微柱凝胶法与经典抗球蛋白法鉴定RhD变异型的结果比较

RhD抗原在不同类型红细胞上表达的强度不均一,从很强的D到弱D,最弱的是Del。RhD变异型包括D抗原增强和D抗原减弱,增强的D抗原可以直接在盐水中凝集IgG抗-D;减弱的D抗原包括弱D、不完全D(部分D),可以通过RhD阴性确认实验或吸收放散实验检出[1]。无论是增强的D抗原还是减弱的D抗原都属于RhD变异型。本文所收集     

广州地区人群中RHD* 960A突变型等位基因的鉴定及血型血清学与分子生物学特征分析

目的分析广州地区人群中RHD*960A突变型等位基因个体的血型血清学与分子生物学特征。方法收集RhD变异型标本,采用2种不同的单克隆抗-D试剂鉴定RhD血型,抗球蛋白凝胶卡法进行直接抗球蛋白试验,并用RhD抗原表位检测试剂盒(D-Screen)检测RhD抗原表位;此外,采用Rh血型分型卡检测Rh CE抗原;采用多重连接酶依赖的探针扩增(MLPA)方法检测RHD及RHCE基因型;对MLPA方法无法给出检测结论的标本,进行RHD基因全部10个外显子的PCR扩增及产物直接测序。结果发现3例RhD变异型标本,直抗阴性,初步血清学结果显示RhD抗原弱阳性表达,RhD抗原表位检测结果显示其红细胞与RhD抗原epD6.6、epD8.2和epD9.1表位特异性单克隆抗体无凝集反应,与其余表位抗体呈弱阳性凝集反应;RHCE抗原分型1例为CCee,其余2例为Ccee;RHD基因的MLPA基因分型显示其基因型为正常的RHD/d(即未鉴定出其携带的突变型RHD等位基因),后续RHD基因外显子直接测序发现其第7外显子携带c.960GA(p.Leu302Leu)同义突变,RHCE基因MLPA基因分型结果与血清学表型一致。结论首次在广州地区人群中发现了RHD*960A突变型等位基因个体,并进行血清学抗原表位和基因型检测,其血清学表现为部分D。     

1例Rh弱D15型基因型分析

Rh血型系统是目前被国际输血协会确认的30个红细胞血型系统中最具复杂性和多态性的血型系统,在临床输血中的重要性仅次于ABO血型.RhD抗原表型除正常D阳性和阴性表型外,还存在多种D变异型.D变异体主要包括弱D(weak D)、部分D(partial D)和DEL型[1].为避免在血清学上RhD变异体被误定Rh阴性,采用DNA基因分型技术鉴定D变异型变得越来越重要.     

Rh血型DEL表型的研究进展

DEL是一种特殊的RhD变异体,常规的间接抗人球蛋白试验检测结果 为阴性,但通过吸收放散试验仍能检测出红细胞表面微量的D抗原.近年来研究表明DEL具有多种等位基因,并能表达部分或完整的D抗原表位.虽然红细胞表面D抗原表位密度很低,远小于正常RhD阳性红细胞,但是依然存在产生同种异体免疫的风险,因此DEL的检测对临床Rh阴性输血具有重要的指导意义.本文就DEL表型的研究进展予以综述.     

Rh血型DEL表型的研究进展

DEL是一种特殊的RhD变异体,常规的间接抗人球蛋白试验检测结果 为阴性,但通过吸收放散试验仍能检测出红细胞表面微量的D抗原.近年来研究表明DEL具有多种等位基因,并能表达部分或完整的D抗原表位.虽然红细胞表面D抗原表位密度很低,远小于正常RhD阳性红细胞,但是依然存在产生同种异体免疫的风险,因此DEL的检测对临床Rh阴性输血具有重要的指导意义.本文就DEL表型的研究进展予以综述.     

