苦参碱抑制宫颈癌HeLa细胞增殖作用及机制

目的探讨苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以不同浓度（0.5、1.0、1.5、2.0g/L）的苦参碱分别处理HeLa细胞24、48、72h后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,WesternBlot方法检测培养48h细胞中真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）、4E结合蛋白1（4E-BP1）蛋白表达情况;1.0g/L的苦参碱作用HeLa细胞1、3、6、12h后,Western Blot方法测其eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平。结果苦参碱明显抑制HeLa细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性：在相同时间内,随着苦参碱浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高（F=235.035,P〈0.05）;在同一浓度时,随着苦参碱作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高（F=320.207,P〈0.05）;2.0g/L苦参碱作用72h对HeLa细胞增殖抑制率最大,为（65.30±2.17）%。不同浓度苦参碱处理HeLa细胞48h后,eIF4E、4E-BP1蛋白的表达均无明显变化（F=0.171、0.932,P〉0.05）。1.0g/L苦参碱作用于HeLa细胞不同时间后,细胞中eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平均降低,且呈时间依赖性（F=43.48、107.23,P〈0.01）。结论苦参碱可以明显抑制体外培养宫颈癌HeLa细胞的增殖,其作用可能是通过抑制eIF4E以及4E-BP1的磷酸化,从而抑制蛋白翻译来实现的。     

苦参碱对人子宫内膜癌细胞增殖抑制的作用机制探究

目的探讨苦参碱对人子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法实验对象为人子宫内膜癌细胞株Ishikawa(常规培养),采用MTT法检测不同浓度苦参碱(0、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml)作用24 h、48 h后对Ishikawa细胞增殖抑制率,采用流式细胞技术检测苦参碱对Ishikawa细胞周期的影响,采用Western Blot技术检测苦参碱对Ishikawa细胞血管内皮生长因子(VEGF)、核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达的影响。结果随着苦参碱药物浓度的增加,对Ishikawa细胞增殖抑制率明显升高,呈一定的剂量依赖性;苦参碱作用24 h IC50为44.655μg/ml,苦参碱作用48h IC50为20.664μg/ml。Ishikawa细胞接受不同浓度苦参碱处理48 h后,G1期细胞百分比的增高情况明显,G2期以及S期细胞百分比降低(P0.05),且随着苦参碱药物浓度的增加,变化越显著(P0.05)。不同浓度苦参碱可有效抑制Ishikawa细胞VEGF、NF-κB p65蛋白表达(P0.05),且随着浓度的增高,Ishikawa细胞VEGF、NF-κB p65蛋白表达越低(P0.05)。结论苦参碱能够对人子宫内膜癌细胞产生明显的抑制,而且具有一定程度上的剂量依赖性,其可能具有将肿瘤细胞阻滞于G1期的作用机制,抑制VEGF、NF-κB p65蛋白表达。     

二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤作用

目的以宫颈癌Hela细胞为研究对象,探讨二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤作用以及二甲双胍联合卡铂是否对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制有协同作用。方法将宫颈癌Hela细胞分为空白对照组、不同浓度(0.01、0.5、1、5、10、20mmol/L)二甲双胍组,采用MTT法检测不同浓度二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的增殖活性的影响;并应用AO/EB染色和流式细胞仪研究二甲双胍的体外抗肿瘤机制;将1.0mmol/L及5.0mmol/L的二甲双胍与25mg/L、50mg/L的卡铂单一或联合作用宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测各组细胞OD值,计算细胞增殖抑制率。结果二甲双胍对宫颈癌Hela细胞体外增殖能力有明显的抑制作用,且呈明显的浓度依赖性和时间依赖性;与对照组比较,荧光显微镜下计数发现不同浓度二甲双胍作用宫颈癌Hela细胞24h后,随着二甲双胍浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高(P0.05),而以不同浓度(0、1、5mmol/L)二甲双胍培养宫颈癌Hela细胞48h后,流式细胞仪检测实验组Hela细胞处于G0/G1期比例升高,S期细胞比例下降,差异具有统计学意义(P0.05);二甲双胍联合卡铂对抑制宫颈癌Hela细胞增殖具有协同作用,且随着二甲双胍浓度的增加,细胞增殖抑制率增加(P0.05)。结论证实二甲双胍对体外宫颈癌Hela细胞增殖有明显的抑制作用,它是通过诱导细胞凋亡、细胞周期G0/G1期阻滞来实现的;二甲双胍与卡铂联合应用能够增强卡铂对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用。     

