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相似文献
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1.
目的:检测T淋巴瘤TCRβ链独特型DNA疫苗的基因表达。方法:大剂量提取质粒,将BALB/c鼠随机分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1/TCRVβ8组、pcDNA3.1/TCRβ8+IL-2组、pcDNA3.1/TCRVβ8+CpG+脂质体组和全硫代CpG组共5组(每组6只),双侧股四头肌内注射疫苗免疫,于第0、2、4周各免疫1次,共3次。接种疫苗后5d,用RT-PCR法检测重组质粒mRNA表达。接种疫苗后7d应用免疫组化检测重组质粒蛋白表达。结果:pcDNA3.1/TCRVβ8组、pcDNA3.1/TCRVβ8+IL-2组、pcDNA3.1/TCRβ8+CpG+脂质体组小鼠骨骼肌中均显示mRNA和蛋白表达,而pcDNA3.1组和全硫代CpG组未见mRNA和蛋白表达。结论:T淋巴瘤TCRβ链独特型DNA疫苗在小鼠骨骼肌中有效地表达了基因产物。  相似文献   

2.
目的:检测T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗的基因表达.方法:大剂量提取质粒,将BALB/c鼠随机分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1/TCR Vβ8组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+ IL-2组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+CpG+脂质体组和全硫代CpG组共5组(每组6只),双侧股四头肌内注射疫苗免疫,于第0、2、4周各免疫1次,共3次.接种疫苗后5 d,用RT-PCR法检测重组质粒mRNA表达.接种疫苗后7 d应用免疫组化检测重组质粒蛋白表达.结果:pcDNA3.1/TCR Vβ8组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+ IL-2组、pcDNA3.1/TCR Vβ8+CpG+脂质体组小鼠骨骼肌中均显示mRNA和蛋白表达,而pcDNA3.1组和全硫代CpG组未见mRNA和蛋白表达.结论:T淋巴瘤TCR β链独特型DNA疫苗在小鼠骨骼肌中有效地表达了基因产物.  相似文献   

3.
目的:观察白细胞介素 2 (IL- 2)与TCRγ独特型DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗肿瘤独特型免疫反应。方法: 24只 6~8周的健康纯系雄性BALB/c小鼠随机均分为 3组,在小鼠双侧股四头肌肌内注射 2. 5g/L盐酸布比卡因,每侧 50μl, 1次 /d, 5d后分组免疫。各小鼠分别于第 1周、2周、4周各免疫 1次,共 3次。①A组: 每次于股四头肌肌内注射pcDNA3. 1 100μg; ②B组:每次于股四头肌肌内注射pcDNA3. 1 TCRγ100μg;②C组:每次于股四头肌肌内注射pcDNA3. 1 -TCRγ100μg及IL 2 5μg。于末次免疫接种后第 5d将每组小鼠随机选 2只处死,分离出胫前肌,RT PCR法检测重组质粒在小鼠骨骼肌中的mRNA表达;间接免疫荧光法检测小鼠血清中抗体生成情况。结果:在pcDNA3. 1 TCRγ组及pcDNA3. 1- TCRγ+IL- 2组小鼠中用RT PCR法均检测到了重组质粒在肌肉中的mRNA表达。pcDNA3. 1- TCRγ组及pcDNA3. 1 -TCRγ+IL 2组小鼠血清中均产生了特异性抗独特型抗体。在第 6周时,pcDNA3. 1 -TCRγ组小鼠抗体滴度最高达 1160;pcDNA3. 1 TCRγ+IL 2组小鼠抗体的滴度最高达 1640, 2组差异有统计学意义 (P< 0. 01 )。结论:TCRγ表达载体pcDNA3. 1 -TCRγ可以诱导小鼠产生特异性抗淋巴瘤细胞独特型抗体;应用IL -2免疫佐剂可使TCRγ独特型DNA疫苗  相似文献   

