促卵泡激素抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡

目的 探讨促卵泡激素(FSH)对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的影响及其机制。方法 应用DNA Fragmentation梯带电泳分析,TUNEL荧光原位凋亡检测法测定对FSH敏感的卵巢癌细胞系OVCAR3(OVCAR3-FSHR)细胞凋亡状态,应用Caspase-3活性分析法检测Caspase-3活性,RT-PCR检测凋亡相关基因survivin mRNA表达,Western blot检测其Survivin及bcl-2蛋白表达。结果 不论是DNA梯带电泳还是TUNEL荧光原位凋亡检测都表明促卵泡激素能抑制顺铂诱导的OVCAR3-FSHR细胞的凋亡。Caspase-3活性分析表明促卵泡激素能降低顾铂引起的Caspase-3活性增加。半定量RT-PCR结果表明FSH能增加survivin mRNA表达,Western blot结果表明FSH能增加Survivin蛋白表达而对bcl-2表达无影响。结论 促卵泡激素能够抑制顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡,其作用机剖可能与促进Survivin表达及降低Caspase-3活性有关。     

Survivin反义核酸与顺铂联合作用诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨特异性封闭Survivin的表达与顺铂联合作用对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用,以期为卵巢癌的治疗提供实验依据.方法将已成功构建的Survivin反义核酸真核表达载体的重组体导入人卵巢癌细胞株中,用G418筛选得到表达反义Survivin的细胞,RT-PCR技术检测转染细胞Survivin表达的变化;采用Hoechest核染色分析与顺铂联合作用时人卵巢癌细胞的凋亡情况.结果构建的Survivin反义RNA真核表达载体能有效的抑制卵巢癌细胞中Survivin基因的表达;顺铂诱导转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞的凋亡作用显著强于未转染Survivin反义核酸的卵巢癌细胞株.结论Survivin反义核酸可明显增强顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡,为其联合应用卵巢癌治疗研究提供了实验依据.     

紫衫醇与顺铂诱导卵巢癌SKOV_3细胞凋亡的研究

目的 :研究两种不同的抗癌药物诱导细胞凋亡的规律 ,为卵巢癌的化疗提供理论依据。方法 :紫衫醇与顺铂分别作用于体外培养的卵巢癌SKOV3 细胞系 ,通过组织细胞化学染色、荧光染色、电子显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞术等方法进行检测和观察。结果 :经两种抗癌药物处理的卵巢癌SKOV3 细胞出现典型的细胞凋亡特征 ,在顺铂处理 0～ 36小时内 ,细胞凋亡呈均一的持续性增强 ,在 5～ 2 5nmol ml剂量范围内呈依赖性增强 ,凋亡率最高达 72 %。紫衫醇诱导细胞凋亡亦具有时间和剂量依赖性 ,2 5nmol ml浓度处理 12小时 ,凋亡率最高达 5 5 % ;但时间过长 (>12小时 )或浓度过大 (>5 0nmol ml) ,凋亡率下降。结论 :紫衫醇与顺铂能有效地诱导肿瘤细胞凋亡 ,诱导细胞凋亡是化疗药物治疗癌症的重要机制之一     

紫杉醇与顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能的研究

目的探讨紫杉醇与顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能的研究。方法联合应用巨噬细胞集落刺激因子及白介素24刺激人外周血单核细胞诱导分化为树突状细胞（DC）,然后将树突状细胞和经紫杉醇联合顺铂在体外诱导发生凋亡的人卵巢癌细胞株共同培养,并共培养DC组为治疗组,生理盐水组和单独DC组作对照,分别注射于人卵巢癌移植瘤裸鼠尾部,2周后剥取瘤组织,计算抑瘤率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察裸鼠人卵巢癌移植瘤的发生率及治疗效果。结果紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞对DC提呈功能显著增强,其诱导的CTL对卵巢癌细胞具有显著的杀伤作用。DC激活的CTL具有抑制移植瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡的作用（P〈0．05）。结论紫杉醇、顺铂诱导的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能具有较强的免疫原性,可以在免疫治疗卵巢癌中发挥重要作用。     