miRNA-21对宫颈癌Hela细胞顺铂化疗增敏作用的研究

目的探讨microRNA-21 (miRNA-21)对宫颈癌Hela/DDP耐药的影响及其相关机制。方法实时荧光定量PCR(Real-PCR)检测Hela细胞、Hela/DDP、转染后miR-21-siRNA组及miR-21-neg中miRNA-21的表达量。MTT法检测顺铂(DDP)对Hela/DDP增殖的影响;流式细胞仪分析Hela/DDP细胞周期及凋亡率;Western blot检测顺铂处理过的Hela/DDP中PTEN蛋白的表达。结果在Hela/DDP组中miRNA-21明显高于Hela组,差异具有统计学意义(P0.05);转染miRNA-21siRNA后,Hela/DDP中miRNA-21明显低于空白对照组及阴性对照组,差异具有统计学意义(P0.05);与空白对照组及阴性对照组相比,顺铂作用Hela/DDP后,转染miRNA-21 siRNA组细胞增殖抑制率、凋亡率及PTEN蛋白表达水平均升高,并呈现G0/G1期阻滞作用,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-21可抑制Hela/DDP细胞增殖、阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡,进而提高Hela/DDP细胞对顺铂的敏感性,可能与宫颈癌Hela/DDP细胞中PTEN蛋白合成增加有关。     

没食子酸对人宫颈癌细胞株Hela细胞生物学行为的影响

目的探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人宫颈癌细胞株Hela细胞生物学行为及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达的影响。方法取人宫颈癌Hela细胞进行培养分别给予0μmol、10μmol、20μmol、30μmol、40μmol EGCG进行处理。采用CCK8法、流式细胞法、Transwell法分别检测不同剂量EGCG处理下细胞增殖、凋亡、侵袭力;采用RT-PCR、Western Blot法检测细胞VEGF、MMP-9基因表达情况。结果①EGCG处理后,Hela细胞增殖抑制率、凋亡率升高,侵袭细胞数减少(P <0.05);随着EGCG剂量的升高,Hela细胞增殖抑制率、凋亡率、侵袭细胞数升高或降低幅度升高(P <0.05)。②未经EGCG(处理浓度=0)组别Hela细胞VEGF、MMP-9基因mRNA、蛋白呈高表达,处理组别细胞VEGF、MMP-9基因mRNA、蛋白表达量降低,随着处理浓度的升高,其表达量降低幅度更大(P <0.05)。结论 EGCG可呈剂量依赖性抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖及侵袭,促使其凋亡,对于恶性生物学行为有较好的抑制效果,VEGF、MMP-9等基因表达的抑制可能是其机制之一。     

雷公藤红素下调HL-60细胞P-Akt与Cyclin D1蛋白表达及其诱导细胞凋亡的效应

本研究探讨雷公藤红素诱导HL-60细胞凋亡及其可能的作用机制。以不同浓度雷公藤红素(0.25-8.0μmol/L)分别作用于HL-60细胞24-72小时,采用MTT法检测细胞增殖活性;TUNEL荧光染色、流式细胞术观察雷公藤红素对HL-60细胞凋亡及周期的影响;Western blot、RT-PCR法分别检测雷公藤红素对HL-60细胞内Akt(P-Akt)及其下游分子Cyclin D1的蛋白、基因的表达水平。结果表明,雷公藤红素能明显抑制HL-60细胞增殖,具有浓度依赖和时间依赖性。此外,雷公藤红素以浓度依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡,并伴随明显的凋亡细胞形态学改变。雷公藤红素的凋亡诱导可能与其诱导HL-60细胞周期阻滞于G0/G1期有关。雷公藤红素对P-Akt及CyclinD1蛋白及基因表达水平均有不同程度的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效和时效关系。结论:雷公藤红素明显抑制HL-60细胞的增殖,并诱导其凋亡,其抗白血病效应可能与其下调P-Akt和Cyclin D1蛋白表达有关。     