4.
目的:构建TCRVβ8+IL-2/pcDNA3.1亚克隆重组质粒。方法:先将TCRVβ8克隆入克隆载体pUC19,分别酶切IL-2pUC19和TCRVβ/pUC19,将IL-2连接到TCRVβ8/pUC19重组质粒上,然后将TCRVβ8+IL-2基因从TCRVβ8+IL-2/pUC19重组质上酶切下,克隆入pcDNA3.1表达载体上。结果和结论:经测序正实成功地构建了TCRVβ8+IL-2/pcDNA3.1亚克隆重组质粒。  相似文献   

5.
目的比较小鼠巨噬细胞源趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)和志贺毒素B亚单位(Shiga toxin B subunit,STxB)与柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3,CVB3)VP1融合DNA疫苗的免疫效果。方法将120只雄性BALB/c小鼠分为6组,每组20只,分别肌内注射pcDNA3、pcDNA3/MDC、pcDNA3/STxB、pcDNA3/VP1、pcDNA3/MDC-VP1和pcDNA3/STxB-VP1,每3周1次,共3次,每次免疫后20d取血清,用微量中和试验检测CVB3中和抗体,第3次免疫后3周,每组取3只小鼠,取脾脏制备脾细胞,用CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性,其余小鼠用10LD50的CVB3攻击,观察小鼠的生存情况。结果pcDNA3/VP1、pcDNA3/STxB-VP1和pcDNA3/MDC-VP1组均能诱导小鼠产生中和抗体;除pcDNA3/STxB-VP1组外,另两组抗体滴度随免疫次数增加而提高;第3次免疫后,pcDNA3/MDC-VP1组平均抗体滴度和脾淋巴细胞特异性CTL杀伤活性高于pcDNA3/VP1(P〈0.05)。病毒攻击后,pcDNA3/MDC-VP1组21d生存率高于其他各组(P〈0.05)。pcDNA3/STxB-VP1组抗体滴度和生存情况与pcDNA3/VP1组无明显差异。结论融合基因疫苗pcDNA3/MDC-VP1能诱导小鼠产生较强的体液和细胞免疫,提高了小鼠生存率,免疫效果优于pcDNA3/STxB-VP1。  相似文献   

6.
目的:构建重组质粒TCRVβ8/pcDNA3.1。方法:从人淋巴瘤Jurkat细胞中提取mRNA,经RT-PCR法获取TCRVβ基因;将表达质粒pcDNA3.1和TCRβ基因行BamHI和HindⅢ双酶切、低熔点胶纯化、连接酶切产物、转化DH5a感受态细菌、筛选菌落和测序鉴定。结果:电泳获得523bp的TCRVβ8预期条带,测序证实为正确的TCRVβ目的基因序列。结论:测是构建TCRVβ8/pcDNA3.1重组质粒的重要步骤。  相似文献   

7.
汉坦病毒H8205株G1-人源IL-2融合基因疫苗的免疫效应   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的探讨汉坦病毒H8205株G1-人源IL-2融合基因疫苗(pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1)的免疫效应。方法将pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1融合基因疫苗通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次;酶联免疫法(ELISA)检测抗汉坦病毒(HTNV)抗体;空斑减少中和试验检测免疫血清中和抗体效价;淋巴细胞增殖试验(MTT法)检测免疫小鼠的细胞免疫反应;动物保护试验以BALB/c小鼠为感染动物模型,在第3次免疫后2周,腹腔内注射100TCID50(半数感染量)HTNV,然后以免疫荧光法观察鼠肾切片,评价其保护力。结果pcDNA3.1/HisB—IL—2—G1融合基因疫苗免疫后可刺激机体产生特异性抗体和中和抗体,中和效价为1:20~1:80。MTT法结果表明,免疫小鼠的脾淋巴细胞有特异性增殖反应。动物试验表明pcDNA3.1/HisB—IL—2—G1融合基因疫苗能保护小鼠免受HTNV感染。结论pcDNA3.1/HisB—IL—2—G1融合基因疫苗可诱导特异性体液免疫应答和较强的细胞免疫应答。  相似文献   

