Wnt信号通路对脑胶质瘤凋亡的影响及其机制

目的初探Wnt信号通路对脑胶质瘤U87细胞凋亡的影响及其机制。方法采用Annexin V-FITC/PI流式细胞仪和Western Blot法检测加入抑制剂LXAV939和不加抑制剂的两组实验的细胞凋亡率及其参与Wnt信号通路的Wnt1和β-catenin蛋白的表达情况。结果经抑制剂LXAV939处理的U87细胞的凋亡率明显大于对照组(P0.05);Wnt1和β-catenin蛋白的表达明显低于对照组(P0.05)。结论 Wnt信号抑制剂LXAV939能诱导脑胶质瘤U87细胞凋亡,其机制可能与下调Wnt1和β-catenin蛋白有关。     

β-连锁蛋白在脑胶质瘤中的表达及其与病理分级的关系研究

目的分析β-连锁蛋白在脑胶质瘤中的表达,探讨其与病理分级的关系。方法 82份脑胶质瘤标本(脑胶质瘤组)及40份对照标本(对照组)均购自上海锐赛生物技术有限公司,采用免疫组化SP法检测脑胶质瘤组和对照组β-连锁蛋白表达情况。比较脑胶质瘤组与对照组β-连锁蛋白表达阳性率,不同病理分级脑胶质瘤标本β-连锁蛋白表达阳性率,并分析β-连锁蛋白对高级别脑胶质瘤的预测价值。结果β-连锁蛋白主要表达于细胞膜,极少数表达于细胞质。脑胶质瘤组β-连锁蛋白表达阳性率高于对照组(χ~2=11.858,P=0.000)。Ⅰ级与Ⅱ级脑胶质瘤标本β-连锁蛋白表达阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05);Ⅲ级及Ⅳ级脑胶质瘤标本β-连锁蛋白表达阳性率高于Ⅰ级、Ⅱ级脑胶质瘤标本,Ⅳ级脑胶质瘤标本β-连锁蛋白表达阳性率高于Ⅲ级脑胶质瘤标本(P0.05)。ROC曲线显示,β-连锁蛋白预测高级别脑胶质瘤的AUC为0.742,当β-连锁蛋白阳性细胞百分比≥5%时,其灵敏度为95.7%、特异度为52.8%、阳性预测值为72.1%、阴性预测值为52.8%、准确率为76.8%。结论β-连锁蛋白在脑胶质瘤中呈高表达,其表达水平与脑胶质瘤病理分级有关,可能参与脑胶质瘤的发生和进展,因此下调β-连锁蛋白的表达可能成为治疗脑胶质瘤的新途径。     

Wnt/β-catenin信号通路抑制剂对脑胶质瘤细胞迁移的影响

目的探讨Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制剂对脑胶质瘤细胞迁移能力的影响。方法抑制组用浓度为20μmol/L的Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535处理脑胶质瘤U251细胞,对照组细胞中不加入抑制剂。培养48 h后,噻唑蓝(MTT)检测各组细胞的存活率,细胞划痕实验检测各组细胞的迁徙率,Transwell小室检测各组细胞迁移的数目,用Western印迹法检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2蛋白的表达水平。结果抑制组细胞存活率、细胞迁移数目、迁徙率和MMP-9、MMP-2蛋白水平与对照组相比明显降低(P<0.01)。抑制组细胞中β-catenin、C-myc水平明显低于对照组(P<0.01)。结论 Wnt/β-catenin信号通路抑制剂能够抑制脑胶质瘤细胞增殖、迁徙及迁移能力。     

茶多酚调控Wnt/β-catenin信号通路对鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响

目的 分析茶多酚对鼻咽癌细胞的作用及其其机制。方法 鼻咽癌细胞CNE2分为对照组,茶多酚低、中、高剂量处理组,分别用不同浓度茶多酚处理(0、40、80、160 mg/L)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法比较细胞增殖抑制率,细胞划痕实验比较细胞迁移率,Transwell小室实验比较细胞侵袭率,流式细胞术实验比较细胞凋亡率,Western印迹比较细胞Wnt、β-catenin、细胞周期蛋白(Cyclin)-D1蛋白情况。结果 经不同浓度茶多酚处理组CNE2细胞增殖抑制率细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05);而经不同浓度茶多酚处理组CNE2细胞迁移率、细胞侵袭率显著低于对照组(P<0.05);经不同浓度茶多酚处理组CNE2内的Wnt、β-catenin及Cyclin-D1蛋白含量比对照组显著低(P<0.05)。结论 茶多酚能够降低Wnt/β-catenin通路表达,进而增强鼻咽癌CNE2细胞凋亡、抵抗该细胞增殖。     

