应用多重实时荧光PCR方法确诊一起副溶血性弧菌所致食物中毒

目的采用多重实时荧光PCR对一起疑似食物中毒的样本进行快速检测,结合病原学的结果,确定病原体。方法2015年5月广西东兰县发生了一起疑似细菌性食物中毒。应用多重实时荧光PCR方法对留存食品和患者肛拭子标本进行副溶血性弧菌4种毒力基因的检测,同时对样本进行病原学检测。结果共检测15份食品样本和12份肛拭子标本,除了从1份肛拭子标本中分离培养出O3∶K6副溶血性弧菌外,其余标本均未分离出食源性致病菌。从8份肛拭子标本中检出副溶血性弧菌毒力基因,其中所有菌株均携带tdh、tlh和orf8基因,3株携带trh基因。结论这是广西首次利用多重实时荧光PCR技术确诊由副溶血性弧菌引起的食物中毒。多重实时荧光PCR方法可以同时鉴定和检测副溶血性弧菌及其毒力基因,具有快速、灵敏、准确的优点,可为食源性暴发事件提供快速、可靠的检测结果。     

三亚市一起副溶血性弧菌引起的食物中毒实验室检测分析

目的对三亚市一起疑似食物中毒事件进行检测,为预防类似事件的发生提供科学依据。方法按照《食品卫生微生物学检验》GB 4789中的方法对事件中可疑样品进行常见病原菌分离鉴定,采用多重食源性致病菌核酸检测系统,对可疑副溶血性弧菌进行4种毒力基因检测,对分纯后的5株副溶血性弧菌做血清分型,最后用K-B扩散法进行药物敏感试验。结果检出5株副溶血性弧菌,血清型均为O3:K6型,均携带tdh、tlh和toxR基因,不携带trh基因,对庆大霉素、氯霉素等13种抗生素100%敏感,对青霉素、苯唑西林、羧苄青霉素、氨苄青霉素100%耐药。结论导致本次食物中毒事件的致病菌为O3:K6型副溶血性弧菌,建议三亚食品卫生监督部门应根据本地区特点加强对海产品的监测力度,督查餐饮机构自我管理能力,增强责任意识,防止类似事件再次发生。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的病原学特征分析

目的 分析2018年中山市某公司发生的1起副溶血性弧菌食物中毒分离株的血清型别、耐药表型和分子特征。方法 对该起食物中毒事件中分离的29株副溶血性弧菌进行病原学检测,采用玻片凝集法进行血清学分型,采用荧光PCR法检测tdh、tlh、trh毒力基因,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子分型。结果 29株副溶血性弧菌分离株血清型均为O3∶K6型;毒力基因检测结果显示,所有菌株均携带tdh、tlh基因;药敏试验结果显示,分离株对头孢唑林、氨苄西林的耐药率分别为100.00%、57.17%。28株病例分离株和1株食物分离株经NotⅠ酶切后PFGE指纹图谱高度相似,仅1株病例分离株与其他28株分离株存在2个条带的差异。结论 该起食物中毒事件的病原体为O3∶K6型副溶血性弧菌, 携带tdh、tlh毒力基因, 具有共同的耐药表型和遗传特征。     

一起因厨师携带副溶血性弧菌引起的食物中毒事件检测与溯源

目的 查明一起食物中毒事件发生原因。 方法 采用传统细菌分离鉴定和实时荧光PCR检测相结合的方法对样本进行鉴定,对分离出的副溶血性弧菌进行常规鉴定、血清分型和脉冲场凝胶电泳分型(pulsed-field gel electrophoresis, PFGE)分析,图谱用BioNumerics软件分析并绘制聚类分析图,对分离菌株进行分子分型和同源性分析。 结果 共分离出3株副溶血性弧菌,两株来自病例,一株来自制作凉菜的厨师,血清型均为O3:K6型,经PFGE聚类分析得到2种带型,两名病例菌株带型完全一致,与厨师的菌株带型存在一个条带的差异,为高度相关株。 结论 推断此次食物中毒是由厨师携带副溶血性弧菌污染凉菜所引起的。     

肇庆市副溶血性弧菌血清型、毒力基因和脉冲场凝胶电泳分子分型研究

目的 通过副溶血性弧菌血清型、毒力基因和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型研究,建立肇庆市副溶血性弧菌DNA指纹图谱基因库。方法 对肇庆市食物中毒分离出的28株副溶血性弧菌和食品安全风险监测的各类水产品分离的17株副溶血性弧菌进行血清分型,耐热直接溶血素相关基因(trh)和耐热直接溶血素基因(tdh)PCR检测,对45株副溶血性弧菌进行PFGE分子分型。结果 食物中毒分离的28株副溶血性弧菌,血清型以O₄:K₈(32.14%)和O₃:K₆(25.00%)为主,17株水产品分离的副溶血性弧菌,血清型以O₁:K_UT(42.11%)为主;21株(46.67%)为tdh⁺trh^-菌株,23株(51.11%)为tdh^-trh^-菌株,1株(2.22%)为tdh^-trh⁺。45株副溶血性弧菌的PFGE相似值为3.9%~100.0%,被分为36种不同的PFGE型别,带型100%相同的菌株几乎都出现在同一年代相近的时间点,但也出现了跨年代菌株。结论 肇庆市食物中毒的副溶血性弧菌以O₄:K₈和O₃:K₆血清型为主,多数菌株携带tdh基因。PFGE结果提示肇庆市流行的副溶血性弧菌存在多克隆来源。     

