亚砷酸联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米诱导人淋巴瘤细胞Raji凋亡的研究

本研究探索亚砷酸、硼替佐米对人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji的协同诱导凋亡作用。小剂量亚砷酸、硼替佐米单用以及二者联合分别处理Raji细胞，用台盼蓝拒染法计数活细胞数和细胞生长抑制率；用流式细胞术分析细胞凋亡和周期的变化；以Western blot检测Caspase-3、BCL-2、BAX、JNK2、IκB-α等凋亡相关元件在蛋白水平的变化。结果表明：相比于单用亚砷酸和硼替佐米，以小剂量亚砷酸联合硼替佐米处理Raji细胞后，细胞生长受明显抑制（P〈0．01），细胞凋亡比例增加（P=0.001），但细胞周期未见明显阻滞；在蛋白水平，细胞凋亡相关元件Caspase-3、BAX和IκB-α表达增加，而BCL-2和JNK2表达量下降。结论：小剂量亚砷酸联合硼替佐米能更有效地诱导Raji细胞凋亡，并具有协同作用。该作用可能是通过抑制NF—κB和JNK2通路实现的。     

硼替佐米诱导Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡的研究

本研究探讨硼替佐米对Burkitt淋巴瘤Raji细胞是否具有凋亡诱导作用及其机制。以硼替佐米处理Raji细胞,观察细胞增殖抑制作用的时间效应和剂量效应,在光学显微镜下观察药物作用前后细胞的形态变化,用流式细胞术检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）,用RT—PCR法检测药物孵育前后NF—κB和p53基因的表达水平。结果表明,在一定剂量和时间范围内硼替佐米能抑制Raji细胞生长;硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡并显示时间和剂量效应;在硼替佐米诱导Raji细胞凋亡过程中,NF-κB及p53基因的袁达水平下调。结论：硼替佐米能诱导Raji细胞凋亡,NF—κB基因和p53基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞凋亡的调控。     

姜黄素联合硼替佐米对骨髓瘤H929细胞增殖抑制与凋亡诱导作用及其机理

本研究旨在探讨姜黄素(curcumin)联合硼替佐米(bortezomib)对人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞系H929细胞增殖和凋亡的影响,并进一步探讨其作用的相关机理。采用MTT法检测不同浓度的姜黄素和硼替佐米单用或联合应用对H929细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞术(FCM)分析单用和联合用药时细胞的凋亡比率;采用RT-PCR法分析凋亡相关基因BCL-2、BAX及细胞周期相关蛋白cyclin D1的表达变化;采用免疫荧光染色法测定不同处理组NF-κB P65蛋白的分布变化。结果表明:姜黄素和硼替佐米单用及联合应用时均可抑制H929细胞的生长,呈剂量依赖性,联合用药在一定浓度范围内有协同效应;联用组细胞凋亡的比例明显高于单用组及对照组;与单用组相比,联用组cyclin D1,BCL-2基因表达下降,BAX升高。核因子NF-κB P65在单用组的胞核内的表达减弱,联合应用组NF-κB P65蛋白分布于胞浆。结论 :姜黄素与硼替佐米均可抑制H929细胞的生长增殖、促进凋亡,联合应用有协同效应。抑制核因子NF-κB的转录及影响其调节凋亡相关基因可能是作用机制之一。     

硼替佐米联合维生素C对淋巴瘤细胞株Jurkat凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的分析硼替佐米联合维生素C(VitC)对淋巴瘤细胞株Jurkat凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法收集淋巴瘤细胞株Jurkat细胞并分成30 nmol/L硼替佐米组、100μg/ml VitC组及联合组(30 nmol/L硼替佐米联合100μg/ml VitC治疗)。用流式细胞仪和CCK-8检测Jurkat细胞凋亡率和周期及采用免疫组织化学法检测Bcl-2和Bax的表达情况。结果 VitC组使Jurkat细胞的生长方式从局部聚集变化成平均分布;硼替佐米组于1～2 d期间Bcl-2的表达水平较VitC组及联合组降低得更慢,其Bax的表达水平较VitC组及联合组升高得更慢,且VitC组的Bax的表达水平显著高于硼替佐米组。硼替佐米组Jurkat细胞抑制率较VitC组显著升高(P 0. 01),联合组Jurkat细胞抑制率较VitC组和硼替佐米组均显著升高(P 0. 01)。相比对照组,硼替佐米组、VitC组及联合组Jurkat细胞凋亡率均显著升高(P 0. 01),且VitC组和联合组Jurkat细胞凋亡率较硼替佐米组均显著升高(P 0. 01)。结论 VitC有利于抑制早期淋巴瘤细胞株Jurkat的增殖,同时细胞凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax的表达情况与VitC诱导Jurkat细胞凋亡关系密切。     