miR-92a对H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响

目的探讨miR-92a对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响。方法通过Lipofectamine~(TM)2000将miR-92a抑制物(inhibitor)及阴性对照组转染大鼠心肌细胞H9C2,RT-PCR检测转染后细胞中miR-92a的表达;将后续实验分为空白对照组、H2O2组和miR-92a inhibitor+H2O2组,利用CCK8法、流式细胞仪及Western印迹分别检测3组细胞的增殖、凋亡、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的蛋白表达。结果 miR-92a inhibitor组miR-92a mRNA表达显著低于空白对照组(P0.05),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05);与空白对照组比较,H2O2组细胞增殖显著降低,凋亡率显著增加,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著上调表达,Bcl-2蛋白显著下调表达(均P0.05),与H_2O_2组比较,miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞增殖显著升高,凋亡率显著降低,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著下调表达,Bcl-2蛋白显著上调表达(均P0.05)。结论抑制miR-92a的表达可促进H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖,抑制细胞的凋亡,其机制与调节Bax、Bcl-2蛋白及Wnt信号通路表达有关。     

姜黄素对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响及其机制

目的观察姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡及细胞内核因子κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法将对数生长期T24细胞分为两组,实验组加入10、20、50、100μmol/L姜黄素,对照组加入完全培养液。培养24、48、72 h时采用MTT比色法检测两组细胞增殖抑制率;培养24 h采用流式细胞术检测细胞凋亡率、Western blot法检测细胞内NF-κB蛋白表达情况。结果实验组细胞增殖抑制率明显高于对照组,且呈时间—剂量依赖性,P均<0.05;实验组24 h细胞凋亡率明显高于、NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组,且呈剂量依赖性,P均<0.05。结论姜黄素能有效抑制人膀胱癌T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调NF-κB表达有关。     

去甲斑蝥素对梗阻性肾病Wnt/β-catenin表达的影响

目的:观察去甲斑蝥素(NCTD)对梗阻性肾病(UUO)大鼠模型及人近端肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化模型Wnt/β-catenin表达的影响。方法:(1)动物实验:第一批SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、UUO 3d组、UUO 7d组及UUO 14d组,每组各4只。将第二批SD大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(UUO 14d)、NCTD 0.05 mg/kg干预组,NCTD 0.1 mg/kg干预组,每组4只。(2)细胞实验:体外培养HK-2细胞,分对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)5 ng/ml刺激组、TGF-β1 5 ng/ml刺激+NCTD(2.5 mg/L、5 mg/L)干预组。免疫组化、Western Blot检测Wnt4、β-catenin蛋白表达情况,Real-time PCR检测Wnt4、β-catenin mRNA表达情况。结果 :随着UUO大鼠梗阻时间延长,β-catenin蛋白表达逐渐升高,UUO14 d表达最强。与UUO组相比,NCTD组Wnt4、β-catenin蛋白及mRNA表达明显下降(P0.05);与对照组相比,TGF-β1刺激组Wnt4、β-catenin蛋白表达上调;与TGF-β1刺激组相比,NCTD不同浓度干预组Wnt4、β-catenin蛋白表达下调,且呈浓度依赖(P0.05)。结论:NCTD干预可以下调梗阻性肾病大鼠肾组织及TGF-β1刺激的HK-2细胞中Wnt4和β-catenin的表达。     

干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探讨干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用RNA干扰技术下调Wnt1基因表达,实验分为对照组(未做处理的细胞)、shRNA NC组(转染siRNA-NC)、shRNA Wnt1组(转染siRNA-Wnt1)。细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力,免疫印迹实验(Western印迹)观察细胞中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素(cyclin)-D1蛋白的表达量。结果转染siRNA-Wnt1到MCF-7细胞后,Wnt1蛋白的表达量受到显著抑制(P0.05);细胞的侵袭、迁移能力受到显著抑制(P0.05);β-catenin、cyclin-D1蛋白的表达下调(P0.05)。结论干扰Wnt1基因表达可以抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路及其下游靶基因cyclin-D1蛋白表达下调有关。     

