梁金菇多糖对K562细胞的促凋亡作用研究

目的研究LJPS的抗肿瘤作用及机制。方法：采用MTT法观察LJPS对K562细胞的增殖抑制．用普通光镜．荧光显微镜、电镜、FCM、DNA电泳等技术检测细胞凋亡．用RT--PCR检测bcl-2mRNA的表碉结果：LJPS对K562细胞有明显抑制增殖并诱导细胞凋亡的作用．DNA电泳出现片段化梯形带．F(、Ⅵ检测示细胞阻滞于G1期．出现凋亡峰．LJPS诱导K562细胞凋亡中下调bcl-2mRNA表达。结论LJPS对K562细胞的抑制增殖、促进凋亡的作用与其下调Bcl-2mRNA表达有关。     

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??OBJECTIVE To investigate the inhibitory activity, induced differentiation-inducing activity and apoptosis-inducingactivity of hydroxyl morpholine(QDML-01) on chronic myelocytic leukemia cells line K562. METHODS The cell growth curve was drawn based on cell counting method. The IC₅₀ value of QDML-01 and positive control medicine to K562 cells were evaluated by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay method. Double soft agar assay method was carried out to study the ability of cell proliferation to determine efficacy of phamacognosy. The pathomorphism was analyed by the Wright-Giemsa staining method. The mechanism of cell apoptosis from morphology and gene level were investigated, by AO-EB double-staining method and DNA breakage test. The effect of QDML-01 on K562 cells from the protein level was determined by Western-blot. RESULTS The growth curves showed the K562 cells had strong cell vitality. They came into logarithmic phase on the third generation. The MTT assay RESULTS showed that the IC₅₀ values of QDML-01 and imatinib to K562 cells were 5.81 and 596.88 nmol??L^-1. Double soft agar colony formation test showed that clone formed at 21 d and the inhibitory rate of QDML-01 was 81.7%.It indicated that K562 cells were sensitive to QDML-01.Morphology test result showed that QDML-01 induced K562 cells to normal cells. The RESULTS of AO-EB double-staining method showed that QDML-01 induced the apoptosis of K562 cells. The study of DNA breakage test indicated that QDML-01 can induce the apoptosis of K562 cells to produce DNA banding with step-like. Western-blot analysis result suggested that QDML-01 can downregulated the expression of P210^bcr/abl protein. CONCLUSION QDML-01 has the inhibitory activity on chronic myelocytic leukemia cells line K562 by promoting the apoptosis of K562 cells and inducing differentiation to normal cells.     

中药889对人白血病粒细胞,肝癌和绿猴肾细胞生长的影响

目的：为了探讨中药８８９对体外培养的癌细胞的影响。方法：我们观察了该药对人白血病粒细胞（Ｋ５６２）、肝癌细胞（Ｈｅｐｅｒ）和绿猴肾细胞（Ｖｅｒｓｅｎｓ，为正常细胞）生长的影响。结果：浓度在２０．８３～４１．６７μｇ／ｍｌ、作用时间为２４～４８ｈ时，Ｋ５６２细胞死亡率和抑制率分别为８０．６７～６８．３３％和８６．２７～７０．１０％；Ｈｅｐｅｒ细胞抑制率为６０．９８～７５．９４％，与空白对照组相比，Ｐ＜０．０５和０．０１，而对Ｖｅｒｓｅｎｓ细胞生长无影响。结论：我们初步认为该药有较强的抑制癌细胞生长和繁殖的能力     

