PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞株MBA-MB-231/ADR的多药耐药逆转作用

目的探讨PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用及其与PI3K/Akt信号转导关系。方法采用MTT法测定三阴性乳腺癌细胞系MBA-MB-231及其多药耐药细胞株MBA-MB-231/ADR对经典化疗药物阿霉素的半数抑制浓度(IC50),以及MBA-MB-231/ADR细胞株在PI3K抑制剂LY294002给药前后对阿霉素的敏感性差异。Western Blot检测MDA-MB-231/ADR细胞株LY294002给药前后,P-Akt、Akt、IκBα、NF-κB、P-gp和cleaved-caspase-3表达水平差异。结果 1MBA-MB-231和耐药细胞株MBA-MB-231/ADR对阿霉素的IC50分别为(0.36±0.03)μmol/L和(16.77±1.57)μmol/L,耐药倍数为46.58倍。2LY294002给药后,耐药细胞株MBAMB-231/ADR对阿霉素的IC50降至(2.59±0.07)μmol/L,耐药倍数降至6.475,对药物敏感性显著增加。3耐药细胞株MBA-MB-231/ADR中PI3K/Akt和NF-κB通路被激活,细胞耐药相关蛋白P-gp处于高表达水平;LY294002处理之后,MBA-MB-231/ADR细胞中PI3K/Akt和NF-κB通路被抑制,P-gp表达水平下调,细胞凋亡相关的cleaved-caspase-3表达上调。结论 PI3K抑制剂LY294002能有效逆转耐药细胞株MBA-MB-231/ADR的耐药性,从而增强耐药细胞MBA-MB-231/ADR对化疗药物阿霉素的敏感性。该研究结果提示LY294002通过阻断PI3K/Akt通路抑制下游NF-κB通路的活化和P-gp表达上调,从而参与MBA-MB-231/ADR耐药性的逆转。     

LY294002对Jeko-1细胞的增殖抑制及作用机制研究

本研究旨在探讨磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶（PI3K/Akt）特异性抑制剂LY294002对人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞生长、细胞凋亡的影响及其作用机制.四甲基偶氮唑盐（MTT）方法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、procaspase-3及PI3 K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的变化.结果表明,LY294002能抑制Jeko-1细胞的增殖.Jeko-1细胞经LY294002 0、5、10和20 μmol/L作用24 h后,凋亡率分别为（3.25±1.27）％、（11.34±2.35）％、（22.81±2.74）％和（43.61±3.48）％,差异有统计学意义（P＜0.01）;Westem blot检测发现,凋亡相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、procaspase-3表达下降,PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平降低.结论：LY294002可明显抑制Jeko-1细胞增殖,其机制可能通过下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K磷酸化水平,抑制PI3K/Akt信号通路,促进细胞凋亡.     

脑源性神经营养因子通过AKT和ERK1/2信号通路诱导内皮细胞血管生成

本研究探讨脑源性神经营养因子（BDNF）促进血管新生的作用及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。以人脐静脉内皮细胞为对象,采用Western blot方法检测细胞内磷酸化Akt、ERK1/2蛋白质的表达;采用Transwell小室迁移实验和管腔形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力,MTT法检测内皮细胞增殖活性,FITC-Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术分析细胞调亡。结果表明：BDNF以时间依赖性的方式激活PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路。应用PI3K激酶抑制剂Ly294002、MEK1激酶抑制剂PD98059可以明显阻断BDNF对PI3K/Akt、MEK1/ERK信号通路的激活。100ng/ml的BDNF体外促内皮细胞血管新生能力与25ng/ml血管内皮生长因子（VEGF）相当,其中BDNF诱导的细胞迁移分别被Ly294002和PD98059阻断,其抑制率分别约为74%和36%;同样,Ly294002、PD98059可部分阻断BDNF诱导的小管形成效应,其阻断率分别约57%和37%;而BDNF的促增殖效应仅被PD98059拮抗,抑制凋亡效应仅受Ly294002影响。结论：BDNF在体外有促血管新生的作用。PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI3K/Akt信号通路起着更为重要的调节作用。     

锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞凋亡和PI3K蛋白表达影响的研究

目的：通过锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞的干预,观察人脑胶质瘤细胞中细胞凋亡和PI3K蛋白表达的变化。方法体外培养U251细胞,应用锯叶棕提取物进行预处理,应用TUNEL法检测细胞凋亡,应用Western Blot法检测PI3K蛋白表达水平的变化。结果TUNEL法染色检测锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响,24 h与48 h均可见TUNEL阳性反应细胞即凋亡细胞,胞体缩小,形态不规则,胞核固缩浓染,呈棕黄色或棕褐色;1.5μL/mL组48 h与24 h比较,凋亡数量显著增多（P＜0.01）;对照组24 h与48 h偶见凋亡细胞,2.0μL/mL组与1.5μL/mL组比较,凋亡率增大（P＜0.01）。用Western blot法检测锯叶棕提取物对人脑胶质瘤细胞PI3K蛋白表达的影响,锯叶棕提取物预处理U251细胞与对照组比较, PI3K蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）。结论锯叶棕提取物能诱导人脑胶质瘤细胞凋亡;锯叶棕提取物诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的机制可能是通过阻断PI3K/Akt信号转导通路。     

PI3K抑制剂LY294002对胶质瘤U87细胞的放射增敏作用

目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶/ 丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号转导通路抑制剂LY294002对人恶性胶质瘤细胞的放射增敏作用.方法:以人胶质瘤细胞株U87 细胞为研究对象,MTT 法观察LY294002 对U87 细胞的增殖抑制;克隆形成法分析细胞放射敏感性,计算放射增敏比(SER);流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布变化.结果:LY294002 对U87 细胞的生长有抑制作用,且呈剂量依赖性;在较低浓度时(25 滋mol/L)可降低U87 细胞照射后的克隆形成率,其SER 为1.01;流式细胞仪分析显示:LY294002 联合放射组的周期分布及凋亡率与LY294002 组,单纯放射组比较均有差异(P ＜ 0.05),表现为G0/G1期细胞增加,S 期细胞减少,凋亡率增加.结论:LY294002 可增强U87 细胞的放射敏感性,抑制PI3K/Akt 信号转导通路可提高胶质瘤的放射治疗效果.     

PI3K/Akt信号传导通路与肿瘤多药耐药研究进展

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B[phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt),PI3K/Akt]信号传导通路作为细胞生存重要通路之一,在促进细胞生长、增殖,促进细胞运动、侵袭,抑制细胞凋亡,促进血管生成,抵抗化疗和放疗等方面起重要作用.近年来,关于PI3K/Akt 信号通路与药物耐药性关系的研究越来越多,并被认为是化疗耐药治疗的新靶点.Akt是PI3K/Akt 通路中的关键性效应分子,多种肿瘤组织中都有Akt 的过度表达和活化.多项实验表明,化疗药物可增加Akt 磷酸化水平,使肿瘤细胞产生化疗耐受,深入研究其作用机制,可能为肿瘤的基因治疗、抗肿瘤药物开发提供新靶点.     

肠三叶因子介导PI3K/Akt信号通路保护胃黏膜上皮细胞紧密连接

目的：探讨肠三叶因子对胃黏膜上皮细胞紧密连接的保护作用,并研究PI3K/Akt信号通路在其中的作用机制。方法：体外培养GES-1细胞,分别设正常对照组,LPS组,ITF组,LPS＋ITF组,LPS＋ITF＋LY294002组,ITF＋LY294002组。正常对照组：正常培养;LPS组：加入浓度为10mg/L的LPS;ITF组：加入浓度为100μg/L的ITF;LPS＋ITF组：加入浓度为10mg/L的LPS,同时加入100μg/L的ITF;LPS＋ITF＋LY294002组：加入浓度为10mg/L的LPS、100μg/L的ITF,同时加入PI3K/Akt信号通路的抑制剂LY294002（15μM）;ITF＋LY294002组：加入100μg/L的ITF,同时加入15μM的LY294002。培养48h,采用Western blot检测ITF对PI3K/Akt信号通路的作用,采用免疫荧光和Western blot检测细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的变化情况。结果：Western blot检测结果说明,与对照组相比,ITF提高了pAkt蛋白的表达水平,而LY294002抑制了ITF激活的pAkt蛋白的表达,说明ITF可以通过激活PI3K/Akt信号通路来调控GES-1细胞的生理活动。免疫荧光和Western blot结果显示LPS导致GES-1细胞的紧密连接遭到破坏,降低紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达水平,而ITF可以通过激活PI3K/Akt信号通路来保护GES-1细胞的紧密连接的完整性。结论：ITF保护胃黏膜上皮细胞紧密连接的完整性,提高紧密连接蛋白的表达水平,其发挥作用的主要分子机制是通过激活PI3K/Akt信号通路来实现的。     

