沉默CD147对前列腺癌LNCaP细胞糖酵解的影响

目的:探讨CD147对前列腺癌(PCa) LNCaP细胞糖酵解的影响,为PCa临床诊断和治疗提供新的分子标志物和靶点。方法:采用慢病毒感染系统建立沉默CD147的细胞作为LNCaP/shCD147组,同时设立阴性对照组(LNCaP/scramble组)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测2组LNCaP细胞中CD147 mRNA表达水平,试剂盒检测2组LNCaP细胞中乳酸(LA)、丙酮酸(PA)和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)浓度及2组LNCaP细胞中丙酮酸激酶(PK)、6-磷酸果糖激酶1(PFK1)和己糖激酶(HK)酶活性,Western blotting法检测2组LNCaP细胞中CD147、HK2、肌肉磷酸果糖激酶(PFKM)和丙酮酸激酶M2 (PKM2)蛋白表达水平。结果:与LNCaP/scramble组比较,LNCaP/shCD147组细胞中CD147 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),表明成功构建沉默CD147的PCa LNCaP细胞模型。与LNCaP/scramble组比较,LNCaP/shCD147组细胞中LA、PA和ATP浓度明显降低(P&l...     

抑癌基因PTEN对人前列腺癌细胞系PC-3的作用

目的：研究抑癌基因PTEN对人前列腺癌细胞系PC—3细胞生长、粘附、细胞周期、超微结构的影响．方法：利用阳离子脂质体LipofectAmine2000介导，分别将含PTEN的逆转录病毒载体PBabe—PTEN—puro及空载体PBabe-puro转入PC—3细胞，观察转染前后细胞的生长、粘附、超微结构、细胞周期改变情况．结果：将PTEN转入后，细胞生长明显受到抑制，生长抑制率为83％；同质型粘附率下降；细胞超微结构失去部分恶性表型特征；细胞周期由G1→S0期受抑制，并且出现一个小的凋亡峰．结论：PTEN可以明显的抑制PC—3生长、粘附．因而PTEN可能会在前列腺癌基因治疗上起一定的作用．     

非那雄胺抑制前列腺癌细胞LNCaP增殖的基因芯片观察

目的 探讨非那雄胺抑制前列腺癌细胞增殖的分子机制,筛选特异性的治疗靶点。方法 利用基因芯片技术检测非那雄胺作用前列腺癌细胞株前后LNCaP差异表达的基因。结果 非那雄胺能够显著抑制前列腺癌细胞株LNCaP的增殖,在96条基因中受非那雄胺作用有差异表达的基因有29条,其中表达上调的基因有11条,下调的基因有18条。结论 非那雄胺抑制LNCaP增殖可能涉及多基因、多通路的共同作用。     

E6-AP对前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究E6相关蛋白(E6-AP)对前列腺癌细胞增殖和细胞周期的影响,阐明E6-AP在雄激素受体通路中的作用机制及在前列腺癌发生发展中的作用.方法:采用电穿孔方法制备tTA及E6-AP稳定转染细胞株;利用强力霉素(DOX)的调节作用,通过MTT实验观察E6-AP过表达及低表达对LNCaP细胞增殖的影响;利用流式细胞仪...     

miR-375通过抑制KLF4促进前列腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-375在前列腺癌(PCa)细胞中的表达、作用及机制.方法 培养细胞,转染质粒,Transwell分析PCa细胞的迁移和侵袭;qPCR分析miR-375、KLF4 mRNA在PCa细胞中的表达;Western blot分析KLF4蛋白在PCa细胞中的表达;生物信息学分析miR-375的靶基因,双荧光素酶实验验证.结果 miR-375在PCa中高表达,抑制miR-375的表达显著抑制PCa细胞的迁移和侵袭;通过生物信息学分析miR-375的潜在靶基因含有KLF4,双荧光素酶实验验证KLF4为miR-375的靶基因;KLF4在PCa细胞中表达显著降低,抑制miR-375的表达能够显著促进KLF4蛋白的表达;进一步研究表明抑制KLF4表达可逆转miR-375抑制物对PCa细胞的迁移侵袭的抑制作用.结论 miR-375抑制KLF4的表达促进PCa的迁移和侵袭,发挥癌基因的作用;其可以作为PCa的治疗靶点,为PCa的治疗提供新的方向.     

