温脉通对VSMC增殖及培养液中SOD MDA的影响

血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖是动脉粥样硬化等疾病的主要病理过程之一[1],抗VSMC增殖就可有效地防治动脉粥样硬化.本实验选择陈淑长教授临床治疗早期肢体动脉硬化性闭塞症(ASO)的有效方药温脉通,观察其对VSMC增殖及细胞周期的影响,同时测定培养液中SOD活性、脂质过氧化物的含量,探讨该方抑制VSMC增殖、防治ASO的作用机理.     

糖尿病中血管平滑肌细胞表型转化机制及中医药干预

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)的增殖和迁移是动脉粥样硬化斑块形成、高血压等糖尿病血管并发症的共同病理特征, 而VSMC表型转化是VSMC增殖和迁移的基础, 因此研究糖尿病中VSMC表型调节及机制, 对防治糖尿病血管并发症具有重要意义。该文拟介绍VSMC表型转化机制及糖尿病中VSMC表型的改变, 并综述中药复方及单体干预VSMC表型转化的研究进展, 为糖尿病血管并发症的中医药防治提供参考。     

中药调节平滑肌细胞内质网应激防治动脉粥样硬化研究进展

血管平滑肌细胞(VSMC)在病理因素诱导下异常增殖、迁移、表型改变是动脉粥样硬化(AS)发病的关键环节。与内质网应激(ERS)相关的凋亡途径可能导致VSMC增殖、凋亡失衡,从而在AS发生和发展中起到重要作用。中药干预调节VSMC异常增殖和凋亡在AS的预防和治疗中发挥重要作用。综述近年来中药单体和复方调节VSMS ERS从而防治AS的部分研究进展,以期进一步阐释与总结中医中药防治AS的作用特点与可能机制。     

中药阻抑血管平滑肌细胞增殖的实验研究概况

抑制血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖是预防动脉粥样硬化的重要途径之一,应用中药复方及有效单体阻抑VSMC增殖的实验研究已显示了成果,从中药复方、中药有效单体两个层面综述了中药抗VSMC增殖的机理.     

田蓟苷对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:通过观察田蓟苷对TNF-α诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响,探讨其治疗动脉粥样硬化的可能药效机制。方法:体外培养大鼠主动脉VSMC,采用SABC-Cy3荧光免疫组化技术鉴定其纯度;以TNF-α刺激VSMC建立细胞增殖和迁移模型;采用MTT法检测细胞的增殖,Transwell小室法检测细胞的迁移,免疫酶组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:2.5～10μg/ml田蓟苷可不同程度抑制TNF-α诱导的VSMC增殖、迁移以及细胞内PCNA的表达,且呈现一定剂量依赖关系的趋势。结论:田蓟苷通过抑制TNF-α对VSMC的增殖和迁移作用,可能是其治疗动脉粥样硬化的药效机制之一。     

香青兰总黄酮对TNF-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:通过观察香青兰总黄酮对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,探讨其治疗动脉粥样硬化的可能药效机制。方法:采用体外贴块法培养大鼠主动脉VSMC,SABC-Cy3荧光免疫组化技术鉴定其纯度;分别应用质量浓度为0.02 mg.L-1 TNF-α,TNF-α+不同浓度香青兰总黄酮组(25,50,100 mg.L-1)作用24 h,并设对照组进行比较。采用MTT法检测细胞的增殖;免疫组化法检测细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:与对照组比较,TNF-α组能显著刺激大鼠VSMC的增殖,香青兰总黄酮不同剂量组联合TNF-α可一定程度抑制TNF-α诱导的VSMC增殖以及细胞内PCNA的表达,且呈现一定的剂量依赖关系趋势。结论:香青兰总黄酮通过抑制TNF-α对VSMC的增殖作用,可能是其治疗动脉粥样硬化的药效机制之一。     

