Mur血型抗原抗体调查及应用研究

目的了解广东地区人群抗-Mur发生频率、性质和来源以及Mur抗原的分布;建立献血者Mur稀有血型库服务于临床用血。方法以微量板的盐水法和聚凝胺法对广东省中山、深圳、江门、东莞、惠州市34 419名献血者做抗-Mur筛查,用抗-Mur做红细胞Mur抗原筛查,部分标本采用固相免疫吸附试验(SPIA)筛查。结果本组筛查对象共检出抗-Mur 48例,占0.14%(48/34 419),其中IgM占79.2%(38/48),IgM+IgG占16.7%(8/48),IgG占4.2%(2/48);献血者抗-Mur频率比较,无显著性差异(P0.05);中山患者抗-Mur频率为0.17%(5/3010),与献血者比较无明显差异(P0.05);中山地区,Mur抗原在献血者、患者中的发生率分别为7.31%(128/1 752)vs 7.14%(80/1 120),P0.05,献血者男性和女性中分别为7.7%(72/931)vs 6.5%(33/504),P0.05;本组Mur阳性者均为汉族,其中广东省籍贯占66.7%(70/105);建立了中山地区献血者Mur稀有血型库;SPIA技术从2 541份血浆标本中检出4例抗-Mur。结论 SPIA可以检出37℃活性有较高临床意义的抗-Mur,广东地区献血人群Mur血型抗体、抗原发生频率均明显高于Rh D血型抗体、抗原发生频率,不规则抗体检测应增加Mur阳性筛选红细胞,供受血者均应检测Mur血型是否相合,以进一步提高输血免疫安全性。     

中国部分人群Mur血型抗原分布及分子基础的研究

目的调查上海地区和云南地区献血者中Mur抗原阳性的分布频率;研究其基因型和分子基础。方法用已知的抗-Mur抗血清在上海和云南少数民族的献血者中用U型微孔板法筛查Mur表型,得出Mur血型抗原表型在这2种人群中的分布频率。对血清学筛出的Mur阳性标本进行Miltenberger血型基因SSP分型,同时进行GYPB假外显子的PCR扩增和直接测序或克隆后测序分析。结果在1 673名上海献血者中筛选出Mur抗原阳性30例,即Mur抗原表型在上海地区中的频率为1.79%;在201名云南献血者中筛选出Mur抗原阳性7例,即Mur抗原表型在云南地区中的频率为3.48%。对实际获得的28份上海献血者和7份云南献血者DNA的分析显示,27份上海献血者阳性标本及6份云南阳性标本均为GYP(B-A-B)Mur,即为GP.Mur型。其余2例Mur抗原阳性献血者DNA测序结果为1种新的GYP(B-A-B)杂交基因型,我们命名为GYP MiⅢShanghai。突变的位点为GYPB上209CA、220AG、224AG、227AC、内含子3的1TG,推测产生的蛋白序列与GP.Bun一致。结论本文统计了上海地区和云南地区献血者Mur抗原分布频率;同时发现了1种新的Mur抗原相关GYP(B-A-B)基因型。中国人群中Mur抗原阳性表型对应的基因型至少包括GYP MiⅢ和GYP MiⅢShanghai这2型。     

抗-Mur引起的交叉配血不合2例并文献复习

目的通过对抗-Mur引起的2例抗体筛查阴性,交叉配血不合病例的抗体分析及鉴定,了解不同抗原谱抗筛细胞对抗体筛查实验结果的影响,提高对Mur抗原、抗体的临床认识。方法利用3家厂商的抗体筛查细胞对2例抗体筛查实验阴性但交叉配血不合的病例进行抗体检测、鉴定,并对相关文献进行复习。结果 2例病例除与1套含"Mia"抗原的抗筛细胞出现阳性反应,与其余抗筛细胞反应均为阴性。抗体鉴定结果为抗Mur。2例自身红细胞与抗-Mur血清凝集反应阴性,但与之配血不相合的献血者血样与抗-Mur血清反应阳性。结论导致2例抗体筛查阴性而交叉配血不合的原因为抗Mur,商品抗筛细胞应包含在中国人群中分布频率较高的Mur抗原。     