扶正祛邪丹对K562细胞株及造血干细胞的影响

目的：研究扶正祛邪丹对K562细胞株和小鼠造血干细胞的影响,探讨扶正祛邪丹治疗骨髓增生异常综合征的疗效机理。方法：扶正祛邪丹含药兔血清培养K562细胞株,用流式细胞仪检测P53蛋白表达、细胞活力、细胞凋亡与细胞周期;用造血干细胞培养法观察扶正祛邪丹对BALB／C小鼠骨髓造血干细胞增殖的影响。结果：扶正祛邪丹对K562细胞株P53蛋白表达有抑制作用,对红系造血祖细胞有促进作用。不能诱导细胞凋亡,对细胞增殖周期无明显影响,对小鼠骨髓粒系造血干细胞无明显促进作用。结论：扶正祛邪丹促进红系造血干细胞增殖,降低P53蛋白表达,可能为其主要疗效机理。     

人参总皂苷诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：研究人参总皂苷诱导白血病细胞凋亡及其机制，为进一步开发人参总皂苷提供实验依据。方法：采用细胞体外培养，图像分析技术、流式细胞术、形态学观察与免疫细胞化学等方法，研究人参总皂苷诱导K562细胞凋亡。结果：人参总皂苷对K562细胞有增殖抑制作用，并可诱导K562细胞凋亡明显增加，同时K562细胞癌基因产物C－MYC，BCL－2表达明显降低。结论：人参总皂苷能诱导K562细胞凋亡，其机制可能与调控癌基因产物的表达有关。     

人参多糖对K562细胞人粒-巨噬细胞集落刺激因子和促红细胞生成素及其受体表达的影响

目的研究人参多糖(GPS)对人红白血病细胞株(K562)表达人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)及其受体的影响。方法采用细胞体外培养技术,RT-PCR检测GPS诱导后K562细胞中GM-CSF、EPOmRNA的表达、免疫细胞化学方法检测K562细胞经GPS作用后GM-CSF、EPO及其受体蛋白表达的变化、Westernblotting检测GPS诱导后K562细胞GM-CSF、EPO受体蛋白的表达。结果经GPS诱导后,RT-PCR检测显示K562细胞GM-CSFmRNA的表达有所增强,但与对照组相比无统计学意义,EPOmRNA的表达有明显的降低;免疫细胞化学方法检测EPO与GM-CSF蛋白的表达明显减弱,EPO与GM-CSF受体蛋白的表达明显增强;Westernblotting检测GM-CSF、EPO受体蛋白的表达增强。结论GPS既能抑制K562细胞分泌GM-CSF、EPO,又能明显促进GM-CSF、EPO受体的合成和分泌。     

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??OBJECTIVE To investigate the protection of hepatocyte growth factor (HGF) on CML cell line K562 from apoptosis induced by etoposide (VP-16) and its molecular mechanism. METHODS Quantitative and qualitative analyses on cell morphological change of apoptosis were performed through acridine orange (AO) staining and HE staining, and fluorescent flow cytometry.The test analyzes membrane on the surface of the PS evagination and integrity of cell membrane surface and mitochondrial membrane potential changes were performed through Annexin V-FITC/PI double dyeing and JC-1 cell dyeing tests, and apoptotic factors such as Bcl-2, Bax, Caspase-3 and Caspase-9 were measured by SYBR Green (Takara) qRT-PCR. RESULTS The HE and AO staining revealed that apoptotic rates in HGF+VP-16 groups were significantly lower than those in VP-16 groups (P<0.05,P<0.05), HGF can inhibit the apoptosis of cells induced by VP-16; FCM (Annexin V-FITC/ PI and JC-1) tests showed that cells apoptotic rates in HGF+VP-16 groups were significantly lower than those in VP-16 groups (P<0.05,P<0.001), indicating that HGF has the anti-apoptosis function. Apoptosis related gene mRNA expression tests found that the Bcl-2 mRNA expression in HGF+VP group was obviously higher than that in the VP-16 group (P<0.001), while Bax mRNA, Caspase-3 mRNA, and Caspase-9 mRNA expressions were significantly lower than those in the VP-16 group (P<0.05, P<0.001, P<0.001),suggesting that HGF possesses antiapoptotic effect through inhibiting apoptosis gene expression and promoting the antiapoptotic gene expression simultaneously. CONCLUSION HGF can significantly protect K562 cells from apoptosis induced by VP-16 through the HGF/c-Met way to regulate PI3K/AKT pathway.     