抑癌基因KLF6在肿瘤中的研究进展

肿瘤的发生、发展是多因素参与的多步骤多阶段过程,随着科学技术的不断发展,人们对肿瘤的认识不断加深。KLF6是近年来新发现的抑癌基因,其突变、缺失和表达减少等可见于多种肿瘤,与肿瘤的发生、发展密切相关,本文就KLF6及其在肿瘤中的研究进展进行综述。     

KLF6mRNA Expression in Primary Hepatocellular Carcinoma

Hepatocellularcarcinoma(HCC)isoneofthethreeleadingcausesofcancerdeathsworldwide.Itsprogressionisbelievedtoresultfromtheaccumulationofgeneticalterationsatnumerouslocicontrollinggrowthandproliferation.Asamodelforbothmultistepandmultipathwaycarcinogenesis,he…     

Clusterin在前列腺癌LNCaP细胞中的抗凋亡作用

目的:探讨Clusterin及其不同功能区域在前列腺癌细胞中的抗凋亡作用.方法:以pIRES2-EGFP质粒为载体,构建含有全长及缺失前导序列(1eader sequence)的Clusterin重组质粒,分别命名为pIRES2-EGFP/cluac、pIRES2-EGFP/clubc.重组质粒转染前列腺癌细胞LNCaP后,以Western blot检测LNCaP细胞及其培养上清液中Clusterin的表达,免疫细胞化学法检测不同功能区域Clusterin在细胞中的分布情况.应用Na2Se03诱导LNCaP细胞凋亡,用流式细胞术(FCM)及荧光显微镜检测Clusterin的抗凋亡作用.结果:在转染pIRES2-EGFP/cluac的LNCaP细胞培养上清及细胞裂解液中均检测到Clusterin的表达,转染pIRES2-EGFP/clubc的LNCaP细胞,仅细胞裂解液中有Clusterin的表达,而培养上清液中未检测到.pIRES2-EGFP/cluac转染细胞中Clusterin在胞浆中呈聚集状态,而pIRES2-EGFP/clubc转染细胞中Clusterin呈弥散分布.FCM及荧光显微镜检测证实,cluac转染对Na2SeO3诱导的LNCaP细胞凋亡有明显的抑制作用.结论:Clusterin有明显的抗前列腺癌细胞凋亡作用,Clusterin前导序列是其发挥抗凋亡作用的必需功能区域.     

激素递减法成功建立雄激素非依赖性LNCaP细胞亚系

目的:利用激素递减法对LNCaP细胞进行去雄环境培养,建立雄激素非依赖的LNCaP细胞(LNCaP-AI)亚系并予以鉴定.方法:利用活性炭处理的血清培养模拟去雄细胞环境,逐步递减培养基中激素10 d,后完全在非雄培养,共连续培养3个月,直到LNCaP细胞重新进入快速生长期,利用CCK-8法、放免法、RT-PCR法分别测定细胞生长曲线、PSA及雄激素(AR)表达情况.结果:LNCaP细胞在激素递减后,生长缓慢,呈神经内分泌样改变和成簇生长,经过共3个月的连续非雄培养,细胞重新恢复以前的形态及生长.CCK-8测定提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中生长,放免法提示LNCaP-AI细胞能够在去雄环境中恢复分泌PSA功能,RT-PCR方法提示LNCaP-AI细胞显著高表达AR.结论:激素递减方法可以3个月左右有效地建立雄激素非依赖的LNCaP细胞亚系.     

抑癌基因KLF6在肿瘤中作用机制的研究进展

Kruppel样因子6（Kruppellike factor6,KLF6）,是一种在哺乳动物组织中普遍表达的核转录调控因子,参与生长发育、细胞分化、生长信号的转导、细胞增殖、凋亡和血管形成等过程。研究表明,KLF6作为肿瘤抑制基因,在前列腺癌、肝癌、结直肠癌等多种肿瘤中失活、突变或表达下降,在肿瘤的发生发展中起重要作用。文章从KLF6的结构功能、在肿瘤发生发展中的作用以及肿瘤中的失活机制三方面进行综述。     

