类风湿关节炎关节滑膜细胞中IL-18表达及意义

取类风湿关节炎（RA）患者的关节滑膜40份（RA组）及外伤后患者的关节滑膜40份（对照组）,用胶原酶消化培养法培养至3-8代,用免疫组化法检测滑膜细胞IL-18表达,用酶联免疫吸附检测细胞培养上清液中IL-18水平。结果RA组滑膜细胞及上清液中IL-18分泌量明显高与对照组（P〈0.05）。认为IL-18高表达参与RA发病,可作为临床治疗的靶点之一。     

类风湿关节炎患者滑膜、滑液和血浆中PAI的检测及其临床意义

目的 检测Ⅰ型和Ⅱ型纤深酶原激活物抑制剂（ＰＡＩ－１和ＰＡＩ－２）在类风湿关节炎（ＲＡ）患者滑膜组织中的定位和表达,同时测定ＲＡ患者滑液和血浆中ＰＡＩ－１的含量和活性,并分析其临床意义。方法 运用免疫组织化学方法检测了２４例ＲＡ、１８例骨关节炎（ＯＡ）和６例正常滑膜组织中ＰＡＩ－１和ＰＡＩ－２的定位及其表达;采用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法测定４６例ＲＡ和８例ＯＡ患者血浆、１４例ＲＡ滑液和１２例正常对照     

血管内皮细胞生长因子在骨关节炎患者膝关节滑膜和滑液中的表达及其意义

目的 检测不同阶段的骨关节炎患者膝关节滑膜组织和滑液中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况,评价VEGF作为进展期骨关节炎的标志的可行性。方法 临床收集膝关节镜或关节置换手术患者的滑液和滑膜组织,根据X线平片的K-L分级进行分组。以Kellegren-Lawrence (K-L)分级均为0级的单纯膝关节半月板损伤的患者作为对照组。酶联免疫吸附测定( ELISA)法检测各组滑液中VEGF的含量,免疫组织化学染色方法检测VEGF在滑膜组织中的原位表达。统计学方法采用方差分析。结果 骨关节炎滑膜组织普遍存在不同程度的炎症,滑膜色泽变暗红,组织增生,甚至呈绒毛样改变。免疫组织化学染色显示,VEGF在滑膜衬里层及血管平滑肌细胞表达。2～4组的滑液中VEGF水平逐级增高,从(1181±116)、(1632±140)到(2252±216) pg/ml,明显高于对照组(648±129) pg/ml,差异均有统计学意义（P＜0.01）;免疫组织化学阳性细胞分数对照组和第2～4组分别为(5±4)％和(9±4)％、(16±6)％、(21±6)％,差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 关节滑膜产生的VEGF参与了骨关节炎软骨损害的病理过程,滑液中VEGF水平的持续升高可作为判断骨关节炎病情活动的一个指标。     

类风湿关节炎患者外周血、滑液及滑膜组织中自然杀伤细胞的特征

目的探讨自然杀伤细胞（NK）在类风湿关节炎（RA）中的特征以及在疗效判断中的作用。方法采用流式细胞仪在单个细胞水平分析RA患者外周血、滑液与滑膜组织中NK细胞的数量。分析NK细胞中信号分子的改变以及产生细胞因子的能力，观察经肿瘤坏死因子（TNF）单克隆抗体治疗后RA患者外周血中NK细胞数量的变化与疗效之间的相关性。结果与健康对照者相比，RA患者外周血中CD3^-CD56^＋NK细胞的数量显著减少（8．95±3．72vs.5．31±5．07，P〈0．05）。RA患者滑液与滑膜组织中CD3^-CD56^＋、CD3^-CD247^＋NK细胞的数量均显著少于相应的外周血（P〈0．05），同时这些细胞中信号分子CD247表达的强度也显著降低。IL-12联合IL-18刺激使1．4％的RA外周血单个核细胞产生干扰素γ，其中1．1％为NK细胞产生；肉豆蔻酸酯和钙离子载体可以使15．33％的单个核细胞产生干扰素γ，其中13．87％为T淋巴细胞产生，NK细胞占1．47％。经TNF单克隆抗体治疗14周后，临床判定为良好反应和中度反应的5例患者中4例外周血中NK细胞数目增加，而治疗反应差的2例患者中NK细胞数量增加或减少各1例。结论RA患者循环与炎症部位中NK细胞的数量显著减少，这些细胞的信号传导和细胞因子产生能力低下；NK细胞的低下状态与所处环境中的炎症程度有关，TNF单克隆抗体治疗在改善患者疾病活动性的同时，使外周血中NK细胞呈增加趋势，NK细胞可能成为疗效判断的一项指标。     