维生素C对顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡的影响

目的探讨维生素C是否能影响顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,以及它对细胞内端粒酶活性的影响。方法MTT法和流式细胞术检测细胞生长和凋亡的情况,TRAP-ELISA法测定端粒酶活性变化。结果DDP联合AA作用组比单独用DDP组细胞凋亡率明显增高,端粒酶活性明显降低。单独10μmol/LDDP处理组细胞生长未受到明显抑制,但联合AA后其生长受到抑制。结论AA能增强DDP诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,并增强DDP对细胞内端粒酶活性的抑制作用。     

8-硝基白杨素增强顺铂诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡作用及其机制

目的探讨8-硝基白杨素(8-NOCHR)体外增强顺铂(DDP)诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡的效应及其机制。方法采用MTT法检测8-NOCHR增强DDP对人卵巢癌HO-8910细胞增殖的影响,Western blot检测不同浓度8-NOCHR及DDP作用后HO-8910细胞P38MAPK和P-P38MAPK蛋白水平的表达情况;分光光度法分别检测8-NOCHR及DDP作用后HO-8910细胞GSH含量的变化以及Caspase-3活性的变化。结果 8-NOCHR能增强DDP对HO-8910细胞的诱导凋亡效果。各用药组P38MAPK、P-P38MAPK的表达均表现不同程度地增强(P<0.05),Caspase-3的活性表现不同程度增高(P<0.01),GSH含量不同程度降低(P<0.01)。结论 8-NOCHR能促进顺铂诱导HO-8910细胞的凋亡;8-NOCHR的化疗增敏作用与细胞内GSH的耗竭,Caspase-3活性增加,促进P38MAPK、P-P38MAPK蛋白表达有关。     

丹皮酚协同顺铂对人卵巢癌细胞A2780s的增殖抑制及促凋亡作用

目的:探讨丹皮酚(Pae)单药及联合顺铂(CDDP)对人卵巢癌细胞A2780s的增殖抑制,凋亡诱导作用及对细胞周期分布的影响.方法:以不同浓度的Pae、CDDP和两药联合作用于人卵巢癌细胞A2780s,采用MTT法测定药物对体外培养的人卵巢癌细胞A2780s增殖的抑制作用,应用两药相互作用指数(CDI)进行联合用药分析...     

地塞米松对顺铂诱导人肺腺癌细胞株凋亡的抑制作用及其机制

目的 研究地塞米松（Dex）对顺铂（CDDP）引起的人肺腺癌细胞株SPCA/Ⅰ凋亡的抑制作用及其分子机制探讨。方法 体外培养SPCA/Ⅰ细胞,分别加入不同浓度Dex培养24 h后,加入不同浓度CDDP继续培养48 h,采用二甲基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;用1 μmol/L Dex刺激SPCA/I细胞,分别于1 h、2 h、4 h、6 h、12 h采用RT-PCR技术,检测SPCA/I细胞中糖皮质激素诱导的蛋白激酶1基因（SGK-1）和丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1（MKP-1）基因的表达;用生物素标记的抗糖皮质激素受体（GR）抗体对SPCA/I细胞中GR行细胞免疫组化检测。结果 SPCA/I细胞经Dex刺激后,对CDDP所致的抑制细胞生长和凋亡呈抵抗作用（P<0.05）。 Dex刺激后的SPCA/I细胞表达SGK-1上调,在12 h时表达达高峰,未检测到MKP-1表达;细胞免疫组化显示SPCA/Ⅰ细胞经Dex刺激后GR表达上调,细胞内GR数目高于对照组（P<0.05）。结论 体外实验结果表明,Dex对CDDP引起的SPCA/I细胞凋亡有抑制作用。其分子机理可能是通过上调细胞内GR数目,增强通路下游SGK1的表达,从而产生抗凋亡作用。     

流式细胞术分析顺铂对人卵巢癌细胞系HO─8910细胞凋亡的诱导作用

流式细胞术分析顺铂对人卵巢癌细胞系ＨＯ┐８９１０细胞凋亡的诱导作用马向东陈必良叶永清郑维国王德堂（第四军医大学西京医院妇产科西安７１００３３）关键词细胞凋亡卵巢肿瘤流式细胞术顺铂中图号Ｒ７３７．３１细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种生理性细胞程序化...     