中药对血管平滑肌细胞的影响

整理和分析中药对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)的影响。血管疾病对患者的危害较大,VSMC的表型转化、过度增殖和迁移是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)、血管成形术后再狭窄和高血压等血管疾病形成的主要环节,故研究中药对VSMC的调节作用对血管疾病的防治意义重大。对中药促使VSMC表型转化、抑制细胞异常增殖和迁移及其分子机制、基础动物实验等方面的研究文献报道进行总结,并对血管平滑肌细胞与内皮细胞、内皮祖细胞及巨噬细胞之间的关系进行分析。结果表明,中药在AS等血管疾病的防治中具有良好的效果,但由于其成分复杂,作用机制难以明确、质量难以控制及毒副作用限制了其在临床中的应用,故结合中药血清药理学等方法,加强中药活性单体化合物对VSMC调节作用的深入研究或将给血管疾病的防治带来新的希望。     

栉孔扇贝糖胺聚糖对bFGF诱导的血管平滑肌细胞增殖及原癌基因<>ic-myc mRNA表达的影响

 目的观察栉孔扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用及原癌基因(c-myc) mRNA表达的影响,并探讨SS-GAG抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法建立碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的VSMC增殖模型,用MTT法观察bFGF、SS-GAG对VSMC增殖活性的影响;用原位杂交方法观察SS-GAG对bFGF诱导增殖的VSMC内c-myc mRNA表达的影响。结果bFGF模型组细胞活性最高,与正常对照组比较,差异有统计学意义,不同浓度的SS-GAG组细胞增殖活性均低于模型组细胞,差别有统计学意义;bFGF诱导增殖的VSMC内c-myc mRNA基因表达强度明显高于对照组;与模型组比较,SS-GAG作用后,增殖的VSMC内c-myc mRNA表达强度和阳性细胞数量均减少,差别有统计学意义。结论bFGF对VSMC有明显的促增殖作用,SS-GAG能显著抑制VSMC增殖,且对bFGF诱导增殖的VSMC的c-myc mRNA的阳性表达有抑制作用。     

补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的:观察补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:健康Wistar清洁级大鼠,分离大鼠胸主动脉,贴块法培养VSMC,抗α-actin的免疫组织化学染色鉴定细胞。无血清培养液培养静止后,以20%胎牛血清(FBS)刺激VSMC增殖。实验分为空白对照组、补肾化痰降浊方组,分别加入不同浓度的补肾化痰降浊方,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察药物对VSMC增殖的影响,并用流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化。结果:经20%FBS刺激后,VSMC细胞增殖明显升高,加入不同浓度的补肾化痰降浊方作用24小时后,细胞增殖明显下降,并呈一定程度的剂量依赖关系。随着补肾化痰降浊方浓度加大,VSMC细胞周期分布发生变化,G0/G1期细胞比例增加,而合成增殖的S期细胞比例减少,出现G0/G1期细胞周期阻滞。结论:补肾化痰降浊方对血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,可能是其防治动脉粥样硬化(AS)及AS性疾病的部分作用机制。     

中药对体外血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

血管平滑肌细胞(VSMC)增殖是经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄、动脉粥样硬化(AS)、高血压病、肺动脉高压等疾病发生发展的重要病理基础.其中,PTCA后再狭窄以内膜下平滑肌增殖为其主要特征.     

中医复方对血管平滑肌细胞调节作用的研究进展

血管疾病对患者危害严重,血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖、迁移及表型转化是动脉粥样硬化(AS)发生发展的主要病理基础,也是AS病变的重要病理学特征之一。AS病变初期的血管壁细胞数量增多、内膜增厚、管腔狭窄,与VSMC过度增殖和凋亡减少密切相关。大量临床研究发现,中医药对AS具有很好的临床疗效,相关治疗机制研究表明,中医复方对VSMC的调节作用具有重要意义。现将近年来中医复方对VSMC调节作用的研究进展综述如下。     

沥水调脂胶囊在体外对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨沥水调脂胶囊治疗动脉粥样硬化的作用机理和弱氧化型低密度脂蛋白在动脉粥样硬化由痰致瘀过程中的作用。方法：以甲醇除蛋白后的沥水调脂胶囊含药血清和弱氧化型低密度脂蛋白(mox-LDL)处理血管平滑肌细胞(VSMC)，用^3H—TdR掺入法检测DNA合成率。结果：低浓度的除蛋白含药血清(5％、10％)在5、10μg／ml的nox-LDL处理VSMC细胞组中与对照组比较，差异均无显著性意义；高浓度除蛋白含药血清(20％)对两个不同浓度的mox-LDL诱导的VSMC增殖均有明显的抑制作用(抑制率分别为40％、42％，P＜0．05)；其作用方式与维生素E相似。结论：沥水调脂胶囊呈浓度依赖方式抑制mox-LDL诱导的VSMC增殖，其机制可能与该药的抗氧化作用有关，进一步提示氧化损伤是由痰致瘀过程中的关键环节，以及抗氧化可能是阻止由痰致瘀的主要手段。     

