染料木黄酮对MDA-MB-453乳腺癌细胞VEGF表达的影响

目的:观察染料木黄酮(genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响,探讨Gen抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法:5×10-5mol/LGen处理MDA-MB-453细胞24、48、72h后,应用免疫组织化学、Westernblot及RT-PCR法检测MDA-MB-453乳腺癌细胞VEGF的表达变化。结果:Gen处理MDA-MB-453细胞24、48、72h后,VEGF的mRNA和蛋白表达量随着处理时间的延长逐渐下降。结论:Gen能在转录和翻译水平下调HER-2/neu高表达乳腺癌细胞VEGF的表达,这可能是Gen抑制HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的机制之一。     

木黄酮对MCF-7/HER-2细胞uPA表达影响

目的探讨植物化学物质染料木黄酮(genistein)抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法采用基因转染技术建立HER-2/neu高表达MCF-7乳腺癌细胞(命名为MCF-7/HER-2),5×10-5mol/L染料木黄酮处理MCF-7/HER-2细胞24,48,72 h后,应用western bolt、免疫沉淀、RT-PCR及激酶活性分析法检测genistein对MCF-7/HER-2乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)表达、HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平及蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性变化。结果MCF-7/HER-2细胞uPA的mRNA和蛋白表达量比MCF-7细胞uPA的mRNA和蛋白表达量高,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平和PTK活性增加,染料木黄酮处理MCF-7/HER-2细胞后,uPA的mRNA和蛋白表达量下调,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平降低,PTK活性下降,且这种作用具有时效性。结论染料木黄酮能下调MCF-7/HER-2细胞HER-2/neu受体的PTK活性和蛋白磷酸化水平,抑制uPA表达,这可能是染料木黄酮抗乳腺癌血管生成的分子机制之一。     

染料木黄酮影响MDA-MB-453细胞对紫杉醇化疗敏感性的机制

目的:探讨染料木黄酮(genistein,GEN)影响紫杉醇(paclitaxel,PTX)体外化疗HER2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453敏感性的作用机制。方法:GEN和PTX单独或联合处理MDA-MB–453细胞,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫细胞化学法检测HER2/neu蛋白、Westernblot检测Akt、p-Akt、CyclinB1、CDK1蛋白表达的变化。结果:GEN和PTX单独作用时MDA-MB-453细胞分别阻滞于G1/S期和G2/M期,HER2/neu、总Akt和CDK1蛋白水平均没有明显变化,但GEN可显著降低p-Akt和CyclinB1蛋白水平,而PTX则明显增加CyclinB1蛋白水平,二者联合处理时GEN拮抗PTX增加CyclinB1蛋白水平和诱导G2/M期阻滞的作用。结论:GEN拮抗PTX增加cyclin B1蛋白水平和G2/M期阻滞的作用,可能是其降低PTX体外化疗MDA-MB-453细胞敏感性的机制之一。     

EGFR、Survivin和uPA在乳腺癌表达的意义及其相关性

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR),生存素(Survivin)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)在乳腺良、恶性肿瘤表达的意义和它们的相关性。方法:利用PV免疫组织化学方法,检测88例乳腺癌和32例乳腺腺瘤中EGFR,Survivin和uPA阳性率。结果:乳腺腺瘤和乳腺癌EGFR阳性率分别为18.75%和63.64%,两者差异有统计学意义(P0.01);Survivin在乳腺腺瘤和乳腺癌阳性率分别为65.62%和70.45%;uPA在乳腺腺瘤和乳腺癌阳性率分别为31.25%和61.36%,两者差异有统计学意义(P0.05)。EGFR,Survivin和uPA在分期低(Ⅰ、Ⅱ期)、非浸润型和无转移组阳性率均低于分期高(Ⅲ、Ⅳ期)、浸润型癌和有淋巴结转移组(P0.05)。结论:EGFR、Survivin和uPA在乳腺癌中表达率较高,而且和乳腺癌的生物学特性有关。检测它们对提示预后和靶向治疗有指导意义。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察三羟异黄酮对体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB—435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法 用噻唑蓝(MTT)法观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞生长的影响；流式细胞仪观察三羟异黄酮处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应；吖啶橙／溴乙锭染色法在荧光显微镜下观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞的凋亡作用。结果 随剂量增大和作用时间延长，三羟异黄酮对细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2—M期，而且随剂量的增大，作用时间的延长，阻滞作用也增强。经吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见，随三羟异黄酮剂量增大，细胞凋亡也逐渐明显。结论 三羟异黄酮可抑制人乳腺癌细胞的增殖，其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2—M期阻滞。     

