0. 01)。干预后,缬沙坦组及QDTS组大鼠的尿白蛋白水平明显降低(P 0. 05)。QDTS还能够提高DN大鼠肾组织中nephrin、PCX的表达(P 0. 05),并且降低ERK的磷酸化水平(P 0. 01)。结论:QDTS可以通过抑制ERK信号通路的过度活化来缓解DN足细胞损伤。     

百令胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞Nephrin表达的研究

目的：探讨百令胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织足细胞nephrin表达的影响。方法：制作DN实验模型,分为正常对照组、DN组、百令胶囊组及贝那普利组。百令胶囊组及贝那普利组按100 mg·kg^-1·d^-1分别给予百令胶囊及贝那普利灌胃,实验周期12周。12周后观察各组血糖（BS）、肾重/体重（KW/BW）、24 h尿蛋白定量、肌酐清除率（Ccr）等,同时还观察肾脏病理形态学变化。并采用免疫组化和RT-PCR观察肾组织nephrin蛋白及基因表达的变化。结果：与正常对照组相比,DN组大鼠BS、KW/BW、24 h尿蛋白定量、肾小球硬化指数和肾小管损伤指数均显著上升（P〈0.05）,Ccr显著下降（P〈0.05）,经过12周治疗后观察百令胶囊组上述指标除血糖外均明显改善。与正常对照组相比,DN组大鼠肾组织足细胞nephrin表达明显下调（P〈0.05）,百令胶囊治疗后观察nephrin表达明显增加,与DN组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：百令胶囊对DN大鼠具有一定的肾脏保护作用,其机制可能与恢复肾组织足细胞nephrin表达有关。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠足细胞podocin表达的影响

目的：观察益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞Podocin表达的影响。方法：采用切除右侧肾脏后腹腔一次性注射STZ的方法建立DN模型,实验分组为：正常对照组、DN模型组、益肾胶囊组、贝那普利组,每组各10只,益肾胶囊组每只大鼠灌胃益肾胶囊625g·kg-1·d-1,贝那普利组每只大鼠灌胃贝那普利10mg·kg-1·d-1,正常对照组及DN模型组每日给予等量的蒸溜水。经过治疗12周后,采用PT-PCR及Westernblot检测肾组织中Podocin表达的情况。结果：实验12周末,DN模型组足细胞Podocin蛋白表达明显低子正常对照组（P〈0.05）。经过益肾胶囊治疗后Podocin表达明显增加,与DN模型组比较（P〈0.05）,与贝那普利组比较两治疗组之间差异无统计学意义。结论：益肾胶囊明显改善DN模型大鼠足细胞Podocin的表达,可能具有一定的足细胞损伤保护作用。     

TRPC6在糖尿病肾脏疾病大鼠肾组织的表达及缬沙坦的作用

目的观察瞬时受体阳离子通道6（transientreceptorpotentialcationchannel6,TRPC6）在糖尿病肾脏疾病（diabetickidneydisease,DKD）鼠肾组织的表达及缬沙坦的作用。方法通过单肾切除联合链脲佐菌素（streptozotocin,sTZ）诱导的DKD模型随机分为糖尿病组（diabetesmellitus,DM）和缬沙坦治疗组,每组10只。另以10只大鼠作对照组（normalcontrol,NC）。缬沙坦组每天给予缬沙坦20mg／kg于饮水中,于8周、16周、24周检测不同时间点24h尿蛋白、血肌酐和血糖。24周处死动物,PAS染色和透射电镜观察肾组织学改变,激光共聚焦检测TRPC6、synaptopodin的表达和分布,免疫组化、RT-PCR检测nephrin、TRPC6mRNA和蛋白的表达。结果与NC组比较,DM组24h尿蛋白、肾质量／体质量指数、TRPC6的表达均显著高于NC组（P〈O．01）,而内生肌酐清除率（endogenouscreatinineclearancerate,Ccr）、nephrin的表达显著低于NC组（P〈0．01）。激光共聚焦显示TRPC6与足细胞标志蛋白synaptopodin高度融合,沿毛细血管袢线形分布。缬沙坦组24h尿蛋白、肾质量／体质量、TRPC6的表达较DM组显著降低,Ccr、nephrin免疫组化积分和mR-NA的表达显著增加,肾脏病理改变减轻。结论DKD大鼠足细胞TRPC6的表达显著升高,缬沙坦可能通过抑制TRPC6的表达来减轻足细胞的损伤。     