硫氧还蛋白5在类风湿关节炎患者滑膜组织滑液及血液中表达的研究

目的 在蛋白和mRNA水平上进一步研究硫氧还蛋白5(TXNDC5)在类风湿关节炎(RA)患者滑膜和血液中的表达水平与临床指标的关系,探讨该基因对RA的病理作用.方法 用免疫组织化学法、免疫荧光定量分析、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白免疫印迹定量分析TXNDC5在RA滑膜中的表达水平;以骨关节炎(OA)、系统性红斑狼疮(SEE)、强直性脊柱炎(AS)及健康人为对照,用夹心酶联免疫吸附法(Sandwich-ELISA)分析TXNDC5在RA患者血液和滑液中的表达水平.采用单因素方差分析,LSD检验、Spearman相关分析进行统计学处理.结果 免疫组织化学法和免疫荧光定量分析显示TXNDC5在RA滑膜组织中高表达(100%,40±9),在OA滑膜中无表达,在AS滑膜中表达量(200%.4±4)也较低.实时定量PCR和Western blotting均证实TXNDC5在RA滑膜中高表达(P均<0.01).SandwichELISA显示,TXNDC5在RA患者血液及滑液中高表达(A值=1.31±0.37),但在OA、SEE、AS以及健康人低表达或无表达(P均<0.05).RA血液中TXNDC5的水平(A值=0.8185±0.299)与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平存在正相关(r=0.350,P=0.027).结论 TXNDC5在RA滑膜和血液中表达量明显升高,可能通过刺激RA滑膜血管翳形成参与RA病理进程.     

类风湿关节炎患者血清滑液和滑膜组织白细胞介素-18的水平及意义

目的 研究类风湿关节炎（RA）患者血清、滑液中白细胞介素－18（IL－18）蛋白及滑膜组织IL－18mRNA表达水平，探讨其在RA致病中的作用。方法 应用双抗夹心酶免疫吸附（ELISA）法和细胞生物法分别测定RA患者血清、滑液中IL－28蛋白水平和生物活性，同时还检测NO、前列腺素E2的含量；有用半定量RT－PCR法检测膜组织IL－18m RNAG表达水平。以骨关节炎（OA）病人及因外伤截肢的正常人作对照。结果 RA患者血清、滑液中IL－18蛋白水平和生物活性均显著高于对照组，滑液中量及活化性比血清高；RA滑膜组织IL－18mRNA表达水平也明显高于对照组。结论 过度表达的IL－18参与了RA的致病过程,；选择性地抑制IL－18生物活性，将是RA治疗的新途径。     

关节滑液类风湿因子用于早期诊断类风湿关节炎的体会

类风湿关节炎是一种自身免疫性疾病。诊断该病时常以血清类风湿因子(RF)试验作为辅助检查,但其阳性反应并非类风湿关节炎所独有,如肝炎、50％的原发性干燥综合征、某些免疫性疾病(如全身性红斑狼疮等)、传染性单核细胞增多症及5～7％正常人群的RF也可能呈阳性反应。但在以上患者的关节滑液中RF不会呈阳性,本文检测了55例关节炎患者的血清和关节滑液类风湿因子,现将结果报告如下。 资料与方法:本组55例关节炎患者,男21例,女34例;年龄25～65岁,均排除了肝炎、红细胞性心内肌炎、黑热病、50％的原发性干燥综合征及某些免疫性疾病(如全身性红斑狼疮等)、传染性单核细胞增多症。全部病例均于上午8时抽取空腹血2ml,离心后行血清RF实验;抽关节液0.5～1ml做滑液RF试验。将滑液(或血清)放入56℃孵箱中30分钟灭     

类风湿关节炎患者血清和滑液中ShGITR的变化及其临床意义

目的探讨类风湿关节炎（RA）和可溶性人糖皮质激素诱导型肿瘤坏死因子受体（shGITR）的关系。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）测定RA患者（37例）、骨关节炎（OA）患者（20例）及健康人（30名）血清和RA患者（21例）、OA患者（20例）滑液中shGITR的水平，并分析血清和滑液中shGITR的浓度变化与疾病炎性指标的相关性。结果RA患者血清中shGITR水平高于OA患者及健康人群（P均〈0．05）。RA滑液中shGITR水平比血清中高（P〈0．05）。在RA患者中，血清、滑液shGITR水平与红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（CRP）、关节压痛数、关节肿胀数、晨僵时间呈正相关（P〈0．05或0．01）；与类风湿因子（RF）、病程无明显直线相关关系，血清shGITR水平与抗环瓜氨酸肽抗体（抗ccP）无明显直线相关关系，而滑液shGITR水平与抗CCP抗体呈直线正相关（P〈0．05）。结论RA患者血清和滑液中shGITR水平增高，且与疾病活动呈正相关。测定血清shGITR水平可作为检测RA疾病活动的实验室指标。     

