1,25（OH）2维生素D3诱导小鼠混合培养细胞白细胞介素1αmRNA …

本研究旨在探讨破骨细胞形成过程中１，２５（ＯＨ）２维生素Ｄ３「１，２５（ＯＨ）２Ｄ３」和白细胞介素１α两种生物因子间的相互作用关系，以期进一步了解正畸牙齿移动过程中牙周组织改建的生物学机理。     

白介素-6与1,25(OH)2维生素D3联合作用下大鼠骨髓破骨细胞的体外诱导培养

目的观察联合应用白介素(IL)-6和1,25(OH)2D3对大鼠骨髓破骨细胞生成诱导的影响.方法采用4周龄SD大鼠无菌条件下取出股骨,剪去两骺端,以α-MEM培养液将骨髓细胞冲出,然后将细胞悬液接种于预置盖玻片或牙本质片的24孔培养板内,24h后换液.试验分为4组,A组不加任何诱导因子;B组加入IL-6(10 U/ml);C组加入1,25(OH)2D3(1 ×10-8mol/L);D组加入IL-6(10 U/ml)和1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L).每组各6孔,于培养的第7天进行多核细胞计数.结果培养1周左右IL-6与1,25(OH)2D3在体外均可单独诱导骨髓破骨细胞的形成,但D组多核细胞数与B、C组相比差异有显著性(P＜0.05).结论IL-6与1,25(OH)2D3联合作用下对骨髓破骨细胞生成的诱导效果明显高于单因素诱导效果.     

白介素-6与1,25(OH)_2维生素D_3联合作用下大鼠骨髓破骨细胞的体外诱导培养

目的观察联合应用白介素(IL)-6和1,25(OH)2D3对大鼠骨髓破骨细胞生成诱导的影响。方法采用4周龄SD大鼠无菌条件下取出股骨,剪去两骺端,以α-MEM培养液将骨髓细胞冲出,然后将细胞悬液接种于预置盖玻片或牙本质片的24孔培养板内,24 h后换液。试验分为4组,A组:不加任何诱导因子;B组:加入IL-6(10 U/ml);C组:加入1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L);D组:加入IL-6(10 U/ml)和1,25(OH)2D3(1×10-8mol/L)。每组各6孔,于培养的第7天进行多核细胞计数。结果培养1周左右IL-6与1,25(OH)2D3在体外均可单独诱导骨髓破骨细胞的形成,但D组多核细胞数与B、C组相比差异有显著性(P<0.05)。结论IL-6与1,25(OH)2D3联合作用下对骨髓破骨细胞生成的诱导效果明显高于单因素诱导效果。     

1,25-二羟维生素D3对骨髓破骨细胞形成和破骨细胞分化因子mRNA表达的影响

目的：观察不同浓度的1，25-(0H)2D3对骨髓单个核细胞诱导形成破骨细胞和对单个核细胞ODF mRNA表达的影响。进一步阐明骨吸收刺激因子在破骨细胞性骨吸收中的作用机制。方法：应用不同浓度的1，25-(0H)2D3(0、10^-10、10^-8、10^-6moL／L)诱导大鼠破骨细胞的形成，观察形成破骨细胞的数目，并采用原位杂交技术检测骨髓细胞ODF mRNA的表达。结果：随着l，25-(0H)：D，浓度的增加，多核细胞计数增多；ODF mRNA表达的阳性信号显著增强。结论：1，25-(0H)2D3通过调节骨髓细胞ODF mRNA的表达，影响破骨细胞的形成和功能，进而调节局部骨微环境内骨吸收与骨形成平衡的变化，影响骨组织改建。     