应用多重实时荧光PCR方法检测副溶血性弧菌及其毒力基因

目的应用多重实时荧光PCR方法检测113株食物中毒副溶血性弧菌分离株多种毒力基因携带情况。方法用水煮法提取菌株DNA后,利用四重实时荧光PCR方法对DNA同时进行4种基因的检测。结果所有的菌株均携带tlh基因,96株菌株(84.96%)携带tdh基因,9株菌株(7.96%)携带trh基因及62株菌株(54.87%)携带orf8基因的菌株同时tdh基因检测为阳性,无同时携带trh基因和orf8基因的菌株。trh、tdh基因和orf8基因阳性的菌株分布在O1~O4血清群。结论本市大部分食物中毒菌株携带除tlh基因外的1种或1种以上的毒力基因,一半以上的菌株为大流行株;四重实时荧光PCR方法可以同时鉴定和检测副溶血性弧菌及毒力基因,建议作为食源性暴发事件的常规检测方法,获得更快速、准确、完整的结果。     

一起由副溶血性弧菌引起两个旅行团食物中毒的调查

目的 查明两个旅行团食物中毒事件发生的原因和可疑危险因素,为有效控制和预防类似事件的发生提供依据。 方法 通过现场流行病学方法,开展描述性流行病学调查,查找可疑餐次,对引起此次食物中毒事件的可疑餐次及可疑食物进行病例对照研究,采集食品、环境及病例样本,进行常见食物中毒致病菌的实验室检测。 结果 共发现24名病例,主要临床症状为腹泻(100.00%)、伴腹痛(91.67%)、呕吐(33.33%)。病例对照研究发现凉拌海蜇(OR=4.857,95%CI:1.457～16.191)是导致食物中毒的可疑食品。实验室检出致病菌为副溶血性弧菌O10∶K4。 结论 凉拌海蜇可能受到副溶血性弧菌的污染,为本次食物中毒的可疑食品,建议加强餐饮机构的食品安全及食品处理环节的监管,加强对餐饮环境的卫生监督。     

TaqMan探针双重荧光PCR法检测副溶血性弧菌毒力基因

目的建立同时检测副溶血性弧菌毒力基因tdh和trh的双重荧光PCR方法。方法筛选副溶血性弧菌tdh和trh毒力基因的特异性引物和探针,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR扩增体系,进行特异性、灵敏度实验,并对本实验室保存的54株副溶血性弧菌进行tdh、trh毒力基因的检测,以了解不同来源的副溶血性弧菌携带毒力基因的状况。结果建立的双重荧光PCR方法特异度强(100%),最低检测浓度达到20 cfu/ml,对本实验室保存的副溶血性弧菌进行毒力基因的检测结果显示,从临床分离的10株副溶血性弧菌和海产品样品中分离的1株副溶血性弧菌均为tdh扩增阳性,trh扩增阴性。结论所建立的方法特异性好,灵敏度高,适用于副溶血性弧菌的毒力基因检测。     

一起食源性致病菌引起食物中毒的病原学检测

目的调查分析一起食源性致病菌引起食物中毒的原因,防止类似事件再次发生。方法现场流行病学调查和实验室检测相结合,对8份可疑食品和2份腹泻物、肛拭样本进行食源性致病菌检测。结果在2份可疑食品和病人腹泻物里检出生物学性状一致的副溶血性弧菌。结论根据流行病学调查及实验室分析,判定本次食物中毒是一起副溶血性弧菌引起的食物中毒事件。     

PCR-毛细管电泳法在小龙虾中三种食源性致病菌检测中的应用评价

目的 探讨PCR-毛细管电泳法在检测小龙虾中沙门氏菌、副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌的应用效果。方法 同时应用食品微生物检验国标GB 4789方法和PCR-毛细管电泳法检测60份小龙虾中的三种致病菌,对两种检测方法的效果进行比较评价。结果 利用国标方法,小龙虾中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的检出率分别为25.00%、20.00%、10.00%。运用PCR-毛细管电泳方法,沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的检出率分别为30.00%、20.00%、10.00%。PCR-毛细管电泳方法沙门氏菌的检出率高于国标方法,三种致病菌的检出情况与国标方法一致,检验过程可控制在24 h之内。结论 PCR-毛细管电泳方法可用于小龙虾中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的检测,具有快速、灵敏、自动化程度高等优点。     

