氧化低密度脂蛋白增加巨噬细胞基质金属蛋白酶-9和-12的表达

为探讨巨噬细胞在动脉粥样斑块不稳定性中的作用机制，观察致动脉粥样硬化的主要炎性因子—氧化低密度脂蛋白(oxLDL)，对巨噬细胞基质金属蛋白酶MMP—9和MMP—12表达和分泌的影响。在体外分离培养小鼠腹腔巨噬细胞，以不同浓度低密度脂蛋白(LDL)、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)作用细胞；作用6h后用RT—PCR检测MMP—9，MMP—12mRNA表达，作用24h后用Western blot和β—酪蛋白酶谱法检测MMP—9，MMP—12酶蛋白的分泌及活性。ox—LDL增强巨噬细胞MMP—9，MMP—12mRNA表达和酶蛋白的分泌及活性，对MMP—12的诱导作用更为显著且呈浓度依赖性。表明oxLDL可能通过同时上调巨噬细胞基质金属蛋白酶MMP—9和MMP—12表达和分泌而提高富含巨噬细胞粥样斑块的不稳定性。     

氧化低密度脂蛋白促进血管内皮细胞表达基质金属蛋白酶-2

目的:用氧化低密度脂蛋白干预培养的人脐静脉内皮细胞, 观察内皮细胞表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的改变。方法:用胶原酶消化法培养人脐静脉内皮细胞, 分组后分别予以25mg/LLDL、25mg/LOX-LDL进行干预。提取细胞总RNA和总蛋白分别进行RT-PCR、Westernblotting检测, 同时收集条件培养基行酶谱法(zymography)检测MMP-2的活性。结果:经mRNA、蛋白和酶活性检测, 发现25mg/LOX-LDL干预时, MMP-2的表达水平明显高于对照和25mg/LLDL。结论:OX-LDL能促进内皮细胞表达MMP-2, 这提示血管细胞外基质的降解在氧化脂蛋白诱发的动脉粥样硬化斑块产生和破裂机制中起着一定作用。     

大肠癌组织中基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达

目的：探讨大肠癌组织中基质金属蛋白酶－2（MMP－2）和基质金属蛋白酶－9（MMP－9）的表达与临床病理参数之间的关系。方法：应用免疫组织化学S－P法检测87例大肠癌组织中MMP－2和MMP－9的表达情况。结果：87例大肠癌组织中MMP－2和MMP－9的表达阳性率分别为56．3％和55．2％。MMP－2和MMP－9在侵及肌层的阳性表达率明显低于侵及浆膜层，淋巴结转移阳性组高于淋巴结转移阴性组，差异均有显著性（P＜0．05）。Dukes分期中，C、D期中MMP－2和MMP－9的阳性表达率明显高于A、B期（P＜0．05），而与性别、年龄、肿瘤部位、组织学类型和分化程度均无关（P＞0．05）。结论：MMP－2和MMP－9可能在大肠癌浸润转移过程中发挥重要作用。     

氧化型胆固醇下调血管平滑肌细胞金属蛋白酶组织抑制剂基因表达

目的：研究氧化型胆固醇对血管平滑肌细胞MMP-9及TIMP-1表达的影响。方法：离体培养免主动脉血管平滑肌细胞，分别用胆固醇、Triol与25-OH负载细胞，狭缝杂交测定TIMP-1mRNA表达，细胞免疫化学测定MMP-9与ITMP-1蛋白表达。结果：Triol与25-OH(1mg/L,24h）抑制TIMP-1 mRNA及蛋白表达，对MMP-9蛋白表达无影响。结论：氧化型胆固醇可以下调血管平滑肌细胞TIMP-1基因表达。     

大鼠肺纤维化中肺泡Ⅱ型上皮细胞基质金属蛋白酶-2和膜型基质金属蛋白酶 mRNA的表达

在肺纤维化形成过程的不同阶段分离和提取肺泡Ⅱ型上皮细胞 ,应用逆转录 聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)方法 ,对不同时期细胞内基质金属蛋白酶 2 (ＭＭＰ 2 )及膜型基质金属蛋白酶 (ＭＴ1 ＭＭＰ)ｍＲＮＡ进行定量研究 ,探讨ＭＭＰ 2和ＭＴ1 ＭＭＰ在肺间质纤维化过程中的来源、动态变化及其作用。一、材料与方法1 动物分组 :清洁级ＳＤ大鼠 (雄性 ,体重 16 0～ 2 0 0ｇ ,复旦大学医学院动物部 ) 5 0只 ,随机分为 10组。 5组为实验组 ,气管内注入博莱霉素Ａ5 (天津市太河制药有限公司 ) 1 5ｍｇ/只 (溶于 0 2ｍｌ生理盐水 ) ;另 5组为对照组 …     

氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导血管平滑肌细胞增殖的机制

ox-LDL能诱导血管平滑肌细胞增殖 ,是致动脉粥样硬化的重要因素。近几年来 ,从细胞内信号、内含增殖活性成分、生长因子作用及氧化效应等方面深入探讨了其作用机制。ox LDL诱导血管平滑肌细胞增殖可能存在多种机制 ,目前还有许多问题有待研究     

雷帕霉素对氧化低密度脂蛋白刺激血管平滑肌细胞信号转导的抑制作用

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及分泌功能改变的细胞内信号转导机制及雷帕霉素(rapamycin)干预作用。方法 培养兔血管平滑肌细胞分为7组处理。以直接细胞计数及噻唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖能力；酶联免疫法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平；Western免疫印迹法定量蛋白激酶B(PKB)表达水平；免疫沉淀、特异底物组蛋白H2Bγ^32P掺入量测定PKB活性。结果 oxLDL使细胞增殖指标增加1．62～3．2倍，细胞因子分泌增加3～5倍，PKB活性增加11．8倍。而相同浓度的低密度脂蛋白对细胞增殖及细胞因子分泌无明显影响。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)特异性抑制剂沃漫青霉素(Wortrmannin．WT)及雷帕霉素均可显著抑制VSMC增殖、细胞因子分泌及PKB活性，并完全逆转oxLDL的上述作用。结论 PI3K／PKB是oxLDL促VSMC增殖及分泌功能的信号通路之一。雷帕霉素可能通过抑制PI2K／PKB对VSMC生物学功能发挥较全面调控效用。     

低氧抑制猪肺动脉平滑肌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的探讨低氧对猪肺动脉平滑肌细胞（PASMC）分泌基质金属蛋白酶（MMPs）的影响。方法采用酶谱法测定PASMC培养基中MMP-2和MMP-9的酶活性，免疫印迹法检测培养基中MMP-2和MMP-9的蛋白表达，免疫组化法测定细胞原位MMP-2和MMP-9的蛋白表达，RT-PCR法检测mRNA的表达。结果低氧后PASMC分泌的MMP-2酶活性、细胞内外蛋白表达量、mRNA表达量均下降；MMP-9酶活性、细胞外蛋白表达量下降，而细胞内蛋白表达无变化。结论低氧可抑制PASMC分泌MMP-2和MMP-9的酶活性，其机制可能是低氧影响PASMC中MMP-2基因的转录、影响MMP-9蛋白表达后的分泌与活化，导致MMP-2和MMP-9酶活性的改变。     

肝星状细胞基质金属蛋白酶-2表达及其调控机制分析

基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)是细胞外基质降解的最重要蛋白水解系统 ,探讨ＭＭＰｓ与肝星状细胞细胞外基质 (ＥＣＭ)关系已成为国际研究肝脏纤维化的热点。我们使用不同条件培养肝星状细胞 ,观察星状细胞分泌ＭＭＰ 2酶活性及ｍＲＮＡ表达 ,研究细胞外基质重塑的分子生物学机制 ,探讨细胞外基质与ＭＭＰｓ表达之间的相互作用。一、材料和方法 :1 制备含有底物不同的三种培养基[1] :(1)聚苯乙烯培养基。单纯的培养基 ,不需任何处理。 (2 )制备Ⅰ型胶原涂层的培养基 :聚苯乙烯培养皿浸泡在 0 3ｍｇ/ｍｌ 0 0 0 1ｍｏｌ/ＬＨＣｌ,ｐＨ 3 0猪的…     

基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9在胶质瘤侵袭和转移中的作用

胶质瘤是一种中枢神经系统恶性肿瘤,病死率高。胶质瘤细胞的侵袭和转移是其致死的重要原因之一,而基质金属蛋白酶通过溶解细胞外基质实现侵袭和转移。基质金属蛋白酶(mat r i x metalloproteinase,MMP)是锌离子依赖性蛋白水解酶,广泛分布于人体各组织和器官,参与细胞外基质的降解和重塑,调节细胞粘着,在肿瘤细胞的侵袭中起着重要作用。本文就基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9在胶质瘤中的侵袭作用及其机制进行综述。     

高脂血症兔与正常兔动脉平滑肌细胞体外生长及形态学观察

本文通过体外培养比较高脂血症兔动脉壁未发生斑块区的平滑肌细胞与正常动脉壁平滑肌细胞的生长代谢特性。结果表明,高脂血症兔SMC生长率明显高于正常兔SMC。并有高尔基氏体发达,内质网及线粒体增多且以不同程度扩张呈空泡状等形态改变。免疫胶体金标记观察提示高脂血症兔SMC在体外仍有较强的分解、代谢低密度脂蛋白及其载脂蛋白的能力。     