5-氟尿嘧啶对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制探讨

目的 观察5-氟尿嘧啶（5-FU）对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制.方法 将对数生长期的MCF-7细胞随机分为观察组和对照组,观察组分别加入终质量浓度为20、10、1、0.1μg/mL的5-FU,对照组加入100 mL的RPMI-1640完全培养液.培养24、48、72 h后,采用MTT法测定MCF-7细胞的吸光度并计算细胞抑制率,显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白.结果 与对照组比较,随着5-FU浓度增加以及用药时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐增加（P均＜0.05）;细胞数量逐渐减少,凋亡现象更加明显;G1期细胞比例明显升高、S期细胞比例逐步降低（P均＜0.05）,但G2期细胞比例变化不明显;Bax蛋白相对表达量逐渐增加,Bcl-2蛋白相对表达量逐步减少（P均＜0.05）.结论 5-FU对人乳腺癌MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;该作用与其促进细胞凋亡,上调Bax蛋白、下调Bcl-2蛋白表达有关.     

三氧化二砷诱导人脑SHG-44胶质瘤细胞凋亡

目的观察三氧化二砷(As2O3)对SHG-44胶质瘤细胞增殖抑制的分子机制。方法在加入SHG-44胶质瘤细胞As2O348 h后,采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)方法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR及蛋白免疫印迹(WB)方法,检测BAX及Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平。结果As2O3对SHG-44胶质瘤细胞的抑制作用随着药物浓度的升高而增强;BAX mRNA及蛋白表达水平与对照组比无明显变化(P0.05),BAX mRNA及蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 As2O3通过促进细胞凋亡而抑制SHG-44胶质瘤细胞的增殖。     

Wnt5a调节BCG感染肺泡上皮细胞自噬的作用研究

目的探讨Wnt5a在卡介苗(BCG)感染肺泡上皮细胞后对细胞自噬的调控作用。方法用BCG感染小鼠肺泡上皮细胞TC-1,分别收集感染不同时间(MOI=10)、不同浓度rhWnt5a及IWP_2处理的TC-1细胞,利用Western blot检测Wnt5a及自噬相关蛋白LC3蛋白表达水平,确定TC-1细胞自噬的最佳时间以及rhWnt5a和IWP_2最适浓度;利用rhWnt5a或IWP_2与BCG单独或共处理TC-1,其中rhWnt5a处理试验设对照组(Control)、BCG组、rhWnt5a组和rhWnt5a+BCG组,IWP_2处理试验设对照组(Control)、BCG组、IWP_2组和IWP_2+BCG组,Western blot检测细胞Wnt5a、LC3和P62蛋白表达水平,免疫荧光染色检测LC3B绿色斑点分布,以确定各处理组细胞自噬情况。结果 Western blot检测在4 h时BCG诱导的TC-1细胞Wnt5a及LC3II表达水平均高于其他时间组,rhWnt5a上样为10 ng/mL时Wnt5a表达水平较Control组显著增加(P0.01),IWP_2上样为20μmol/L时Wnt5a表达水平较Control组显著降低(P0.01),在不同处理组中,rhWnt5a+BCG组较BCG组Wnt5a、LC3II及P62的表达均显著升高(均P0.01),IWP_2+BCG组较BCG组处理Wnt5a、LC3II及P62的表达均显著降低(均P0.01),且较Control组均升高(均P0.05)。免疫荧光染色显示,BCG感染后TC-1细胞中的LC3B斑点数量与荧光强度较Control组均显著增加,BCG与rhWnt5a共处理后细胞中LC3B斑点数量与荧光强度较BCG组均显著增多,BCG与IWP_2共处理后LC3B斑点数量与荧光强度较BCG组均显著减少(均P0.05)。结论 Wnt5a对BCG诱导的TC-1细胞自噬具有调控作用。rhWnt5a重组蛋白能促进BCG诱导的TC-1细胞自噬,IWP_2对BCG诱导的TC-1细胞自噬有抑制作用。     