类风湿关节炎患者滑膜树突状细胞的研究

目的　探讨滑膜树突状细胞在类风湿关节炎 (RA)中的作用。方法　采用免疫组织化学方法观察 2 5例RA滑膜中HLA DR抗原阳性表达细胞、S 10 0阳性CD1a阳性的树突状细胞(DC)的多少和分布情况。结果　 2 3例RA滑膜细胞HLA DR表达阳性 ,19例S 10 0表达阳性 ,16例CD1a表达阳性 ,其阳性例数的百分率均高于对照组。RA滑膜中HLA DR、S 10 0和CD1a标记阳性细胞数均明显高于对照组 ,其差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。结论　RA滑膜中DC和被激活的DC及HLA DR阳性细胞的存在和增多可能在RA病变局部递呈自身抗原的过程中起重要的作用 ,是RA自身免疫异常的重要的始发因素     

表皮生长因子对类风湿关节炎滑膜细胞的作用

目的 观察表皮生长因子（ＥＧＦ）对类风湿关节炎（ＲＡ）滑膜细胞的作用和细胞中有丝分裂素激活的蛋白激酶（ＭＡＰＫ）的激活情况。方法 ３～５代体外培养的ＲＡ滑膜细胞,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入检测ＥＧＦ对细胞ＤＮＡ合成的影响;ＥＧＦ刺激后裂解细胞,收获蛋白,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＭＡＰＫ的活化。结果 ＥＧＦ刺激组和对照组每分钟计数值差异有显著性（Ｐ〈０．００１）。ＥＧＦ能引起细胞内明显ＭＡＰＫ活化。结论     

血清与关节滑液葡萄糖-6-磷酸异构酶检测在类风湿关节炎中意义的研究

葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)是一种多功能的蛋白分子,存在于各种细胞胞质中,参与糖酵解和糖异生,也作为一种细胞因子或生长因子分泌于细胞外,促进细胞增殖和迁移.近来GPI与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的关系成为研究热点,但GPI在RA关节滑液中的检测及RA患者血清与关节滑液中的GPI水平关系鲜见报道.本研究通过检测RA患者血清与关节滑液中的GPI水平,旨在探讨其在RA中的意义,现将结果报告如下.     

类风湿关节炎患者血管内皮生长因子mRNA的表达

目的　以类风湿关节炎 (RA)患者血管内皮生长因子 (VEGF)在外周血单个核细胞(PBMC)mRNA的表达为研究对象 ,探讨VEGF与RA病情的关系和VEGF在RA中的病理作用。方法　应用半定量RT PCR方法检测 18例RA患者和 12名健康人PBMCVEGFmRNA的表达。结果　①RA患者和健康人PBMCVEGFmRNA的表达以与内参照 β Actin的比值计算 ,RA组 (6 4±6 4 )显著高于正常对照组 (1 5± 1 0 ) ,P =0 0 0 5。②晚期RA患者的PBMC表达VEGFmRNA (8 4± 8 7)高于早期患者 (4 5± 2 0 ) ,P =0 0 2 5 ;且高度活动组的患者 (11 0± 9 8)高于轻、中活动组的患者 (4 2± 2 0 ) ,P =0 0 0 2。结论　①RA患者PBMCVEGF的mRNA表达增强 ;②RA患者PBMC的VEGFmRNA表达在晚期患者和高活动性患者增强更显著。本研究提示 ,VEGF作为重要的血管增生的促进因子参与到RA的病理过程中     

类风湿关节炎滑膜转化生长因子β1表达及病理改变的关系

目的 了解转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）在类风湿关节炎（ＲＡ）滑膜组织中的表达及与病理改变的关系,以探讨ＴＧＦβ１在ＲＡ发病中的作用。方法 采用免疫组织化学ＬＳＡＢ法检测了５３例（其中２６例ＲＡ,２０例其他关节炎和７例正常人）滑膜组织中ＴＧＦβ１染色强度及面积的定量分析。结果 ＲＡ滑膜衬里层ＴＧＦβ１阳性细胞数及阳性染色强度、衬里下层染色强度及阳性面积均较正常组和其他关节炎组明显增强（Ｐ〈０．０５）;ＲＡ滑膜衬里层细胞层数、衬里下层炎症细胞的浸润均较对照组明显增多;活动期ＲＡ滑膜衬里层和衬里下层ＴＧＦβ１染色均较静止期明显增强,并且活动期滑膜炎中,慢性活动期、肉芽组织增生期较新近活动期衬里下层染色强度及阳性面积明显升高（Ｐ〈０．０５）。结论 ＲＡ滑膜ＴＧＦβ１蛋白合成、分泌增多,并且增多的ＴＧＦβ１可能与ＲＡ滑     