1,25-(OH)2D3作用下人牙周膜细胞破骨细胞分化因子及破骨细胞发生抑制因子的表达及意义

目的观察1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对体外人牙周膜细胞(HPDLC)破骨细胞分化因子(ODF)mRNA及破骨细胞发生抑制因子(OCIF)mRNA表达的影响,探讨正畸牙周组织改建的分子机制。方法以不同浓度的1,25-(OH)2D3(0、1×10-10、1×10-8、1×10-6mol/L)作用于体外培养的人牙周膜细胞,利用原位杂交染色及RT-PCR检测技术,检测不同浓度的1,25-(OH)2D3作用于体外培养人牙周膜细胞ODF、OCIFmRNA表达的强度变化。结果随1,25-(OH)2D3浓度的升高,人牙周膜细胞ODFmRNA的表达升高,而OCIFmRNA的表达降低。结论1,25-(OH)2D3在体外可影响人牙周膜细胞ODFmRNA和OCIFmRNA的表达,从而通过调节ODF和OCIF相对含量的变化,影响牙周组织改建过程。     

不同浓度1,25-二羟基维生素D3对体外培养破骨样细胞骨吸收作用的影响

目的:观察不同浓度的1,25-二羟基维生素D3对体外培养破骨样细胞骨吸收作用的影响.进一步阐述骨吸收刺激因子在正畸牙周组织改建中的作用.方法:应用不同浓度的1,25-二羟基维生素D3(0、10-10、10-8、10-6mol/L)诱导大鼠骨髓破骨样细胞的形成,观察细胞在牙本质片上形成骨吸收陷窝的数目以及陷窝面积的大小;并采用原位杂交技术检测大鼠骨髓细胞的ODF mRNA表达.结果:随着1,25-二羟基维生素D3浓度的增加,骨陷窝数明显增多,陷窝面积增大;ODF mRNA表达的阳性信号显著增强.结论:在体外,1,25-二羟基维生素D3可以调节大鼠骨髓破骨样细胞的形成及骨吸收活性.     

人白细胞介素-10质粒转染抑制RANKL诱导的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分化形成破骨细胞

目的:探讨人白细胞介素-10(human interlenkin-10,hIL-10)质粒转染后的表达产物对RANKL诱导的破骨细胞形成的影响。方法:将hIL-10及相应的空载体质粒在脂质体介导下转染293T细胞,获取含hIL-10蛋白的培养液;通过TRAP染色及骨吸收实验观察转染产物对RANKL诱导的小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分化形成破骨细胞的影响。结果:hIL-10质粒脂质体法瞬时转染293T及RAW264.7细胞获得成功,部分细胞发出绿色荧光,ELISA检测表明目的基因获得表达,RAW264.7细胞在RANKL诱导下可形成破骨细胞样细胞,在该培养体系中加入含hIL-10蛋白的培养液上清,TRAP染色阳性细胞及骨吸收陷窝面积显著减少(P<0.05)。结论:本实验所采用的hIL-10质粒可以成功转染293T及RAW264.7细胞,产生的hIL-10蛋白在体外具有抑制破骨细胞形成和骨吸收的生物学功能。     

白细胞介素与破骨(牙)细胞

破骨 (牙 )细胞的主要功能是吸收骨、牙根和钙化的软骨 ,白细胞介素 (IL)参与了这种细胞的功能调节。本文对IL -1、IL -4、IL -6、IL -8与破骨 (牙 )细胞的关系进行综述     

牙周炎牙槽骨吸收机理的基础研究——白细胞介素2对破骨细胞性骨吸收的作用

本文利用新生兔的四肢长管骨分离破骨细胞,将其与牛骨片共同培养。24小时后,培养液中加入白细胞介素2(IL-2),使终浓度分别为50μ/ml和100μ/ml,并做空白对照。培养40小时、64小时及1周,采用相差显微镜计数每个骨片上形成的吸收陷窝数,同时拍照,再利用图象分析系统计算每张照片上吸收陷窝的表面积。初步的研究结果表明:IL-2可以刺激破骨细胞性骨吸收。     

Effects of 1,25 - （OH） 2 D3 on Stimulation of Osteoclast - like Cells Formationand Expression of ODF mRNA in Murine Marrow Cells in Vitro