高脂血清对易感和不易感动脉粥样硬化动物的动脉平滑肌细胞生长的影响

体外培养家兔和树鼩为主动咏平滑肌细胞,分别观察各自的高脂血清对平滑肌细胞生长的影构,以~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)掺入细胞DNA,用液体闪烁计数器计数。结果表明:兔高脂血清对兔平滑肌细胞生长有显著的增殖作用,而树鼩高脂血清对树鼩平滑肌细胞的生长未见显著的促进增生作用。     

氧化修饰低密度脂蛋白对内皮细胞功能的影响

目的 观察氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）对内皮细胞NO／ET-1、t-PA／PAI-1合成、细胞表面细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 采用培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs），在分另0加入不同浓度ox-LDL（50、100、150、200mg／L）孵育24h后，观察培养液中NO、ET-1、t-PA、PAI-1水平及细胞表面ICAM-1的表达。结果 ox-LDL可显著抑制NO、t-PA的合成。ox-LDL还可明显增加ET-1、PAI-1的分泌及诱导细胞表面ICAM-1的表达。结论 ox-LDL对内皮细胞具有明显的细胞毒作用，它对NO／ET-1、t-PA／PAI-．1及ICAM-1表达的影响可能是其致动脉粥样硬化发生的重要机制之一。     

Coordinate Regulation of Matrix Metalloproteinase-1 and Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 Expression in Human Vascular Smooth Muscle Cells

The expression of matrix metalloproteinases (MMPs) and their inhibitors (TIMPs) by human vascular smooth muscle cells (SMC) was monitored as a function of the phenotypic modulation in vitro. Cell phenotype was manipulated by varying serum concentration and cell density. Synthetic phenotype was characterized by a minimum expression of the contractile proteins and a maximal proliferation rate. Contractile phenotype was quiescent and expressed a maximal level of contractile proteins. Synthetic cells expressed the highest levels of both MMP-1 and TIMP-1 and displayed maximal collagenolytic activity. No significant change was detected in MMP-2 expression or catalytic activity. Enzyme immunoassays revealed that MMP-1 expression fell by 77 ± 2.4-95 ± 0.5%, and that of TIMP-1 by 34 ± 0.5-59 ± 1.9%, as the cells acquired a contractile phenotype. The level of the MMP-1/TIMP-1 complex was similarly reduced by 78 ± 2.9-85 ± 1.6%. These data demonstrate that the expression of MMP-1 and TIMP-1 are coordinately regulated with SMC phenotype.     

苯那普利对糖尿病大鼠肾组织中MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的研究苯那普利对糖尿病大鼠肾组织中基质金属蛋白酶 -2(MMP_2)和组织金属蛋白酶抑制因子_2(TIMP_2)表达的影响。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分成3组 :正常对照组 (C组 ,n=10)、糖尿病未治疗组 (DM组 ,n=10)和糖尿病苯那普利治疗组 (DB组 ,n=10)。应用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型。造模成功后 ,用苯那普利对DB组进行治疗性灌胃 ,其余2组均用等量自来水灌胃。4周后 ,将所有大鼠一次性处死 ,摘除肾脏 ,用免疫组化方法 (SP法 )研究MMP_2和TIMP_2的表达 ,应用HPIAS -1000型医学彩色图像分析系统对结果进行图像分析 ,应用SAS8.1统计软件进行医学统计和相关分析。结果采用平均吸光度 (OD值 )作为记录结果 ,MMP_2在C组、DM组和DB组中的OD值分别为 :0.08362±0.00762、0.16372±0.01835和0.13316±0.01357,其中DM组较C组上调约95.8 %,DB组较C组上调约59.2 %,较DM组下调约36.6 % ;TIMP_2在3组中的OD值依次为 :0.07368±0.00638、0.15673±0.02321和0.12142±0.01036,其中DM组较C组上调112.7 % ,DB组较C组上调64.8% ,较DM组下调47.9 % ;而MMP -2/TIMP -2的比值在3组中依次为 :1.135±0.112、1.045±0.131和1.097±0.125,其中DM组较C组下降7.9% ,DB组较C组下降3.3% ,较DM组上升4.6 %。以上各组间差异均具有     

氧化修饰低密度脂蛋白对人外周血单核细胞和THP-1细胞功能的影响

以天然低密度脂蛋白(nLDL) 为对照组, 探讨了氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL)对人外周血单核细胞(PBMs) 和人前单核白血病细胞株THP 1 粘附和分泌功能的影响。结果表明: oxLDL可上调单核细胞粘附分子CD11b 表达, 促进其与内皮的粘附, 并进一步诱导TNF α、IL 8 的分泌; 而nLDL无此作用。说明oxLDL是单核细胞粘附和激活的诱导剂, 经oxLDL诱导的THP 1 表现出与成熟单核 巨噬细胞相似的特征, 可作为体外动脉粥样硬化单核细胞分化激活的细胞模型     