山楂红曲荷叶汤对动脉粥样硬化模型大鼠血管平滑肌细胞的影响

目的:探究山楂红曲荷叶汤对动脉粥样硬化模型大鼠血管平滑肌细胞的影响。方法:本研究完整剪取动脉粥样硬化大鼠胸主动脉,采用贴块法培养动脉血管平滑肌细胞(VSMC),通过VSMC的形态学观察和鉴定确定研究模型,以细胞增殖以及繁殖周期为指标分析山楂红曲荷叶汤对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。结果:山楂红曲荷叶汤对20%FBS刺激的VSMC增殖而发生的细胞周期改变有显著的抑制作用,使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,说明山楂红曲荷叶汤可使VSMC增殖周期停滞于G0/G1期,从而抑制VSMC增殖。结论:山楂红曲荷叶汤可以在一定程度上抑制动脉粥样硬化模型大鼠血管平滑肌细胞的增殖。     

雷公藤红素对培养的动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:动脉血管平滑肌细胞(VSMC)过度增殖是动脉粥样硬化及冠脉成形术(PTCA)后再狭窄形成的主要原因,为了探讨雷公藤红素预防再狭窄形成的可能,本研究观察了雷公藤红素对培养的大鼠胸主动脉 VSMC 增殖的影响。方法:采用大鼠传代培养的 VSMC(4～7代),将雷公藤红素(0.05～0.40mg/L)加入细胞培养基中,24h 和48h 后用中性红细胞染色法测定细胞总蛋白的方法做细胞计数并测定氚-胸腺嘧啶脱氧核苷(~3H-TdR)掺入的放射性强度每分计数(cpm)值,求各组均值及标准差,采用 q 检验做统计学处理。结果:各药物剂量组的雷公藤均可抑制 VSMC 增殖及对~3H-TdR 的掺入并呈药物剂量依赖性关系,与对照组比较P<0.05或 P<0.01。结论:雷公藤红素能够抑制大鼠 VSMC 的增殖,为该药物可能用于以VSMC 增殖为主的冠心病和再狭窄的形成提供了实验依据。     

补肾益气方及其拆方对ox-LDL所致"AS"症血管平滑肌细胞病理模型的影响

目的:研究补肾益气方及其拆方(黄芪、首乌)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)所致动脉粥样硬化(AS)症血管平滑肌(VSMC)病理模型细胞的增殖及其调控基因的影响。方法:用ox-LDL处理VSMC复制"AS"细胞病理模型,用MTT法、流式细胞仪、RT-PCR法观察含受试药物血清对模型细胞增殖、泡沫细胞形成、增殖周期及相关基因表达影响。结果:补肾益气方及其拆方(黄芪、首乌)能降低模型细胞的增殖率及泡沫细胞形成率;降低S期细胞的百分率,下调VSMC增殖促进基因PDGF-a、c-MYC,上调增殖抑制基因P27的表达。结论:补肾益气方及其拆方具有抑制AS症的血管平滑肌细胞增殖和泡沫细胞的形成。     

淫羊藿苷对HCY诱导增殖血管平滑肌细胞GRP78表达的影响

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对同型半胱氨酸(HCY)诱导的增殖血管平滑肌细胞(VSMC)葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达的影响,探讨ICA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48 h后,用流式细胞仪Annexin/PI双染法检测凋亡率;RT-PCR检测GRP78 mRNA的表达;目的基因克隆、鉴定并测序.结果:0.2,0.4 mg·L~(-1)的IcA可显著促进兔VSMC凋亡,且存在剂量依赖性,与半胱氨酸组相比,差异显著(P＜0.01);RT-PCR结果显示:0.2,0.4 mg·L~(-1)的淫羊藿苷作用于VSMC 48 h后,GRP78 mRNA表达水平显著升高,与半胱氨酸组相比差异显著(P＜0.05);测序结果表明,来源于VSMC的全长648 bp的基因片断与兔葡萄糖调节蛋白78基因高度同源.结论:ICA促进GRP78 mRNA表达,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