硼替佐米治疗淋巴瘤新进展

硼替佐米作为第一个应用于临床的蛋白酶体抑制剂,通过影响多种细胞周期调控蛋白及NF-κB活性,发挥抗肿瘤作用.硼替佐米在多发性骨髓瘤(MM)的治疗中取得了令人鼓舞的疗效,是近年来MM药物治疗最重要的进展之一.淋巴瘤细胞中普遍存在NF-κB的组成性高表达,因此,硼替佐米可望成为治疗淋巴瘤一种新的选择.     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米对K562细胞株NF-κB活性及ICAM-1表达的影响

为了研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米对急性白血病K562细胞株核因子κB(NF-κB)及细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响,用含10%小牛血清的RPMI1640培养液体外培养K562细胞,用0、10、20、30、50、100nmol/L的硼替佐米干预K562细胞6小时后收集细胞。用SP免疫组织化学法测各组细胞NF-κB活性,并以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析K562细胞ICAM-1表达的变化。结果表明:各药物处理组K562细胞NF-κB的活性和ICAM-1的表达均明显受抑制,与对照组相比,存在显著性差异(p<0.05),且各组NF-κB活性与ICAM-1表达成正相关。结论:蛋白酶体抑制剂硼替佐米可能通过抑制NF-κB活性下调细胞间黏附分子ICAM-1的表达,这为白血病靶向治疗提供了一个新的途径。     

酪蛋白激酶CK2抑制剂TBB增加硼替佐米诱导的结肠癌细胞系HT29细胞凋亡

目的探讨酪蛋白激酶CK2抑制剂TBB对硼替佐米诱导的结肠癌细胞凋亡的影响。方法选用人结肠癌细胞系HT29细胞,MTT法检测单独使用硼替佐米和联合四溴苯三唑(TBB,CK2抑制剂)对HT29细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测单独使用硼替佐米和联合TBB对HT29细胞凋亡的影响,Western blot方法检测硼替佐米和联合TBB处理的HT29细胞Cleaved Caspase-3的表达情况。结果 MTT结果显示硼替佐米能抑制HT29细胞增殖并呈现剂量依赖性,硼替佐米与TBB联合使用更能抑制增殖。单独使用硼替佐米能诱导细胞凋亡,两者联合的细胞凋亡效应更加明显。硼替佐米能促使Cleaved Caspase-3表达上调,两者联合使用会进一步增加Cleaved Caspase-3的表达。结论硼替佐米能诱导HT29细胞凋亡,而CK2促进了硼替佐米诱导的细胞凋亡。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米对K562细胞株NF-κB活性及ICAM-1表达的影响

为了研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米对急性白血病K562细胞株核因子κB（NF-κB）及细胞间黏附分子（ICAM-1）表达的影响，用含10％小牛血清的RPMI 1640培养液体外培养K562细胞，用0、10、20、30、50、100nmol/L的硼替佐米干预K562细胞6小时后收集细胞。用SP免疫组织化学法测各组细胞NF-κB活性，并以反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析K562细胞ICAM-1表达的变化。结果表明：各药物处理组K562细胞NF-κB的活性和ICAM-1的表达均明显受抑制，与对照组相比，存在显著性差异（P〈0．05），且各组NF-κB活性与ICAM-1表达成正相关。结论：蛋白酶体抑制剂硼替佐米可能通过抑制NF-κB活性下调细胞间黏附分子ICAM-1的表达，这为白血病靶向治疗提供了一个新的途径。     

