3例ABO血型鉴定正反不符患者基因序列分析——附1个新的ABO等位基因突变点位的发现

目的 探讨导致3例ABO血型正反定型不符的分子机制。方法 采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行亚型鉴定;采用PCR方法扩增ABO基因的6、7外显子;采用测序方法对ABO6、7外显子进行直接测序。结果 血型血清学试验结合基因测序证实3例标本为分别为：AwB(1例)、Ael(2例)。基因直接测序发现先证者1在A等位基因第7外显子发生了476C>T、595C>T突变,在B等位基因第7外显子526C>G、657C>T、703G>A、796C>A、803G>C、930G>A突变;先证者2、3在A等位基因第7外显子发生了476C>T和767C>T突变,两标本突变点符合Ael₀₅。以上的基因位点改变均导致了ABO血型的血清学表型变化,表现为ABO亚型。先证者3的母亲及女儿都携带Ael₀₅等位基因。结论 本研究揭示了3例ABO亚型的分子遗传背景,并发现1个新的ABO血型等位基因,即：c.595C>T单基因位点突变。     

一例Ael患者及家系分子生物学调查

目的 探讨1例血型鉴定正反不符的基因序列,并对其进行家系调查。方法 采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行亚型鉴定;采用PCR方法扩增ABO基因的6、7外显子;采用测序方法对ABO基因的6、7外显子进行直接测序。结果 血清学方法鉴定患者为A亚型,符合A_el特征,家系血清学表现均正常。基因测序发现先证者A等位基因6外显子：261DEL/G,A等位基因7外显子：476C>T和767C>T,两标本突变点符合Ael₀₅。先证者的女儿和母亲均携带Ael₀₅等位基因。结论 研究揭示了1例ABO亚型的分子遗传背景,避免了血型的误判和漏检。     

1例A3B亚型的血清学和分子生物学结果分析及家系调查

目的 分析1例ABO血型A亚B型标本的血清学和分子生物学特征,探讨ABO亚型鉴定的准确方法。方法 采用常规血清学方法分析了1例标本ABO表型,首先使用PCR-SSP方法对样本进行ABO基因分型,再采用直接测序的方法对样本的第6、第7外显子测序确定其基因型。结果 血型血清学检测结果为A亚B型;PCR-SSP分型结果为A₁B型;测序发现标本ABO基因的第6和第7外显子存在突变：第6号外显子发生297A>G突变,第7号外显子发生467C>T、526C>G、657C>T、703G>A、745C>T、796C>A、803G>C及930G>A突变,该样本基因型为A307/B01。先证者母亲血型血清学检测结果疑似为A亚型;基因测序结果为A₃型。先证者父亲血型血清学检测结果为B型。结论 血清学实验结合分子生物学方法可准确鉴定ABO亚型,分子生物学方法还有助于探索ABO亚型的形成机制。     

1例罕见AB3亚型的分子机制

目的探讨1例罕见AB3亚型的分子机制。方法对1例ABO血型正反定型不符患者的血型通过血清学鉴定、PCR-SSP、ABO基因直接测序、TA克隆单体型分析等方法分析其分子机制。结果该患者血型鉴定为比较少见的A102/B301亚型,该亚型是由于ABO基因第七外显子存在1054C/T杂合导致R352W氨基酸改变所致。结论 ABO基因存在1054CT,该突变可能是导致B301亚型的分子遗传基础之一。关健词:     

FUT1基因h586突变致类孟买血型血清学与分子机制分析

目的探讨研究1例■类孟买血型的血清学特点及基因分析,为类孟买血型鉴定与输血策略提供参考。方法采用试管法检测患者ABO及Lewis血型,吸收放散试验检测红细胞上弱表达的ABO抗原及筛查血清中不规则抗体,利用新生儿红细胞和型物质中和试验验证抗体特异性,用PCR-SSP法鉴定ABO基因型并进行FUT1和FUT2基因测序分析。结果患者红细胞上常规血清学未检测到ABH抗原,吸收放散试验检出红细胞上B抗原存在,血清中检出抗-A、抗-B及抗-H 3种混合抗体,Lewis血型为Le(a-b+)。基因检测显示,患者ABO基因型为BO1,FUT1基因型为h⁵⁸⁶/h⁵⁸⁶,h⁵⁸⁶(nt586C>T)是586位点由C突变为T,导致196位CAG谷氨酰胺(Gln)突变为TAG终止密码,FUT2基因型为Se³⁵⁷/Se³⁵⁷,存在357C>T纯合突变。结论 FUT1基因h⁵⁸⁶无义突变是本例类孟买型形成的分子生物学基础;此类孟买血型的正确鉴定是在血清学基础上结合基因测...     

