我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA体外RNA转录物感染性的研究

目的：研究我国登革２型病毒４３株（Ｄ２－４３）基因组全长ｃＤＮＡ体外ＲＮＡ转录物的感染性,为进一步阐明登革２型病毒的致病机制及探索其新型疫苗奠定基础。方法：用ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶系统制备Ｄ２－４３基因组全长ｃＤＮＡ的体外ＲＮＡ转录物,纯化后经电穿孔法转染Ｃ６／３６细胞,观察致细胞病变作用以判断其感染性。从病变的细胞和培养上清中提取总ＲＮＡ,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增及克隆测序的方法证实细胞病变确为ＲＮＡ转录物感染所致;同时收集可产生细胞病变的培养上清,再感染Ｃ６／３６细胞以进一步证实该体外ＲＮＡ转录物感染的稳定性。结果：以我国Ｄ２－４３病毒株基因组全长ｃＤＮＡ为模板制备的体外ＲＮＡ转录物可使Ｃ６／３６细胞产生病变,从病变细胞和培养上清中可扩增获得病毒特异的基因片段。在培养细胞中进行连续传代仍可产生细胞病变作用。结论：构     

改进的锚定反转录PCR法克隆中国人庚型肝炎病毒3′末端基因

应用改进的锚定反转录ＰＣＲ（ａｎｃｈｏｒｅｄＲＴ－ＰＣＲ）法，在总ＲＮＡ的３′端“加尾”，Ｏｌｉｇｏｔｅｘ提纯ｐｏｌｙ（Ａ）＋ｍＲＮＡ，Ｏｌｉｇｏｄ（Ｔ）－ａｎｃｈｏｒ引物合成第１链ｃＤＮＡ，ａｎｃｈｏｒ引物及特异引物进行“半巢式”ＰＣＲ，从献血员血清中扩增出ＨＧＶ３′末端基因片段。序列分析结果表明：此中国株ＨＧＶ３′末端基因序列与美国株存在较大差异，但阅读框架相似。用此方法克隆单链ＲＮＡ病毒基因组的３′末端。由于许多动物病毒和９０％以上的植物病毒均为单链ＲＮＡ基因组，故该技术也可应用于其它病毒基因组未知末端的基因克隆。     

我国三株登革2型病毒基因组全序列的测定及系统发生树分析

目的：测定我国３株登革２型病毒（ｄｅｎｇｕｅ２ｖｉｒｕｓ,ＤＥＮ２）流行株的全序列并确定其基因型。方法：运用ＲＴ－ＰＣＲ和５′,３′ＲＡＣＥ法测定我国３株登革 全序列,采用邻结法绘制系统发生树。：ＤＥＮ２－０４、４３、４４株的核苷酸及氨基酸差异分布于整个序列之中,ＤＥＮ２－０４与ＤＥＮ２－４３、４４共有２１个氨基酸位点的差异引起极性或电荷变化。ＤＥＮ２－０４株与ＪＡＭ株、越南分离株和泰国分离株同为     

新分离登革2型病毒福建株5‘和3’端序列测定及二级结构分析

目的：测定新分离登革２型病毒福建（ＦＪ－１０）株５’和３’端非编码区序列，分析二级结构与功能的关系。方法：从ＦＪ－１０株感染的乳小鼠脑中提取总ＲＮＡ，利用ＲＡＣＥ法分别扩增５’和３’端ｃＤＮＡ片段，并克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体中，然后分别测定插入片段的核苷酸序列，并用ＲＮＡ绘图软件预测５’和３’端非编码区的二级结构。结果与结论：ＦＪ－１０株５’和３’端非编码区长度分别为９６和４５４个核苷酸，并形成复杂的茎环结构，可能与病毒的复制和毒力有关。     

反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒的初步研究

以质粒（ｓＳＶＬＤ３）为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到一条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将上述片段插入到ｐＧＥＭ－３Ｚ中，经筛选、鉴定，得到一重组质粒（ｐＨＤＶ１０８），经测序发现有２个碱基变异，以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。针对核酶两个重要的单链区，设计并合成二条反义寡核背酸（ＡＳＯＮ），当在转录反应中同时加入ＡＳＯＮ后，核酶的自裂率下降均较明显，当ＡＳＯＮ浓度为１６ｕｍｏ１／Ｌ时，核酶自裂抑制率均在７０％以上。提示，ＡＳＯＮ可与核酶两个重要的单链区结合，从而抑制核酶的自裂活性。     