人源Mur血型抗体的鉴定和应用——附1例报告

目的对1名AB型献血者血液中的抗-Mur抗体系统地进行特异性、反应能力等检测,并利用此抗体对中山市人群Mur抗原发生频率进行调查。方法在本实验室,应用合成的Mur抗原特异性多肽,通过红细胞多肽凝集抑制试验鉴定抗-Mur;英国国际血型参比实验室对该抗体进行了经典血型血清学试验、试管凝集方法和Miltenberger抗原谱细胞鉴定抗-Mur。观察蛋白水解酶、酸碱度对Mur抗原抗体反应的影响,以微量板盐水法检测广东中山地区Mur抗原发生频率。结果确定了该抗体是高质量的Mur血型抗原检测试剂;木瓜酶、菠萝酶能破坏Mur抗原,弱酸性环境能增强Mur抗原抗体反应,中山地区献血者Mur抗原占7.31%(128/1 752)。结论我们发现的这例人源抗-Mur,无ABO天然抗体存在,效价高,特异性强,为理想的Mur血型定型抗体,为今后国内外输血界对Mur血型相关研究提供了基本保证。中山地区Mur抗原发生频率较高,输血时应该予以充分的重视。     

Mur基因分型方法的建立及西安地区无偿献血者的频率分布

目的建立Mur基因分型的方法,同时检测西安地区无偿献血人群中Mur血型的基因频率。方法根据Mur基因序列特异性设计引物,建立了Mur血型的基因检测方法。同时对379例西安地区无偿献血者进行GYP(BA-B)Mur基因检测,检出的阳性样本用抗-Mur进行确认,并随机抽取20例基因检测阴性的样本,用抗-Mur检测作为对照。结果建立的Mur基因检测方法的检测结果与血清学检测结果吻合,证明该方法具有很好的特异性。西安市无偿献血者样本379例,检出Mur阳性4例,Mur抗原在西安地区无偿献血人群中的频率为1.05%。结论建立的Mur基因分型方法可以替代血清学的方法用于鉴定Mur血型抗原,对于了解人群分布频率,筛查和提供相合的血液,保障临床输血安全具有重要的作用。     

惠州地区无偿献血者Mur血型检索库的建立

目的通过对惠州地区无偿献血者抗-Mur及Mur抗原进行检测,了解其在人群中的分布,建立本地区的Mur血型检索库。方法分别采用高通量微板法和微柱凝胶法对献血者进行抗-Mur筛查和确认,并对其Mur抗原进行血清型检测。根据检测结果及献血者相关资料,建立Mur血型检索库,指导临床用血及献血者招募。结果总筛查人数32 305人,抗体阳性104人,阳性率0.32%,其中41例具有临床意义,男女间的差异具有统计意义(P0.05),女性高于男性;抗原阳性1 862人,阳性率为5.76%。在近1年的临床输血应用中,共避免41袋含有抗-Mur血液流入临床,并为5例抗-Mur阳性患者找到相合血液。结论 Mur血型检索库的建立,能有效避免含有Mur抗体的血液制品流入临床,减少因此引起的疑难配血及输血不良反应,并快速找到相合血源,同时有利于稀有血型献血者的保留和电子配血的开展及推广。     

M血型检测的影响因素及M抗原与Mur血型的关联性

目的探讨M抗原和抗-M检测的影响因素,了解M抗原与Mur抗原的关联性,调查广东省中山地区人群M血型的发生频率。方法采用微孔板(或试管)盐水法,对该地区581例无偿献血者进行M和Mur血型抗原筛查,观察不同条件下人源性抗-M和单克隆抗-M检测的敏感性。结果该地献血者中M抗原与Mur抗原的发生频率分别为78.0%(453/581)、7.9%(46/581),其中Mur抗原者中M抗原阳性发生频率为100.0%(46/46)。孵育温度越低,抗-M活性越高,孵育时间过短易导致敏感性降低;试剂红细胞越新鲜,敏感性更高。结论M抗原与Mur抗原两者存在密切相关性。M抗原抗体检测最佳孵育温度和时间分别为4℃、15 min,单克隆抗-M试剂应选择效价高的试剂(如1∶16以上),抗体筛选红细胞试剂尽可能选择新鲜的,以纯合子最佳。     

番禺地区Mur抗原与抗-Mur频率调查

在MNS血型系统众多的变异型及卫星抗原中,Mur抗原及抗-Mur与输血密切相关,而国内也有抗-Mur引起输血反应的相关报道[1].我们对本地区献血人群中Mur抗原与抗-Mur的频率进行了调查,报道如下.     