甘草提取物(Gc34)对MDA-MB-231乳腺癌细胞体外促凋亡作用研究

目的观察甘草提取物Gc34对MDA-MB-231细胞的体外促凋亡作用。方法 MTT法检测不同时间(24、48、72h),不同浓度(25、50、75、100μg/ml)Gc34对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;采用AO/EB染色、透射电镜实验判断凋亡;流式细胞仪检测其凋亡率。结果 MTT结果显示,随着Gc34作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降,Gc34对MDA-MB-231细胞体外增殖抑制呈明显的剂量-时间依赖性,72h半数抑制浓度(IC50)为65.38μg/ml;AO/EB染色表明药物组细胞出现明显凋亡迹象,而阴性对照组中细胞形态完好;透射电镜结果显示,75μg/ml Gc34处理72h后细胞出现典型凋亡形态学改变;流式细胞仪分析结果显示,随Gc34剂量增加细胞凋亡率逐渐上升,呈明显的剂量依赖性。结论甘草提取物Gc34在体外能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖并诱导其凋亡。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞外调节激酶影响

目的探讨三羟异黄酮（genistein）对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞外调节激酶1/2（ERK1/2）MAPK信号转导通路的影响.方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法分别检测三羟异黄酮以及与ERK1/2上游激酶MEK1/2抑制剂联合作用时对MDA-MB-231增殖的抑制作用;应用Western blot蛋白免疫印记法分别检测ERK1/2总蛋白、c-Jun、c-Fos蛋白的表达.结果 MTT结果显示,与对照组相比,三羟异黄酮作用48h后,细胞存活度随浓度增加而降低,合用MEK1/2抑制剂细胞存活度最低;Western blot分析提示,随三羟异黄酮剂量的增加,ERK1/2、c-Jun、c-Fos蛋白表达增加,但合用抑制剂后蛋白表达降低.结论三羟异黄酮可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,并激活了ERK1/2 MAPK信号转导通路;MEK1/2抑制剂可以抑制三羟异黄酮介导的ERK1/2活化,同时提高三羟异黄酮的肿瘤抑制作用.     

膀胱尿路上皮癌uPA和tPA表达及临床病理意义

目的研究膀胱尿路上皮癌和癌旁正常移行上皮组织中尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）和组织型纤溶酶原激活剂（tPA）表达水平及其临床病理意义。方法45例膀胱尿路上皮癌和10例癌旁正常膀胱移行上皮组织标本常规制作石蜡包埋切片,uPA和tPA染色方法为EnVision免疫组化法。结果膀胱尿路上皮癌uPA表达阳性率（60．0％）明显高于癌旁正常膀胱移行上皮组织（20．O％,X2=5．25,P=0．022）,但tPA则相反（42．2％vs90．9％,）（X2=7．47,P=0．006）。病理分级0－I级、临床分期Tis－T1及初发病例uPA表达阳性率明显低于病理分级Ⅱ－Ⅲ级、临床分期Ⅱ－Ⅳ及复发病例（P〈0．05或P〈0．01）;病理分级0－I级、临床分期Tis—T1及单发病例tPA表达阳性率明显高于病理分级Ⅱ－Ⅲ级、临床分期Ⅱ－Ⅳ及多发病例（P〈0．05或P〈0．01）。膀胱尿路上皮癌中uPA表达与tPA表达呈高度不一致性（X2=4．39,P〈0．05）。结论uPA和tPA可能是反映膀胱尿路上皮癌发生、进展、侵袭潜能及预后的重要生物学标记物。     

胆固醇缺乏对Jurkat细胞蛋白酪氨酸激酶活性的影响

目的：探讨胆固醇缺乏抑制Jurkat细胞增殖的分子机理,方法,用间接免疫荧光法,^3H-TdR掺入及流式细胞术等,观察其对蛋白酪氨酸激酶（PTKs)信号传递系统的影响,结果：经去脂血清培养基培养的Jurkat细胞和lovastatin处理3天后,^3H-TdR掺入率明显下降,细胞增残受抑,细胞受阻于G0／G1期,细胞内酪氨酸磷酸化蛋白含量明显下降,加入LDL可以部分逆转上述变化,结论：无论是内源性还是外源性胆固醇的缺乏都能使Jurkat细胞蛋白酪氨酸激酶活性下降,推测这一变化与细胞G0／G1期阻滞及细胞增残受抑有关。     