放疗对宫颈癌细胞系的增殖抑制及抑癌基因p16、MGMT表达的影响

目的研究放疗对宫颈癌细胞系的增殖抑制及抑癌基因p16、O6-甲基鸟嘌呤-DNA转移酶(MGMT)表达的影响。方法培养2种人宫颈癌细胞系Hela、C33A,分为对照组和辐照组,正常培养作对照组(Control),接受X射线辐照为辐照组,辐照剂量为4 Gy;采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白印记(Western Blot)检测细胞中凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)及抑癌基因p16、MGMT的表达。结果与对照组相比,辐照组宫颈癌Hela、C33A细胞增殖活性、Bcl-2/Bax的表达显著下降,凋亡率、p16、MGMT的表达显著上调(P 0. 05)。结论放疗可通过上调宫颈癌Hela、C33A细胞中p16、MGMT的表达,下调Bcl-2/Bax的表达,抑制细胞增殖,促进其凋亡。     

PATZ-P53相互作用参与调控宫颈癌细胞凋亡与侵袭的分析

目的探讨PATZ-P53相互作用参与调控宫颈癌细胞凋亡与侵袭的机制。方法宫颈癌Hela细胞株分别给予PATZ处理(人重组PATZ终浓度分别为10 ng/ml,100 ng/ml)与对照处理(含血清的DMEM培养基,不加入任何试剂)。各组细胞均在培养48 h后,采用MTT法检测宫颈癌细胞增殖活性,采用流式细胞仪检测凋亡指数,采用侵袭小室检测侵袭情况,采用Western Blot方法检测P53、Casepase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,PATZ处理48 h后,随着PATZ浓度的增加细胞增殖活性增大,且不同组别的细胞增殖活性比较差异有统计学意义(P 0. 05);随着PATZ浓度的增加细胞凋亡指数减小,不同组别的细胞凋亡指数比较差异有统计学意义(P 0. 05);随着PATZ浓度的增加细胞侵袭穿透指数增加,不同组别的细胞侵袭穿透指数比较差异有统计学意义(P 0. 05); PATZ能够呈现剂量依赖性的抑制Casepase-3与P53蛋白,不同组别的Casepase-3与P53蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(P 0. 05)。结论 PATZ-P53相互作用能抑制宫颈癌细胞凋亡,促进细胞侵袭与增殖,抑制Caspase-3蛋白的表达,从而发挥促癌作用。     

Fascin shRNA通过Notch1信号通路调控结直肠癌细胞的生长

目的:研究聚束蛋白(Fascin)shRNA对结直肠癌细胞生长的影响。方法:结直肠癌细胞HT29感染FascinshRNA和shRNAcontrol慢病毒,real-timePCR和Western印迹法分别测定细胞中FascinmRNA和蛋白的表达水平,同时用Western印迹法检测细胞中的Notch1蛋白水平。用Notch1信号通路抑制剂DAPT处理下调Fascin后的HT29细胞,MTT测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹法检测周期蛋白p27、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平。结果:Fascin shRNA慢病毒感染后的细胞中Fascin转录和表达水平均降低,而shRNA control慢病毒感染对细胞中的Fascin表达水平没有影响。沉默Fascin的细胞增殖能力降低,细胞G0/G1比例升高,细胞中Cyclin D1蛋白水平降低,p27蛋白水平升高。沉默Fascin能够降低细胞中Notch1蛋白水平,并且Notch1信号通路抑制剂DAPT可以协同沉默Fascin,进一步抑制结直肠癌细胞增殖,阻滞结直肠癌细胞周期,减少CyclinD1蛋白表达,促进p27蛋白表达。结论:FascinshRNA通过抑制Notch1信号通路阻碍结直肠癌细胞增殖,将细胞周期阻滞在G0/G1期。     

没食子酸对人食管癌细胞生长与凋亡的影响

目的:探究没食子酸(gallic acid,GA)对人食管癌细胞KYSE150增殖、迁移、侵袭及细胞周期与凋亡的影响。方法:用MTT、细胞划痕、transwell实验检测GA对KYSE150增殖、迁移及侵袭的影响,细胞凋亡和周期的影响,Western Blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达。结果:GA能抑制食管癌细胞的增殖;细胞的迁移和侵袭能力显著下降(均P<0.05);随着药物浓度增加,G0/G1期细胞比例递增,S期和G2/M期细胞比例递减,凋亡率增加(P<0.05);GA能降低细胞中Cyclin D1的表达(P<0.05)。结论:GA能抑制食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,能促进细胞凋亡,机制可能是通过影响Cyclin D1基因的表达使食管癌细胞阻滞于G0/G1期。     