裸鼠皮下前列腺癌模型的建立研究

目的:建立裸鼠皮下LNCaP前列腺癌模型,为前列腺癌动物实验研究提供工具.方法:以每只1×106 LNCaP细胞数与基底膜基质混合注射入5只BALB/c裸鼠前肢腋窝皮下,于第2周至第12周分别检测裸鼠血浆tPSA含量,12 w后处死裸鼠,取皮下肿瘤及相关器官做病理检查,监测肿瘤生长及转移情况.结果:80%(4/5)裸鼠于第8周后在前肢腋窝皮下长出肿瘤,肿瘤包膜完整,病理切片可见典型肿瘤细胞,但5只裸鼠均未发现肿瘤转移;5只裸鼠均可测得血浆tPSA,且血浆tPSA含量随肿瘤生长而升高,其中未长出实体瘤的裸鼠血浆tPSA含量亦随时间推移而升高.结论:成功地建立了裸鼠皮下LNCaP前列腺癌模型.该肿瘤模型能分泌PSA和表达DD3mRNA,能更有效地模拟人前列腺癌的生物学特性.     

雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI的建立

目的:建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI.方法:长期在去雄激素的血清环境下培养雄激素依赖性LNCaP细胞,培养出能够适直无雄激素环境的LNCaP-AI细胞亚系.MTT、RT-PCR、免疫荧光方法观察LNCaP-AI细胞在无雄激素环境下的增殖能力和表达及分泌前列腺特异性抗原(PSA)的水平.结果:LNCaP前列腺癌细胞在无雄激素中培养3个月后逐渐适应了无雄激素的环境,成为雄激素非依赖的LNCaP-AI细胞亚系.LNCaP-AI细胞在无雄激素的环境下迅速增殖,能够分泌PSA,但其PSA mRNA的表达水平是正常生长LNCaP细胞的44%.结论:成功构建雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI,可以模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程.     

Inhibitory Effect of Matrine on the Expression of PSA and AR in Prostate Cancer Cell line LNCaP

In order to investigate the inhibitory effect of matrine on the expression of prostate specific antigen （PSA） and androgen receptor （AR） in prostate cancer cell line LNCaP in vitro, LNCaP cells were treated with matrine at different concentrations （0.5, 1.0, 1.5, 2.0 g/L） for 12-36 h. The growth activities of cancer cells were determined by MTT colorimetric assay. The AR level was measured by Western blotting. The expression of PSA was detected by using AXSYM system-chemical luciferase methods. The results showed that matrine could effectively inhibit the growth of androgen-dependent prostate cancer cell line LNCaP in vitro in a time-and dose-dependent manner （P〈0.05）. It could obviously decrease the level of AR （P〈0.01） and inhibit the expression of PSA in a dose-dependent manner （P〈0.05） in LNCaP cells. It was concluded that matrine could significantly suppress the growth of LNCaP cells and inhibit the expression of PSA and AR of prostate cancer cells.     

前列腺癌细胞激素非依赖性转化过程中microRNA的差异化表达

目的 对比观察雄激素依赖前列腺癌细胞(LNCaP)与雄激素非依赖前列腺癌细胞(LNCaP-AI)中microRNA的表达差异,探讨前列腺癌激素依赖向非依赖转化的转录后调控机制.方法 利用Agilent基因芯片检测LNCaP及LNCaPAI细胞microRNA的表达,用RT-PCR方法对其中6个microRNA进行验证,并对差异表达的microRNA所调控靶基因功能进行生物信息学分析.结果 基因芯片检测发现:与LNCaP相比,LNCaP-AI细胞有27个microRNA表达降低,11个microRNA表达升高.对其中6个microRNA进行RT-PCR验证,结果与基因芯片结果一致.通过检索http://www.mirbase.org/针对microRNA调控的靶基因,并参考已知的与雄激素非依赖相关基因的功能,发现LNCaP细胞转化为激素非依赖的LNCaP-AI细胞过程中,差异表达的microRNA主要调控表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Bcl-2及雄激素相关代谢酶.结论 前列腺癌激素非依赖转化过程中存在microRNA的差异表达,可能涉及雄激素受体(AR)旁路信号通路、金属酶、抗凋亡基因及雄激素相关代谢酶基因等.     