8.
实验性自身免疫性心肌炎小鼠的免疫功能变化   总被引:1,自引:0,他引:1  
张军  张瑜  范荣  刘莉  沈茜 《重庆医学》2005,34(8):1164-1166
目的 观察肌凝蛋白诱导Balb/c小鼠发生自身免疫性心肌炎后小鼠免疫功能的变化。方法 以猪心肌中提取并纯化的肌凝蛋白免疫Balb/c小鼠,建立自身免疫性心肌炎模型。流式细胞仪检测小鼠外周血和脾淋巴细胞CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+、Th1、Th2及TCRVβ8.1&8.2和TCRVβ10的变化,酶联吸附试验观察外周血TGF-β1和抗肌凝蛋白抗体的变化。^3H—TdR检测小鼠脾脏单个核细胞对肌凝蛋白刺激的增殖反应。结果 940(15/16)小鼠在免疫后第18天出现不同程度的心肌炎病理改变,主要表现为心肌间质单个核细胞浸润;免疫鼠血浆肌钙蛋白Ⅰ水平升高,TGF-β1水平显著下降,并出现较高滴度的抗肌凝蛋白自身抗体。免疫小鼠外周血CD3^+CD4^+细胞较正常对照小鼠显著增高。外周血和脾脏Th1、Th1/Th2及TCRVβ8.1&.8.2阳性T淋巴细胞显著增加;小鼠脾脏单个核细胞对肌凝蛋白的增殖反应较对照组明显增加。结论猪心肌肌凝蛋白可以诱导Balb/c小鼠出现典型的自身免疫性心肌炎,是一种以Th1细胞介导为主的自身免疫反应。  相似文献   

9.
目的探讨白细胞介素 2 (interleukin 2 ,IL 2 )基因佐剂对柯萨奇病毒B3(CoxsackievirusB3,CVB3)基因疫苗的免疫增强作用。方法将 pcDNA3/IL 2 pcDNA3/VP1、pcDNA3/VP1、pcDNA3/IL 2、空白质粒 pcDNA3和生理盐水分别肌内注射免疫BALB/C小鼠 ,1次 /周 ,共注射 3次 ,每次注射后的第 6天断尾取血 ,用微量中和试验方法检测血清中和抗体 ;第 3次注射后的第 7天用 80 0TCID50 CVB3感染小鼠 ,观察各组小鼠的生存情况。结果pcDNA3/IL 2 pcDNA3/VP1和 pcDNA3/VP1组小鼠能产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加而提高 ,pcDNA3/IL 2 pcDNA3/VP1组抗体水平高于同期 pcDNA3/VP1组抗体水平 ,但各组小鼠的生存率无显著性差异(P >0 .0 5 )。结论IL 2基因佐剂对 pcDNA3/VP1诱导抗体产生有一定免疫增强作用。  相似文献   

10.
C3d对分泌型柯萨奇病毒B组3型VP1 DNA疫苗的免疫增强作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
Zhao N  Han XY  Wang XL  Li J  Li W  Xie LX  Li L  Wang YX 《中华医学杂志》2007,87(36):2561-2563
目的 构建分泌型柯萨奇病毒B组3型(CVB3)衣壳蛋白1(sVPl)与三拷贝补体3片段(C3d3)融合基因疫苗,并观察其免疫效果。方法 将C3d3 cDNA与带有白细胞介素2(IL-2)信号肽的CVB3VPl基因拼接,构建真核表达质粒pcDNA3/sVP1-C3d3。BALB/c小鼠随机分为3组,分别肌肉注射pcDNA3/sVP1-C3d3、pcDNA3/sVP1和pcDNA3质粒,于不同时间检测小鼠血清中和抗体滴度、特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性、血中病毒滴度,并观察疫苗的免疫保护作用。结果 小鼠的中和抗体滴度随免疫次数增加而提高,第3次免疫后pcDNA3/sVP1-C3d3组中和抗体滴度(33.6±1.7)和特异性CTL杀伤率(66.1%±2.9%)均明显高于pcDNA3/sVP1组(28.3±1.7,52.8%±3.3%,均P〈0.05);以致死量CVB3感染小鼠后,经融合基因免疫的小鼠血中病毒滴度显著降低,生存率达50%,而pcDNA3/sVP1组仅为25%,pcDNA3组无存活。结论 C3d可以显著增强sVPI基因免疫诱导的特异性免疫应答。  相似文献   