LGR5对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制研究

目的探讨富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制。方法采用前瞻性研究,以宫颈癌细胞Hela为研究对象,构建过表达和敲低LGR5的细胞株,RT-PCR和Western blot检测LGR5表达。将转染pc DNA3.1-LGR5的Hela细胞作为LGR5组,以转染pc DNA3.1空载体的细胞记为pc DNA3.1组;将转染LGR5 siRNA细胞作为si LGR5组,以转染阴性对照siRNA细胞记为NC组。Western blot分别检测各组细胞中上皮间质标记物钙黏附蛋白E(E-cadherin)、钙黏附蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及Wnt/β-cadherin通路蛋白β链蛋白(β-catenin)和下游蛋白c-Myc、细胞周期蛋白(Cyclin D1)表达变化。Transwell实验检测各组细胞迁移侵袭能力变化。结果 Hela细胞中成功过表达和敲低了LGR5;与pc DNA3.1组相比,Hela细胞转染pc DNA3.1-LGR5后细胞中上皮标志物E-cadherin表达显著降低(P0.05),间质标记物vimentin、N-cadherin表达显著增加(P0.05)。与NC组相比,Hela细胞转染si LGR5后细胞中E-cadherin表达明显增加(P0.05),vimentin、Ncadherin表达明显下降(P0.05)。与pc DNA3.1组相比,Hela细胞过表达LGR5后细胞迁移侵袭能力、Wnt/β-catenin通路蛋白β-catenin及其下游基因c-Myc、Cyclin D1表达均显著增加(P0.05);而Hela细胞沉默LGR5后较NC组细胞迁移侵袭能力、Hela细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达均明显降低(P0.05)。结论过表达LGR5能够促进宫颈癌细胞Hela上皮间质转化和侵袭迁移,而干扰LGR5则抑制了细胞上皮间质转化和迁移侵袭,其中机制可能与LGR5调控Wnt/β-catenin信号转导有关。     

p21WAF1/GIP1基因转染人宫颈癌Hela细胞对顺铂敏感性的影响

目的 探讨转染p21^WAF1／GIP1基因（p21基因），对宫颈癌Hela细胞生长抑制作用及p21基因转染Hela细胞对顺铂敏感性的影响。方法 应用脂质体转染技术，将质粒peDNA3转入人宫颈癌Hela细胞中，经G418筛选，转染阳性克隆细胞连续传代培养，并采用中性红摄入法测定顺铂对p21基因转染人宫颈癌Hela细胞增殖抑制作用，流式细胞仪（FCM）检测细胞周期变化。结果 经G418筛选，Hela细胞全部死亡，转染质粒peDNA3的Hela细胞存活，并可连续传代。p21基因转染后，细胞生长明显受到抑制，细胞周期停滞于G1期，与对照组相比，细胞周期G1期比例明显增加。同时p2l表达阳性的Hela细胞对顺铂敏感性增强。结论 p2l基因转染能使Hela细胞出现生长抑制并对顺铂化疗作用敏感性明显增强。     

miR-421下调Bcl-XL诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的作用机制

目的探究miR-421在宫颈癌中的表达情况及其对细胞凋亡的作用机制。方法通过实时荧光定量核酸扩增检测miR-421在宫颈癌组织和癌旁正常宫颈组织中的表达情况。选取宫颈癌Hela细胞,并将miR-421 inhibitor、空白对照及miR-421 inhibitor+Bcl-XL转染Hela细胞,采用流式细胞术检测miR-421对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,双荧光素酶实验验证miR-421与B淋巴细胞瘤-XL(B cell lymphoma-XL, Bcl-XL)蛋白的靶向调节关系,Western Blot检测miR-421对Bcl-XL蛋白表达的影响。结果实时荧光定量核酸扩增检测结果显示,宫颈癌组织及癌旁正常宫颈组织的miR-421表达量分别为3.13±0.26、1.23±0.11,比较差异有统计学意义(P0.05)。流式细胞术检测结果显示,miR-421 inhibitor组与对照组细胞凋亡率分别为(2.63±0.13)%、(12.31±0.29)%,比较差异有统计学意义(P0.05)。双荧光素酶检测结果及Western Blot实验显示,抑制miR-421表达后,野生型Bcl-XL的荧光素酶活性受到明显抑制,而突变型Bcl-XL的荧光素酶活性影响不大,同时抑制miR-421表达后,Bcl-XL的蛋白表达水平也显著降低。结论 miR-421通过下调Bcl-XL以诱导宫颈癌Hela细胞凋亡。     