副溶血性弧菌MPCR-DHPLC检测方法的建立

目的:建立多重PCR(Multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(Denaturing High-Performance Liquid Chromatography,DHPLC)检测副溶血性弧菌的方法,并了解该菌携带毒力基因的情况。方法:根据副溶血性弧菌的毒力基因tdh、trh和种特异性基因toxR进行引物设计,以其单一PCR扩增产物在DHPLC出现的色谱峰作为标准色谱峰,建立MPCR-DHPLC的检测方法。结果:该方法能有效扩增副溶血性弧菌的tdh、trh和toxR基因,25株副溶血性弧菌的MPCR扩增产物经DHPLC分析所得的色谱峰在位置和峰型与标准色谱峰有很好的符合性,其他菌属的菌株均无特异性扩增,对模拟污染样品可正确检测,灵敏度达到1*103CFU/ml,特异性达到100%。结论:本文建立的MPCR-DHPLC方法可准确检测副溶血性弧菌,并了解该菌携带毒力基因的情况。     

一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒的实验室检测

目的对一起副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行毒力基因及分子分型研究,明确传染源。方法参照WS 271—2007等标准,对食物中毒患者肛拭子和剩余食物进行致病菌分离,并对分离的可疑致病菌进行生化鉴定、毒力基因检测、血清学分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)和药敏试验。结果 16份来自患者的样本,1份来自食品龙虾的样本和1份盛装龙虾的容器涂抹物样本均检出O_3:K6血清型副溶血性弧菌。副溶血性弧菌毒力基因检测均为tdh阳性、trh阴性。PFGE分型显示,所有的菌株为高度相似克隆,相似度为100%。结论该起食物中毒事件为O_3:K6血清型副溶血性弧菌染污的龙虾所致。PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究。     

福建不同来源副溶血性弧菌的毒力因子检测

目的 了解福建省不同来源副溶血性弧菌携带毒力因子情况,为副溶血性弧菌食物中毒的检测和研究提供参考依据.方法 用PCR方法检测从食品及食物中毒病人分离菌株的毒力因子.结果 食品和临床病人分离菌株均含t/h基因,不含trh基因;临床分离菌株均含tdh基因,而食品分离菌株均不含tdh基因或含量少.结论 福建省副溶血性弧菌食物...     

一起由多种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒的实验室检测分析

目的研究引起本次食物中毒的副溶血性弧菌血清型和分子分型的特征。方法采集患者肛拭子、剩余食物和水样样本进行致病菌检测,对分离的可疑致病菌进行鉴定、PCR毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果从27份样本中分离出16株副溶血性弧菌,分属8个血清型;经PFGE分型,16株菌共产生11种带型,相似度为51.45%;12株菌携带tdh基因,所有菌株均不带有trh基因。结论此次食物中毒由多型别的副溶血性弧菌混合感染引起。建议在处理由副溶血性弧菌引起的食物中毒的过程中,每一个样本均需挑取多个可疑菌落,留待后续的检测。     

2014－2016年厦门市思明区海产品中副溶血性弧菌动态监测

目的 掌握厦门市思明区2014－2016年5－10月份市售海产品中副溶血性弧菌的污染状况以及分离菌株的血清型、耐药性与毒力基因携带状况,为食品安全监管、食源性疾病防控提供参考。 方法 2014－2016年5－10月份自思明区农贸市场与超市采集海产品样品分离副溶血弧菌,对分离菌株进行血清学分群、药物敏感试验以及毒力基因tdh和trh检测。 结果 180份样品共检出副溶血性弧菌菌株146株,检出率为81.11%,各类海产品检出率差异无统计学意义;7－9月份检出率均较5月份高。分离菌株血清群分布广泛,呈多样化状况,且以O2(27.27%)、O1(22.60%)、O4(15.75%)、O3(10.96%)为主。所有分离株均对氨苄西林耐药,对头孢曲松等16种抗生素敏感。仅检出一株菌株携带tdh毒力基因,毒力基因检出率为0.68%。 结论 2014－2016年厦门市思明区5－10月份海产品存在严重的副溶血性弧菌污染;分离株血清型以O2、O1、O4、O3为主,呈多样性;毒力基因携带率不高;分离株均对大部分抗菌药物敏感。     