PCNA基因反义RNA表达质粒的构建及对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应

为观察ＰＣＮＡ基因反义ＲＮＡ表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应,用ＤＮＡ重组法将人ＰＣ－ＮＡ基因反向克隆到真核细胞表达质粒ｐＤＯＲ－ｎｅｏ中,构建成ＰＣＮＡ基因真核表达质粒ｐＤＲ－ＰＣＮＡ,用ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＴＭ介导转染人胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１,并接种于裸鼠背部皮下。经Ｇ４１８筛选获得的转染细胞系ＳＧＣ／ＰＣＮＡ与亲本细胞相比,其生长速度减慢,ＲＮＡ、蛋白质生物合成受到抑制,Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期ＤＮＡ含量降低,移植瘤生长速度减慢,瘤体平均直径（０．５４±０．１３）ｃｍ,明显小于对照组（１．５１±０．１１）ｃｍ。结果表明,ＰＣＮＡ基因反义ＲＮＡ表达质粒对胃癌裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用。     

高压氧对实验兔海水型呼吸窘迫综合征的预防作用

目的　观察高压氧（ＨＢＯ）对海水淹溺肺水肿（ＰＥ－ＳＷＤ）的预防作用。方法　复制ＰＥ－ＳＷＤ动物模型后,３２ 只兔随机分为ＰＥ－ＳＷＤ对照组、药物治疗组和ＨＢＯ组。对３ 组兔的动脉血气酸碱指标、Ｃａ２＋ 沉淀反应颗粒、ｃ－ｆｏｓ ｍ ＲＮＡ和ｃ－ｊｕｎ ｍ ＲＮＡ 等进行自动检测和定量分析比较,并观察分析３组兔的存活时间和海水型呼吸窘迫综合征（ｓｅａｗ ａｔｅｒ－ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｔｒｅｓｓ ｓｙｎｄｒｏｍ ｅ,ＳＷ－ＲＤＳ）发生率。结果　ＨＢＯ组兔ＰａＯ２ ,ＳａＯ２ 和ｐＨ ３ 项指标比药物组显著升高（Ｐ＜ ０．０１）,动物存活时间［（４３．０３±７．１９）小时］比药物组［（２３．５８±１．４９）小时］明显延长,Ｃａ２＋ 沉淀反应颗粒,ｃ－ｆｏｓ ｍ ＲＮＡ,ｃ－ｊｕｎ ｍ ＲＮＡ和ＳＷ－ＲＤＳ发生率ＨＢＯ组则明显低于药物组（Ｐ＜ ０．０１）。结论　ＨＢＯ可明显提高ＰａＯ２ 和ＳａＯ２,有效改善低氧血症和代谢性酸中毒,减轻ＰＥ－ＳＷＤ时肺组织的损伤,从而可防止ＰＥ－ＳＷＤ向ＳＷ－ＲＤＳ转化。     

长链RT-PCR扩增我国登革2型病毒5′半分子

登革病毒是单股正链ＲＮＡ病毒 ,基因组全长约 11ｋｂ ,近95 %为编码基因 ,由单一的开放读码框编码 3种结构蛋白和7种非结构蛋白。目前登革病毒致病机制仍不很清楚 ,也缺乏安全有效的疫苗。反向遗传学技术 ,即由病毒的全长ｃＤＮＡ克隆体外转录获取ＲＮＡ病毒的技术 ,为深入研究ＲＮＡ病毒基因组结构和功能、筛选候选疫苗株等方面的工作开辟了新途径 ,该技术实现了对ＲＮＡ病毒基因组的直接操作 ,具有广阔的应用前景。已报道的登革病毒全长ｃＤＮＡ克隆有 4株 ,均为体外连接法获得 ,即用逆转录ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ)法扩增出小片段ｃＤＮＡ逐…     

