肾综合征出血热病毒在体外培养的血管内皮细胞中增殖的研究

目的 研究肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒在血管内皮细胞（ＨＥＣ）内的增殖。方法 采用微量免疫酶斑法检测ＦＲＳ病毒（Ａ９、ＰＵＶ株）感染后ＨＥＣ的病毒繁殖动态，亲与病毒在Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞繁殖动态相互对比。结果 ＨＦＲＳ病毒感染ＨＥＣ后第一天即可检验到病毒释放，Ａ９株第３在达增殖高峰，ＰＵＶ株第７天达增殖高峰。结论 ＨＦＲＳ病毒可在原妈靶细胞ＨＥＣ内增殖但不同的病毒株繁殖速度不同，这种差异可能与其致     

临沂市1991—1997年肾综合征出血热监测研究

目的 探讨肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）在当地的流行特征和规律以及ＨＦＲＳ疫苗的预防接种效果。方法 统计分析ＨＦＲＳ疫情资料。人群血清流行病学调查、ＨＦＲＳ疫苗接种效果观察、宿主动物带毒率调查采用ＩＦＡＴ方法。宿主动物密度调查采用夹夜法。结果１９９１￣１９９７年全市累计报告ＨＦＲＳ病例３２７９２例，年平均发病率为４７．７１／１０万，男、女比例为１．７９：１（２１０５１／１１７４１），病例中农民占８７     

抗HSV－1杂交瘤细胞系的建立及单抗特性研究

以ＨＳＶ－１为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠，取其脾细胞在ＰＧＥ介导下与ＳＰ２／０细胞常规融合，ＩＦＡ法筛选鉴定，反复克隆，共获得７株能稳定、持续分泌抗ＨＳＶ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系。核型分析染色体数为８７～１０３条之间，Ｉｇ类型分别为ＬｇＧ＿１、ＩｇＧ＿（２ｇ）、ＩｇＧ＿３，腹水抗体效价在１０￣（－５）～１０￣（－７）之间免疫沉淀。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析，２株与１３２Ｋ多肽发生特异性反应，只具有ＨＳＶ－１型特异性，其余３株与１２０～１２８Ｋ多肽，２株与６０Ｋ多肽发生特异性反应，具有ＨＳＶ型共同抗原特异性。７株ＭｃＡｂ与ＣＭＶ均不发生特异反应。这些杂交瘤细胞系的建立对于ＨＳＶ的临床早期、快速诊断有重要的应用价值。     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体与中西医结合治疗的研究

为探索一种更为简便，快速，特异，敏感的肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）抗体的检测方法及中西医结合治疗该病的有效手段。１８６例ＨＦＲＳ病人血清同时采用免疫滴金法９ＣＧＩＤＡ）与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）对比检测特生免疫球蛋白Ｍ抗体（抗ＨＦＲＳ－ＩｇＭ），免疫荧光法（ＨＦＡＴ）对比检测特异性免疫球蛋白Ｇ抗体（抗ＨＦＲＳ－ＩｇＧ）并以２０例发热待排，４８例病毒性肝炎血清作对照；１０１例ＨＦＲＳ病人分组进行中     

两种方法检测EHF患者早期血清中病毒结构蛋白抗体的研究

ＥＨＦ病毒抗原经已知抗核蛋白（ＮＰ）的ＭｃＡｂＡ３５及抗膜蛋白的ＭｃＡｂＡ３Ｇ１亲和层析进行分离纯化，再经高压液相色谱（ＨＰＬＣ）进一步纯化，获得了高纯度的ＥＨＦ病毒结构蛋白：ＮＰ、ＭＰ。书ＮＰ、ＭＰ分别滴于ＰＶＤＦ膜，与早期患者血清进行免疫酶斑点试验，检测患者血清中相应结构蛋白的抗体，并结合临床资料进行临床转归分析；同时与ＨＩ、ＲＰＨＩ检测结果相比较。２８例ＥＨＦ患者血清，斑点试验检测仅ＭＰ抗体阳性４例，ＨＩ检出３例；ＲＰＨＩ检测仅ＮＰ抗体阳性１５例，有５例斑点试验同时检出ＭＰ抗体，说明斑点试验对ＭＰ抗体的检测敏感性高（抗体滴度亦高）。联系ＭＰ、ＮＰ抗体的出现与病情转归的关系发现，ＭＰ抗体先出现的患者病情普遍转重，ＮＰ抗体先出现的患者，病情转轻或趋于稳定，ＭＰ、ＮＰ抗体同时出现的患者，其转归介于上述二者之间，且ＨＩ、ＲＰＨＩ和斑点试验检测结果其差别无统计意义。提示斑点试验用于ＥＨＦ患者血清中结构蛋白抗体的检测更敏感，有可能作为患者病情转归的预测指标，值得进一步推广应用。     

黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备和鉴定

以自己合成的黄曲霉毒素Ｂ＿１一人血清白蛋白（ＡＦＴＢ＿１－ＨＳＡ）偶联物免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，应用杂交瘤技术，建立了两株能持续分泌抗ＡＦＴＢ＿１单克隆抗体（ＡＦＴＢ＿１ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，命名为ＩＢ５和２Ｆ１，接种ＢＡＬＢ／ｃ鼠腹腔均能诱发产生含特异性抗体的腹水。用间接竞争抑制ＥＬＩＳＡ鉴定ＭｃＡｂ的反应特异性，使ＭｃＡｂ与固相黄曲霉毒素Ｂ＿１一牛血清白蛋白（ＡＦＴＢ＿１－ＢＳＡ）结合产生５０％抑制所需的ＡＦＴＢ＿１、Ｂ＿２、Ｇ＿１、Ｇ＿２浓度依次为：１Ｂ５４．０、３６．９、２３．３、４０３．３ｎｇ／ｍｌ，２Ｆ１２．４、２．６、２．８、４。７ｎｇ／ｍｌ。     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体制备及其对病毒抗原特性的鉴定

用肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）免疫Ｌｏｕ／ｃ大鼠脾细胞与ＩＲ９８３Ｆ骨髓瘤细胞融合，获得１１株能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系。用放射免疫沉淀、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ及免疫酶技术等对这一组大鼠单克隆抗体（单抗）进行了特性鉴定和病毒抗原性分析。发现１１株单抗中，９株为抗核壳蛋白（ＮＰ）特异性，２株为抗Ｇ２糖蛋白。大多数抗ＮＰ单抗无中和活性及血凝抑制（ＨＩ）活性，但有２株例外，具有一定程度的中和或（和）ＨＩ活性。而抗Ｇ２单抗均只有一定程度的中和或（和）ＨＩ活性。在ＨＦＲＳＶ抗原性分析方面，可初步将１１株大鼠单抗分成组、亚组、野鼠型及亚型特异性单抗，并对上述单抗特性进行了讨论。     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的单克隆抗体，并对其特性进行系统地鉴定。方法以活的ＲＳＶＬｏｎｇ株滴鼻（ＴＣＩＤ５０为１×１０－６，取１００ＴＣＩＤ５００１２５ｍｌ进行）加ＲＳＶ感染Ｈｅｐ２细胞（ＣＰＥ达～）腹腔注射免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠，用细胞融合技术制备能稳定分泌抗ＲＳＶ的单克隆抗体细胞株。结果细胞融合一次成功，融合率为９６％，抗ＲＳＶ抗体阳性孔率为６５％。鉴定１株杂交瘤细胞Ｆ３株，染色体数为９８条，抗体亚类属ＩｇＧ１，对ＲＳＶ抗原特异；在无补体存在的情况下其腹水抗体中和效价为１∶１２８，且具融合抑制活性，腹水融合抑制效价为１∶６４。结论Ｆ３株单克隆抗体为抗ＲＳＶＦ蛋白的ＭｃＡｂ。     