茯苓酸通过Wnt信号通路对肾癌细胞生物学特性的影响

目的研究茯苓酸(PA)对人肾癌786-0细胞生物学特性的影响,并探讨其对Wnt信号通路的调控作用。方法以不同浓度的PA处理人肾癌786-0细胞,培养0、24、48、72 h采用噻唑蓝(MTT)法检测肾癌细胞存活率,采用流式细胞术检测肾癌细胞凋亡情况,采用划痕实验检测肾癌细胞转移能力,采用Transwell实验检测肾癌细胞体外侵袭能力,采用Western印迹法检测Wnt蛋白、β-连环蛋白(catenin)、Cyclin D1蛋白表达水平。用Wnt信号通路激活剂氯化锂(LiCl)处理40μg/ml PA诱导的肾癌细胞,以同样的方法检测肾癌细胞凋亡率。结果不同浓度的PA作用于肾癌细胞后,对肾癌细胞增殖有显著抑制作用,随着PA浓度显著增加、作用时间的延长肾癌细胞增殖抑制率显著升高(P0.05);肾癌细胞的凋亡率随着PA浓度的增加而升高(P0.05);随PA浓度增加肾癌细胞侵袭能力及迁移能力显著降低(P0.05);Wnt、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达量显著下降(P0.05);Wnt信号通路激活剂能够消除PA对肾癌细胞诱导的凋亡(P0.05)。结论 PA可抑制肾癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移能力,PA可抑制Wnt信号通路的激活诱导肾癌786-0细胞凋亡。     

黄芪多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响和机制研究

目的 研究黄芪多糖(APS)对缺氧/复氧(H/R)所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法 分离并体外培养乳鼠心肌细胞3 d后随机分为五组,正常组、H/R组、APS低、中、高剂量(20、40、80μmol/mL)组;给药干预30 min后,H/R组和APS各剂量组给予缺氧2.5 h后复氧处理。复氧2 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡水平,生化分析法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测培养液中N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,Western blot法检测糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、激活型半胱氨酸蛋白酶-12(cleved caspase-12)、B细胞淋巴瘤基因-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(Bax)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果 与正常组比较,H/R组细胞增殖抑制率和凋亡率升高(P 0.01),培养液中LDH、CK、CK-MB水平和NT-proBNP、TNF-α、IL-1β水平升高(P 0.01);GRP78、CHOP、Cleved Caspase-12、Bax、NF-κB蛋白表达上调而bcl-2表达下调(P 0.01),bcl-2/Bax比值降低(P 0.01)。与H/R组比较,APS中、高剂量细胞增殖抑制率和凋亡率降低(P0.01),培养液中LDH、CK、CK-MB水平和NT-pro BNP、TNF-α、IL-1β水平降低(P 0.05);GRP78、CHOP、Cleved Caspase-12、Bax、NF-κB蛋白表达下调而bcl-2表达上调(P 0.01),bcl-2/Bax比值升高(P 0.01)。结论 APS可以减轻H/R诱导的乳鼠心肌细胞损伤,可能与APS抑制内质网应激通路介导的细胞凋亡和炎症反应有关。     

葛根素对H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制

目的探讨葛根素对过氧化氢(H_2O_2)诱导颈椎间盘纤维环细胞凋亡的影响及机制。方法分离培养大鼠颈椎间盘纤维环原代细胞,将细胞分为对照组、H_2O_2组和葛根素组,氯化锂(LiCl)为Wnt信号通路激活剂。噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)水平。Western印迹检测Wnt1、β-catenin、糖原合成酶激酶(GSK)-3β和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,H_2O_2组细胞活力降低,凋亡率升高,ROS水平升高,Wnt1、β-catenin和GSK-3β蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与H_2O_2组比较,葛根素组细胞活力升高,凋亡率降低,ROS水平降低,Wnt1、β-catenin和GSK-3β的蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。葛根素+LiCl组细胞活力显著高于葛根素组,凋亡率显著低于葛根素组(P0.05)。结论葛根素可降低由H_2O_2诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡,机制与细胞内ROS水平降低及激活Wnt信号通路有关。     