TRIM31基因沉默对U266细胞增殖及凋亡的影响及其机制

目的:探讨三结构域蛋白31(TRIM31)基因沉默对多发性骨髓瘤细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制。方法:以正常人骨髓浆细胞为对照,用RT-qPCR和Western blot实验检测人多发性骨髓瘤细胞株(U266、RPMI-8226、NCI-H929和KMS-11)中TRIM31 mRNA和蛋白表达水平。用RT-qPCR法检测含有shRNA-TRIM31的重组慢病毒载体及其对照载体感染之U266细胞中TRIM31 mRNA的水平;用CCK-8、软琼脂克隆形成实验和流式细胞术分别检测细胞增殖活性、克隆形成能力和凋亡率;Western blot检测细胞中TRIM31、cleaved-caspase-3、BCL-2、Bax、p-Akt(Ser473)、Akt和PI3K(p110α)等蛋白的表达水平。用PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂LY294002和TRIM31-shRNA慢病毒联合干预U266细胞,用CCK-8、流式细胞术检测细胞增殖活性和凋亡率,Western blot检测细胞中p-Akt(Ser473)和Akt蛋白表达水平。结果:与正常人骨髓浆细胞比较,U266、RPMI-8226、NCI-H929和KMS-11细胞中TRIM31 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.001),其中U266细胞最为显著;慢病毒感染后,U266细胞中TRIM31 mRNA和蛋白水平显著降低(P0.001);沉默TRIM31可显著抑制U266细胞增殖(P0.05),降低细胞克隆形成能力,提高细胞凋亡率,并上调cleaved-caspase-3和Bax蛋白水平,下调BCL-2、p-Akt(Ser473)和PI3K(p110α)蛋白水平,而对Akt蛋白无显著影响;LY294002干预显著增强TRIM31基因沉默对U266细胞增殖的抑制作用以及细胞凋亡的促进作用。结论:TRIM31基因沉默可抑制U266细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号通路抑制有关。     

蒿甲醚对人恶性胶质瘤细胞的抑制作用

目的 探讨蒿甲醚对U251人胶质瘤细胞增殖活性、凋亡的影响及其机制.方法 将浓度为0、50、100、200、400、600及800 μmol/L的蒿甲醚孵育U251胶质瘤细胞24、48 h.利用MTT法测定细胞增殖活性.然后将利用浓度为0、200、400及800μmol/L的蒿甲醚培养U251人胶质瘤细胞48 h,利用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡.最后利用Western blot法检测胶质瘤细胞的磷酸化AKt的表达水平.结果 400 μmol/L及更高浓度的蒿甲醚培养48 h,U251细胞的增殖活性受到显著抑制,同时随着浓度升高抑制作用增强.与对照组相比,蒿甲醚显著促进U251细胞的凋亡.400 μmol/L和800 μmol/L浓度的蒿甲醚显著抑制了磷酸化Akt的表达水平.结论 蒿甲醚能够以剂量依赖的方式显著抑制U251细胞的增殖活性并促进其凋亡,该抑制作用可能与其抑制Akt信号通路有关.     