霉酚酸酯及缬沙坦对糖尿病大鼠足细胞的保护机制研究

目的探讨霉酚酸酯、缬沙坦及2者联合应用对糖尿病。肾病（DN）大鼠足细胞损伤的保护作用。方法雄性Wistar大鼠行右肾切除后，腹腔注射链脲佐菌素（STZ，65mg／kg）建立糖尿病模型。将实验动物随机分为右。肾切除对照组（NC）、糖尿病组（DM）、霉酚酸酯治疗组（M）、缬沙坦治疗组（V）、缬沙坦和霉酚酸酯联合治疗组（V＋M）。治疗组分别给予霉酚酸酯15mg·kg^-1·d^-1，缬沙坦40mg·kg^-1·d^-1；联合治疗组为上述两组之和。检测各组8周末的左肾质量／体质量比值、尿蛋白量（24h）、血糖（Glu）、Scr。光镜及电镜观察肾组织形态学变化。免疫组化检测肾组织中nephrin、结蛋白（desmin）及单核细胞趋化因子1（MCP-1）蛋白表达。实时PCR测定肾组织中nephrin及MCP-1mRNA表达。结果与NC组相比，DM组大鼠血糖、尿蛋白量及左肾质量／体质量比值均显著上升（P〈0．01）；肾小球硬化指数（GSI）及肾间质损害加重（P〈0．01）；肾组织内MCP-1、desmin蛋白表达均显著上调（P〈0．01）。与DM组比较，M组、V组及V＋M组上述指标除Glu、Scr外，均明显改善（P〈0．05或P〈0．01）。与NC组（100％）相比，DM组nephrinmRNA表达下调（78％，P〈0.05）；各治疗组nephrinmRNA表达增加，以M组增加最明显（134％，P〈0．01）。与NC组（100％）相比，DM组MCP-1mRNA表达明显上调（251％，P〈0.05）；各治疗组明显降低，以M组最显著（126％，P〈0．01）。nephrinmRNA与MCP-1mRNA表达呈负相关（r=-0，86。P〈0．01）。尿蛋白量（24h）与MCP-1mRNA呈正相关fr=0．82，P〈0．01）；与nephrinmRNA呈负相关（r=-0．78，P〈0．01）。结论霉酚酸酯及缬沙坦均能下调糖尿病大鼠肾组织中desmin及MCP-1基因及蛋白的表达，上调nephrin基因及蛋白表达，降低尿蛋白量，预防肾损伤。联合治疗不优于单一治疗。霉酚酸酯可能通过抗炎性反应减轻足细胞损伤，减少蛋白尿，对早期DN大鼠具有明显的肾保护作用。     

糖肾安防治早期糖尿病肾病的实验研究

目的:研究糖肾安对早期糖尿病肾病大鼠的治疗作用并探讨其可能机制。方法:采用单肾切除、高糖高脂饲料喂养、小剂量STZ(35mg/kg)腹腔注射"三联"方法建立糖尿病肾病大鼠模型。随机分为正常对照组、模型对照组、糖肾安组、福辛普利组、联合干预组,每组9只。用药6周后观察各组大鼠体重、肾重、血糖、24h尿蛋白定量、血浆Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)水平的差异及肾脏病理改变、肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达。结果:模型组大鼠体重、肾重、肾重/体重、血糖、24h尿蛋白定量及血浆ColⅣ水平、肾脏TGF-β1、VEGFmRNA表达与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);各用药组上述指标有所改善,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。糖肾安组与福辛普利组比较上述指标差异均没有统计学意义。肾脏病理变化以模型组最为明显,系膜细胞重度增生,各用药组均有不同程度减轻。结论:糖肾安对早期糖尿病肾病具有良好的防治作用,其效果与福辛普利相当,中西医结合治疗能取得更好的效果。其肾保护作用可能是通过影响肾脏促纤维化生长因子TGF-β1、VEGF表达实现的。     

Tacrolimus对糖尿病大鼠肾脏足细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨Tacrolimus（FK506）是否通过足细胞的保护作用减轻糖尿病大鼠尿白蛋白排泄。方法将40只大鼠按随机数表法分为对照组（C组）、糖尿病（diabetesmellitus,DM）模型组（DM组）、DM＋FKS060．5mg·kg^-1·d^-1给药组（FK5060．5组）及DM＋FK5061．0mg·kg^-1·d^-1给药组（FK5061．0组）,每组10只。采用链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）腹腔注射建立糖尿病模型,FK506灌胃给药。4周后大鼠24h尿白蛋白测定采用酶联免疫方法,电镜下观察肾小球足细胞病理组织学改变,应用免疫荧光与Westernblot检测肾组织Nephrin和Podocin表达。结果DM组大鼠24h尿白蛋白排泄率（albuminexcretionrate,AER）明显高于对照组（P〈0．01）,FK5060．5与1．0mg／kg给药组大鼠AER水平明显低于模型组（P〈0．05,P〈0．01）。透射电镜观察DM组肾小球基底膜增厚、结构模糊不清,系膜基质增多,足细胞损伤,与DM组比较,FK5060．5、1．0组肾组织超微结构改变有不同程度改善。免疫荧光显示Nephrin和Podocin在C组大鼠肾小球呈线状均匀分布;DM组大鼠肾小球表达明显减少,且呈颗粒状不均匀分布;FK5060．5组和FK5061．0组Nephrin和Podocin表达不同程度增加,呈线状及颗粒状分布。Westernblot显示DM组Nephrin和Podocin较C组表达明显下降;FK5060．5组和FK5061．0组Nephrin和Podocin量较DM组明显增加（P〈0．01）。结论FK506能减少糖尿病大鼠尿白蛋白排泄,改善肾小球足细胞病变,其机制可能与上调Nephrin和Podocin表达有关。