DFR变异型孕妇血型鉴定及孕期监测策略探讨

目的 对3例RhD变异型孕妇进行血型血清学和分子生物学鉴定,探讨其孕期监测策略.方法 收集3例D变异型孕妇外周血标本,采用2种单克隆抗-D试剂进行RhD抗原鉴定,使用D-Screen试剂盒进行D抗原表位检测.提取基因组DNA,采用多重连接探针扩增技术(MLPA)和序列特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)基因分型试剂盒...     

1例RhD变异型孕妇血型检测引起的实验方法学及临床处理讨论

正Rh血型系统在临床上的重要性仅次于ABO血型系统,是最复杂的血型系统~([1])。Rh抗原由两个基因编码:RhD基因编码D抗原,RhCE基因编码C/c、E/e抗原,形成主要包括D、E、C、e、c的5种抗原,其中D抗原的免疫原性最强,其在红细胞上质和量的改变可导致D变异型;此外,RhD基因和RhCE基因高     

8例无亲缘关系的献血者Ⅵ型部分D抗原的血清学性质

1953年Argall等描述了一种RhD抗原的异常表达,即输注RhD(+)细胞的RhD(+)病人产生了抗-D。这种异常表达可能反映了基因组上的本质病变,命名为部分D。依据抗D血清与部分D抗原红细胞的反应性,将部分D抗原分为六种类型[Ⅲ～Ⅶ]。 单克隆抗体作为血型试剂的应用,使得人们对D抗原的分析更趋完善。在Paris和Lund实验室,根据与单克隆抗体的反应特征,确定了部分D Ⅳ,     

弱D25变异型血型抗原表位分析及输血策略探讨

目的对1例输注阳性血液的D变异型患者进行Rh血型血清学及分子生物学鉴定,并对其进行不规则抗体检测,探讨该D变异型的输血策略。方法采集患者标本,用2种不同的单克隆抗-D试剂鉴定D抗原,并用试剂盒检测D变异体抗原表位,Rh CE抗原分型,红细胞直接抗球蛋白试验,不规则抗体筛查;采用多重链接酶依赖的探针扩增(MLPA)方法检测RHD及RHCE基因型,对于MLPA检测不到的RHD突变型等位基因,对RHD基因全部10个外显子进行PCR扩增及产物直接测序分析。结果该患者初步D抗原鉴定结果显示为D抗原弱表达,且直接抗球蛋白试验阴性;D抗原表位检测结果显示其红细胞与D抗原ep D5.4、ep D2.1和ep D3.1表位特异性单克隆抗体产生弱凝集反应,与其余表位抗体均无凝集反应,大量输注D阳性血液后的168 d及232 d抗体筛查结果均为阴性;Rh CE抗原分型为cc Ee,MLPA结果显示其基因型为RHD/d,RHCE基因MLPA基因分型结果与血清学表型一致;RHD基因外显子直接测序发现其第3外显子携带纯合的c.341GA(p.Arg114Gln)错义突变。结论患者为弱D25变异型,对弱D25型的D抗原进行表位分析的显示其部分抗原表位缺失。该患者大量输注阳性血液后未产生抗-D,为制定该血型患者的临床输血策略提供数据。     

3例弱D表型献血者的RhD抗原表位和分子机制研究

目的研究3例RhD抗原表型为弱D型54的献血者的RhD抗原表位和分子机制。方法采用常规试剂对3例弱D型54样本进行Rh分型,并采用D-screen分析样本的RhD抗原表位。对RHD基因全部外显子测序并分析RHD基因杂合性。使用Robetta服务器进行模型构建。结果 2例样本仅检出365C>T突变,1例样本检出365C>T杂合突变和1 227G>A杂合突变。经D-screen中全部抗体检测的2例样本表现出与部分D表型中DVII相同的D抗原表位分布,另1例未经D-screen全部抗体检测的样本与DVII的D抗原表位分布类似。同源建模分析显示弱D型54的胞内S122L突变也可能影响D抗原胞外区的蛋白结构。结论首次在中国人中报道了弱D型54,并首次分析了该表型的D抗原表位组成。弱D型54具有部分D表型的特征,可能引起同种免疫。     