肾综合征出血热病毒R22株感染人血管内皮细胞的核酸原位杂交研究

用地高辛配基（Ｄｉｇ－）标记我国肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒Ｒ２２株片段ｃＤＮＡＲ３克隆探针对ＨＦＲＳ病毒Ｒ２２株感染的人血管内皮细胞（ＨＥＣｓ）作核酸原位杂交，杂交结果显示在受染的血管内皮细胞胞浆内有明显的杂交信号，而正常细胞和ＨＦＲＳ病毒感染经ＲＮＡ酶处理组不出杂交信号，结果表明ＨＦＲＳ病毒ＲＮＡ主要定位于血管内皮细胞的细胞浆中，提示病毒ＲＮＡ在胞浆中复制。     

UL2基因与HSV—1在三叉神经节中潜伏感染的相关性

目的 深入了解ＵＬ２基因与ＨＳＶ－１在三叉神经节潜伏感染的相关性。方法 选择ＨＳＶ－１国际参考标准株Ｆ株、ＨＳＶ－１ＲＥ（株）（ＵＬ２基因插入突变株）和其亲代ＨＳＶ－１△３０５株（ＴＫＡ＾－）三株病毒进行对比分析研究。对三株ＨＳＶ－１病毒腹腔免疫接种小鼠双侧三叉神经节分别进行ＰＣＲ扩增。结果 ＨＳＶ－１（ＲＥ）和ＨＳＶ－１（△３０５）组ＨＳＶ－１潜伏感染率明显低于ＨＳＶ－１（Ｆ）组（Ｐ〈０．０２５）,提示ＵＬ２基因可能在ＨＳＶ－１形成潜伏感染过程中起一定作用,经ＨＳＶ－１（Ｆ）病毒攻击实验后三个实验组小鼠,其潜伏感染率无明显变化,而对照组小鼠潜伏感染率明显高于ＨＳＶ－１（ＲＥ）组和ＨＳＶ－１（△３０５）组（Ｐ〈０．０１）。结论 ＨＳＶ－１（ＲＥ）株的免疫接种可以预防ＨＳＶ－１潜伏感染的建立。同时也为ＨＳＶ－１Ｒ     

聚合酶链反应检测H2株甲肝减毒活疫苗在人体分布和增殖…

本文运用ＰＣＲ检测６名疫苗接种者，２名受野毒感染性甲肝患者和１名抗ＨＡＶ－ＩｇＭ抗体阳性者，动态观察Ｈ２减毒株甲肝病毒在人体血浆，血白细胞，尿液，唾液和粪便中分布与增殖状况，并做了血清甲肝抗体（ＩｇＭ和ＩｇＧ）测定。结果表明疫苗株主要在人体血白细胞内定位增殖复制，而野毒株感染部位主要在人体消化道；疫苗株口服途径感染能力已大大下降，其传播危险性也大为减少，疫苗株只引起低滴度中和抗体，而野毒株引起抗体     

逆转录病毒载体介导的基因治疗中可复制逆病毒的检测

目的：探讨逆转录病毒载体导的基因治疗中,可复制逆转录病毒（ＲＣＲ）的检测方法,为其在应用中的安全性奠定基础。方法：构建含抗ＨＩＶ－、整合酶单链抗体基因的逆转录病毒表达载体（pＳＬＸＣＭＶ／ＩＮ－sＦv）,应用３Ｔ３放大实验继Ｓ＋／Ｌ－试验对其包装细胞（ＰＡ３１７／ＩＮ－sＦv）上清中ＲＣＲ进行了检测,并以野生型４０７０Ａ病毒为阳性对照。结果：含ＩＮsＦv的包装细胞上清中ＲＣＲ呈阴性,不同稀释度的阳性对照     