人血管平滑肌细胞种植构建工程生物血管的实验研究

了解猪血管去细胞后平滑肌细胞种植情况,为猪血管用于血管组织工程提供资料。取猪颈动脉,生物酶预处理猪血管,在自行设计制作的新型动力性生物反应器中,用原代培养的人平滑肌细胞种植在去细胞血管基质材料内,HE染色及银染检测平滑肌细胞种植效果。结果表明生物酶预处理血管后,HE染色及银染检测可见血管腔平滑肌细胞形态正常,沿血管长轴分布,提示经生物酶预处理的猪血管人平滑肌细胞能成功种植,可望构建实用的组织工程血管。     

A Modular Tissue Engineering Construct Containing Smooth Muscle Cells and Endothelial Cells

Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were seeded on sub-mm sized collagen cylinders containing embedded umbilical vein smooth muscle cells (UVSMC). These cylindrical “modules” are intended to be used as a vascularized construct, in which HUVEC lined channels are created by the random packing of the modules in situ or within a larger container. Embedding UVSMC cultured in medium containing 10% FBS had an adverse effect on subsequently seeded HUVEC junction morphology; HUVEC/UVSMC co-culturing was done in HUVEC medium (2% FBS with the addition of 0.03 mg/mL endothelial cell growth supplement) as compared to HUVEC seeded on collagen-only modules. In contrast, embedding UVSMC cultured in serum-free medium prior to embedding improved EC junction morphology. Such serum-free culturing, also prevented the UVSMC induced contraction of the collagen modules. On the other hand, embedding serum-free cultured UVSMC promoted HUVEC proliferation and NO secretion compared to those modules embedded with 10% serum cultured UVSMC. These results suggest, not surprisingly, that embedded UVSMC phenotype plays an important role in the seeded HUVEC phenotype, and that the response can be modulated by the UVSMC culture medium serum concentration. These studies were undertaken with a view to using the UVSMC to modulate the thrombogenicity of the HUVEC. Exploration of this outcome awaits further studies directed to understanding the mechanism of the cellular interactions.     

氧化低密度脂蛋白及抗氧化剂对人脐静脉内皮细胞表达CD40和CD40 L的影响

目的探讨OX -LDL和VitE对人脐静脉内皮细胞表达CD40 和CD40L的影响。方法应用流式细胞技术检测细胞表面CD40和CD40L表达水平。结果低浓度OX -LDL(<200μg/L)可使内皮细胞表达CD40 和CD40L含量明显增加 ,具有浓度和时间依赖效应。高浓度(>200μg/L)OX -LDL刺激时 ,CD40 和CD40L表达明显下降。抗氧化剂VitE呈剂量依赖性部分逆转OX -LDL对内皮细胞表达CD40 和CD40L。结论OX -LDL刺激内皮细胞高表达CD40和CD40L可能是其致动脉粥样硬化的重要机制。     

Contribution of Dietary Intakes of Antioxidants to Homocysteine-Induced Low Density Lipoprotein (LDL) Oxidation in Atherosclerotic Patients

Purpose

Elevated circulating oxidized low density lipoprotein (Ox-LDL) levels are associated with increased risk of atherosclerosis, which may be due to high plasma homocysteine (Hcy) and low intakes of antioxidants. We investigated the contribution of dietary intakes of antioxidants to Hcy-induced LDL oxidation in atherosclerotic patients (AP) and controls.

Materials and Methods

Male AP (n = 101) who were confirmed by coronary angiography and 91 controls were evaluated by blood biochemistry and dietary intakes. To determine whether homocysteine is an independent risk factor for atherosclerosis, subjects were divided into three groups; low- (≤ 6.9 uM/L), normal- (7 uM-12 uM/L) and high- (≥ 12.1 uM/L) Hcy.

Results

Plasm levels of homocysteine and LDL were higher, but plasma apo A-I in HDL and folate were lower in the AP group. The odds ratio (OR) for the risk of atherosclerosis was 3.002 [95% confidence interval (CI), 1.27-7.09] for patients in the highest tertile with homocysteine ≥ 12.1 uM/L. AP having high homocysteine levels had low intakes of vitamin A, β-carotene and vitamin C. By logistic regression analysis, age, body mass index (BMI), plasma LDL, plasma folate, and low intakes of vitamin A and β-carotene were found to be risk factors for atherosclerosis in patients with high-Hcy, but dietary B vitamins including folate were not.

Conclusion

A high-Hcy level was a risk factor for atherosclerosis in patients with high Ox-LDL levels. High intakes of antioxidants appeared to be a protective factor for atherosclerosis, perhaps exerting a pro-oxidative effect on LDL when combined with high levels of Hcy and LDL. However, more evidence for the benefits of B vitamins as a homocysteine-lowering therapy is needed.