靶向β-catenin的siRNA对宫颈癌细胞恶性表型的影响

目的探讨靶向β-链蛋白（β-eatenin）的小干扰RNA（siRNA）对宫颈癌细胞Hela细胞功能的影响以及相关作用机制。方法脂质体介导转染β-catenin小干扰RNA（β-cateninsiRNA）敲低Hela细胞β-catenln的表达。MTT法检测转染后细胞增殖水平,流式法评价转染后细胞周期分布及凋亡变化,并结合Western印迹研究β-catenin在Hela细胞中的作用机制。结果体外转染β-catenin小干扰RNA能明显抑制Hela细胞增殖,诱导其凋亡,并且能够明显下调Bcl-2及CyclinD1蛋白水平表达,上调Bax蛋白表达水平。结论β-cateninsiRNA能明品柳制Hela绅晌毕长．β-catPnin可作为宫颈癌基因治疗的靶点。     

BML-111下调骨桥蛋白对脂多糖诱导的Hela细胞增殖的影响及其机制

目的:研究脂氧素类似物BML-111对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的宫颈癌细胞株Hela细胞增殖及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的影响。方法:分别用100、10、1、0.1μg/m L LPS刺激Hela细胞,MTT方法检测其对细胞存活率的影响;Western blot免疫印迹法检测LPS对Hela细胞OPN及p53蛋白表达的影响。Hela细胞分4组:(1)空白组;(2)LPS组;(3)LPS+BML-111组;(4)LPS+BML-111+Boc-2(BML-111受体FPR2/ALX的阻断剂)组。MTT方法检测BML-111对LPS诱导的Hela细胞存活率的影响;Western blot免疫印迹法检测BML-111对LPS诱导的Hela细胞OPN及p53(增殖指标)蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,100、10、1、0.1μg/m L LPS均能明显促进Hela增殖及OPN、p53蛋白表达(P<0.05),但不同浓度组间比较差异无显著性(P>0.05)。BML-111能明显抑制LPS诱导的Hela细胞存活率,并能抑制OPN及p53蛋白的表达,Boc-2能阻断这种效应。结论:BML-111能抑制LPS诱导Hela细胞增殖,其作用可能是通过与受体结合,进而抑制OPN下调p53实现。     

S1PR2拮抗剂JTE-013抑制白血病细胞增殖

目的:探讨鞘氨醇-1-磷酸受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2,S1PR2)特异性拮抗剂JTE-013对人慢性髓系白血病(CML)K562细胞增殖的影响。方法:将JTE-013(0,0.5,1,5,10,20μmol/L)分别作用于人慢性髓系白血病细胞系K562细胞24、48 h,采用CCK-8法检测细胞活力;用JTE-013(0,5,10,20μmol/L)处理K562细胞24 h,采用碘化丙啶(PI)DNA染色法检测细胞周期变化;采用Western blot检测细胞周期蛋白P21和Cyclin D1表达水平。结果:JTE-013呈浓度依赖性抑制CML细胞系K562细胞增殖(r=-0.971)。实验结果显示,随着JTE-013作用浓度的升高,K562细胞活力逐渐降低(r=-0.971),且这种增殖抑制作用是通过将K562细胞阻滞在G0/G1期来实现的。进一步对G_0/G_1期调控蛋白进行检测,发现随JTE-013处理浓度升高,周期蛋白P21表达逐渐升高(r=0.835),Cyclin D1蛋白表达逐渐减少(r=-0.803)。结论:S1PR2拮抗剂JTE-013可抑制人CML细胞系K562细胞增殖,可能是通过将细胞阻滞在G_0/G_1期有关。     