PESV对K562细胞PI3K、p-Akt通路抑制作用的研究

目的探讨PESV对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞凋亡调控的PI3K、p-Akt信号蛋白的影响及作用机制。方法将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,通过MTT检测细胞生长曲线,Western blot检测PI3K及p-Akt蛋白水平变化。结果与对照组相比,PESV处理后K562细胞,凋亡率增加,PI3K及p-Akt表达降低。结论 PESV可能通过抑制凋亡调控的PI3K、p-Akt信号蛋白,从而达到抑制K562细胞系增殖,促进细胞凋亡的作用。     

葛根素注射液对K562/Adr细胞化疗药物敏感性及机理研究

目的：通过观察葛根素注射液协同化疗药物对K562／Adr白血病耐药细胞的抑制作用，探讨葛根素增加白血病耐药细胞对化疗药物的敏感性及作用机理。方法：选K562／Adr耐药细胞株作为靶细胞，采用MTT法观察不同浓度的葛根素注射液对K562／Adr耐药细胞增殖的影响，及细胞对化疗药物的敏感性。RT—PCR的方法检测葛根素对耐药相关基因（MDR1／P-gp、MRP）表达的影响。结果：①MTT法结果显示低到中等浓度的葛根素（25～100μg／mL）对15562／Adr耐药株的生长与对照组相比无显著差异（P〉0.05），但当葛根素浓度提高至250μg／mL以上时，对细胞则出现增殖抑制作用，且随浓度增加抑制作用增强。②用不同浓度的葛根素和化疗药物（Adr 1μg/mL）合用时结果显示，低浓度（25～50μg／mL）的实验组与对照组无显著差异（P〉0．05）；随着葛根素浓度增加（100～500μg／mL），Adr对细胞的抑制作用明显，即K562／Adr对Adr的敏感性与葛根素呈剂量依赖吴系。③K562／Adr细胞经葛根素（100μg/mL）处理1周后，MDR1基因表达受到抑制，是未经处理细胞的2．5倍，MRP基因表达在处理前后无明显变化；当处理1个月后，细胞中MDR1、MRP两基因表达均明显低于未经处理过的细胞，分别是未经处理细胞的2．6倍和3．5倍。结论：葛根素注射液在一定浓度下，能直接抑制白血病耐药细胞增殖，并能提高耐药细胞对化疗药物的敏感性；其机制可能通过对耐药相关基因（MDR1、MRP）表达抑制来起作用。     

氯化锂诱导裸鼠移植瘤模型K562细胞向红系分化的研究

目的研究不同浓度LiCl对K562裸鼠移植瘤模型的白血病细胞增殖及凋亡的影响,并具体研究低浓度氯化锂(10mmol/L LiCl)在体外对K562裸鼠移植瘤模型的白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法制备慢性粒细胞白血病细胞系K562裸鼠移植瘤模型,用不同浓度的LiCl(10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L)来作用,药物作用组为不同的实验组,对照组加等量的生理盐水,以阿糖胞苷(Ara—C)药物处理作为阳性对照,在体内观察LiCl对慢性粒细胞白血病系K562裸鼠移植瘤模型的作用效果。并采用液体培养试验,四唑盐(MTT)比色试验,集落培养试验为指标观察10mmol/LLiCl对K562裸鼠细胞增殖的影响,采用联苯胺染色实验及流式细胞仪检测细胞膜分化抗原CD71的表达检测细胞的分化。结果①30mmol/LLiCl在瘤体大小、肿瘤浸润范围、小鼠生存期等方面明显优于其他浓度的LiCl,并都对K562细胞具有抑制增殖的作用。②在LiC(l10mmol/L)作用下,联苯胺染色实验可见黄色的阳性细胞,流式细胞术检测CD71的表达量呈明显增强,提示10mmol/L LiCl可诱导K562细胞向红系分化。结论①10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L LiCl都能抑制K562白血病细胞增殖,其中30mmol/L LiCl的效果最佳②低浓度10mmol/L LiCl同样能抑制K562白血病细胞增殖和诱导其向红系分化。     