目的：观察不同浓度的1，25-(OH)2D3对破骨细胞形成及对骨髓细胞ODFmRNA表达的影响：进一步阐明骨吸收刺激因子在正畸牙周组织改建中的作用。方法：应用不同浓度的1，25-(OH)2D3(0、10^-10、10^-8、10^-6mol／L)诱导大鼠骨髓细胞破骨样细胞的形成，采用体外破骨细胞溶骨模型，观察牙本质片上骨吸收陷窝数目，采用原位杂交技术检测骨髓基质细胞ODF的mRNA表达。结果：随着1，25-(OH)2D3浓度的增加，骨陷窝数明显增多，陷窝面积增大；ODF mRNA表达的阳性信号显著增强。结论：在体外，1，25-(OH)2D3可以调节破骨细胞的骨吸收活性，进而调节局部骨微环境的骨吸收及骨形成平衡的变化。     

白细胞介素-1β介导牙髓细胞 MMP-1和COX-2的 mRNA表达的研究

目的 :观察白细胞介素 -1β对人牙髓细胞基质金属蛋白酶 -1(MMP -1)和环氧化酶 -2 (cyclooxyge nase -2 ,COX -2 )的mRNA表达的影响 ,探讨IL -1β介导MMP -1、COX -2对炎症的基质降解、炎性疼痛产生机制的影响。方法 :重组人IL -1β刺激牙髓细胞 18h ,提取牙髓细胞总RNA ,反转录为cDNA ,半定量PCR检测基质MMP -1、COX -2的mRNA的表达。结果 :外源性的重组人IL -1β明显地刺激牙髓细胞MMP -1、COX -2的mRNA的表达 ,并呈一定浓度依赖性。结论 :IL -1β使得牙髓细胞MMP -1、COX -2的mRNA的表达量增多 ,表明牙髓炎症时IL -1β分泌异常增多 ,会引发基质金属蛋白酶 -1、环氧化酶 -2 (COX -2 )表达异常的增多 ,参与并加剧炎性基质降解、炎性疼痛产生。     

白细胞介素-6对破骨细胞骨吸收效应及MMP-3表达影响的实验研究

目的：观察不同浓度IL－6对破骨细胞骨吸收的剂量效应及对破骨细胞基质金属蛋白酶－3表达的影响，以期进一步阐明IL－6介导基质金属蛋白酶在破骨细胞性骨吸收中的病理机制。方法：采用体外破骨细胞溶骨模型，通过原子吸收分光光度仪及免疫组化染色技术检测不同浓度IL－6对破骨细胞溶骨活性及其质金属蛋白酶－3表达的影响。结果：当IL－6＞10U／ml时，培养上清中Ca^2 浓度显著增加，牙本质片上骨吸收陷窝数目明显增多；当IL－6浓度为100U／ml、500U／ml时破骨细胞基质金属蛋白酶－3表达的阳性信号显著增强。结论：在IL－6作用下，破骨细胞表达基质金属蛋白酶－3。IL－6对破骨细胞具有激活作用，低浓度主要诱导破骨细胞形成，较高浓度刺激破骨细胞的溶骨活性。     

白细胞介素-1β诱导牙髓细胞的金属蛋白酶-1和COX2的表达

目的 :探讨白细胞介素 1β对人牙髓细胞金属蛋白酶 1(matrixmetalloproteinase 1,MMP 1)、环氧合酶 2 (cyclooxygenase 2 ,COX2 )基因表达变化的生物学意义。方法 :培养人牙髓细胞 ,传代至第 4代 ,PT PCR检测人牙髓细胞是否表达IL 1β受体 ,进而用 1nmol/L人的重组IL 1β刺激人牙髓细胞 18h ,提取细胞总RNA ,反转录为cDNA ,半定量PCR检测IL 1β对人牙髓细胞的金属蛋白酶 1、COX2的mRNA的表达变化。结果 :人牙髓细胞表达IL 1β受体 ,而且用 1nmol/L人的重组IL 1β明显地刺激牙髓细胞的金属蛋白酶 1、COX2的mRNA表达。结论 :牙髓炎时牙髓组织内的IL 1β生成增多 ,会进一步引发金属蛋白酶 1、COX2基因异常表达相应增多 ,而金属蛋白酶 1导致炎症基质降解、COX2将引发炎性痛的病理改变。     