类风湿关节炎患者外周血及滑液CC趋化因子配体5的表达

目的 探讨CC趋化因子配体5（CCLS）在类风湿关节炎（RA）患者外周血及滑液中的表达。方法 用酶联免疫吸附法测定28例RA患者血清、滑液、外周血白细胞和滑液炎性细胞CCL5水平，并与骨关节炎（OA）进行对照；RA患者滑膜组织CCL5表达采用免疫组织化学法。结果 RA患者血清和滑液CCL5水平均明显高于OA患者．且RA患者滑液CCL5水平又明显高于其血清。RA患者滑液炎性细胞CCL5水平较其外周血白细胞高，滑膜组织表达CCL5亦增高，并与滑膜炎程度呈显著性正相关。结论 滑液炎性细胞及滑膜组织是RA患者CCL5的主要来源．CCL5在RA滑膜炎病理过程中发挥着重要作用。     

RANK RANKL和骨保护素在类风湿关节炎患者外周血和滑液中表达的研究

目的研究骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子(RANK)及其配体(RANKL)在类风湿关节炎(RA)患者外周血和滑液中的表达,探讨RANKL、RANK和OPG在RA骨破坏中的意义。方法收集活动期RA患者治疗前后外周血、滑液和健康对照,以间接免疫荧光标记,流式细胞术检测RANK、RANKL和OPG在外周血和滑液中CD3+T淋巴细胞、中性粒细胞和CD14+单核细胞的表达率及平均荧光强度。结果①RA组治疗前后外周血RANK、RANKL和OPG在CD3+T淋巴细胞、中性粒细胞和CD14+单核细胞上的表达率差异无统计学意义(P>0.01);RANK的表达强度治疗后高于治疗前(P<0.01)。②RA组外周血CD3+T淋巴细胞上RANKL及RANK的表达率和表达强度明显低于滑液,OPG的表达则高于滑液(P<0.01),RANKL/OPG比率明显增高(P<0.01)。结论RANK表达强度的改变提示其可能与RA炎症的发展和转归有关,而活化的CD3+T淋巴细胞可能通过上调RANK、RANKL的表达,下调OPG表达参与RA破骨细胞的分化和骨损伤的调节机制。     

维生素D结合蛋白在类风湿关节炎滑膜中表达的研究

目的 本研究通过蛋白质组学的方法比较类风湿关节炎(RA)、骨关节炎及强直性脊柱炎(AS)滑膜组织中表达的蛋白,筛选RA滑膜中表达特异性下调的蛋白,并通过单核苷酸多态性(SNPs)分析方法分析靶蛋白编码基因对RA的遗传易感性.方法 提取RA( 10例)、骨关节炎(10例)及AS(10例)滑膜组织总蛋白,每类疾病的样本等比例混合,然后用2-D凝胶电泳进行分析,对RA样本中表达量明显低于骨关节炎和AS的蛋白进行飞行时间质谱鉴定,检测结果用蛋白印迹法验证.用Taqman方法对中国人群中267例RA患者和160名健康对照的维生素D结合蛋白(VDBP)编码基因的标签SNPs进行基因分型,并扩大样本量(389例RA和371名健康对照)验证分型结果.采用单因素方差分析和Fisher确切概率法进行检验.结果 蛋白质组学研究发现,在RA患者滑膜中VDBP表达量明显下降,蛋白印迹法也验证了这一结果.基因分型研究发现,SNP位点rs2282679与RA密切相关(P=0.026 794).进一步扩大样本实验也得出了一致结果,rs2282679与RA有相关性[比值比(OR )=0.678 639,95％可信区间(CI)0.541 113～0.851 118,P=0.000 776].结论 与骨关节炎和AS患者相比,VDBP在RA患者滑膜中表达量明显下降.VDBP基因上的SNP位点rs2282679与RA有相关性.VDBP在RA中的表达下调及其基因的遗传效应显示VDBP可能参与RA的病理过程.     