Bmi-1介导的K562/ADR细胞多药耐药机制

目的:观察Bmi-1基因沉默对白血病耐药细胞株K562/ADR耐药性的影响并初步探讨其机制。方法:将2种序列的Bmi-1小干扰RNA SiRNA转染到耐药细胞K562/ADR,检测Bmi-1基因m RNA和蛋白的表达以确定转染效果。检测Bmi-1基因沉默后耐药蛋白P-gp及其编码基因MDR1的表达情况,并采用流式细胞术检测细胞内阿霉素蓄积情况。检测Bmi-1基因沉默后NF-κB蛋白的表达变化;应用NF-κB抑制剂PDTC处理K562/ADR细胞抑制NF-κB活性后,检测P-gp蛋白的表达及其功能的变化。检测Bmi-1基因沉默后PTEN、AKT和p-AKT蛋白表达的变化。应用PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理K562/ADR细胞抑制p-AKT表达后,检测NF-κB和P-gp蛋白的表达。应用PTEN抑制剂BPV(phen)处理Bmi-1基因沉默后的细胞,检测AKT、p-AKT、NF-κB和P-gp蛋白的表达。以上mRNA表达用RT-PCR法检测,蛋白表达用Western blot法检测。结果:在mRNA水平和蛋白水平2种序列的小干扰RNA均使K562/ADR细胞Bmi-1基因表达降低。MDR1/P-gp在Bmi-1 siRNA干扰细胞中的表达明显低于在K562/ADR细胞的表达(P0.05);干扰后细胞内阿霉素蓄积增多。Bmi-1基因沉默后,细胞NF-κB活性降低;NF-κB抑制剂抑制NF-κB活性后,K562/ADR细胞P-gp蛋白表达及药物泵出功能被抑制。Bmi-1基因沉默后PTEN蛋白表达增高,而p-AKT蛋白表达明显降低(P0.05)。PI3K/AKT通路抑制剂LY294002抑制p-AKT表达后,NF-κB活性和P-gp蛋白表达明显下降(P0.05)。PTEN抑制剂BPV(phen)处理Bmi-1基因沉默细胞后,NF-κB活性和P-gp蛋白表达得到重塑。结论:Bmi-1在MDR1/P-gp介导的K562/ADR细胞多药耐药中起关键作用,这种作用可能是通过激活PTEN/AKT途径调控NF-κB完成。     

OTUB1基因的siRNA转染对脑胶质瘤细胞凋亡及STAT3信号通路的影响研究

目的探讨卵巢肿瘤相关蛋白酶B1(OTUB1)基因的siRNA转染对脑胶质瘤细胞活力、凋亡及STAT3信号通路的影响。方法 Western blotting检测OTUB1在人脑恶性胶质瘤U251、U87、BT325和M17细胞中的蛋白表达;U87细胞分为空白组(不做任何处理)、NC组(转染Control siRNA)和si-OTUB1组(转染OTUB1 siRNA),参照Lip2000转染试剂盒说明转染siRNA。Western blotting检测转染OTUB1-siRNA后OTUB1的蛋白表达,并选择抑制效果好的siRNA作为研究对象;MTT检测OTUB1-siRNA转染后的24~72 h细胞活力;流式细胞仪检测OTUB1-siRNA转染的48 h细胞凋亡率;Western blotting检测STAT3、磷酸化的STAT3及STAT3信号通路下游相关基因cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达。结果 OTUB1在U251、U87、BT325和M17细胞中均呈现出阳性表达,在U87细胞中呈现出较高水平表达;OTUB1-siRNA转染后的U87细胞OTUB1的蛋白表达显著低于空白组和NC组(P0.05);与NC组比较,si-OTUB1转染U87细胞24-72h的细胞活力均显著降低,转染48 h的细胞凋亡率显著升高,p-STAT3、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达均显著降低(P0.05),而三组间STAT3的蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论 OTUB1在人脑恶性胶质瘤细胞高表达,抑制OTUB1表达后可明显降低脑胶质瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,机制可能是通过下调STAT3信号通路实现的。     