B亚型中Bx新等位基因的鉴定

目的对ABO血型中B亚型分子遗传背景的研究,发现并鉴定ABO新等位基因。方法对5份血型血清学鉴定为B亚型的样本,采用PCR-SSP、ABO基因第6及第7外显子直接测序方法进行基因定型;并对目的B亚型样本进行RT-PCR、巢式PCR扩增、测序,分析其cDNA结构的差异。结果5份血清学为B亚型的样本中,血清学鉴定为Bx的个体发现了一个新的B等位基因。该等位基因与B101等位基因相比,差异仅在于第7外显子的B基因序列中nt721位C>T突变。其余4份B亚型样本的ABO基因第6、7外显子都未发现新的点突变。结论首次在中国汉族人中发现一个721C>T新变异的B等位基因,该等位基因nt721位由C转变为T,241位氨基酸由精氨酸转变为色氨酸,可导致糖基转移酶活性的降低,表明ABO基因的第241位氨基酸对决定糖基转移酶活性是至关重要的。     

1例ABw19亚型的血型分子机制分析

目的对1例ABw19亚型的血型分子机制进行研究。方法对1例ABO血型正反定型不符患者的血型通过基因测序等方法研究其分子机制。结果该患者血型鉴定为比较少见的ABw19亚型,该亚型是由于ABO血型基因第7外显子存在646T/A杂合,导致F216I氨基酸改变所致。结论 ABO血型基因646TA突变可能是导致ABw19亚型的分子遗传基础之一。     

ABO血型系统中1种新A2等位基因的发现及在中国福建地区汉族人群中A2亚型调查

本研究探讨ABO血型系统中A2亚型在中国福建地区汉族人群中的分布频率及其分子机制。采用血清学方法鉴定1例A2亚型标本,PCR扩增ABO基因第6、7外显子及第6内含子,PCR产物经割胶纯化后直接测序,并对含有突变位点的扩增片段进行单倍体序列分析;用抗-A1单克隆血清筛查福建地区3 176例A或AB型汉族无偿献血者。结果表明,该例A2亚型的基因型鉴定为A/Olv,与A101相比,其第7外显子存在467C>T和607G>A突变,分别导致多肽链P156L和E203K替换;经标准血清学方法检测,3 176例随机A或AB型献血者(同时期健康献血者约16 527人)未检出A2亚型。结论:首次发现467C>T和607G>A组合的A2等位基因,A2亚型在福建地区汉族人群中罕见。     

α-1,3-N-乙酰半乳糖胺转移酶p.Trp181Cys突变导致Aw亚型

目的 探讨Aw亚型的血清学特征和分子生物学机制。方法 采用标准血型血清学方法检测先证者及其家系(父亲、母亲、女儿、儿子)ABO血型,利用聚合酶链反应(PCR)特异性序列引物对先证者及其父亲进行ABO基因初步分型,再使用PCR方法扩增ABO基因7个外显子的全部编码序列并进行测序。结果 该家系成员中有2例为Aw亚型,其红细胞含有弱A抗原,血清中含有抗A和抗B,基因型为Aw.new/O01;2例为B亚型;1例为O亚型。ABO血型基因直接测序分析显示先证者及其父亲存在c.467C>T、c.543G>C杂合变异和c.261delG缺失。第7外显子发生543位碱基G>C突变,导致第181位氨基酸由色氨酸被半胱氨酸替换,该突变极其罕见。结论 α-1,3-N-乙酰半乳糖胺转移酶基因第543位G>C突变可能引起酶活性下降,从而导致A抗原表达减弱,该研究进一步证实该突变具备遗传基础,在家系中能够稳定遗传。     

ABO变异型A102Bw33血型基因亚型遗传学鉴定

目的:对1例血清学检测为ABw亚型的样本进行了分子生物学研究及鉴定。方法:在标准血型血清学方法鉴定的基础上,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP),ABO基因第6、7外显子PC R产物直接测序及克隆测序等方法进行ABO亚型基因分型和单倍型分析。结果:先证者红细胞含有A和B抗原,同时血清中含有抗-B抗体。PCR-SSP结果显示,样本基因型为A1B。直接测序分析发现,297A/G、467C/T、526C/G、657C/T、703A/G、803G/C和9306/A 7个位点杂合。克隆测序得到2个等位基因A102和Bw33。Bw33基因序列与B101基因比对仅第796位碱基为AC突变,796C是A基因的特性。结论:796碱基AC突变导致产生Bw33的表型,其血清中产生抗-B抗体。     