雷公藤内酯醇对K562细胞增殖周期的影响及对比研究

目的探讨雷公藤内酯醇抑制 K562细胞增殖的机理。方法选用 K562细胞株,运用细胞培养、MTT 法及流式细胞仪研究不同浓度雷公藤内酯醇、足叶乙甙(VP-16)对 K562细胞增殖及细胞周期的影响。结果雷公藤内酯醇能抑制 K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,且具有上调 K562细胞 G_1/S 检测点的能力。而 VP-16作用点是 G_2/M 期。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,能干扰 K562细胞 G_1/S 检测点的转换,与 VP-16作用点不同。     

鬼臼毒素对人K562白血病细胞的作用研究

采用MTT法和流氏细胞仪技术,研究了天然药物鬼臼毒素（podophyllotoxin）对人慢性髓细胞性白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明,鬼臼毒素对K562细胞的IC50是79.19unol。L^-1;C以IC50药物浓药作用人K562细胞24h,细胞凋亡率达到31.96%,G0-G1期峰前有亚二倍林峰出现,此结果说明鬼臼毒素能快速有效地诱导K562细胞发生凋亡。     

铁筷子对胃癌及白血病K562细胞体外生长的抑制效应

应用细胞培养技术,观察了铁筷子提取物对人胃癌细胞及人白血病K562细胞系集落形成影响,结果表明该提取物对两种恶性肿瘤细胞的生长均有明显抑制作用,使其集落形成率显著低于对照组,镜下见细胞膜粗糙,毛刺,并有崩解破坏现象。     

槲皮素对白血病K562细胞增殖及PPARγ蛋白表达影响的研究

目的:研究槲皮素在诱导白血病K562细胞凋亡过程中PPARγ蛋白的表达.方法:用槲皮素作用于K562细胞一定时间后,通过胎盘蓝拒染法观察其生长曲线,MTT法检测其对细胞的抑制率,Hoechst33258染色后荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡率,采用Western-blotting技术从蛋白分子水平上检测槲皮素对PPAR～蛋白表达.结果:槲皮素显著抑制K562细胞的增殖并呈浓度依赖关系.电泳的结果显示一定浓度的槲皮素能够上调PPARγ蛋白的表达,进而可能诱导K562细胞的凋亡.结论:PPARγ蛋白表达的上调可能是槲皮素抑制K562细胞增殖诱导凋亡的原因之一,其中,槲皮素起着PPARγ非特异配体的作用.     

姜黄素对人白血病K562细胞凋亡的影响

Ｋ５６２细胞对多种化疗药物诱导凋亡具有抗性，本文以ＡＯ／ＥＢ染色法、细胞分光光度术、ＤＮＡ凝胶电泳及电镜观察等方法，发现姜黄素可显著诱导Ｋ５６２细胞凋亡，提示该药对治疗慢性粒细胞性白血病可能有价值。     

芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT-PCR检测芒果苷(25~200μmol/L)处理(24、48、72、96h)后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化;采用Western blotting方法检测K562细胞BCR/ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后,P210蛋白质水平下调,并呈时间及剂量依赖性,bax基因表达显著上调,bcl-2基因表达轻度下调,survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR/ABL融合蛋白质P210、bcl-2和sur-vivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。     