SATB1在甲状腺癌启动PI3K/Akt信号通路中的作用研究

目的研究甲状腺癌细胞在发生、发展、侵袭及转移过程中富含AT序列的特异结合蛋白1(SATB1)所起的作用,探讨SATB1在启动PI3K/Akt信号通路中的作用。方法将甲状腺癌细胞随机分成4组:未处理组:除DMEM外不加任何处理;LY294002抑制组:DMEM培养集中加LY294002抑制剂10μmol/L;SATB1诱导剂组:DMEM培养集中加SATB1抗体200μg/L;TSATB1诱导抑制组:DMEM培养集中加SATB1L抗体200μg/L,加LY294002抑制剂10μmol/L。培养24 h后采集培养基中甲状腺癌细胞中血清采用酶联免疫(ELASE)法检测基质金属蛋白酶9(MMP9)、白细胞介素1(IL-1)和IL-6的表达情况,对甲状腺细胞裂解使用Western blotting方法测定PI3K、Akt、P-Akt及PIP3的表达情况,使用免疫组化方法检测甲状腺癌细胞中SATB1的表达。结果免疫组化方法可以看出:在甲状腺癌细胞胞核中SATB1表达为黄色,黄色越深表明表达越重,而在胞浆中无任何表达。不同实验组中SATB1的表达的深浅不一致且差异有统计学意义(P0.05);其中SATB1诱导剂组蛋白SATB1的表达最高,表达最低的LY294002抑制组,且差异具有统计学意义(P0.05)。Western blot研究证实,各组中PI3K、Akt、P-Akt及PIP3的表达不同且差异有统计学意义(P0.05);其中SATB1诱导剂组PI3K、Akt、P-Akt及PIP3的表达最高,而LY294002抑制组最低(P0.05)。ELASE法结果表明各组中MMP9、IL-1和IL-6的表达不同且差异有统计学意义(P0.05);SATB1诱导剂组MMP9、IL-1和IL-6的表达最高,而LY294002抑制组最低(P0.05)。结论 SATB1与甲状腺癌侵袭转移有关;SATB1在PI3 K/Akt信号通路具有启动的作用,同时SATB1可能参与肿瘤的微环境和炎性因子的表达。     

SARI过表达对CBFL细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨SARI基因过表达对核结合因子白血病(CBFL)细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:通过17号外显子测序验证CBFL细胞模型Kasumi-1细胞负载c-KIT N822K突变。构建SARI基因过表达慢病毒载体,并转染Kasuimi-1细胞。采用荧光定量PCR和Western blot鉴定细胞转染后SARI基因过表达效果。设置空白对照(CON)、空载体对照(NC)和SARI过表达(OE) 3组。MTT法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyto C、Caspase 9、Caspase 3、cleaved-Caspase 3、PARP、cleavedPARP,以及PI3K/Akt通路蛋白PI3K(p85)、p-PI3K(p85)、Akt、p-Akt的表达变化。结果:Kasumi-1细胞具有c-KIT N822K突变。成功构建稳定过表达SARI基因的Kasumi-1细胞。与NC组细胞相比,OE组细胞增殖减缓,凋亡增加;抗凋亡蛋白BCL-2表达降低,促凋亡蛋白BAX表达增高;出现Cyto C蛋白的表达; Caspase 9、Caspase 3表达降低,cleaved-Caspase3表达增高; PARP表达降低,活性剪切体cleaved-PARP表达增高,PI3K/Akt通路蛋白p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt磷酸化水平下调(P 0. 05)。结论:SARI基因过表达可通过线粒体途径诱导CBFL细胞凋亡,机制可能与PI3K/Akt信号通路失活有关。     

VE—statin／Egfl7基因沉默对恶性胶质瘤细胞U251基因表达谱的影响

目的探讨VE-statin／Egfl7基因在恶性胶质瘤中表达的分子调控机制。方法用小RNA干扰技术沉默VE-statin／Egfl7基因在人恶性胶质瘤U251细胞中的表达,然后用基因表达谱芯片研究VE-statin／Egfl7基因沉默前后该细胞基因表达谱的变化,进行生物信息学分析。并选取两条差异表达基因用实时荧光定量PCR进行验证。结果通过RNA干扰技术明显抑制了VE-statin／Egfl7基因在U251细胞中的表达。基因表达芯片检测结果发现与对照组相比,实验组下调基因有141条,包括未知功能基因7条,已知功能基因134条;上调的基因有130条,包括未知功能基因3条,已知功能基因127条。通过生物信息学分析发现这些基因主要与细胞增殖分化、凋亡及细胞外基质黏附等生物学功能密切相关,涉及的主要信号通路包括表皮生长因子受体ERBB家族信号、细胞存活信号及整合素ave3信号。结论VE-statin／Egtt7在恶性胶质瘤中的分子调控机制可能通过P13K／Akt和Ras／MAPK两条信号转导通路实现,为进一步研究VE-statin／Egfl7的功能和分子机制提供了新的线索。     