RNA干扰Ku70基因对宫颈癌Hela细胞放射敏感性影响的实验研究

目的观察ku70基因短干扰RNA(siRNA)对宫颈癌Hela细胞放射敏感性的影响。方法采用集落形成技术测定不同剂量射线照射对Hela细胞存活率的影响,观察Hela细胞对射线照射的敏感性。采用时定量PCR技术(quantitiv real time PCR,QRT-PCR)检测Ku70 mRNA水平表达。采用Western Blot免疫印记技术检测Ku70蛋白表达。采用RNA干扰(RNAi)技术抑制Hela细胞中Ku70蛋白的表达,观察Ku70蛋白表达下调对Hela细胞放射敏感性的影响。采用集落形成技术测定4.0 Gy射线照射对Hela细胞存活率的影响。进而分析Hela细胞对射线的放射敏感性。结果宫颈癌Hela细胞对1.0-4.0 Gy射线照射不够敏感,有相当高的辐射抗性。量效实验证实,1.0-6.0 Gy射线照射后,HeLa细胞中Ku70 mRNA及Ku70蛋白表达均明显增高。时效实验证实,4.0 Gy射线照射后8 h-72 h,HeLa细胞中Ku70 mRNA及Ku70蛋白表达均明显增高。本实验成功的构建了Ku70基因RNA干扰载体pSilencer-4.1-Ku70,稳定转染HeLa细胞后,有效抑制Ku70蛋白的表达。稳定转染pSilencer-4.1-Ku70干扰质粒并抑制Ku70蛋白表达后,HeLa细胞对射线照射的放射敏感性显著增高(P0.001)。结论 Ku70 siRNA有效下调Ku70 mRNA水平,抑制Ku70蛋白的表达,可明显提高Hela细胞对辐射的敏感程度。本研究结果还提示,Ku70基因可作为衡量宫颈腺癌辐射敏感性指标,为临床合理筛选患者进行放疗、预测放疗疗效提供一条适用途径。     

LY294002对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的:探讨2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮(LY294002)对多发性骨髓瘤细胞株U266的增殖抑制作用及其机制。方法:用不同浓度(0、5、10和20μmol/L)LY294002处理U266细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞活力,吖啶橙染色法检测细胞形态,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1),Cyclin E表达及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路的激活状况。结果:0、5、10和20μmol/L的LY294002处理U266细胞24、48和72 h后,能显著提高细胞增殖抑制率,并具有时间及剂量依赖性(r=0.408,r=0.485)。5,10,20μmol/L的LY294002处理细胞48 h,能使细胞核呈现致密浓染,细胞周期明显阻滞在G1期(P0.01),显著下调BCL-2,Cyclin D1,Cyclin E,PI3K及p-AKT表达(P0.01),明显上调BAX表达(P0.01)。结论:LY294002能显著抑制多发性骨髓瘤细胞U266增殖,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

盐酸埃克替尼诱导肺癌HCC827细胞周期阻滞及其机制研究

目的 研究国家一类新药盐酸埃克替尼（Icotinib）对人非小细胞肺癌细胞HCC827的增殖抑制及细胞周期的影响,并探讨其作用机制.方法 实验分为空白组、对照组和Icotinib处理组,采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测Icotinib对人肺癌HCC827细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化;Western blot检测相关蛋白表达,应用SPSS 13.0进行统计学分析.结果 Icotinib以时间-剂量依赖的方式抑制HCC827细胞增殖,48 h的IC50为0.60 μmol/L,72 h的IC50为0.06 μmol/L;Icotinib诱导HCC827细胞发生明显的G1期阻滞并具有剂量依赖性.进一步对周期相关蛋白检测发现,Icotinib处理组较对照组相比,显著上调p21蛋白表达,抑制cyclin D1及cyclin A表达,但对cyclin E作用不明显.检测还发现Icotinib处理组明显下调ERK的磷酸化水平.结论 Icotinib能够明显抑制HCC827细胞增殖,引起细胞G1期阻滞,其机制可能与上调p21及抑制cyclin D1、cyclin A蛋白表达水平相关.并且MAPK/ERK信号通路在其介导的生物学效应中起重要作用.     

奥氮平对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及机制

目的研究奥氮平对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及机制。方法用0μM、50μM、100μM、150μM、200μM的奥氮平处理A549细胞,MTT测定细胞增殖情况,细胞克隆实验检测细胞克隆形成能力,计算半数抑制浓度。用半数抑制浓度的奥氮平处理A549细胞,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡情况,Western blot测定细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27蛋白水平。结果50μM、100μM、150μM、200μM的奥氮平作用后的A549细胞增殖能力和克隆形成能力均明显低于0μM作用组(P0.05)。A549细胞经半数抑制浓度的奥氮平作用后,细胞G0/G1期比率升高,细胞凋亡增多,细胞中Cleaved Caspase-3、p27蛋白水平升高,CDK4、Cyclin D1蛋白水平降低,与未经奥氮平处理的细胞比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论奥氮平可以在体外抑制肺癌A549细胞的增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,作用机制与下调CDK4、Cyclin D1蛋白,促进Cleaved Caspase-3、p27蛋白表达有关。