11.
目的:观察编码白细胞介素(IL)-12和IL-18的真核表达载体[pcDNA3.1/IL-12(以下简称IL-12质粒)和pcDNA3.1/IL-18(以下简称IL-18质粒)]对HBcAg DNA疫苗(pJW4303/HBc)诱导BalB/c(H-2^d)小鼠免疫应答的影响。方法:肌肉注射接种IL-12质粒、IL-18质粒和HBcAg DNA疫苗,ELISA法检测小鼠血清抗HBc IgG亚类(IgGl,IgG2a)水平。结果:免疫6周后,联合注射IL-12、IL-18和IL-12+IL-18组小鼠血清的抗HBc终点滴度均明显高于单纯注射HBcAg DNA疫苗组小鼠(P<0.05),抗HBc IgG亚类以IgG2a占优。结论:IL-12、IL-18以及IL-12+IL-18联合HBcAg DNA疫苗注射能够提高小鼠血清中抗HBc水平。  相似文献   

12.
目的构建柯萨奇病毒B3(CoxsackievirusB3,CVB3)VP1与白细胞介素 15 (interleukin 15 ,IL 15 )双表达基因疫苗 ,并观察其对小鼠的免疫效果。方法从CVB3VP1基因的重组质粒 pcDNA3/VP1上扩增出带有完整表达构件的VP1基因 ,克隆至IL 15基因重组质粒 pcDNA3/IL 15 ,构建成双表达重组质粒 pcDNA3/VP1 IL 15 ,转化DH5a大肠杆菌 ,大量扩增后 ,肌内注射Balb/c小鼠 ,1次 /周 ,共 3次 ,每次免疫后第 6天取血清 ,用微量中和试验方法检测血清中和抗体。第 3次免疫后的第 7天 ,用 80 0TCID5 0CVB3感染小鼠 ,观察各组小鼠的生存情况。结果构建的 pcDNA3/VP1 IL 15重组质粒目的基因与CVB3 VP1和IL 15的序列相同 ;免疫小鼠后 pcDNA3/VP1 IL 15重组质粒能诱导机体产生中和抗体 ,抗体滴度随免疫次数增加而提高 ;病毒攻击后 pcDNA3/VP1 IL 15和 pcDNA3/VP1 pcDNA3/IL 15组较其他组生存时间明显延长 (P <0 .0 5 )。结论本研究成功构建了 pcDNA3/VP1 IL 15真核双表达重组质粒 ;该质粒能诱导机体产生中和抗体 ,对CVB3毒株的攻击有一定程度的保护作用。  相似文献   

13.
汉坦病毒H8205株G2-人源IL-2融合基因免疫效果的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的对比研究两种融合基因pcDNA3.1/HisB-IL2-G2与pcDNA3.1/HisB-G2的免疫效果。方法大量制备重组质粒后免疫Balb/c小鼠,剂量为100μg/次。于0、4和8周,共免疫3次。免疫前和免疫后第2、6、10周采血,用间接免疫荧光法(IFA)与ELISA检测抗汉坦病毒(HTNV)抗体;用空斑减少中和试验(PRNT)检测免疫血清的中和效价;用淋巴细胞增殖试验检测免疫小鼠的细胞免疫反应;用免疫脾细胞转移保护实验检测疫苗的保护效应。结果两种融合基因均可刺激机体产生特异性的抗汉坦病毒76—118株的交叉抗体和中和抗体,且差异无显著性意义,而pcDNA3.1/HisB-IL2-G2诱导特异的细胞免疫明显高于pcDNA3.1/HisB-G2。结论pcDNA3.1/HisB-IL2-G2融合基因的免疫效果优于pcDNA3.1/HisB-G2,该研究结果为进一步研制有效的肾综合征出血热(HFRS)基因疫苗提供了重要实验依据。  相似文献   