栀子苷预处理对大鼠心肌缺血再灌注后PI3K/Akt信号通路的研究

目的探索栀子苷(GEN)对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)后心肌细胞氧化应激水平及心肌凋亡的影响极其与PI3K/Akt信号通路的关系。方法60只SD大鼠随机分为3组:缺血再灌注组(I/R),栀子苷预处理+缺血再灌注组(GEN+I/R),栀子苷+缺血再灌注组+PI3K/Akt信号通路抑制剂(LY294002)组(GEN+I/R+LY),GEN+I/R组在I/R造模前给予50 mg/kg GEN预处理,GEN+I/R+LY组在GEN预处理前给予0.3 mg/kg LY294002。ELISA法检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)以及钙泵(Ca~(2+)-ATPase)水平;Western blot检测心肌组织p-e NOS,p-Akt,Akt以及Bcl-2、Bax蛋白表达;免疫组织化学染色检测p-e NOS,p-Akt蛋白表达。结果与I/R组比较,GEN+I/R组LDH、MDA含量显著降低,SOD、Ca~(2+)-ATPase显著升高(P0.05);与GEN+I/R组比较,GEN+I/R+LY组LDH、MDA含量显著升高,SOD、Ca~(2+)-ATPase显著降低(P0.05)。并且,与I/R组比较,GEN+I/R组p-eNOS、p-Akt、Akt、Bcl-2表达量以及p-e NOS,p-Akt免疫荧光强度显著提高(P0.05),Bax蛋白表达显著降低(P0.05);与GEN+I/R组比较,GEN+I/R+LY组p-eNOS、p-Akt、Akt、Bcl-2表达量以及pe NOS、p-Akt免疫荧光强度显著降低,Bax蛋白表达量显著升高(P0.05)。结论栀子苷可通过激活PI3K/Akt信号通路抑制心肌缺血再灌注后氧化应激及细胞凋亡从而发挥保护作用。     

PI3K/Akt参与内皮祖细胞分化的体外观察

背景:内皮祖细胞分化为成熟内皮细胞的分子机制尚不清楚,要通过包括PI3K/Akt信号通路在内的多个信号通路调节细胞内部多种基因的表达来完成.目的:分析PI3K/Akt信号传导通路在内皮祖细胞分化中的作用.设计、时间及地点:分组对照体外实验,于2007-09/2008-03在中国医科大学附属盛京医院病理实验室完成.材料:4～6周龄Wistar大鼠,雌雄不限.方法:采用密度梯度离心法从大鼠骨髓分离内皮祖细胞,经差速取二次贴壁细胞接种于培养瓶内.收集培养5 d的内皮祖细胞,用激光共聚焦显微镜鉴定,AC133和vWF双染阳性细胞为正在分化的内皮祖细胞.主要观察指标:应用Western blot和反转录-聚合酶链反应检测培养0,3,7,10,14 d的内皮祖细胞中AC133,vWF,P13K,Akt蛋白和mRNA表达水平.结果:经Western blot和反转录-聚合酶链反应检测,AC133在培养0 d表达最强,3 d有弱表达,7,10,14 d几乎没有表达(P < 0.05):vWF在堵养过程中表达强度没有明显变化(P>0,05):P13K和Akt在培养0 d表达最强,3 d表达稍弱,随着培养时间的延长,表达逐渐减弱.P13K/Akt与AC133表达趋势一致.结论:在内皮祖细胞分化为内皮细胞过程中,可能有信号传导通路PI3K/Akt的参与.     