桥粒胶蛋白-3介导促卵泡激素通过EGFR/Akt信号通路对卵巢癌细胞增殖活性的调控

目的 通过检测桥粒胶蛋白-3（Dsc3）在卵巢癌中的表达以及促卵泡激素（FSH）对Dsc3、EGFR/Akt信号通路下游分子以及细胞增殖的影响,探讨Dsc3是否介导FSH通过EGFR/Akt信号通路对卵巢癌细胞增殖活性的调控,进而促进肿瘤的发生。方法 免疫组化检测Dsc3在卵巢肿瘤组织中的表达;运用蛋白质印迹分析方法检测Dsc3在6种卵巢肿瘤细胞及卵巢永生化上皮细胞中的表达情况和FSH对Dsc3、EGFR的调控,以及干扰Dsc3、EGFR和应用Akt通路阻断剂对信号通路分子的调控;运用MTT方法检测干扰Dsc3、EGFR以及使用Akt阻断剂后对卵巢癌细胞增殖活性的影响。结果 （1）Dsc3在卵巢癌及交界性卵巢肿瘤中的阳性表达率均高于良性卵巢肿瘤,差异均有统计学意义（P<0.05）,Dsc3在卵巢癌中的阳性表达率与交界性卵巢肿瘤的差异无统计学意义（P>0.05）;Dsc3在某些卵巢癌细胞如Hey、HO8910中及交界性卵巢肿瘤细胞MCV152中的表达高于卵巢永生化上皮细胞Moody;（2）FSH呈剂量-时间依赖效应上调Dsc3、EGFR的表达;（3）干扰Dsc3后,信号通路分子EGFR、pAkt受到抑制,Akt无明显改变;干扰EGFR后,信号通路分子Dsc3、pAkt受到抑制,Akt无明显改变;应用Akt通路阻断剂后,Dsc3、pAkt受到抑制,Akt无明显改变;以上三种处理均可抑制FSH对Akt信号通路的调控;（4）干扰Dsc3、EGFR,及应用Akt通路阻断剂均可抑制FSH介导的卵巢癌细胞增殖活性（P<0.05）。结论 Dsc3介导FSH通过EGFR/Akt通路调控的卵巢癌细胞增殖活性,进而促进卵巢癌的发展。     

卵泡刺激素(FSH)对卵巢癌HEY细胞系Notch通路及转录因子Snail表达的影响

 目的  研究卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)体外对卵巢癌HEY细胞系Notch通路上Notch1胞内段蛋白(N1ICD)、转录因子CSL与靶基因表达以及对转录因子Snail家族的调节作用,以探讨FSH促进卵巢癌侵袭的可能机制。 方法  体外培养卵巢癌HEY细胞系,设PBS对照组和FSH 40mU/mL实验组,改良的Boyden小室检测两组细胞侵袭力,Western blot检测两组N1ICD、CSL、Snail、Slug蛋白表达,RT PCR检测HEY 1、HEY 2、HES 1 mRNA表达。结果  FSH 40 mIU/mL可显著增强卵巢癌HEY细胞系的侵袭能力(P=0.001)。相比于对照组,实验组FSH 40 mIU/mL作用24 h后N1ICD和CSL蛋白表达显著上升(P=0.001,P=0.028)。FSH 40 mIU/mL作用后18~24 h HEY 1 mRNA的表达增加,作用24 h时HEY 2 mRNA 的表达增加。而FSH作用后HES 1 mRNA水平无明显变化。FSH 40 mIU/mL作用24 h后,相比于对照组 Snail 蛋白表达显著上升(P=0.009),而Slug蛋白的表达无显著变化(P>0.05)。结论  FSH可能激活Notch1信号通路和Snail转录因子,进而促进卵巢癌细胞的侵袭能力。     