BrdU-ELISA法测定四逆汤及组方药提取物对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察四逆汤(SNT)及组方药提取物对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法 采用MTT比色法和Brdu—ELISA法观察药物对离体大鼠VSMC增殖的影响。结果 BrdU—ELISA法结果表明四逆汤总提取物(EST)对VSMC的BrdU掺入DNA没有显著影响，而MTT测定表明：EST可以提高VSMC的脱氢酶活性。甘草(LE)、附子(AE)、干姜(GE)、甘草加附子(LAE)、干姜加附子(AGE)提取物显著提高VSMC的脱氢酶活性，同时提高VSMC的BrdU掺入DNA的水平。结论 EST可以增加VSMC的脱氢酶活性，但对VSMC的BrdU掺入DNA的水平无影响。而其他组方药提取物可以增加VSMC的脱氢酶活性，同时提高VSMC的BrdU掺入DNA的水平。     

丹参酮ⅡA对血管平滑肌细胞内质网应激相关基因表达的影响

目的:研究丹参酮ⅡA对同型半胱氨酸(HCY)诱导增殖血管平滑肌细胞(VSMC)内质网应激(ERS)相关基因免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化的机制.方法:建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的丹参酮ⅡA共同培养,Annexin/PI双染法、原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡率,观察凋亡细胞形态;实时荧光定量PCR检测Bip基因表达.结果:丹参酮ⅡA可显著促进兔VSMC凋亡,细胞凋亡率与HCY组相比差异显著(P＜0.01),且存在剂量依赖性;丹参酮ⅡA组Bip mRNA表达水平显著升高,与HCY组相比差异显著(P＜0.05,P＜0.01).结论:丹参酮ⅡA上调Bip基因表达,放大ERS信号,诱导兔VSMC凋亡,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.     

大黄(庶虫)虫丸对动脉粥样硬化模型家兔血管平滑肌细胞的影响

目的:从血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡、血管壁胶原合成等方面探讨大黄虫丸(熟大黄,土鳖虫,水蛭,黄芩等)抗动脉粥样硬化(AS)的机制。方法:采用免疫损伤合并高脂食饵的方法复制家兔早期AS模型,检测指标包括血管壁超微结构观察,血管壁羟脯氨酸含量测定;用免疫组化和TUNEL法分别测定血管壁VSMC的增殖和凋亡。结果:大黄虫丸使AS家兔血管壁中膜层厚度变小,VSMC排列趋于正常,减轻线粒体肿胀和粗面内质网扩张,减少细胞器的增多,使VSMC表型转化减轻,成纤维细胞和胶原纤维明显减少。大黄虫丸也能降低血管壁羟脯氨酸含量,降低PCNA染色阳性细胞数,升高TUNEL染色阳性细胞数。结论:大黄虫丸可抑制血管壁胶原的合成,抑制VSMC的增殖并促进其凋亡,进而逆转血管重塑,这可能是其抗AS的机制之一。     

红芪多糖对培养血管壁平滑肌细胞的影响

目的:观察红芪多糖对培养血管壁平滑肌细胞(VSMC)的影响。方法:应用组织贴块法,在正常培养条件和高脂血清损伤等条件下,观察红芪多糖对 VSMC 的增殖、自由基清除及超微结构等的影响。结果:在正常、高脂血清、巨噬细胞孵育液培养条件下,有显著抑制 VSMC 的作用(P<0.01);对肾系膜细胞孵育液、未融合状人内皮细胞孵育液及 VSMC 孵育液培养条件下刺激的 VSMC 增殖无显著抑制作用(P>0.05);对正常、高脂血清培养条件下的VSMC 内过氧化脂质可显著降低(P<0.01),对超氧化物歧化酶活性可以显著增高(P<0.01),并能提高高脂血清培养条件下前列环素/血栓素 B_2比值。结论:红芪多糖可在高脂血清培养条件下,保护 VSMC 形态结构,促进细胞新陈代谢,有益于延缓动脉粥样硬化的进程。