贵阳市无偿献血人群RhD变异体的基因型分析

目的研究分析RhD抗原变异体的血清学表型和基因型。方法收集贵阳市159名无偿献血者RhD盐水法初筛阴性的标本,采用间接抗球蛋白试验(IAT)筛出部分D型和弱D型抗原,用乙醚吸收放散试验检出Del型抗原,并对Rh表型(C、c、E、e抗原)进行血清学检测。同时运用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)对RhD变异型D抗原外显子进行扩增和选择性测序以判定其确切型别。结果 159例RhD初筛阴性标本中检出RhD变异型53例(33.3%),包括Del1227GA、3GA 46例(28.9%)、部分D DVI typeШRHD-CE(3-6)-D 3例、弱D15 845 GA 3例、弱D24 1013TC 1例。Rh表型结果显示,ccee 65例、Ccee 79例、CCee 11例、ccEe和CcEe各2例。结论贵阳市无偿献血人群中RhD变异体的基因型呈现多态性,其中主要为Del型。     

流式细胞术检测不同RhD血清型红细胞RhD抗原的表达

本研究旨在建立流式细胞术(FCM)检测红细胞表面RhD抗原的实验方法,并研究不同RhD血清型红细胞表面D抗原表达的差异。选取标准的RhD( )和RhD(-)细胞按1∶1比例混合,用间接标记法[一抗为IgG抗-D,二抗为FITC-抗-IgG F(ab′)2]染色,应用FCM检测RhD( )细胞的比例,并确立IgG抗-D的最佳使用稀释度。采用FCM检测RhD阳性、弱D型、RhDel型、RhD阴性红细胞表面D抗原数量。结果显示,IgG抗-D单克隆抗体的最佳使用稀释度是1∶4,1×106/50μl。RhD阳性、弱D型、RhDel型、RhD阴性者RhD( )红细胞百分率分别为(96.8±2.97)%、(79.5±9.88)%、(47.8±11.43)%、(3.7±2.96)%,红细胞表面D抗原平均荧光强度依次为33.3±6.21道、18.6±5.39道、7.10±1.17道、0.79±0.55道。结论:4种不同血清表现型的RhD抗原数量的差异有显著性,以RhD阳性的抗原数量最多,弱D型次之,RhDel型最少。     

中国人Rh血型D抗原数量的调查

目的分析中国人不同血清型RhD抗原数量是否存在差异。方法采用流式细胞仪检测RhD阴性、RhD阳性、弱D型和RhDdel型红细胞表面D抗原数量。结果RhD阴性、RhD阳性、弱D型和RhDdel型红细胞表面D抗原荧光强度分别为5.43%±2.11%,99.28%±0.98%,32.98%±15.63%和29.46%±9.88%。结论4种不同血清表现型的RhD抗原数量的差异有显著性,以RhD阳性的抗原数量最多,RhDu次之,RhDdel最少,但与RhD阴性相比仍有一定数量的抗原存在于红细胞膜上。     

长春地区RH阴性献血者Du血清学检测

Rh血型是继ABO血型发现后临床意义最大的一个血型系统。根据红细胞上是否存在D抗原,可将红细胞分类为Rh阳性或Rh阴性。RhD阴性的个体绝大多数缺失RhD基因,但某些RhD阴性个体的产生是由于RhD基因部分缺失或D基因突变后产生的,通常称为Du。     