PCI-32765和Bortezomib对B细胞肿瘤细胞系细胞增殖、凋亡的影响及其机制的研究

本研究旨在探讨Btk抑制剂PCI-32765和蛋白酶体抑制剂bortezomib对Raji、Ramos细胞的增殖、凋亡的影响及其作用机制.PCI-32765和bortezomib单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞后,分别运用CCK-8法及流式细胞术检测细胞的增殖与凋亡,Western blot法检测Btk、NFκB、c-IAP1、Bcl-xL、caspase-3等蛋白的表达.结果表明：①PCI-32765（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0μmol/L）和bortezomib（10、20、30、40、50、60、80 nmol/L）处理Raji和Ramos细胞48 h,均可抑制细胞增殖,抑制率呈剂量依赖性,且两药具有协同作用;②PCI-32765（2.0μmol/L）、bortezomib（20 nmol/L）单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞不同时间（8、12、24、36、48、72 h）,均可抑制细胞存活率,抑制率呈时间依赖性,且两药具有协同作用;③PCI-32765（2μmol/L）和bortezomib（20 nmol/L）单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞48 h,可明显促进Raji及Ramos细胞的凋亡.Raji细胞实验结果,空白对照组、PCI-32765和bonezomib单药组、联合用药组的细胞凋亡率分别为10.34±0.53％、24.26±0.91％、43.66±1.08％与74.06±0.72％,各组间有统计学差异（P＜0.05）;Ramos细胞实验结果,空白对照组、PCI-32765和bortezomib单药组、联合用药组的细胞凋亡率分别为15.16±1.49％、71.36±0.82％、75.32±2.36％与84.30±0.91％,各组间有统计学差异（P＜0.05）;④PCI-32765和bonezomib单药处理Raji、Ramos细胞后,细胞内Btk、NFκB、Bcl-xl及c-.IAP1的表达水平较对照组降低,Caspase-3的表达水平升高,两药联用后,作用增强.结论：PCI-32765和bonezomib可以协同抑制Raji与Ramos细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与抑制Btk、NFκB的活性,下调Bcl-xl及c-IAP1等抗凋亡蛋白,同时上调Caspase-3等凋亡蛋白的表达而发挥作用.     

硼替佐米对淋巴瘤细胞增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响

目的:研究硼替佐米对淋巴瘤细胞株Jurkat细胞和Raji细胞的增殖、凋亡及SHP-2基因表达的影响。方法:用MTT(噻唑蓝)实验观察不同浓度硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞增殖的作用;利用细胞形态学检查、流式细胞仪检测细胞凋亡;用RT-PCR的方法检测硼替佐米处理淋巴瘤细胞株前后SHP-2基因的mRNA表达水平。结果:硼替佐米对Jurkat细胞和Raji细胞有抑制增殖,诱导凋亡的作用,并呈剂量和时间依赖性。在5-100 nmol/L硼替佐米处理后,Jurkat细胞株和Raji细胞株中SHP-2 mRNA的表达水平上调。结论:硼替佐米明显抑制Jurkat细胞株和Raji细胞株增殖,诱导其凋亡,上调细胞株SHP-2 mRNA的表达水平,表明SHP-2基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞和Jurkat细胞凋亡的调控。     

硼替佐米联合阿霉素诱导霍奇金淋巴瘤L428细胞凋亡的实验研究

硼替佐米是首个进行临床研究的蛋白酶体抑制剂,已应用于治疗多发性骨髓瘤(MM)及部分非霍奇金淋巴瘤,同时Mitsiades[1]和Ma等[2]体外实验证实硼替佐米与阿霉素联合处理MM细胞具有协同作用,而硼替佐米与阿霉素联合对霍奇金淋巴瘤(HL)有无协同作用未见报道.为研究硼替佐米对HL的抗肿瘤作用,我们观察了硼替佐米对HL细胞株L428细胞的增殖抑制作用,同时观察硼替佐米联合阿霉素对L428细胞的协同作用,并对其凋亡机制进行探讨.     

硼替佐米联合阿霉素诱导霍奇金淋巴瘤L428细胞凋亡的实验研究

硼替佐米是首个进行临床研究的蛋白酶体抑制剂,已应用于治疗多发性骨髓瘤(MM)及部分非霍奇金淋巴瘤,同时Mitsiades[1]和Ma等[2]体外实验证实硼替佐米与阿霉素联合处理MM细胞具有协同作用,而硼替佐米与阿霉素联合对霍奇金淋巴瘤(HL)有无协同作用未见报道.为研究硼替佐米对HL的抗肿瘤作用,我们观察了硼替佐米对HL细胞株L428细胞的增殖抑制作用,同时观察硼替佐米联合阿霉素对L428细胞的协同作用,并对其凋亡机制进行探讨.     