RNAi沉默PSA基因对人前列腺癌细胞系LNCaP生长的影响

目的研究运用RNA干扰技术沉默PSA基因后对人前列腺癌细胞系LNCaP细胞产生的影响。方法构建针对PSA基因的小分子干扰RNA(PSA-siRNA),将前列腺癌LNCaP系进行分组,设PSA-siRNA转染组、阴性对照组、转染液组(只由转染试剂进行转染实验)和对照组(不添加任何转染试剂)进行实验。应用蛋白印迹法检测PSA的变化,并通过MTT法和流式细胞技术检测LNCaP细胞的调亡和细胞增殖方面的变化。结果蛋白印迹法检测结果显示,与阴性对照组、转染液和对照组比较,应用PSA-siRNA处理48h后的LNCaP细胞株,PSA的表达明显降低,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法和流式细胞仪检测示,转染组的细胞生长抑制率为27.5%,且观察到更强的细胞调亡(19.3%)。结论运用RNA干扰技术沉默PSA基因可以有效抑制LNCaP细胞中PSA基因的表达,进而抑制LNCaP细胞的生长与增殖,并可有效诱导细胞调亡。     

青蒿琥酯对人源肝星状细胞LX-2增殖、胶原产生以及KLF6表达的影响

目的：探讨青蒿琥酯（Art）对人源肝星状细胞（HSCs）LX-2增殖的影响以及其抗肝纤维化的作用机制。方法：将肝星状细胞LX-2分为对照组和实验组,对照组为细胞培养液,实验组为不同浓度的青蒿琥酯。应用MTT法检测青蒿琥酯对细胞增殖的影响,比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）活性,酶消化法测定羟脯氨酸（Hyp）含量,Westeinblotting法测定青蒿琥酯对HSCs内KLF-6蛋白表达的影响。结果：与对照组相比,青蒿琥酯能抑制肝星状细胞LX-2的增殖（P〈0．01）,且呈剂量-效应和时间-效应关系;青蒿琥酯各浓度组LDH活性与对照组比较,无显著性差异（P〉0．05）;青蒿琥酯能降低肝星状细胞LX-2中Hyp含量（P〈0．01）,且呈剂量-效应关系,并能降低KLF6蛋白的表达（P〈0．01）。结论：青蒿琥酯对人源肝星状细胞LX-2有明显的抑制作用,其作用机制是降低胶原的生成以及KLF6蛋白的表达减少,进而抑制肝纤维化的发生。     

KLF6蛋白在胃炎、上皮内瘤变和胃癌中的表达及意义

目的：探讨 KLF6基因在胃癌发生、发展中的作用和意义。方法采用免疫组化技术分别检测36例慢性萎缩性胃炎、高级别上皮内瘤变和胃癌组织中 KLF6蛋白的表达,分析 KLF6与其临床病理参数之间的关系。结果 KLF6蛋白在胃癌组和上皮内瘤变组中的表达低于胃炎组,胃癌组中表达低于上皮内瘤变组（P 〈0.05）;KLF6蛋白的阳性表达率在胃癌的不同分化程度之间有差异;在胃癌的不同 TNM 分期之间也有差异（P 〈0.05）,并且 TNM 分期越高,阳性表达率越低;尚不能认为与淋巴结转移、肿瘤部位、胃癌侵及层次、肿瘤大小有关（ P 〉0.05）。结论 KLF6基因的异常表达参与了胃癌的发生、发展过程,对胃癌的诊断和预后具有一定的参考价值。     

microRNA-148a对前列腺癌细胞系LNCaP神经内分泌分化的影响

目的探讨microRNA(miRNA)-148a对前列腺癌细胞系LNCaP神经内分泌分化的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)验证miRNA-148a在雄激素依赖性与雄激素非依赖性前列腺癌细胞系中的差异表达。采用miRNA-148a及其抑制物(anti-miRNA-148a)改变LNCaP细胞中miRNA-148a的表达量,观察LNCaP细胞神经内分泌分化的差异程度,并检测神经内分泌分化标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)的差异表达。结果 LNCaP-AI细胞中的miRNA-148a相对表达量显著低于LNCaP细胞(P<0.05)。下调miRNA-148a在LNCaP细胞中的表达量,可明显促进LNCaP细胞神经内分泌分化。结论 miRNA-148a可以抑制LNCaP细胞的神经内分泌分化,可能成为前列腺癌生物治疗的新靶点。