不同浓度1,25-二羟基维生素D3对大鼠正畸牙移动过程中破骨细胞分化因子的影响

目的探讨牙周局部注射不同浓度的1,25-二羟基维生素D3[1,25-(OH)2D3]对大鼠正畸牙移动压力侧破骨细胞分化因子表达的影响,以及相关的作用机制。方法96只成年健康雄性Wistar大鼠随机等量分为对照组、A组、B组和C组。在大鼠上颌左侧第一磨牙与上颌两切牙之间安放加力装置,每隔3d注射药物10μL;对照组注射生理盐水,A组注射10-10mol/L的1,25-(OH)2D3,B组注射10-8mol/L的1,25-(OH)2D3,C组注射10-6mol/L的1,25-(OH)2D3;分别于加力后第1、3、7、14天处死各组中6只大鼠。制取标本后,HE染色观察正畸牙移动牙周膜压力侧破骨细胞的数目、形态以及活性变化,同时运用免疫组织化学染色,检测正畸牙压力侧破骨细胞分化因子(ODF)的表达。结果4组大鼠正畸牙移动压力侧破骨细胞的变化趋势一致,但是B组大鼠压力侧ODF表达在第7、14天显著提高。结论10-8mol/L的1,25-(OH)2D3能更有效地促进大鼠正畸牙的移动过程中ODF的表达,促进破骨细胞的活化。     

维生素D及其受体诱导口腔扁平苔藓巨噬细胞IL-10表达

目的:探讨维生素D及其受体(VD/VDR)对口腔扁平苔藓(OLP)巨噬细胞炎性因子的调控作用。方法:选取OLP患者和健康对照志愿者各20例,分选组织巨噬细胞检测炎性因子和VDR表达量并分析两者间相关性;在单核源巨噬细胞和THP-1细胞系过表达VDR或加入维生素D,检测细胞白细胞介素-10(IL-10)表达量;染色体免疫共沉淀和荧光素酶报告基因实验检测VDR与IL-10基因启动子结合情况;维生素D处理OLP巨噬细胞检测炎性因子表达量。结果:OLP病变组织巨噬细胞VDR表达水平降低,且与炎症抑制因子IL-10表达水平呈正相关;细胞水平上,VD/VDR信号通路明显诱导巨噬细胞IL-10表达;分子机制上,VDR通过与IL-10基因启动子区域作用元件相结合,激活IL-10基因转录水平;维生素D处理后OLP巨噬细胞IL-10表达上调且促炎因子表达下调。结论:OLP巨噬细胞VD/VDR信号通路通过调控IL-10转录水平影响炎症因子表达。     

白细胞介素-17在破骨细胞凋亡中的作用研究进展

［摘要］Ｔh17 细胞在炎症状态下特征性分泌白细胞介素-17（IL-17）,在不同机体环境下表现不同生物学特征。IL-17协同多种细胞因子通过上调Fas/FasL,参与细胞凋亡。本文就IL-17细胞因子与破骨细胞凋亡相关关系的研究进展进行综述。     