32名RhD变异型献血者分子遗传背景研究

目的对广州地区收集的32例RhD变异型献血者进行基因分型,以了解RhD变异型在广州献血者中的分布情况。方法采用传统血清学方法,对2016年6月—2017年1月的RhD变异型献血者进行RhD表型鉴定。提取基因组DNA,采用MLPA检测试剂盒对收集的32例RhD变异型标本进行RHD基因分型。对于不能明确分型的标本,使用Sanger测序法对RHD基因进行测序分析。使用D-Screen试剂盒对RhD变异型标本的RhD抗原表位行进一步检测。结果在32例RhD变异型标本中:检出RHD~*DVI.3/01N.01 8例、RHD~*DVI.3/DVI.3 1例、RHD~*weak partial 15/01N.01 7例、RHD~*960A/01N.01 3例、RHD~*weak D type 25/01N.01 3例、RHD~*weak D type 72/01N.01 2例、RHD~*D-CE(4)-D-CE(10)/01N.01 1例、RHD~*95A/01N.01 1例、RHD~*710T/01N.01 1例、RHD~*DVI.3/01EL.01 1例、RHD~*weak partial 15/01EL.01 1例、RHD~*weak D type 25/01EL.01 1例、RHD~*DVI.3/D-CE(3-9)-D 1例和RHD~*538A/D-CE(2-9)-D 1例。结论弱部分D15和部分DVI.3是广州地区献血者人群中最常见的RhD变异型。MLPA基因分型方法是1种有助于检出这2种不同RHD突变型等位基因的方法。     

1例部分D表型献血者RhD抗原表位及分子机制研究

目的 研究1例RhD抗原表型为部分D的献血者RhD抗原和分子机制.方法 利用血清学方法对1例初筛为RhD阴性样本进行RhD阴性确认并进行CE分型;采用D-screen检测该样本RhD抗原表位.利用Sanger测序法对RHD基因的全部外显子测序.建立数字PCR鉴定RHD基因型的方法并分析该例样本RHD基因合子型.采用Ro...     

石家庄地区RhD变异型的分子背景研究

目的研究石家庄地区 RhD变异型的分布及基因分型。方法 RhD变异型标本经血清学方法确认后,应用PCR-SSP方法检测,对于检出的Rh弱D和部分D基因型,采用高分测序法(SBT)对RHD基因10个外显子进行序列分析。结果血清学实验检出D变异型(弱D或部分D)标本107例,PCR-SSP方法检测出部分D基因型14例,以D cat.VI type3*型居多,弱D基因型93例,以弱D15型为主,经测序发现3例Rh弱D表型均为第1外显子第22碱基T突变成C,且NCBI上未查到对应基因型。结论在石家庄地区,人群中 RhD变异型个体的分子基础差异较大,呈多样性分布。     

30名RhD阴性无关供血者的Del分析

人类Rh血型系统的临床意义仅次于ABO系统,其中红细胞D抗原的重要性仅次于A和B抗原。最近,许多研究表明,黄种人与白种人的RhD(一)个体不完全相同,部分个体常规血清学方法检测为D阴性,但用吸收放散的方法可以证弭他们的红细胞上有弱D抗原,称为D洗脱阳性(Del)。笔者用血清学方法对30名RhD(一)个体进行了分析,结果如下。     

Rh弱D及Del的相关研究进展及临床应用

RhD抗原在不同类型红细胞上表达的强度不一,从很强的D到弱D,最弱的是Del.弱D主要是由于RHD基因编码区发生点突变,引起编码的细胞内或RhD跨膜区的氨基酸发生改变,导致红细胞上的D抗原位点数减少.RHD1227A等位基因是亚洲人群Del表型的重要遗传标记.本文就弱D及Del的分子机制、检测方法及临床应用等综述如下.     

DEL红细胞膜D抗原表位分析

目的分析Rh血型D放散型(DEL)红细胞膜D抗原表位(epitopemapping)。方法采用微量吸收放散技术通过9种抗D抗原不同表位的人抗D单克隆抗体,检测3名已知Rh表型和RH基因型的D放散型个体的红细胞膜D抗原表位,分别以Rh阳性、Rh阴性、部分D表型DVa(Hus)和DVIⅢ型样本作为对照。结果3名携带RHD1227A等位基因的D放散型个体,红细胞膜D抗原9个抗原表位均检测为阳性,而对照样本检测结果各不相同。结论携带RHD1227A等位基因的中国汉族D放散型个体红细胞膜可能表达基本完整D抗原。