干扰素-γ对兔动脉损伤后平滑肌细胞增殖和迁移的作用

目的　探讨干扰素 -γ(IFN-γ)对动脉损伤后平滑肌细胞 (SMC)增殖和迁移的作用及其作用机制。方法　建立兔髂动脉球囊损伤动物模型 ,培养损伤后动脉 SMC,实验分 4组 :对照组、转化生长因子 -β1(TGF-β1)组、IFN-γ组、TGF-β1+ IFN-γ组。每组细胞加培养液或加入 10μg/L TGF-β1或 (和 ) 50 0 k U/L IFN-γ刺激 72 h,细胞计数和四甲基偶氮唑盐 (MTT)法测定各组 SMC的增殖 ,同时测定 SMC迁移。明胶酶谱分析 SMC中基质金属蛋白酶 -2 (matrix metalloproteinase-2 ,MMP-2 ,66k D蛋白 )的活力。结果　与对照组比较 ,72 h后 TGF-β1组细胞数和迁移距离增加 (P <0 .0 1) ,MTT A值检测细胞增殖抑制率为 -19.4% ;IFN-γ组细胞数和迁移距离减少(P <0 .0 1) ,细胞增殖抑制率为 15.8% ;TGF-β1+ IFN-γ组细胞数和迁移距离低于 TGF-β1组 ,细胞增殖抑制率为 -9.1%。明胶酶谱分析显示各组细胞均可检测到 MMP-2。,TGF-β1组还可检测 MMP-2酶原 (pro-MMP-2 ,72k D蛋白 )的表达。与对照组 (10 0 % )比较 ,TGF-β1组 MMP-2相对活力为 14 3 % ,IFN-γ组为 95% ,TGF-β1+ IFN-γ组为 10 9%。结论　 IFN-γ可抑制动脉损伤后的 SMC增殖和迁移并减轻 TGF-β1的促 SMC增殖和迁移的作用。并且 ,IFN -γ可以抑制 SMC MMP-2活力     

Wnt5a调节BCG感染肺泡上皮细胞自噬的作用研究北大核心CSCD

目的探讨Wnt5a在卡介苗(BCG)感染肺泡上皮细胞后对细胞自噬的调控作用。方法用BCG感染小鼠肺泡上皮细胞TC-1,分别收集感染不同时间(MOI=10)、不同浓度rhWnt5a及IWP_(2)处理的TC-1细胞,利用Western blot检测Wnt5a及自噬相关蛋白LC3蛋白表达水平,确定TC-1细胞自噬的最佳时间以及rhWnt5a和IWP_(2)最适浓度;利用rhWnt5a或IWP_(2)与BCG单独或共处理TC-1,其中rhWnt5a处理试验设对照组(Control)、BCG组、rhWnt5a组和rhWnt5a+BCG组,IWP_(2)处理试验设对照组(Control)、BCG组、IWP_(2)组和IWP_(2)+BCG组,Western blot检测细胞Wnt5a、LC3和P62蛋白表达水平,免疫荧光染色检测LC3B绿色斑点分布,以确定各处理组细胞自噬情况。结果 Western blot检测在4 h时BCG诱导的TC-1细胞Wnt5a及LC3II表达水平均高于其他时间组,rhWnt5a上样为10 ng/mL时Wnt5a表达水平较Control组显著增加(P<0.01),IWP_(2)上样为20μmol/L时Wnt5a表达水平较Control组显著降低(P<0.01),在不同处理组中,rhWnt5a+BCG组较BCG组Wnt5a、LC3II及P62的表达均显著升高(均P<0.01),IWP_(2)+BCG组较BCG组处理Wnt5a、LC3II及P62的表达均显著降低(均P<0.01),且较Control组均升高(均P<0.05)。免疫荧光染色显示,BCG感染后TC-1细胞中的LC3B斑点数量与荧光强度较Control组均显著增加,BCG与rhWnt5a共处理后细胞中LC3B斑点数量与荧光强度较BCG组均显著增多,BCG与IWP_(2)共处理后LC3B斑点数量与荧光强度较BCG组均显著减少(均P<0.05)。结论 Wnt5a对BCG诱导的TC-1细胞自噬具有调控作用。rhWnt5a重组蛋白能促进BCG诱导的TC-1细胞自噬,IWP_(2)对BCG诱导的TC-1细胞自噬有抑制作用。     

干扰素α-2b对人肝癌细胞及血管内皮生长因子分泌的抑制作用

目的探讨干扰素(IFN)α-2b对人肝癌细胞及其血管内皮生长因子(VEGF)分泌的抑制作用。方法培养人肝癌HepG2细胞制成细胞悬液,同时设立空白组(培养液)、阴性对照组(培养液+HepG2细胞)、不同浓度IFNα-2b处理组。用MTT比色法、酶联免疫法检测HepG2的抑制率、VEGF蛋白表达水平。结果不同浓度IFNα-2b对体外培养肝癌细胞的生长抑制率具有时间、剂量双重效应(P均<0.05);IFNα-2b对VEGF蛋白表达抑制呈剂量效应(P均<0.01)。结论 IFNα-2b对肝细胞癌增殖和VEGF的分泌均有抑制作用。     