戊型肝炎病毒F86株的某些生物学性状及分子生物学特征的鉴定

目的：对法国赠送的戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ,ＨＥＶ）Ｆ８６株进行生物学性状与基因特征的鉴定,并与我国分离的８７Ａ株病毒进行比较。方法：用常量法测定病毒的血凝滴度;微量滴定法测定在２ＢＳ、Ａ５４９、ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中的病毒滴度;腹腔注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,３周后取血清进行抗体检测;利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从接种病毒的细胞培养液中直接检测病毒ＲＮＡ,ＰＣＲ阳性产物纯化回收后克隆并测序。结果：Ｆ８６株病毒血凝试验阴性;在２ＢＳ、Ａ５４９细胞中连传３代,病毒滴度稳定,在ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中病毒滴度稍低;在接种Ｆ８６株病毒的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠中可检出特异性抗体;在其细胞培养物中检出ＨＥＶ聚合酶区一段核苷酸序列,测序结果与我国８７Ａ株的同源性为９８．７％。结论：Ｆ８６株病毒不能凝集人Ｏ型红细胞,对２ＢＳ、Ａ５４９及ＬＬＣ－ＭＫ２细胞均敏感,对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠不致病。部分序列的测定结果表明该株病毒确为ＨＥＶ,从而由国外实验室证实ＨＥＶ可用人源性细胞分离。     

人β－干扰素在杆状病毒载体与Sf细胞体系中的表达

采用苜蓿尺蠖核多角休病毒（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ中多角体蛋白基因启动子及其前后序列作为转移载体，将人β－干扰素（ＨｕＩＦＮ－β基因插入转移载体ｐＵＡｃ－５，构建成ｐＡｃ－ＩＦＮ－β载体。该质粒ＤＮＡ与野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ经ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ共转染秋粘虫（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）传代细胞（Ｓｆ９细胞），利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征，进行病毒空斑筛选。用核酸杂交方法鉴定出携带ＨｕＩＦＮ－β基因的主组病毒。用重组病毒感染Ｓｆ９细胞，可表达ｒＨｕＩＦＮ－β。在１．０×１０￣６细胞／ｍｌ感染上清中测定ｒＨｕＩＦＮ－β最高活性为３．０×１０￣６ＩＵ／ｍｌ，抗天然ＨｕＩＦＮ－β抗体能完全中和ｒＨｕＩＦＮ－β的抗病毒活性。     

延迟性脾破裂误漏诊原因分析

目的探讨延迟性脾破裂误漏诊原因和预防措施.方法回顾性分析总结12例延迟性脾破裂中的诊断和误漏诊的经验与教训.结果本组延迟性脾破裂的误漏诊5例(41.66%).对多发伤与脾破裂并存可能认识不足,外伤史轻微或伤员隐瞒外伤史,缺乏腹痛-缓解-突然再腹痛的典型病史,缺乏“对冲性脾破裂”力学分析和整体化诊断思路等为其误漏诊的主要原因.结论详细的外伤史和全面系统检查,重视腹以外多发伤掩盖腹内脏器伤及延迟性脾破裂可能.确立外伤-腹内脏器伤-脾破裂整体化诊断思路.不间断地辅以B超检查脾形态学变化和腹内有无积液,腹腔穿刺确定有无血腹、X线胸腹部检查观察左侧胸肋角和膈肌运动情况、必要时CT检查以尽早发现脾包膜下血肿,降低延迟性脾破裂误漏诊率.     

湿润烧伤膏治疗婴儿湿疹的临床疗效观察

目的观察、探讨湿润烧伤膏(MEBO)治疗婴儿湿疹的临床疗效。方法将84例婴儿湿疹患儿随机分为治疗组(44例)和对照组(40例),治疗组外涂湿润烧伤膏治疗,对照组外涂湿疹膏治疗,连续治疗1周后,观察两组疗效。结果治疗组有效率为97.73%,对照组有效率为82.50%;两组疗效经秩和检验,差异具有统计学意义(P0.05);随访1个月,治疗组未见复发,对照组有2例患儿复发。结论湿润烧伤膏治疗婴儿湿疹疗效好,无毒副作用,安全可靠。     