PCR法在疱疹病毒性脑炎诊断及疗效观察中的应用

选择疱疹病毒科病毒ＤＮＡ多聚酶基因高保守区中的一对引物，一次ＰＣＲ可同时扩增疱疹病毒科的４种病毒［单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ１）、单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ２）、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）、及巨细胞病毒（ＣＭＶ）］相应的ＤＮＡ片段。根据扩增产物分子的大小及对扩增产物酶切分析，可将标本中的４种病毒准确分型。用该法检测临床疑为病毒脑炎患者和其他中枢神经系统疾病患者（对照组）的脑脊液（ＣＳＦ），脑炎组ＣＳＦ阳性率３０％（９／３０），对照组ＣＳＦ阳性率６．７％（２／３０）；其中８例为ＨＳＶ１阳性，２例为ＣＭＶ阳性，１例为ＨＳＶ２阳性。２例病毒脑炎患者经用无环鸟苷抗病毒治疗７～１０ｄ后其ＣＳＦ中的ＨＳＶ１ＤＮＡ由阳转阴。由此说明ＰＣＲ法不仅可早期诊断疱疹病毒性脑炎，还可显示抗病毒药物的疗效。     

乙型肝炎病毒DNA疫苗的免疫效果

用已构建的不同载体乙型肝炎。基因疫苗（ＰＣＲ３．１－Ｓ，ｐｃＤＮＡ３－Ｓ）和乙型肝炎Ｃ基因疫苗（ＰＣＲ３．１－Ｃ０分别给Ｂａｌｂ／ｃ小鼠多点肌肉注射，２周后追加免疫一次，用ＥＬＩＳＡ法及ＭＴＴＩ地分别检测小鼠血清抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢＣ抗体及地ＨＢｓＡｇ或ＨＢｃＡｇ的特异性增殖反应。结果：免疫接种２周后小鼠血清抗－ＨＢＳ及抗－ＨＢＣ抗体ＯＤ值分别为０．８３７３和０．７９６１均明显高于对照组（０．１２     

免疫转印技术分析流行性出血热病毒抗原组分的研究

免疫转印技术分析流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）陈株、Ｒ_(２２)株结构蛋白。病毒抗原系感染乳鼠脑内增殖，硫酸鱼精蛋白—ＰＥＧ法提取。采用免疫ＥＨＦＶ血清（浙江Ｒ３血清，抗Ｒ２２血清）及抗ＥＨＦＶ单克隆抗体（Ｒ_(３１)、Ａ_(１９)、Ａ_(２０)、Ａ_(３５)、Ａ_(２５—１)）对两株病毒多肽抗原进行分析。结果陈株具有７５ＫＤ，６９ＫＤ，６６ＫＤ，６１ＫＤ４条多肽，Ｒ２２株具有７２ＫＤ．６９ＫＤ，的ＫＤ３条多肽。抗体识别模式表明两株病毒抗原仅有微小的株间差异。     

血清急性期蛋白EB病毒IgA／VCA，IgA／EA抗体测定在鼻咽癌诊断中的应用

测定１９０例鼻咽癌（ＮＰＣ）患者血清中急性期蛋白（ＡＰＰＳ）包括：唾液酸（ＳＡ）．α＿１－抗胰蛋白酶（α＿１－ＡＴ），α＿１－酸性糖蛋白（ａα＿１－ＡＧＰ），触珠蛋白（ＨＰ），铁传递蛋白（ＴＦ）和前清蛋白（ＰＡ）及ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＩｇＡ／ＶＣＡ，ＩｇＡ／ＥＡ抗体，并评价ＡＰＰＳ和ＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ，ＩｇＡ／ＥＡ抗体对鼻咽癌的诊断价值。。将ＡＰＰＳ测定值经逐步判别分析统计学处理，求得判别函数，用以对ＮＰＣ进行判别诊断。结果发现：ＮＰＣ治疗前组ＡＮＰＳＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ，ＩｇＡ／ＥＡ与临床病理诊断的符合率分别为８１．８８％和５６．５７％，而治疗后未复发组两者的符合率分别为８０．９５％和３３．３３％。结果表明：对ＮＰＣ的诊断和随访ＡＰＰＳ优于ＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ，ＩｇＡ／ＥＡ抗体。     