硼替佐米对急性单核细胞白血病细胞株SHI-1诱导凋亡作用及其对Bcl2112、Bcl-2和Bax基因表达影响

本研究探讨蛋白酶抑制剂硼替佐米对急性单核细胞白血病细胞株SHI-1增殖和凋亡的影响及Bcl2112、Bcl-2和Bax基因在其中的作用。用MTT比色法观察硼替佐米对SHI-1细胞的生长抑制作用，用Annexin—V标记、线粒体跨膜电位（△ψm）和DNA凝胶电泳分析细胞凋亡，用RT—PCR方法检测0、6，12和24小时Bcl2112、Bcl-2和Bax基因表达。结果表明，硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制SHI-1细胞生长，24小时和48小时半数抑制浓度分别为54．13nmol／L和5．45nmol／L；硼替佐米能够诱导SHI-1细胞凋亡，在6小时Annexin-V阳性细胞就开始增高并呈时间依赖性，ACm减低，形态学可见明显细胞核凝聚、固缩和碎裂，DNA凝胶电泳显示DNA片段化；RT-PCR显示，Bcl2112表达增高，Bcl-2表达减低，但Bax表达无明显改变。结论：硼替佐米抑制SHI-1细胞增殖，并可能通过上调Bcl2112基因和下调Bcl-2基因，使线粒体膜电位下降而促使SHI-1细胞发生凋亡。     

姜黄素诱导黑素瘤细胞凋亡的研究

目的:研究姜黄素诱导黑素瘤细胞A375、M14凋亡的机制。方法:将对数生长的黑素瘤细胞A375、M14分别用姜黄素干预;显微镜下观察黑素瘤细胞株A375和M14的凋亡状态;应用Western Blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Ba x、Caspase-3、γ-H2A X、NF-κB的变化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:实验发现姜黄素干预黑素瘤细胞后可见细胞发生凋亡;在姜黄素诱导黑素瘤细胞凋亡过程中,凋亡相关蛋白Bax和γ-H2AX表达水平较对照组升高,而Bcl-2、NF-κB表达水平较较对照组下降,有活性的Caspase-3生成;随着姜黄素的浓度增加,黑色素瘤细胞早期凋亡的比例增加。结论:姜黄素诱导黑素瘤细胞生长凋亡的机制可能与其对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、γ-H2AX、NF-κB的表达调控有关。     

自噬抑制剂ROC-325抗多发性骨髓瘤作用的研究

目的:探讨自噬抑制剂ROC-325对人多发性骨髓瘤细胞株增殖、凋亡、自噬的影响及其与硼替佐米联合用药的细胞学效应。方法:不同浓度的ROC-325作用于骨髓瘤细胞,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的作用,用Caspase-3/7、Caspase-9活性测定法检测药物对细胞凋亡的影响,用单丹磺酰戊二胺染色观察自噬小体数量,Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白(PARP和Caspase-3)和自噬相关蛋白(P62、Beclin-1和LC3A/B)的表达情况,用CCK-8法检测ROC-325联合硼替佐米对硼替佐米耐药细胞株的抑制作用。结果:ROC-325可呈剂量依赖性抑制RPMI 8226、RPMI 8226-BTZ100、U266和IM9细胞增殖(r=-0.8275,r=-0.9079,r=-0.9422,r=-0.9305),72 h IC50分别为2.795、4.020、5.432和4.755μmol/L。Caspase-3/7、Caspase-9活性结果显示,随着药物浓度的增加,Caspase-3/7和Caspase-9相对活性逐渐升高(r=0.9648,r=0.9377,r=0.9318;r=0.9087,r=0.9431,r=0.8914)。单丹磺酰戊二胺染色结果显示,细胞内自噬泡数量随着ROC-325浓度的提高逐渐增多(r=0.9565,r=0.9373,r=0.9233)。Western blot结果显示,ROC-325可诱导凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3表达上调以及自噬相关蛋白P62、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达上调,Beclin-1表达下调。ROC-325联合硼替佐米的CCK-8法检测结果显示,ROC-325与硼替佐米对耐药细胞株RPMI 8226-BTZ100的抑制具有协同作用。结论:ROC-325可以抑制骨髓瘤细胞增殖,通过线粒体途径诱导骨髓瘤细胞的凋亡,通过影响自噬体和溶酶体的融合抑制骨髓瘤细胞的自噬,ROC-325联合硼替佐米后可以克服硼替佐米耐药。     