Wnt3a对小鼠胚胎干细胞心肌细胞分化的影响

目的:观察Wnt3a信号对小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)心肌细胞分化的影响。方法:用悬滴培养法促进ESCs形成拟胚体(embryoid bodies,EBs)。用免疫荧光染色法检测心肌特异性蛋白cTnT的表达。在不同分化时间加入Wnt3a及Wnt信号通路抑制剂Dkk-1观察对搏动EBs百分率的影响。用RT-PCR检测Nk同源异型盒5(Nkx2.5)、锌指转录因子-4(GATA-4)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)及心房钠尿肽(ANP)基因表达水平的变化。用Western blot检测cTnT表达水平的变化。将不加入Wnt3a,分化第0~5天及5~10天加入Wnt3a的组分别命名为对照组,D0-5组及D5-10组。加入Dkk-1的组命名为Dkk-1组。结果:通过悬滴培养法形成的EBs能够出现自发性搏动并且有TnT表达。EBs形成过程中即分化第0~5天加入Wnt3a与对照组相比具有更高的搏动EBs百分率,Nkx2.5、GATA4、β-MHC和ANP基因表达的水平,以及cTnT蛋白表达水平,而EBs形成后即分化第5~10天加入Wnt3a的结果相反。分化第5~10天加入Dkk-1与对照组相比具有更高的搏动EBs百分率及cTnT蛋白表达水平,并且在分化第0~5天分别加入Wnt3a及Dkk-1与单独加入Wnt3a及Dkk-1相比,搏动EBs百分率及cTnT蛋白表达水平更高。结论:Wnt3a对ESCs向心肌细胞分化的调控呈时间依耐性,EBs形成过程中激活Wnt3a信号及EBs形成后阻断Wnt3a信号能够获得更多的心肌细胞。     

SOX1过表达抑制食管癌细胞的增殖并促进凋亡的发生

目的 探索SOX1过表达对食管癌细胞增殖及凋亡的作用及其机制。方法 构建SOX1过表达细胞株，检测SOX1 mRNA和蛋白表达，CCK-8检测细胞增殖，细胞划痕及结晶紫染色检测细胞的迁移及克隆形成能力，Hochest染色实验检测细胞凋亡情况，Western blotting检测GSK-3β及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平。结果 SOX1过表达组mRNA显著高于对照组(P<0.01)。CCK-8 OD值及增殖曲线绘制表明SOX1过表达组增殖速率显著降低(P<0.05);SOX1过表达组细胞的迁移速率和克隆形成能力明显下降(P<0.05);显微镜下观察到SOX1过表达组细胞的皱缩明显，提示凋亡的发生；Western blotting检测结果表明，SOX1过表达组GSK-3β上调，Wnt信号通路相关基因β-catenin、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 SOX1通过抑制Wnt/β-catenin信号传导抑制食管癌细胞的增殖和促进凋亡。     

川芎嗪对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用观察及机制探讨

目的 探讨川芎嗪对人骨肉瘤MG-63细胞生长的抑制作用及可能机制.方法 取对数生长期的人骨肉瘤MG-63细胞,随机分为川芎嗪低浓度组、高浓度组和对照组,川芎嗪低浓度组、高浓度组分别予3、30 mg/mL的川芎嗪,对照组加入完全培养液;48 h后采用四氮唑盐比色法检测MG-63细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布;Westemblot法检测Bcl-2、CyclinD1及NF-κB p65蛋白表达水平.结果 与对照组比较,川芎嗪低浓度组、高浓度组MG-63细胞增殖抑制率、凋亡率及G0/G1期细胞比例均明显升高,NF-κB p65及其靶基因Bcl-2、CyclinD1蛋白表达水平均明显降低,且川芎嗪高浓度组作用更明显;P均＜0.05.结论 川芎嗪对体外培养的MG-63细胞有增殖抑制作用,其机制可能与其促进MG-63细胞凋亡、诱导G0/G1期阻滞、抑制NF-κB及其靶基因的蛋白表达有关.