Mur血型分子诊断方法的建立与应用

目的建立Mur血型的分子生物学诊断方法。方法根据Mur血型的分子背景,设计特异性引物,采用PCR-SSP技术,优化反应体系及扩增参数,建立Mur血型分子检测方法;同时采用标准抗血清、标准细胞,用血清学方法予以验证并初步应用于献血者Mur血型的检测。结果建立了Mur血型PCR-SSP检测方法,用以检测14份已知抗-Mur阳性或阴性的献血者标本,同时用血清学方法平行检测:抗-Mur阳性11/11、抗-Mur阴性3/3,结果完全一致;用本法对随机抽取的107名献血者血样检测,检出2例阳性,同时采用标准抗血清用血清学方法所做的复核结果也完全一致。结论所建立的Mur血型PCR-SSP检测方法可以准确地检出Mur抗原,弥补了Mur血型血清学检测方法的局限性,有助于Mur血型检测方法的标准化、规范化。     

低频率抗Mur抗体引起溶血性输血反应的调查研究

目的研究抗Mur抗体血型血清学特征,调查其在输血医学中临床意义.方法对2例患者的血清,与已知血型的试剂红细胞和4个已知Mur抗原,在盐水介质、低离子间接抗球蛋白介质,分析鉴定出其抗体的特异性.结果这2例患者与已知血型的试剂红细胞在多种反应介质中的反应结果显示患者血清中含有抗Mur抗体,患者血清与4个已知Mur抗原的反应证实该例抗体只与Mur抗原反应.结论该例同种抗体为特异性抗Mur抗体,在临床会引起溶血性输血反应.在东方人群中Miltenberger血型抗体常规筛选鉴定值得探讨.     

低频率抗Mur抗体引起溶血性输血反应的调查研究

目的研究抗Mur抗体血型血清学特征，调查其在输血医学中临床意义。方法对2例患者的血清，与已知血型的试剂红细胞和4个已知Mur抗原，在盐水介质、低离子间接抗球蛋白介质，分析鉴定出其抗体的特异性。结果这2例患者与已知血型的试剂红细胞在多种反应介质中的反应结果显示患者血清中含有抗Mur抗体，患者血清与4个已知Mur抗原的反应证实该例抗体只与Mur抗原反应。结论该例同种抗体为特异性抗Mur抗体，在临床会引起溶血性输血反应。在东方人群中Mihenberger血型抗体常规筛选鉴定值得探讨。     

国内抗体筛查细胞试剂比对

目的通过收集国内市场上常见的进口抗体筛查(抗筛)细胞和国产抗筛细胞,了解其抗原构成,比较检出不规则抗体的能力。方法选取临床抗筛阳性或可疑阳性标本111份,3个月前有过输血史的临床抗筛阴性标本204份,3种国产抗筛细胞(A、B、C)和进口D细胞同时采用微柱凝胶法做抗体筛查,阳性结果可疑阳性到4+凝集阳性划分为1到5个等级从。对抗筛阳性标本作抗体鉴定。结果 4种抗体筛查细胞抗原谱存在差异,A、B、C细胞同D细胞相比具有剂量效应的抗原(如C,c,E,e;M,N,S,s;Fya,Fyb;Jka和Jkb)不全为纯合子;A、C细胞未包含K抗原,A、D细胞未包含Dia抗原,4种细胞均未包被Mur抗原。4种抗体筛查细胞检测结果一致的标本有268份(201份均为阴性,67份均为阳性),不一致的有47份,4种抗体筛查细胞的检测结果差异存在统计学意义(χ2=105.10,P0.0001)。对47份标本中的37份作抗体鉴定,以抗体鉴定结果为参照标准,A和D细胞表现最好,C细胞假阳性最多(29/37),B细胞假阴性最多(6/37)。4种抗体筛查细胞的阳性等级在67份阳性的标本中存在统计学差异,以A和D阳性等级较高(P0.001,χ2=26.10)。结论不同厂家抗体筛查细胞质量存在差异。国产抗体筛查细胞的抗原有待进一步规范,一方面具有剂量效应的抗原(如C,c,E,e;M,N,S,s;Fya;Fyb;Jka和Jkb)应为纯合子,否则可能漏检一些低效价抗体;另一方面一些在中国人群中分布频率较高的抗原,如Diego血型系统中的Dia抗原和MNS系统中的Mur抗原,及一些在中国人群中分布频率较低的抗原,如Kell血型系统中的K抗原,应有明确规范包含在抗体筛查细胞中。     