1个新的ABO等位基因及其家系研究

目的 对1种新的ABO等位基因变异组合进行分子机制的研究,并对先证者进行家系调查,了解该变异组合在家系中的传递情况。方法 采用血清学方法对1例先证者及其家系成员进行ABO血型鉴定,采用PCR-SBT法对先证者及其父亲进行基因测序,确定突变点及突变类型。结果 该家系中先证者及其父亲的血清学结果为A亚型,ABO基因检测结果与ABO^*A1.01序列比对显示两个样本均存在c.1A>G、c.467C>T、c.903C>T变异,ISBT数据库中暂未检索到此种突变型组合的基因型。结论 发现1种新的ABO等位基因变异组合c.1A>G、c.467C>T、c.903C>T,并且能在家系中稳定遗传。     

疑似AB3亚型的罕见开米拉血型的研究——附1例报道

目的进行1例疑似AB₃亚型的献血者血型分子生物学研究。方法用常规血型血清学方法进行ABO血型鉴定;对ABO基因的外显子6和外显子7扩增后进行直接测序和单克隆测序;通过短串联重复序列检测分析14个基因位点。结果该献血者血清学表现为AB₃亚型,而ABO基因分型、序列测定以及STR-PCR检测的多个位点均存在2个以上的等位基因。结论该献血者非AB₃亚型,而是罕见的卡米拉血型。     

2个新的ABO血型等位基因的发现和序列分析

目的 探讨4例ABO血型正反定型不符标本的遗传背景。方法 采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行亚型鉴定;采用PCR方法扩增ABO基因的7个外显子;采用测序方法对7个外显子进行直接测序。结果 血型血清学试验证实4例标本为ABO亚型,分别为:Bx(1例);ABx(1例);Ax(2例)。基因直接测序发现Bx和ABx在ABO~*B.01基础上1～6外显子未发生改变,仅在B等位基因第7外显子发生了449位核苷酸AG的突变;2例Ax在ABO~*A1.01基础上1～6外显子未发生改变,仅在A等位基因第7外显子发生了467位核苷酸CT的突变和798位插入了一个碱基T,以上的基因位点改变均导致了ABO血型的血清学表型变化,表现为ABO亚型。结论 研究揭示了4例ABO亚型的分子遗传背景。发现2个新的ABO血型等位基因,即:c.449AG单基因位点突变,c.467CT的突变和c.798insT单碱基插入。     

一例B(A)血型的血清学及分子生物学鉴定

摘要：目的?对1例血型血清学正反定型不符的标本进行ABO血型鉴定。方法?运用血型血清学方法鉴定标本ABO血型；用PCR-序列特异性引物(SSP)基因定型和ABO基因直接测序的方法确定该标本的基因型。结果?血型血清学检测结果表现为B(A)亚型的特点；PCR-SSP分型结果定为B(A)04/O1型；测序发现标本ABO基因的第6和第7外显子存在变异：第6外显子存在261delG、297A>G；第7外显子存在526C>G、640A>G、657C>T、703G>A、796C>A、803G>C、930G>A，判断该样本血型为B(A)04/O01血型。结论?该血型血清学初步鉴定为B(A)的标本用PCR-SSP法和ABO基因直接测序法确认为B(A)04/O01型。     

P1P~K血型不合引起习惯性流产的血清学及分子生物学研究1例

目的对1例疑为P1PK血型不合引起习惯性流产患者进行血清学及分子生物学研究,明确患者血型及抗体特异性,阐述其分子遗传机制。方法采用血清学方法鉴定患者及3个家系成员ABO、P1PK血型及血清中意外抗体;PCR扩增编码P1P~k的α1,4-半乳糖基转移酶基因(α1,4-galactosyltransferase gene,A4GALT)第3外显子编码区序列,测序分析DNA序列,并做家系调查。结果血清学试验证实患者及其姐姐均为P1PK血型系统的p表型,患者血清中存在抗-PP1PK(抗-Tja)抗体,测序结果显示患者及其姐姐均在第3外显子出现903CG(CCCCCG)的等位基因突变。结论患者为罕见的p表型,由P1PK血型不合导致血清中产生的抗-PP1PK抗体引起患者习惯性流产,A4GALT基因第3外显子的903CG突变可能是患者p表型形成的分子基础。     

B糖基转移酶p.R168W突变导致B_(el)亚型的分子机制研究

目的对B糖基转移酶R168W突变导致B_(el)亚型的分子机制进行研究。方法免疫血清学、ABO基因型SSP-PCR检测及直接测序患者及其家系成员ABO基因第6、第7外显子测序。构建3D分子模型,并就GTB蛋白突变对结构影响进行预测。结果经吸收放散试验在患者红细胞上检出弱B抗原,血清中未检测到抗-A、检出抗-B;患者女儿血清学结果呈正常B型。SSP-PCR结果证实患者及其女儿ABO血型基因型为O1/B和B/B型。对ABO基因第6、第7外显子测序,患者及其女儿带有c.502CT突变,即B_(el)03等位基因,导致氨基酸置换R168W。分子模建与分析提示突变可能降低了蛋白结构的稳定性,影响了B转移酶的总体活性。结论 ABO基因c.502CT突变通过减低GTB的稳定性导致患者出现B_(el)表型。     