三羟异黄酮对乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响

目的探讨三羟异黄酮(Genistein)对乳腺癌细胞系MCF-7的生长、细胞周期及诱导细胞凋亡的影响。方法培养MCF-7细胞,在其对数生长期加入三羟异黄酮,通过MTT试验,流式细胞仪技术及Giemsa染色法,观察三羟异黄酮对MCF-7生长的影响。结果(1)MTT试验显示,细胞培养第1天,三羟异黄酮20、40、80、160μmol.L-14个剂量组的吸光度值(该值反映对MCF-7细胞生长的抑制作用)分别为0.460±0.018、0.450±0.020、0.440±0.020、0.385±0.040,明显低于对照组(0.520±0.023,P<0.05),第2、3、4天的变化趋势相同于第1天。(2)三羟异黄酮80、160μmol.L-12个剂量组的细胞周期G2%分别为50.0%、57.5%,而对照组为6.8%。(3)三羟异黄酮10、80μmol.L-12个剂量组晚期细胞凋亡率分别为6.51%、20.03%,而对照组为0.50%。结论三羟异黄酮对MCF-7的生长有明显的抑制作用;能阻滞细胞周期的正常进行,但主要在细胞周期的后期(G2期)发挥作用;能诱导细胞凋亡。     

Rb基因在染料木黄酮抑制人乳腺癌细胞生长中的作用

目的:研究Rb基因在染料木黄酮(genistein,Gen)抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖中的作用。方法:采用MTT实验和集落形成实验观察Gen对人乳腺癌细胞增殖影响,Westernblotting检测Rb基因、细胞周期素cyclinE蛋白表达情况,RT-PCR检测Rb基因mRNA的表达。结果:Gen显著抑制MCF-7细胞生长,促进细胞Rb基因在蛋白及mRNA水平的表达,抑制cyclinE蛋白的表达。结论:Gen抑制人乳腺癌细胞增殖,其机制可能通过上调Rb基因表达,下调cyclinE蛋白表达。     

全反式视黄酸调控乳腺癌细胞的增殖及机制研究

目的研究全反式视黄酸(ATRA)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及ATRA与X射线照射对视黄醇类X受体α(RXRα)表达水平的影响。方法 MTT法检测细胞增殖,Western blot检测RXRα表达水平。结果 ATRA浓度在100～1000 nmol/L,72 h可抑制细胞的增殖。观察不同时间100 nmol/L的ATRA作用,24 h内,促进MDA-MB-231细胞的增殖,而作用48 h后,可抑制细胞的增殖。ATRA在100～1000 nmol/L范围内可诱导RXRα的表达,且存在浓度依赖性。100 nmol/L的ATRA作用24 h即可诱导RXRα的表达,并且存在时间依赖性。X射线照射未能诱导RXRα的表达。结论 100～1000 nmol/L的ATRA作用48 h即可抑制MDA-MB-231细胞增殖,且其对MDA-MB-231细胞RXRα蛋白表达存在浓度和时间依赖性,为ATRA用于临床乳腺癌的治疗提供了理论基础,也提示RXRα可能是ATRA抑制乳腺癌细胞增殖的机制之一。     

染料木黄酮抑制DU145细胞的作用及其机制研究

目的: 研究大豆异黄酮主要成分染料木黄酮 (GEN)对离体培养DU145前列腺癌细胞的生长抑制作用及其机制。方法: DU145前列腺癌细胞接受不同浓度的GEN处理,克隆形成试验用于测定DU145细胞的生存曲线及IC50;DNA ladder和DAPI(4-6-二氨基-2-苯基吲哚)染色法用于检测细胞凋亡;流式细胞仪和免疫印迹法分别用于观察细胞周期改变和相关蛋白表达。结果: 克隆形成试验显示: GEN能抑制离体培养DU145细胞的生长,其作用于DU145细胞的IC50约为30 mmol。GEN 处理24h后,早发细胞凋亡仅见于高浓度GEN处理组,72 h后凋亡亦见于较低浓度GEN组。流式细胞仪显示GEN可导致DU145细胞G2/M期阻滞;细胞周期相关蛋白分析显示随着GEN浓度的提高,p21cip1蛋白表达稳步上升,周期素B1呈双相改变,cdc-2则变化较小。结论: GEN可抑制离体培养DU145前列腺癌细胞的生长,其作用机制可能与GEN诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞有关,后者同时伴有细胞周期相关蛋白表达的改变。     