14.
15.
目的 探讨白细胞介素-2(intefleukin-2,IL-2)基因佐剂对柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)基因疫苗的免疫增强作用。方法 从CVB3VP1基因的重组质粒peDNA3/VP1上扩增出带有完整表达构件的VP1基因,克隆至pcDNA3/IL-2,构建成CVB3VP1基因和IL-2基因双表达质粒pcDNA3/VP1-IL-2,转化DH5a大肠杆菌。将peDNA3/VP1-IL-2、peDNA3/IL-2 peDNA3/VP1、pcD.NA3/VP1、peDNA3/IL-2、空白质粒peDNA3和生理盐水分别肌肉注射BALB/C小鼠,每周注射1次,共注射3次,每次注射后的第6天,断尾取血,用微量中和试验方法检测血清中和抗体;第3次注射后的第7天,用800TCID50CVB3感染小鼠,观察各组小鼠的生存情况。结果pcDNA3/VP1-IL-2、pcDNA3/IL-2 pcDNA3/VP1和pcDNA3/VP1组小鼠能产生中和抗体,抗体滴度随免疫次数增加而提高,pcDNA3/VP1-IL-2和pcDNA3/IL-2 pcDNA3/VP1组抗体水平高于同期pcDNA3/VP1组抗体水平,但各组小鼠的生存率无明显差异。结论IL-2基因单独或与VP1基因共表达对pcDNA3/VP1诱导抗体产生均有一定免疫增强作用。  相似文献   

16.
Zhao XR  Li DJ  Yuan MM  Cai LR  Sun XX 《中华医学杂志》2003,83(21):1906-1909
目的 研究分子佐剂C3d能否增强人绒毛膜促性腺激素 (hCG) βDNA疫苗的免疫原性 ,并转变Th1/Th2型免疫应答模式。方法 抽提纯化pcDNA3、pcDNA3 hCGβ、pcDNA3 hCGβ C3d3、pCMV4 hCGβ C3d34种质粒。将 12只 6周龄BALB/c雌性小鼠分为 12组 ,A1~ 3组各 6只以pcDNA3免疫 ,作为空白对照组 ;B1~ 3组各 6只以pcDNA3hCGβ免疫 ,作为阴性对照组 ;C1~ 3组各 6只以pcDNA3 hCGβ C3d3免疫 ,作为实验 1组 ;D1~ 3组各 5只以pCMV4 hCGβ C3d3免疫 ,作为实验 2组。免疫前 1周 ,于小鼠左后腿肌肉注射 0 2 5 %普鲁卡因 0 1ml。 1周后 ,在相同部位分别肌注前述 4种质粒 ,剂量分别为 :5pmol(A1~D1组 )、10pmol(A2~D2组 )、2 0pmol(A3~D3组 )。 3周后 ,再次给予相同剂量质粒加强免疫。于第 2次免疫后 3周 ,处死小鼠。用ELISA法测定外周血抗hCGβ抗体效价和经hCG抗原体外刺激脾细胞培养上清中Th1型 (IL 2、INF γ、TNF α) /Th2型 (IL 4、IL 10 )细胞因子分泌水平。结果 C3d分子佐剂能明显提高抗hCGβ抗体滴度。当免疫剂量为 2 0pmol时 ,与B3组比较 ,C3组抗hCG抗体最大效价达到 1∶4 5 0 ,提高了 9倍。D3组抗hCG抗体最大效价达到 1∶12 15 0 ,提高了 2 4 3倍。D3组与C3组相比较 ,抗hCG抗体水平提高了 2 7倍。受  相似文献   

17.
目的 观察丙肝核酸疫苗的免疫效果。方法 用丙肝病毒C+E1区基因的真核表达重组质粒pSVL-HCV/C+E1免疫蛇毒预处理的BALB/C和C57BL小鼠,两周后采用ELISA法开始检测抗体滴度。结果 真核表达重组质粒pSVL-HCV/C+E1免疫能诱导习免疫应答,产生高水平的特异抗体。特别是C57BL小鼠抗体反应最好,初次免疫就能产生高水平的特异抗体,加强后能持续数周,最高滴度OD值达1.45。结  相似文献   