一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒调查

目的 查明一起食物中毒事件的发生原因和可疑危险因素。 方法 通过描述性流行病学研究查找可疑餐次,对2016年广州某旅行团食物中毒事件中可疑餐次食物开展病例对照研究,采集病例样本进行常见食物中毒致病菌实验室检测。 结果 共发现137名病例,症状主要为腹泻(100%)、腹痛(86.13%)、呕吐(21.90%)。食用10月17日午餐的豉汁蒸金昌鱼(OR=13.82, 95%CI:1.71~111.73)和10月18日午餐的传统手打墨鱼丸(OR=4.83,95%CI:1.82~12.79)是发病的危险因素。致病菌为副溶血性弧菌(O4:K8)。 结论 食用被副溶血性弧菌污染的豉汁蒸金昌鱼和传统手打墨鱼丸是导致本次食物中毒的原因,建议加强对餐饮机构的监督管理,提高卫生安全意识,防止再次发生类似事件     

一起副溶血性弧菌食物中毒的调查与分析

目的分析食物中毒的原因,查明致病菌。方法对14例食物中毒患者进行流行病学调查,3例食物中毒患者肛拭子、1份粪便标本及7份剩余菜肴进行病原菌的分离、鉴定,并对分离菌株进行血清学分型、毒力基因多重PCR检测tdh、trh和toxR基因试验、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果 3份食物中毒患者肛拭子、1份粪便标本中均检出副溶血性弧菌,经血清学分型、毒力基因多重PCR检测、PFGE分子分型试验,4份患者标本的分离株试验结果完全一致。均为副溶血性弧菌,血清型为O4∶K9,毒力基因tdh阳性、trh阴性和toxR阳性,脉冲场凝胶电泳图谱的聚类分析结果显示:4株副溶血性弧菌的带型相似度为100%。7份剩余菜肴均未检出相关致病菌。结论根据流行病学调查,实验室检测分析,这是一起由副溶血性弧菌污染食物所致的食物中毒。     

食源性相关腹泻患者粪副溶血性弧菌检测结果分析

目的了解多重荧光PCR检测食源性相关腹泻患者粪副溶血性弧菌与增菌培养分离法检测结果的关系以及毒力基因携带情况。方法比较多重荧光PCR与培养分离法对200例食源性相关腹泻患者粪副溶血性弧菌的检测,在培养鉴定中使用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统(法国bio Mérieux公司)的GN配套鉴定卡及AST-GN09药敏卡,并进行血清学分型。结果增菌培养分离法的检出率为36.00%(72/200),所有菌株均能被多重荧光PCR鉴定出tlh基因,其中毒力基因携带tdh+/trh+占2.78%(2/72)、tdh+/trh-占88.89%(64/72)、tdh-/trh+占5.55%(4/72);tdh-/trh-占2.78%(2/72)。血清型O3∶K6最多,占58.33%(42/72)、其次O4∶K8占8.33%(6/72)。结论多重荧光PCR比较适合于食源性相关腹泻患者粪副溶血性弧菌的快速鉴定与毒力检测,也应重视培养分离法对鉴定与药敏的地位,努力优化选择性培养基及培养条件,加强主动监测。     

不同来源副溶血性弧菌分离株的耐药性和毒力分析

目的:了解广东省副溶血性弧菌水产品分离株与食物中毒分离株携带毒力基因和耐药情况及差异。方法:对132株副溶血性弧菌用纸片扩散法进行耐药检测,对487株副溶血性弧菌以PCR方法进行毒力基因测定。结果:副溶血性弧菌菌株对14种抗生素都有耐药。同时对5种以上抗生素耐药的有60株,占45.5%。多重耐药株的构成比以海虾分离株和食物中毒株为主,占50%。耐药谱分析结果显示,副溶血性弧菌分离株对青霉素类、庆大霉素、连霉素等,普遍有较高的耐药率。487株副溶血性弧菌的tdh和trh基因检测,食品分离株毒力基因的携带率明显低于食物中毒分离株。而食物中毒分离株中以携带tdh基因为多,占93.75%。结论:为防止超级耐药株的产生,应尽快立法加强对兽药使用的监控。复合PCR基因检测能缩短检测周期,有应用前景。     

一起副溶血性弧菌引起的群体性食物中毒事件溯源分析

目的 对一起副溶血性弧菌引起的群体性食物中毒事件进行溯源分析,为避免类似食物中毒事件发生提供依据。方法 对采自该食物中毒事件现场的接触者肛拭子、食物样本、环境涂抹样本进行病原学检测,并对分离出的副溶血性弧菌进行毒力基因鉴定、血清学分型和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型。结果 采集的38份样本中,有21份（19份肛拭子、2份环境涂抹样本）检出副溶血性弧菌,检出率为55.3%。分离出的21株副溶血性弧菌血清型均为O3:K6,其tlh/tdh毒力基因为阳性,PFGE分子分型显示高度同源（同源性在98.7%～100.0%之间）。结论 综合流行病学调查结果和实验室检测结果判定,引起该群体性食物中毒事件的病原菌为携带tlh/tdh基因的O3:K6型副溶血性弧菌。建议监管部门加强卫生监管力度,避免类似事件的发生。