ABO血型系统中Aw基因分子遗传背景的研究与分析

目的:研究一个含有Aw亚型中国汉族家系的ABO基因的遗传机制。方法:对1例血型血清学鉴定为Aw亚型的样本及有关家系,采用PCR-SSP扩增、DNA测序方法,以A101一致序列进行比对,对其ABO等位基因的第6外显子、第6内含子及第7外显子进行基因克隆和单倍体测序分析。结果:血清学为Aw型样本中ABO基因序列与ABO*A101相比有两个位点发生了突变467C>T,543G>T),文献中未见报道,为一个新的A等(位基因,该样本的家系5人中,2人带有这个新变异的A等位基因。结论:543位突变倒致编码ABO糖基转移酶的156位氨基酸由脯氨酸(Pro)变为亮氨酸Leu),大大降低了酶活性;这个位点对转移酶的活性(是至关重要的。     

Bx02等位基因的鉴定及其编码GTB酶3D建模

目的 对2例ABO正反定型不一致的血液标本进行鉴定并探索其分子机制。方法 采用血清学标准方法对2例ABO正反定型不一致的标本进行ABO血型鉴定,采用PCR-SSP技术进行ABO基因分型,并对ABO基因外显子6和7进行直接测序和克隆测序。应用Pymol软件模拟3D结构模型并预测GTB蛋白突变对结构影响。同时采集先证者父亲的血液标本进行检测。结果 先证者红细胞检测有B抗原,血清中有抗-B。PCR-SSP基因分型结果为O1/B。直接测序显示第6外显子261delG/G、297A/G,第7外显子526C/G、646A/T、657C/T、681A/G、703A/G、771C/T、796A/C、803C/G、829A/G、905A/G、930A/G和1096A/G杂合,基因型为Bx02/O02。克隆测序结果与ABO*B. 01等位基因相比较,905位存在A>G突变。3D结构模拟提示Asp302Gly可能造成GTB酶活性或功能改变。结论鉴定了2例Bx02等位基因,血清学和基因分型的方法联合检测对于准确鉴定ABO血型有重要意义。     

A205亚型1例的分子生物学鉴定及家系调查

目的探讨A205亚型个体的分子生物学及家系遗传特征。方法选择2020年8月因术前血型筛查正反定型不符拟行进一步血型鉴定的1例先证者及其父母、弟弟为研究对象。先证者为男性, 17岁。采用标准血型血清学方法对受试者进行ABO亚型鉴定, 并且应用Sanger测序法确定ABO基因突变情况。并且根据血清学和分子生物学检测结果, 分析先证者血型在家系中的遗传特征。本研究经福建医科大学附属泉州第一医院伦理委员会批准(泉一伦[2021]124号), 受试者及家属均知情同意并签署知情同意书。结果① ABO血型鉴定结果显示, 先证者及其母亲的血清学分型为Ax亚型, ABO基因分型为A205/O01, Sanger测序结果显示存在c.28+5859T>G、c.261delG、c.467C>T、c.1009A>G。先证者父亲及弟弟的血清学分型为均O型。②家系调查结果显示, 先证者与其母亲ABO血型分型、ABO基因分型及测序结果一致, 先证者的ABO基因突变遗传自母亲。结论 ABO基因c.28+5859T>G单核苷酸突变可抑制A基因的转录, 而同时存在c.467C>T、c.1009...     

罕见的B(A)表型血清学及基因检测

目的对1例B(A)表现型用血清学及基因检测进行鉴定。方法使用2个厂家的单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂;进口单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂;Diamed凝胶系统;人源抗-A、抗-B、抗-H血型试剂和试剂红细胞,用常规血清学方法对被检血样进行ABO血型定型。采用吸收放散方法;分子生物学PCR-RFLP方法;ABO基因第6、7外显子的PCR产物正反向测序方法进一步分析。结果被检血样红细胞及血清经2种单克隆抗-A、抗-B和试剂红细胞进行抗原抗体鉴定:正定型结果不一致;正反定型结果不符合。用吸收放散方法,人源抗-A、抗-B、抗-H;进口单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂和Diamed凝胶系统检测:有弱A抗原、强H抗原检出;PCR-RFLP基因分型:检出B/O基因;基因克隆测序证实为:B(A)700/O*02。结论证实该例为B(A)700/O*02。