苦参碱诱导K562细胞分化的差异表达基因的研究

目的研究苦参碱诱导人红白血病K562细胞分化的分子机制。方法应用改良的mRNA差异显示逆转技术(DDRT—PCR)筛选苦参碱诱导K562细胞分化相关的差异表达基因；对差异cDNA片段纯化、克隆、测序及Blast分析，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法验证。进一步对其中的未知差异cDNA片段采用Northern杂交确定其转录本的大小及组织分布特性，进而充分利用多种生物信息学资源对差异片段进行结构和功能的预测。结果苦参碱诱导K562细胞前后存在明显的基因表达差异，筛选获得了17条差异条带。其中4个差异显著片段经RT—PCR验证后，在Genbank中分析，有3个为已知基因，1个可能为未知基因，暂命名为KH基因。Northern杂交证实KH基因转录本的大小为1．35kb，分布于正常人体脑组织中。结论苦参碱具有诱导K562细胞基因表达谱发生变化的作用，由苦参碱诱导的K562细胞分化是一个多基因参与的过程；KH基因可能是苦参碱作用K562细胞后表达量发生改变的未知基因，可能与细胞癌变有关。     

苦参碱作用K562细胞表面分化抗原表型的改变

近年来 ,肿瘤诱导分化剂的研究日渐增多 ,从中药和天然药物中寻找和提取诱导分化剂是一种新途径。苦参碱是传统中药苦参的有效成分 ,文献报道具有抗癌活性[1] ,对白血病细胞有抑制生长和诱导分化作用 [2 ]。本课题组在前期研究的基础上 [3,4 ]通过流式细胞仪检测进一步表明 :一定浓度的苦参碱可诱导 K5 62细胞向成熟方向分化 ,并具有多向诱导分化作用。1　材料与方法1 .1　苦参碱 :纯度 99% ,由实验室自备。1 .2　细胞培养 :K5 62细胞在含 1 0 %新生小牛血清的 RMPI- 1 640培养液中传代培养。1 .3　苦参碱对 K5 62细胞的作用 :收集对数生…     

刺五加体外逆转K562/ADR细胞多药耐药性的初步研究

目的:初步研究刺五加体外对人白血病细胞系K562/S及其多药耐药细胞系K562/ADR的影响,并进一步探讨中药在肿瘤化疗中扶正增效作用的可能途径.方法:以MTT法测定刺五加对K562/S(敏感株)和K562/ADR(耐药株)的直接细胞毒作用;测定柔红霉素(DNR)对细胞的细胞毒作用;测定细胞在不同浓度刺五加作用后DNR的细胞毒性变化;用荧光法测定细胞内药物(DNR)浓度的变化,结果:①刺五加在25μg/ml～200μg/ml～浓度之间对562/S和K562/ADR细胞均无明显的毒性,当浓度大于200μg/ml细胞毒性呈增加的趋势,因此选择50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml为实验浓度进行以下实验.②DNR对K562/S和K562/ADR的半数抑制浓度(IC50)分别为0.087μg/ml和8.36μg/ml,K562/ADR耐药细胞的耐药倍数为96倍.③K562/ADR细胞在50μg/ml、10μg/ml、200μg/ml、200μg/ml刺五加作用24h后可增加DNR对其的细胞毒作用,IC50下降分别为6.874μg/ml,4.028μg/ml及1.978μg/ml.与对照组相比P＞0.05、P＜0.05、P＜0.01);逆转倍数分别为1.22倍、2.08倍、4.23倍.3种浓度的刺五加对K562/S敏感细胞的DNRIC50,也有一定影响,但均无统计学意义(P＞0.05)④刺五加(100μg/ml和200μg/ml)可提高K562/ADR细胞内DNR的含量,从对照组的0.286μg/ml蛋白分别提高到1.045μg/mg蛋白和1.712μg/mg蛋白;与对照组相比均有统计学意义(P＜0.05);但对K562/S细胞无显著影响,且耐药细胞株内DNR的含量亦未恢复到敏感细胞的水平(2.895μg/mg蛋白,P＜0.05).结论:高浓度刺五加有一定抗肿瘤作用,对抗肿瘤化疗有扶正增效作用.