低频率抗体抗-Mur引起的溶血性输血反应

目的 :研究抗Mur抗体的血清学特异性及其在输血中的临床意义。方法 :患者的血清 ,与 3组试剂红细胞 (其中二组为Miltenberger抗原试剂红细胞组 )和 2 8个低频率血型抗原 ,在盐水介质、低离子强度介质和低离子间接抗球蛋白介质中反应 ,分析鉴定其抗体的特异性。结果 :患者血清与三组试剂红细胞在多种反应介质中的反应的结果显示患者血清中含有抗Mur抗体 ,患者血清与 2 8个低频率血型抗原的反应证实该例抗体只与Mur抗原反应。结论 :该例同种抗体为特异性抗Mur抗体 ,且引起溶血性输血反应。在亚洲人中Miltenberger血型系抗体筛选意义值得探讨。     

抗-Mur流式微球检测技术的建立及应用

目的合成Mur血型抗原多肽及重复多肽序列,比较2者抗原性,并建立不依赖新鲜红细胞的可用于抗-Mur检测的流式微球实验技术。方法采用固相化学合成法合成制备生物素Biotin标记的Mur血型抗原多肽及重复多肽序列:Biotin-GGDGDGDGDGDTYPAHTANEVSE和Biotin-GGDGDGDGDGDTYPAHTANEVSETYPAHTANEVSE,经凝集抑制试验验证其抗原特异性后,通过链亲和素streptavidin包被于羧基流式微球表面,建立抗-Mur流式微球检测技术。采用该方法检测本研究室制备的抗-Mur参考血清1份和2 300例临床患者血液标本,并与试管法血凝试验比较。同时验证多肽抗原微球的稳定性和保存期限。结果 Mur血型抗原多肽及重复多肽序列被高效包被于流式微球表面;通过抗-Mur流式微球检测技术可检测出参考血清中的抗-Mur;流式微球检测技术与试管法血凝试验对临床患者血液标本抗-Mur阳性检出率皆为0.35%(8/2 300)。通过对参考血清检测实验比较,流式微球检测技术的Mur血型抗原重复多肽序列阳性检测结果明显优于Mur血型抗原多肽,该多肽抗原微球4℃保存稳定性可维持> 11个月。结论基于合成重复多肽序列抗原的抗-Mur流式微球检测技术用于检测抗-Mur,弥补了临床难以获得Mur表型阳性红细胞及保存期短的局限性,有助于临床常规开展抗-Mur检测。     

献血者红细胞血型不规则抗体筛查必要性的探讨

目的了解福州地区献血者血型不规则抗体的频率和分布特点,探讨对献血者进行不规则抗体筛查的必要性。方法选择含特定抗原的红细胞,采用固相红细胞微板法和盐水凝集微板法,筛查献血者血型不规则抗体;检出的抗体进行效价测定。结果从14460名献血者中,共检出不规则抗体42例,检出率为0.29%,其中冷自身抗体16例(IgM)、非特异性不规则抗体11例、抗-Mur3例、抗-M5例、抗-Leb5例、抗-Lea1例、抗-P11例,检出的不规则抗体以效价<16、37℃无活性的IgM型抗体为主。结论我们认为仍没有明确的证据表明,应对Rh(D)阳性献血者进行普遍的强制性红细胞血型不规则抗体筛查。     

南宁地区无偿献血人群HCV筛查阳性情况分析

目的了解南宁地区无偿献血者丙型肝炎病毒(HCV)筛查阳性反应人群分布情况。方法收集南宁地区2015-2017年采集的389 518份无偿献血者血液标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)用两种试剂进行检测,ELISA检测合格标本进行核酸检测(NAT),对无偿献血者性别、献血形式、年龄、民族、教育程度和职业与HCV筛查结果进行分析。结果 389 518份无偿献血者血液标本中,HCV筛查阳性631份,阳性率为0.16%,其中ELISA阳性630份,NAT阳性1份。无偿献血者HCV阳性率与年龄、民族因素无关(P0.05);女性献血者HCV阳性率显著低于男性(P0.01),机采血小板成分血献血者HCV阳性率显著低于全血献血者(P0.01);学历越高,HCV阳性率越低(P0.01);医务人员是献血者已知职业中HCV阳性率最低的献血人群(P0.05)。结论提高女性、高学历、医务人员和既往合格献血人群献血比例,献血前进行HCV快速筛查,加强潜在和固定献血者的健康教育等措施可以降低经输血传播HCV的风险,有利于血液安全。     