EGFR/PI3K/Akt细胞信号传导通路与肿瘤

表皮生长因子受体(EGFR)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB,也称Akt)信号通路是生物体内一条非常重要的生存信号通路。EGFR通过二聚化后刺激Ras蛋白,导致磷酸化级联反应的发生来激活PI3K/Akt信号通路,从而引起肿瘤的发生发展。本文从EGFR/PI3K/Akt信号传导通路对肿瘤的调节机制等多个方面综述了EGFR/PI3K/Akt信号通路与肿瘤的关系。     

Ras/MAPK与PI3K/Akt信号转导通路及其相互作用

Ras/MAPK通路和PI3K/Akt通路是膜受体信号向细胞内转导的重要途径,它们调节着细胞凋亡、生长以及一些重要基因的表达。在不同的细胞类型、不同的细胞分化时期、不同的实验条件下,PI3K/Akt通路和Ras/MAPK通路之间的相互作用都会十分明显地表现在这两条通路的不同阶段,这些为白血病和其他肿瘤的新治疗方案提供了重要的理论依据。现将PI3K/Akt和Ras/MAPK通路及其相互作用综述如下。     

微电场对胎盘滋养细胞迁移/侵袭相关信号通路活性的影响

目的探讨滋养细胞迁移/侵袭相关促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶(MAPK/ERK),磷酸肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)和蛋白酪氨酸激酶/信号转导和转录活化因子3(JAK/STAT3)信号传导通路在微电场刺激下的活化水平。方法将胎盘滋养细胞用场强为150mV/mm的直流微电场加以刺激,通过蛋白质印迹法(Western blot)测定电刺激前和后各时间点滋养细胞MAPK/ERK、PI3K/Akt和JAK/STAT3信号传导通路相关活性分子的活化水平。滋养细胞在加电前分别用MAPK抑制剂PD980599(100μmol/L)和Akt抑制剂LY294002(20μmol/L)处理1h,在上述相应含抑制剂的培养基中用场强为150mV/mm直流微电场刺激5h,观察抑制剂对微电场刺激细胞行为的影响。结果 Western blot结果显示,滋养细胞在150mV/mm微电场作用下,p42/44MAPK Thr202/Thr204位点、Akt Ser473位点于5min开始活化,10~60min内逐渐加强,STAT3S727位点在微电场作用下上述各时间点无明显磷酸化水平改变。相应信号通路抑制剂处理后滋养细胞对微电场刺激的应答反应均受到明显抑制。结论微电场对滋养细胞迁移/侵袭功能的影响与MAPK/ERK、PI3K/Akt信号通路的活化有关。     

黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞PI3K/Akt/eNOS信号通路的影响

背景：前期研究证实黄芪通过P38MAPK通路促进内皮祖细胞增殖,其影响是否通过PI3K/Akt/eNOS途径实现？目的：观察黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞蛋白激酶B、内皮型一氧化氮合酶表达的影响。方法：采用密度梯度离心法获取糖尿病患者外周血单个核细胞,培养7d后鉴定内皮祖细胞。观察0,50,200,800,3200,6400mg/L黄芪多糖分别干预6,12,24,48h对内皮祖细胞影响的量效和时效关系;用黄芪多糖及黄芪多糖与PI3K抑制剂LY294002联合干预糖尿病患者内皮祖细胞,Western blot检测磷酸化Akt及磷酸化内皮型一氧化氮合酶的表达水平。以未进行任何处理健康人内皮祖细胞作为对照组。结果与结论：糖尿病患者内皮祖细胞的增殖能力较对照组明显下降（P〈0.05）。黄芪多糖显著增加糖尿病患者内皮祖细胞的增殖能力,当黄芪多糖在200～800mg/L质量浓度范围,干预6～24h可呈时间及剂量依赖性增强内皮祖细胞的增殖能力（P〈0.01）,并呈剂量依赖性升高内皮祖细胞磷酸化Akt及磷酸化内皮型一氧化氮合酶的表达（P〈0.05）;PI3K抑制剂LY294002能阻断黄芪多糖诱导的Akt、内皮型一氧化氮合酶的磷酸化（P〈0.05）。说明黄芪多糖通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路促进内皮祖细胞增殖和向内皮细胞的分化。