抑制ClC-3表达对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的促进作用

目的：探讨抑制氯离子通道-3(ClC-3)基因表达对顺铂(DDP)诱导的人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的促进作用,为卵巢癌的治疗提供实验依据。方法：转染pSH1-siRNA-ClC-3 重组质粒至人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,Western blotting方法检测转染重组质粒对ClC-3蛋白表达的影响;MTT法检测细胞增殖率;Western blotting方法检测凋亡相关蛋白细胞色素C（Cyt-c）及Caspase-3活化片段蛋白表达。结果：与SKOV3细胞比较,SKOV3/ DDP细胞中ClC-3蛋白表达水平增加( P<0.05);转染pSH1-siRNA-ClC-3 重组质粒后,SKOV3/DDP细胞ClC蛋白表达水平明显降低;ClC-3-siRNA联合DDP作用后,SKOV3/DDP细胞增殖率下降( P<0.05),Cyt-c和Caspase-3活化片段蛋白表达水平增加( P<0.05) 。结论：pSH1-siRNA-ClC-3可有效抑制SKOV3/DDP细胞ClC-3蛋白的表达,并促进DDP诱导SKOV3/DDP细胞凋亡。     

289例妇女月经模式与血清基础促卵泡刺激素水平调查

目的通过对妇女月经模式及血清基础卵泡刺激素变化的调查,寻找有助于预测卵巢功能变化的简便临床手段。方法选择35～49岁未绝经女性289例,以每5岁分组,对比各组月经周期、经期及经量变化,并检测血清基础卵泡刺激素（basal follicle stimulatinghormone,bFSH）,进行相关性分析。结果随年龄增加月经规律性下降;35～40岁组稳定性高,40-44岁组周期明显缩短,45—49岁组周期延长、长短不一及跃过者比例均最高且经期变化最大。经量变化各组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。月经模式中现状规律与否、周期、经期与年龄和bFSH之间相关性具有统计学意义（P〈0．05）。结论45～49岁组月经稳定性下降,主要表现周期先缩短,随后逐渐延长。故临床上可以通过月经模式中月经规律与否结合月经周期及经期变化情况初步判断卵巢功能的降低;bFSH有助于进一步明确这一判断。     

槲皮素联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槲皮素单独及联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取对数生长期的卵巢癌SKOV-3细胞作为研究对象,实验分6组:阴性对照组(生理盐水),槲皮素低(25μmol/L)、中(50μmol/L)、高剂量组(100μmol/L),顺铂组(10μmol/L),联合组(槲皮素50μmol/L+顺铂10μmol/L)。采用MTT法检测不同浓度槲皮素单独及联合顺铂对SKOV-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测槲皮素作用于SKOV-3细胞Bcl-2及MtP53蛋白表达水平的变化。结果与阴性对照组相比,槲皮素可明显抑制SKOV-3细胞的增殖,并具有显著的时间和剂量依赖关系,槲皮素高剂量组在72 h的抑制率可达63.49%(P<0.05);流式细胞仪分析发现槲皮素可使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P<0.05),提示其将细胞周期阻滞于G1期;槲皮素还可明显诱导SKOV-3细胞凋亡,高剂量组的凋亡率可达29.51%;槲皮素作用后,Bcl-2及MtP53表达则明显降低(P<0.05)。结论槲皮素在体外可抑制SKOV-3细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡相关蛋白MtP53和Bcl-2的蛋白表达水平有关;槲皮素与顺铂联用有协同作用。     