口腔癌患者外周血白细胞介素2和可溶性白细胞介素2受体水平的临床研究

对２９例口腔癌患者外周血白细胞介素２（ＩＬ－２）活性和可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）含量进行检测，并对其中１６例术后患者外周血ＩＬ－２和ｓＩＬ－２Ｒ水平进行检测。结果表明：口腔癌患者ＩＬ－２活性明显低于正常对照组（Ｐ＜０．００１）。ｓＩＬ－２Ｒ水平明显高于正常对照组（Ｐ＜０．００１）。手术治疗后ＩＬ－２活性明显回升，ｓＩＬ－２Ｒ水平则显著下降（Ｐ＜０．０１）。研究还发现ＩＬ－２及ｓＩＬ－２Ｒ水平与肿瘤临床分期密切相关（Ｐ＜０．０５）。口腔癌患者外周血ＩＬ－２和ｓＩＬ－２Ｒ水平的变化可能与肿瘤大小、治疗效果和复发、预后密切相关。外周血ＩＬ－２和ｓＩＬ－２Ｒ水平的检测对口腔癌的诊断、病情的判断及预后监测具有一定的临床意义。     

1,25(OH)2VD3诱导培养兔骨髓细胞FOS蛋白产生的实验研究

目的观察1,25二羟维生素D3[1,25( OH)2VD3]对培养兔骨髓细胞产生立即早期基因c-fos的蛋白产物(FOS蛋白)的诱导作用 .方法在原代培养至第六代的兔骨髓细胞中加入含5×10-5M /L 1,25(OH)2VD3的培养液,继续培养3小时后,固定标本,进行FOS免疫组化反应.结果大部分细胞形态正常,胞核呈棕黄色,椭圆形,胞浆不着色,细胞轮廓清晰,表现为FOS免疫组织化学反应阳性.结论 1,25(OH) 2VD3能够诱导兔骨髓细胞表达FOS蛋白,提示它可能通过c-fos这条信号转导途径在骨组织改建过程中发挥作用.     

白细胞介素-24通过Jak-Stat通路对破骨细胞影响的实验研究

目的:研究白细胞介素-24(interleukin-24,IL-24)在体外通过Jak-Stat信号通路对单核巨噬细胞向破骨细胞分化的影响。方法:使用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)确定最佳感染复数(MOI);使用ELISA检测培养基中IL-24的含量;采用Real-time PCR方法检测RAW264.7细胞中Jak-Stat信号通路相关基因Jak1、Jak2、Jak3、Stat1、Stat2、Stat3及其向破骨细胞分化过程中相关基因NFATc1、CTSK、MMP9 mRNA的表达。结果:MOI=600为最佳转染效率;转染组IL-24含量显著高于未转染组(P＜0.01);在RANKL诱导条件下转染IL-24的RAW264.7细胞与未转染组相比Jak2、Stat3 mRNA的表达增加(P＜0.05),在RANKL诱导条件下转染IL-24的RAW264.7细胞加入信号通路抑制剂后与未加入抑制剂组相比,向破骨细胞分化过程中相关基因NFATc1、CTSK、MMP9 mRNA的表达降低(P＜0.05)。结论:IL-24通过Jak-Stat信号通路调控破骨细胞的分化及功能。     

1,25（OH）2维生素D3矿化液对人牙髓干细胞成骨方向诱导作用的研究

目的研究维生素D3矿化液对人牙髓干细胞的成骨方向诱导是否有促进作用。方法从恒牙牙髓中分离培养成纤维样细胞并测试其间充质干细胞的特异性标记物Stro-1阳性率,用一定浓度的1,25（OH）2维生素D3、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠的矿化液诱导牙髓干细胞,通过倒置相差显微镜、碱性磷酸酶染色、Vonkossa染色及骨钙素、Ⅰ型胶原基因表达观察和检测矿化液诱导后细胞形态变化及矿化基质分泌情况,以未诱导组为对照。结果维生素D3矿化液连续诱导21d后,诱导组的细胞碱性磷酸酶染色阳性、Ⅰ型胶原和骨钙素的基因表达阳性,并可见明显钙结节形成。结论维生素D3矿化液可以诱导人牙髓干细胞向成骨样细胞分化并促进其产生矿化基质。