靶控吸入七氟烷与传统吸入七氟烷模式麻醉效果比较

目的比较靶控吸入模式与新鲜气体控制吸入模式两种七氟烷吸入模式下手术患者脑电双频指数（BIS）波动、血流动力学稳定性、辅助药物应用、七氟烷消耗量、苏醒情况与术中知晓等方面的差异。方法选择80例拟行脊柱手术的患者,随机分为靶控吸入组（T组）和新鲜气体控制吸入组（F组）,每组40例。两组麻醉诱导相同,顺序静注咪达唑仑0.05 mg/kg和芬太尼4μg/kg后,吸入8%的七氟烷,然后静注维库溴胺0.1 mg/kg,3 min后气管插管。术中麻醉,T组靶控呼出七氟烷浓度为2.3%,F组持续吸入2.3%七氟烷（氧流量1.5 L/min）,两组舒芬太尼按0.15 ng/ml目标血浆浓度靶控输注（TCI）,按需追加维库溴胺。记录并比较两组患者的脑电双频指数（BIS）值、血压、心率、辅助药物剂量、七氟烷消耗量、苏醒时间、苏醒期躁动和术中知晓等情况。结果两组患者均顺利完成手术,T组在术中和结束时的BIS值高于F组（P〈0.05）,T组术中平均动脉压（MAP）高于F组（P〈0.05）,去氧肾上腺素和七氟烷用量明显低于F组（P〈0.05或P〈0.01）,苏醒时间明显短于F组（P〈0.01）,其余指标两组间无显著性差异。结论七氟烷靶控吸入麻醉模式麻醉深度确实可靠,术中血流动力学稳定,七氟烷消耗量低,术后苏醒迅速完全,值得推广应用。     

甲状腺结节术前检查对其良恶性诊断的预测价值

目的 探讨预测甲状腺结节（TN）良恶性的术前检查指标。 方法 收集济宁市第一人民医院2016年2月至2019年2月接受甲状腺手术的513例TN患者的临床资料,其中男性111例、女性402例,年龄13~80（49.02±12.95）岁。以患者术后病理结果为“金标准”,分为良性组（275例）和恶性组（238例）。检测患者的血清促甲状腺激素（TSH）、甲状腺球蛋白（Tg）、甲状腺球蛋白抗体（TgAb）和甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）的水平。患者行甲状腺超声和甲状腺静态显像检查,采用超声甲状腺影像报告和数据系统进行分级。采用t检验、卡方检验及Mann-Whitney秩和检验比较2组患者的基本资料;采用单因素回归、Logistic多因素回归对所有指标进行分析,并预测甲状腺癌的相关危险因素。 结果 2组TN患者的年龄（χ2=26.716,P=0.000）、体重指数（t=−2.301,P=0.022）、结节功能状态（χ2=16.882,P=0.001）、结节直径大小（χ2=151.817,P=0.000）、TSH水平（Z=−4.430,P=0.000）和超声检查（χ2=225.712,P=0.000）均存在差异,且差异有统计学意义;2组患者的性别、肿瘤家族史、文化程度、合并症、体重、身高、Tg、TgAb和TPOAb水平的差异均无统计学意义。单因素分析结果显示,TN患者的年龄、体重、文化程度、TSH和Tg水平、结节直径大小、超声检查（OR=1.004、0.980、0.514、1.280、1.002、1.222、0.589,均P< 0.05）可能与甲状腺癌相关。Logistic多因素回归分析结果显示,TSH水平（OR=1.198,P=0.046）、年龄（OR=0.962,P=0.001）和结节直径大小（OR=0.251,P=0.000）是甲状腺癌的独立危险因素,超声检查（OR=16.390,P=0.000）预测意义较大。 结论 超声检查对预测甲状腺癌有重要意义,结合患者年龄、血清TSH水平和结节直径大小,预测甲状腺癌的价值可能更大。     

消妇炎胶囊辅料的合理性实验研究

目的确定消妇炎胶囊的辅料及用量。方法以浸膏粉的吸湿率和流动性为考察指标,对加入淀粉、糊精及微晶纤维素3种不同辅料后制得的颗粒进行考察,优选出最佳辅料后,再对最佳辅料的不同用量进行考察。结果加入辅料后,颗粒的抗吸湿能力和流动性都明显改善,其中加入淀粉后,分别在6、12、24、48、60 h测得的吸湿率为2.01%、4.03%、5.98%、6.66%、7.31%,休止角为34.61°,均小于糊精与微晶纤维素,表明加入淀粉颗粒质量最好;每80 g浸膏粉中分别加入30、45、60 g淀粉,综合判定45 g较好。结论每80 g浸膏粉加入淀粉45 g为辅料用量参数,制得颗粒的抗吸湿能力和流动性均好,可节约成本。     

脑脊液检测对结核性脑膜炎诊断的意义

 目的 评估3种脑脊液检测方法对结核性脑膜炎(简称结脑)诊断的价值.方法 将150 例住院患者分为2组,其中结核性脑膜炎组(结脑组)73例,对照组77例.所有患者均进行脑脊液细胞学检查(简称细胞学),腺苷脱氨酶检测(简称ADA法)和脑脊液单核细胞内结核抗原(简称抗原法)的检测.结果 细胞学检测显示,结脑组混合性细胞学反应占82.2%,对照组仅27.2%,有统计学差异.ADA法的敏感性为89%,特异性80.5%,阳性预测值81.2%,阴性预测值91.2%.抗原法的敏感性84.9%,特异性100%,阳性预测值100%,阴性预测值87.5%.结论 抗原法的特异性和阳性预测值最好,联合检测对诊断的价值更大.     