18.
目的分析EV71疫苗诱导BALB/c小鼠CD4+TCR Vβ基因家族克隆化改变,探讨EV71疫苗免疫机制。方法采用TCR克隆化检测试剂盒和基因扫描技术对EV71疫苗诱导的BALB/c小鼠CD4+TCRVβ基因家族克隆化进行分析,并结合ELISPOT方法、Luminex技术和体外微量中和试验研究EV71疫苗诱导的细胞免疫和体液免疫应答情况,探讨EV71疫苗免疫机制。结果通过对小鼠CD4+TCR Vβ1-20克隆化检测,发现免疫组的Vβ17基因家族出现单克隆或寡克隆改变,对照组Vβ17为多克隆化,未见克隆化改变。免疫组小鼠脾MNC(去除CD8+)IFN-γ和IL-6的分泌水平较对照组显著增高(P均<0.01),血清EV71中和抗体应答均为阳性。进一步测序发现,免疫组Vβ17的CDR3区氨基酸序列为TASQNTLY。结论成功筛选出EV71疫苗诱导BALB/c小鼠CD4+TCR特异性改变的Vβ基因家族为Vβ17,与MHC-EV71抗原肽特异性结合的CDR3区氨基酸序列为TASQNTLY。  相似文献   

19.
目的将克隆有汉坦病毒包膜糖蛋白基因M片段及G1、G2基因的重组质粒免疫动物,了解上述目的基因在核酸疫苗中的应用价值。方法大量制备已构建好的pcDNA3.1-M、pcDNA3.1-G1、pcDNA3.1-G2重组质粒DNA及对照空质粒pcDNA3.1。然后用这四组质粒DNA通过肌肉注射的方法免疫6~8周龄的BALB/c小鼠(每组5只),每4周免疫一次,共免疫3次,每次免疫前及最后一次免疫后2周断尾取血,用免疫荧光的方法检测基因免疫的体液免疫应答效果。结果重组质粒pcDNA3.1-G1免疫小鼠有4只血清抗汉坦病毒抗体为阳性,重组质粒pcDNA3.1-G2以及重组质粒pcDNA3.1-M免疫小鼠各有1只血清抗汉坦病毒抗体为阳性。结论汉坦病毒糖蛋白基因核酸免疫动物后可刺激机体产生特异性的体液免疫应答。  相似文献   

20.
HBsAg核酸疫苗诱导H-2b小鼠体液免疫应答的初步研究   总被引:4,自引:1,他引:3  
目的:观察adw和adr亚型HBV PreS2 S核酸疫苗单一或联合HBcAg核酸疫苗诱导的小鼠体液免疫反应。方法:C57BL/6小鼠23只随机分为4组;pJW4303组(P组),pJW4303/S2 S(adw亚型)组(W组)、pJW43/3S2 S(adr亚型)组(R组),pJW4303/S2 S(adr) pJW4303/HBc组(R+C组)。免疫方法为每只小鼠每次肌注相应质粒DNA100μg(100μl)。免疫程序为0、2、4周。于第3次免疫后4周W组、R组、R+C组小鼠血清全部检出抗-HBs,抗体含量随免疫次数增多而增加,抗-HBs浓度最高达22329IU/L,与P组(对照质粒组)相比差异有显著性(P<0.01),但各核酸疫苗组之间差异无显著性(P>0.5)。抗-HBs浓度最高达22329IU/L,与P组(对照质粒组)相比差异有显著性(P<0.01),但各核酸疫苗组之间差异无显著性(P>0.5)。而抗-HBc在第一次免疫后2周即在R+C组全部出现,抗-HBs和抗-HBc在P组始终未检出。结论:adw和adr亚型HBV PreS2 S核酸疫苗和HBc核酸疫苗能诱导H-2^b小鼠产生较强的体液免疫反应,联合HBc核酸疫苗有助于抗-HBs的早期产生。  相似文献   

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