硼替佐米对慢性髓系白血病急变期原代细胞耐药的逆转作用及XIAP表达的影响

本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米对伊马替尼耐药的慢性髓系白血病(CML)急变期原代细胞药物敏感性及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达的影响。采用MTT法观察伊马替尼单用与联合硼替佐米对伊马替尼耐药的CML急变期原代细胞生长增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡与P170糖蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测XIAP基因表达。结果表明,伊马替尼及硼替佐米单药对单个核细胞均表现出抑制作用,且呈时间-剂量依赖;联合5、10 nmol/L硼替佐米能明显增强单个核细胞对伊马替尼的敏感性;流式细胞术检测显示硼替佐米作用后细胞凋亡明显增高,同时P170糖蛋白表达明显降低;实时荧光定量PCR检测显示,耐伊马替尼CML急变期原代细胞高表达XIAP基因,硼替佐米作用后其表达下调。结论:硼替佐米可抑制白血病原代细胞并提高其对伊马替尼的敏感性,硼替佐米可能通过抑制XIAP的表达从而增加凋亡,这为扩展硼替佐米在临床上治疗CML提供实验依据。     

2-甲氧基雌二醇增强骨髓瘤细胞U266对硼替佐米敏感性的相关机制研究

本研究旨在探索2-甲氧基雌二醇(2-ME2)联合硼替佐米对人骨髓瘤细胞株U266的协同抑制增殖和诱导凋亡作用及其可能机制。2-ME2、硼替佐米单用以及二者联合分别处理U266细胞,用CCK8方法检测细胞增殖活力,caspase3/7活性法检测细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期的变化,荧光实时定量PCR检测P21、BAX、BCL-2等mRNA水平变化。结果表明:相比于2-ME2和硼替佐米单用,2-ME2联合硼替佐米处理U266细胞后,细胞增殖明显抑制(p<0.05),细胞凋亡增加(p<0.05),细胞周期阻滞于G1-S期;在mRNA水平,P21及BAX表达上调,BCL-2表达下调。结论:2-ME2联合硼替佐米能更有效地抑制U266细胞增殖和诱导凋亡,具有协同作用,其机制可能与其诱导P21及BAX表达上调有关。     

LBH589或联合硼替佐米逆转髓系白血病耐药及其分子机制研究

目的 探讨新一代组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米逆转急性髓系白血病(AML)细胞耐药效应及其分子机制.方法 耐药AML细胞株HL-60/ADM和难治性AML原代细胞与不同浓度LBH589、硼替佐米或两者联合进行体外培养,采用MTT法检测细胞增殖活力,Hoechst33342染色和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,用阿霉素摄取率并结合细胞增殖抑制率评估逆转耐药效应.进一步检测处理前后细胞MRP1及信号通路蛋白变化.结果 LBH589、硼替佐米均能够抑制HL-60/ADM和难治性AML原代细胞增殖,诱导凋亡,其中21 nmol/LLBH589和12 nmol/L硼替佐米联合时作用最强,经Calcusyn软件分析证明两者联合具有明显的协同作用(CI值分别为0.531和0.498).联合组MRP1阳性率为(57.78±3.34)%,显著低于LBH589、硼替佐米单药组[(76.06±5.17)%和(71.83±4.53)%,P值均＜0.05],而单药组与对照组之间差异也有统计学意义(P值均＜0.01).联合组细胞内阿霉素摄取率为(64.81±3.69)%,明显高于单药组[(28.96±2.52)%和(37.29±3.71)%](P值均＜0.05).LBH589联合硼替佐米可以明显抑制磷酸化Akt和磷酸化IKKα/β蛋白的表达,降低PI3K/Akt/NF-κB通路的活性,明显上调P53蛋白的表达,抑制NF-κB P65、Bcl-2、XIAP和MRP1蛋白活性,促进Caspase-8、Caspase-3和PARP的裂解激活.结论 LBH589、硼替佐米能够抑制耐药AML细胞增殖和促进凋亡,并逆转耐药,两者联合具有明显的协同作用.PI3K/Akt/NF-κB信号传导通路受抑或阻断可能是其主要的作用机制.