CXCR3 CCR5及其配体在类风湿关节炎患者滑液和外周血中的表达

目的 在单细胞水平上，研究类风湿关节炎（RA）患者滑液及外周血中单核/巨噬细胞，T淋巴细胞上趋化因子受体CCR5及ＣＸＣＲ３的表达。并测定CCR5的配体MIP-1β。激活正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）及T细胞亚群，探讨其在RA发病中的作用机制。方法 分离RA患者滑液单个核细胞（SFMC），外周血单个核细胞（PBMC）及正常人PBMC（对照），以三色荧光素标记物进行流式细胞术分析CD14^ ,CD3^ 细胞膜表面趋化因子受体CCR5，CCR3及细胞内趋化因子MIP-1β，RANTES和细胞因子白细胞介素（IL）-4，干扰素（IFN）-γ的表达率。结果 与PBMC相比，RA患者SFMC中的单核/巨噬细胞，T细胞上趋化因子受体CCR4及CEXR3表达显著增高；且单核/巨噬细胞分泌趋化因子MIP-1β，RANTES的百分比较高；SFMC中Th1细胞亚群（即IFN-γ^ T细胞）的表达率与滑液及外周血中T淋巴细胞上趋化因子受体CCR4及CXCR3的表达率显著相关。结论 趋化因子受体CCR5^ ,CXCR3^ 的单核/巨噬细胞，T细胞积聚在RA患者的病变关节内，且单核/巨噬细胞分泌较多趋化因子；CCR5，CXCR3可能参与调节细胞移动。与Th1细胞亚群及其“伙伴”细胞在RA关节内积聚有关；可能与RA的发病相关。     

白细胞介素-23在类风湿关节炎滑膜中的表达及意义

目的白细胞介素（IL）-23由IL-23p19和IL-12p40亚单位组成，它在一些自身免疫疾病发生过程中起着重要的作用。研究分析类风湿关节炎（RA）患者关节滑膜组织中IL-23p19蛋白及其mRNA的表达，旨在探讨其在RA发病中的意义。方法应用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学方法检测RA患者关节滑膜组织中IL-23p19基因和蛋白的表达。并与骨关节炎（OA）患者和健康人作对照研究。结果IL-23p19mRNA和蛋白在RA患者关节滑膜组织中表达明显增高．而在OA患者中低表达，正常对照组中无表达。结论IL-23p19在RA关节滑膜组织中高表达．提示IL-23可能直接参与了RA的发病过程。     

可诱导共刺激因子在类风湿关节炎外周血和关节滑液细胞的表达

目的探讨可诱导共刺激因子(ICOS)在类风湿关节炎(RA)外周血和关节滑液的表达和作用。方法选择RA患者45例,年龄18-71岁,平均(48±16)岁,病程0．5～17年,平均(6±7)年,男性9例,女性36例(80％)。取新鲜抗凝外周血单个核细胞(PBMC)行ICOS、CD45RO和CD45RA在CD4~ 、CD8~ T淋巴细胞亚群的双色和或三色表达百分比。其中15例同时行关节液单个核细胞(SFMC)进行相同的检查。与RA患者年龄和性别匹配的正常体检者56名作为对照。结果①CD4~ ICOS~ /CD4~ 在RA的PBMC较正常对照组明显下降(P=0．0175),在RA的SFMC非常显著升高(与RA的PBMC比较,P=0．0020)；②CD8~ ICOS~ /CD8~ 在RA患者的PBMC较正常对照组明显下降(P=0．0193),在RA的SFMC升高但差异无统计学意义(与PBMC比较,P=0．0933)；③CD45RO~ ICOS~ /CD4~ 在RA的SFMC较PBMC显著升高(P= 0．0330),CD45RO~ ICOS~ /CD8~ 在SFMC较PBMC也明显升高(P=0．0588),可能扩大例数后能达到有统计学意义的显著升高；④B淋巴细胞上的CD19~ ICSOL~ /CD19~ 在RA的PBMC升高(与对照相比差异无统计学意义),而在SFMC则降低(与PBMC相比,P=0．0123)。⑤将RA患者按病情分为活动与非活动,非活动性RA外周血细胞CD19B细胞表达的ICOSL(ICOS配体)百分比较活动性RA非常显著地升高(P=0．0016)。其他各组T细胞表达的ICOS没有显著性变化。结论RA活化的T淋巴细胞主要集中于关节液中,故无论是CD4~ ,还是CD8~ 细胞,表达ICOS及其与CD45RO记忆细胞三色表达均较血液有非常显著地升高,而且是非常敏感的指标。而关节液B淋巴细胞表面的ICOSL较血液中下降,尤其是活动组较非活动组非常显著地下降。说明RA关节局部发生了由ICOS介导的免疫反应,并可能参与了关节的破坏活动。