垂体卵泡刺激素腺瘤

垂体卵泡刺激素腺瘤是一种特殊类型的内分泌肿瘤,该病发病率低,患者临床表现多样化,故容易误诊和漏诊。近年来国内外学者对其病因和发病机制进行了深入研究,了解垂体卵泡刺激素腺瘤的临床特点及鉴别诊断对此类患者的诊治具有重要意义。     

西北地区汉族妇女卵巢反应性与卵泡刺激素受体基因多态性的关系

目的 探讨西北地区汉族妇女控制性超排卵(COH)中卵巢反应性与卵泡刺激素受体(FSHR)基因Thr307Ala(rs6165)和Asn680Ser (rs6166)位点多态性的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性酶切技术对卵巢高反应患者45例、低反应患者27例和正常反应患者69例的FSHR基因第10号外显子Thr 307Ala位点和Asn680Ser位点进行分型,并通过Fisher's精确检验方法分析基因型和等位基因分布频率.结果 FSHR基因Thr307Ala基因型、等位基因分布频率在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).Asn680Ser位点基因型、等位基因分布频率在卵巢高反应组与正常反应组间差异无统计学意义(P＞ 0.05);Ser/Ser基因型频率在卵巢低反应组中占40.7％,与正常反应组比较差异有统计学意义(P＜0.01);携带G等位基因者发生卵巢低反应的风险增加,OR值为2.37 (95％CI=1.25,4.52).结论 FSHRAsn 680Ser基因多态性与西北地区汉族妇女COH中的卵巢低反应相关;Asn680Ser位点等位基因为G时,增加卵巢低反应的风险.     

促卵泡激素受体基因Asn680Ser位点基因多态性与多囊卵巢综合征易感性的meta分析

目的采用meta分析的方法评价促卵泡激素受体（FSHR）基因单核苷酸多态性（SNP）位点Asn680Ser多态性与多囊卵巢综合征（PCOS）易感性的关系。方法检索PubMed、Ovid、EMBASE、中国生物医学文献数据库（CBM）与CNKI中关于FSHR基因Asn680Ser位点多态性与PCOS易感性的病例一对照研究,检索时限均从建库起至2013年1月。由2名评价者按照纳入和排除标准独立选择文献,提取资料和评价质量后,采用Stata11．0软件进行meta分析,并用Begg漏斗图评估文献的发表偏移。结果共纳入11篇文献,累计病例1344例,对照3885例。meta分析结果显示,无论在显性、隐性以及加性遗传模式下,Asn680Ser与PCOS相关性的合并OR（95％c,）分别为1．19（1．02～1．39）、1．21（1．00～1．45）和1．27（1．02～1．58）,差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论FSHR基因Asn680Ser位点多态性与PCOS的易感性有关,在显性、隐性及加性遗传模式中,FSHR基因Asn680Ser位点的Ser等位基因均为PCOS的危险因素。     

单细胞凝胶电泳评价顺铂致人卵巢癌细胞DNA损伤修复的实验研究

目的：采用单细胞凝胶电泳(彗星实验)研究顺铂致人类卵巢癌H08910细胞DNA的损伤及修复，为彗星实验应用于临床检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性奠定基础。方法细胞采用0．02 EC50、0．03 ECS0及O．05 EC50三种浓度顺铂处理1h，更换培养基后，继续培养3h、24h和48h进行彗星电泳实验。结果：顺铂处理后造成H08910细胞产生明显的DNA损伤，呈现不同彗尾长度的彗星。顺铂浓度增加，平均彗尾长度增加；一定顺铂浓度下，彗尾长度随培养时间的延长逐渐减小，较低浓度(0．02 EC50)处理的细胞在培养48h后彗尾长度可恢复至接近对照组的水平；在顺铂处理0．02 EC50浓度下随培养时间延长，彗星出现比率逐渐下降，而0．05 EC50浓度处理的细胞彗星比率则呈上升趋势。结论彗星实验检测DNA损伤及修复的敏感度较高，H08910细胞可修复一定浓度的顺铂引起的DNA损伤。