骨原发性淋巴瘤影像学特点分析

目的探讨骨原发性淋巴瘤(PLB)的影像学特点,提高临床骨原发性淋巴瘤的影像诊断率。方法回顾性分析18例经临床和病理证实的骨原发性淋巴瘤的X线平片、CT及MRI特点。结果男10例,女8例,平均年龄(40.6±5)岁,单发16例,多发2例。股骨5例次,腰椎4例次,髂骨、胸椎各3例次,颅骨、胫骨各2例次,骶椎、肱骨各1例次;X线及CT表现为浸润型4例,溶骨型7例,硬化型1例,混合型5例,囊变型1例,明显骨膜反应3例,合并病理骨折5例,16例有明显软组织肿块,MRI检查:病变在T1WI多呈低或等信号,T2WI多呈等或稍高信号,呈明显均匀或不均匀强化。结论 (1)骨原发性淋巴瘤影像学上缺乏特征性表现,X线、CT及MRI综合分析,有助于明确诊断、鉴别诊断。(2)全身症状轻,骨皮质破坏的范围相对小而软组织肿块大,骨膜反应轻,MRI的T2WI信号不高,增强扫描多呈明显强化,是其相对特征性影像学特点。     

多发性肋骨骨折两种处置方式的比较

目的 探讨多发性肋骨骨折治疗的有效方法.方法 按纳入及排除标准筛选34例常规外固定病例（常规组）及31例行肋骨内固定术病例（内固定组）,比较两组的住院时间、疼痛持续时间、呼吸情况,以及肺部感染发生率.结果 两组患者一般资料及合并肺挫伤和胸水情况比较差异无统计学意义;内固定组住院时间、疼痛持续时间、呼吸频率恢复时间、SaO2恢复时间和肺部感染与常规组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.常规组肺部感染发生率为26.5％（9/34）,内固定组肺部感染发生率为3.2％ （1/31）,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 肋骨内固定术优于常规外固定法.     

Study of age of fusion of hyoid bone

The present study was conducted to determine the age of fusion of greater cornua with the body of hyoid bone. Age of fusion of hyoid bone can help in determining the age of an individual, especially of unknown dead bodies where only skeletal remains are available. A victim of compression of neck will more likely have fracture of hyoid bone if his hyoid bone is fused. Indian authors have reported that the fusion of hyoid bone occurs after 40 years of age. Studies done by foreign workers observed that hyoid bone fused at an earlier age (30-40 years). A total of 170 excised hyoid bones from dead bodies belonging to the age group of 20-65 years were studied. Fusion occurred earlier in females as compared to males by about 5 years. The mean age of unilateral and bilateral fusion in males was 38.25 and 53.16 years, respectively. The mean age of unilateral and bilateral fusion in females was 38.00 and 48.50 years, respectively. All the hyoid bones were fused after the age of 60 years. No significant differences were found between the fusion on right and left side.     

武警某院急诊科抗菌药物处方分析

 目的 了解武警某院急诊科抗菌药物的使用情况。方法 提取急诊科2015年下半年的处方,遴选出使用抗菌药物(除去眼膏、外用膏药及中成药)的处方。对抗菌药物处方进行分类统计及分析, 包括使用抗菌药物的种类及比例、使用居前6位的抗菌药物、抗菌药物的联合使用情况等。结果 在2015年下半年急诊处方中有抗菌药物处方3872张,占处方总数的22.3%。使用抗菌药物构成比中,喹诺酮类药物使用频率最高,占42.9%。使用居第一位的药物是左氧氟沙星,占39.8%。单联处方77.86%,二联处方22.14%,无三联处方。结论 2015年下半年我院急诊科抗菌药物使用符合卫生部抗菌药物使用规定,但有些方面还需要进一步改进。