原位分子杂交检测大鼠肾综合征出血热病毒隐性感染和病毒RNA的体内分布

目的和方法：用异羟基洋地黄毒苷配基－１１－ｄＵＴＰ随机引物延伸法分别标记肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）汉坦株病毒Ｍ与ＳＲＮＡ全片段ｃＤＮＡ作为探针，用核酸原位分子杂交法检测某动物所一批大鼠ＨＦＲＳ病毒的隐性感染及病毒ＲＮＡ的组织细胞定位和分布．结果：９８只大鼠中８８只病毒ＲＮＡ阳性，阳性率８９．７９％，阳性率最高的脏器是肝脏７９／８５，其次为心脏２２／８３，再次为肾脏１４／７９，其余脏器阳性率较低．阳性部位主要在各脏器的实质细胞胞浆内，呈细颗粒状，未见于核内．结论：结果说明本批大鼠ＨＦＲＳ病毒隐性感染率极高；大鼠ＨＦＲＳ病毒ＲＮＡ的阳性检出率明显高于同批大鼠病毒抗原和血清抗体的阳性检出率，说明原位分子杂交检测病毒ＲＮＡ对确定动物病毒隐性感染具有重要的流行病学意义．病毒ＲＮＡ主要存在于肝脏，提示肝脏可能是病毒的主要潜伏部位，病毒可能主要由粪便排除．     

在人二倍体细胞上分离和适应的甲型肝炎病毒株

应用人二倍体细胞ＫＭＢ＿（１７）株，从甲型肝炎患者粪便中直接分离到３株甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）。３株ＨＡＶ在ＫＭＢ＿（１７）细胞上已稳定地传代１０次，其抗原滴度可达５１２，感染滴度为７．０～７．７５１ｏｇＴＣＩＤ＿（５０）／ｍ１。用直接免疫荧光法在感染细胞胞浆内检测到特异性荧光着染颗粒，免疫电镜可见成堆２７～３０ｎｍ空心和实心混杂的病毒颗粒，中和试验结果表明抗－ＨＡＶ血清可完全中和这些病毒。证明分离的３株病毒均属ＨＡＶ，可作进一步研究应用。     

常频喷射通气和高频喷射通气对蒸气吸入伤犬通气效率的比较

采用蒸气吸入性损伤犬模型，比较常频喷射通气（ＮＦＪＶ）和高原喷射通气（ＨＦＪＶ）的通气效率。结果表明：（１）与ＨＦＪＶ比较，ＮＦＪＶ时的气道压峰值显著升高（Ｐ＜０．０１）；（２）与ＨＦＪＶ比较，ＮＦＪＶ时的Ｐ＿ＡＯ＿２显著下降（Ｐ＜０．０５），ＰａＣＯ＿２显著升高（Ｐ＜０．０１）；（３）与ＨＦＪＶ比较，ＮＦＪＶ时的心输出量（ＣＯ）、氧供量（ＤＯ＿２）和氧耗量（ＶＯ＿２）均显著减少（分别减少１４％、２０％和２４％，Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），而ＰａＯ＿２、ＳａＯ＿２、Ｐ＿（Ａ－ａ）Ｏ＿２、ＰａＯ＿２／Ｆ＿１Ｏ＿２、ＰｖＯ＿２、ＳｖＯ＿２和氧摄取率（ＥＲＯ＿２）均无明显变化。提示，ＮＦＪＶ与ＨＦＪＶ比较，前者导致肺泡通气不足和ＣＯ＿２潴留，且对循环和组织氧合有不良影响。     

己酮可可碱对呼吸道合胞病毒所致的TNF—α基因表达水平的影响

观察己酮可可碱（ＰＴＸ）对呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）所诱导的巨噬细胞肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）含量及ＴＮＦ－αｍＲＮＡ表达水平的影响。收集Ｂａｌｂ／ｃ小鼠腹腔巨噬细胞，随机分成三组①对照组（ＮＯＲ组）；②感染组（ＲＳＶ组）；培养基中含有１０＾６ｐｆｕ的ＲＳＶ；③己酮可可碱组（ＰＴＸ组）：用ＲＳＶ（１０＾６ｐｆｕ）感染后，培养基中加入ＰＴＸ（１ｍｇ／ｍｌ）；每组于ＲＳＶ感染巨噬细胞ＦＮＦ－αｍＲＮＡ表