Miltenberger系列混合抗体的分离鉴定及临床意义探讨

目的探讨Miltenberger系列混合抗体的分离鉴定方法及其在输血中的临床意义。方法首先用Mia抗原阳性的抗体筛选细胞对患者血清进行抗体筛查,并使用谱细胞及Miltenberger系列的GP.Vw、GP.Hut、GP.Mur、GP.Hil、GP.Bun细胞对患者血清进行初步鉴定;随后利用Miltenberger系列的GP.Mur,GP.Hut和GP.Vw细胞分别对患者血清进行吸收试验,并分离吸收后的上清液;最后用Miltenberger系列的GP.Vw、GP.Hut、GP.Mur、GP.Bun细胞分别对吸收后的上清液进行抗体特异性鉴定。结果患者血型为A型,DCCee,Mia(-),Mur(-);患者血清分别与GP.Mur,GP.Hut和GP.Vw细胞吸收分离后,鉴定结果为抗-Mia、抗-Mur、抗-Vw和抗-Hut的混合抗体,同时可能合并存在抗-MUT。结论抗体筛选细胞中包含Mia抗原阳性的红细胞可以大大提高Miltenberger系列抗体的检出率。利用不同表型细胞对待检血清进行吸收,可以实现对Miltenberger系列混合抗体的分离和鉴定,为患者选择相应抗原阴性的血液配型及输血,确保临床输血安全。     

山东菏泽地区无偿献血者不规则抗体筛选结果分析

目的研究本地区自愿无偿献血者不规则抗体的分布规律,以提高输血安全。方法共检测无偿献血者血液标本30 294人份,结合全自动微柱凝胶法和凝聚胺法,筛选红细胞不规则抗体,并对筛查阳性者鉴定抗体特异性,分类统计IgM/IgG性质、效价,分析不规则抗体在无偿献血人群中的发生率,并分析其是否存在性别、血型等差异。结果抗体筛选阳性标本共计44份(阳性率0.145%)。7种不规则抗体分别分布于Lewis血型、自身抗体、MN血型和Rh血型此4类。其中女性高于男性(P0.05),O型血献血者的抗体阳性率较低。结论本地区女性无偿献血者的不规则抗体筛选阳性率明显高于男性。筛查献血者不规则抗体能在一定程度上增强输血安全性。     

第4代HIV抗原抗体联合检测试剂的评价

目的评价HIV(1+2)抗原抗体联合检测试剂,了解其是否适合于血液筛查。方法用HIV抗原抗体联合检测试剂和第3代HIV抗体检测试剂平行检测HIV感染或疑似感染样本205份、吸毒人群样本1486份、有既往献血史人群样本427份、献血和献浆人群样本7237份和丙型肝炎患者样本176份,对两种试剂检测结果不一致样本进行HIV p24抗原或RNA的检测,并分析其特异性和灵敏度。结果联合检测试剂检测HIV p24抗原的分析灵敏度为(2.5~5.0)U/ml,检测HIV抗体的分析灵敏度与第3代HIV抗体检测试剂相当。共检测出8996份HIV抗体阴性样本和503份HIV抗体阳性样本,与第3代试剂相比其特异为99.67%,灵敏度为100%,而且2份HIV感染“窗口期”样本也能检出。结论该试剂在增加HIV p24抗原检测的情况下,对HIV抗体检测的特异性和敏感性没有降低,可用于血液筛查以减少“窗口期”样本传播HIV的风险。     

合肥地区献血人群HTLV筛查情况及分析

目的调查合肥地区献血者HTLV的血清学流行情况,为该地区血液安全筛查策略的制定提供参考。方法采用国产或进口双抗原夹心法ELISA试剂分别筛查献血者血液标本,初筛反应性标本进行双孔复试,复试反应性标本利用蛋白印迹法(WB)进一步确认。结果 9 964份献血者标本共筛选出4份反应性,占0.04%;经确认3份不确定,1份阴性。结论合肥地区献血人群中存在一定的血清学筛查阳性率,有必要扩大监测量及进行抗-HTLV确认和追踪研究,为是否将HTLV纳入当地献血者血液筛查提供依据。