Abstract：

Objective To investigate reversal effect of histone deacetylase inhibitor LBH589 alone or in combination with proteasome inhibitor bortezomib on drug resistance in acute myeloid leukemia(AML) and its mechanism.Methods Ex vivo cultures of HL-60/ADM cells and fresh refractory AML cells were treated with LBH589, bortezomib or their combination at varying concentrations.Proliferation capacity, apoptosis rate and reversal of drug resistance were evaluated by MTT assay, dual staining of Hoechst33342 and AnnexinVFITC/PI by flow cytometry, and adriamycin uptake rate with proliferation inhibition, respectively.The change of signal pathway at protein level was analyzed by Western blot.Results Synergistic cytotoxicity was observed in the combination treatment with LBH589 and bortezomib against HL-60/ADM cells, as well as the fresh AML cells, the most powerful synergy being observed at 21 nmol/L LBH589 plus 12 nmol/L bortezomib,with CI values of 0.531 and 0.498, respectively by Calcusyn software analysis.Moreover, the accumulation of adriamycin in HL-60/ADM cells was increased more in combination treatment[(64.81 +3.69)%]than in either LBH589[( 28.96 + 2.52 ) %]or bortezomib[( 37.29 ± 3.71 ) %]alone ( P ＜ 0.05 ), and so did the uptake rate of adriamycin being (64.81 ± 3.69 ) %, ( 28.96 ± 2.52 ) % and ( 37.29 ± 3.71 ) % respectively (P ＜ 0.05 ).The combination treatment induced multiple apoptotic molecules co-action and intracellular drug accumulation contributed to the synergistic cytotoxity, including caspase activation, PARP cleavage, XIAP downregulation, p53-dependent suppression of Bcl-2 and MRP1 expression via the inhibition of phosphoinositide 3-kinase ( PI3K )/Akt/nuclear factor-κB ( NF-κB ) signaling pathway. Conclusions Combination treatment of drug resistant AML cells with LBH589 and bortezomib produces a synergistic effect of in creasing sensitivity to chemotherapy.The mechanism may be mainly resulted from inhibition of PI3K/Akt/NF-κB signaling pathway.     

三氧化二砷联合硼替佐米诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞株凋亡及相关机制的研究

目的本研究旨在探讨三氧化二砷与硼替佐米联合应用对多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)细胞株RPMI8226细胞凋亡的影响及其相关机制。方法 CCK-8法检测三氧化二砷与硼替佐米联合应用对RPMI8226细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测两种药物诱导RPMI8226细胞凋亡情况及各药物组处理前后的细胞表面死亡受体4(death receptor 4,DR4)和死亡受体5(death receptor 5,DR5)表达的变化;Western blot检测各药物组Bcl-2、caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP蛋白表达水平的变化。结果三氧化二砷与硼替佐米联合组对RPMI8226细胞生长抑制明显高于三氧化二砷单药组,细胞凋亡率均较三氧化二砷单药组明显增多,细胞表面DR4和DR5表达明显增高。与三氧化二砷或硼替佐咪单药组相比较,联合用药组RPMI8226细胞Bcl-2表达下调明显,而caspase-3,caspase-8和caspase-9表达上调明显。结论硼替佐米可以增加RPMI8226细胞对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性,这可能与Bcl-2的表达下调及caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP蛋白的表达上调有关。     

栀子苷通过抑制细胞凋亡保护糖尿病大鼠胰岛细胞

目的探索栀子苷(GEN)对糖尿病大鼠胰岛细胞的影响及相关机制。方法利用链脲佐菌素(STZ)制作大鼠糖尿病模型,50只SD大鼠随机分为5组,对照组,模型组,栀子苷10 mg/kg,栀子苷25 mg/kg,栀子苷50 mg/kg,每组10只,连续栀子苷灌胃用药1周后,对照组和模型组只给与等量生理盐水灌胃处理。检测大鼠空腹血糖值;利用Western blot法检测凋亡因子NF-κB以及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达;酶联免疫吸附(ELISA)法检测Caspase-3、Caspase-9活性。结果一周后,模型组血糖值显着高于对照组,而栀子苷组较模型组有明显降低(P0.05);Western blot显示,模型组NF-κB和Bax表达显着高于对照组,而栀子苷组则明显抑制NF-κB和Bax表达,并呈剂量依赖效应(P0.05),相反,模型组中Bcl-2表达则显着低于对照组,而栀子苷组则显着高于模型组(P0.05);ELISA显示,模型组Caspase-3、Caspase-9活性显着高于对照组,而栀子苷组则明显抑制Caspase-3、Caspase-9活性,并呈剂量依赖效应(P0.05)。结论栀子苷对糖尿病大鼠模型具有降糖作用,可能是通过抑制NF-κB和Bax,提高Bcl-2表达,同时还可能抑制Caspase-3和Caspase-9蛋白酶活性,从而减轻了胰岛细胞的凋亡来发挥作用。