葡多酚对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用研究

目的研究葡多酚(GPC)对人乳腺癌(MCF-7)细胞增殖活性的影响及雌激素受体(ER)的调节作用。方法将GPC与MCF-7细胞共同培养,共设肿瘤细胞对照组、高、中、低(200、100、10μg/ml)剂量GPC组、ER阻断剂对照组(ICI10-6mol/L)和ER阻断剂(ICI10-6mol/L)+GPC(200μg/ml)6个组。用MTT法测定各组乳腺癌细胞的增殖活性水平,用免疫组化方法检测乳腺癌细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和Bax蛋白的表达水平。结果与肿瘤细胞对照组比,高剂量GPC组乳腺癌细胞的增殖活性水平和PCNA阳性表达率降低,Bax蛋白阳性表达率升高(P<0.05);ER阻断剂+GPC组乳腺癌细胞的增殖活性水平、PCNA阳性表达率,均较高剂量GPC组升高,Bax蛋白阳性表达率降低,各项差别均有显著性意义(P<0.05)。结论GPC可有效抑制人乳腺癌细胞的增殖,并促进其凋亡;其作用与ER调节有密切关系。     

染料木黄酮对胃癌细胞侵袭转移的抑制作用

目的:研究染料木黄酮(genistein)对胃癌细胞侵袭转移的影响,并初步探讨其作用机制。方法:运用MTT法观察染料木黄酮对人胃癌细胞系SGC-7901细胞粘附能力的影响;用BoydenChamber膜侵袭系统,观察对SGC-7901游走和侵袭的影响;免疫细胞化学法观察对SGC-7901细胞TGF-β1表达的影响。结果:染料木黄酮作用后,SGC-7901细胞粘贴率降低(P<0.05),游走穿膜细胞数(83±4)和侵袭穿膜细胞数(35±3)均明显低于对照组(114±7,60±4,P<0.05),并且能降低TGF-β1的表达。结论:染料木黄酮能有效抑制胃癌侵袭转移。其作用机制可能与通过降低TGF-β1的表达,抑制胃癌细胞异质粘附、运动能力有关。     

染料木黄酮对脂肪变HepG2细胞甘油三酯水平和Lipin 1表达的影响

目的 研究染料木黄酮(genistein,Gen)对油酸(oleic acid,OA)诱导的脂肪变HepG2细胞胞核内Lipin1水平以及培养基和胞浆内甘油三酯水平的影响.方法 在HepG2细胞中分别或联合加入0～640μmol/L的Gen,0～2.0 mmol/L的OA干预,用MTT法测定细胞活性,以确定适宜的OA建模和Gen的干预浓度.之后,采用OA建立HepG2细胞脂肪变模型,用Gen干预24h,收集培养基上清和细胞分别测定甘油三酯水平,Western blot检测胞核Lipin1的表达.结果0.5 mmol/L OA为造模最佳干预浓度,可同时提高培养基和细胞中甘油三酯的含量,10～50 μmol/L的Gen可以减轻HepG2细胞脂肪变的状态,并且呈现剂量效应关系(P＜0.05),同时,胞核内Lipin1水平增加(P＜0.05).结论 Gen能抑制OA诱导的HepG2细胞脂肪变,并可能与Lipin1的核转移有关.     

硒-甲基硒代半胱氨酸对乳腺癌细胞端粒酶活性和hTERT基因表达的影响

目的研究有机硒化合物硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenoey-stein,MSC)对人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞端粒酶活性的影响,探讨其诱导细胞凋亡的作用机制。方法不同浓度的MSC(12.5、25、50、100、200·mol/L)RPMI-1640培养液分别作用于人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞24h、48h,ELISA法检测端粒酶活性;RT-PCR法检测细胞hTERT mRNA基因的表达;SPSS16.0进行数据录入及统计学分析。结果各MSC浓度处理组明显抑制端粒酶活性和hTERT mRNA的表达(P<0.01)。结论 MSC能够抑制人乳腺癌细胞的增殖并诱导凋亡,其发生机制可能与端粒酶活性、hTERTmRNA表达的降低有关。