口腔黏膜上皮细胞体外培养的研究

目的 建立一种新的口腔黏膜上皮细胞体外培养模型。方法 结合组织块法和酶消化法，先用分离酶消化获取单纯的口腔黏膜上皮组织，再将组织块种植于培养皿，经原代培养和传代培养，光镜观察培养细胞。酶消化后组织块行既染色，观察分离酶作用部位。培养细胞行抗角蛋白抗体免疫组化染色。结果 分离酶作用于基底膜。可以完整地将上皮细胞与固有层分离，细胞培养过程中未见成纤维细胞生长，抗角蛋白抗体染色阳性。结论 该培养方法可获取纯净的人口腔黏膜上皮细胞，建立符合临床研究所需要的口腔黏膜上皮细胞体外培养模型。     

人胎关节软骨细胞体外培养的生物学特性

目的：研究软骨组织工程中传软软骨细胞与原代的差异，方法：用5个月人胎关节软骨分离培养细胞，观察细胞存活率，贴壁率，生长曲线和组织形态学的改变。结果：（1）软骨块在4℃下，3天内细胞存活率可达93．4％－97．6％。（2）原代细胞为圆形或三角形；第4代有一半转变成梭形，到第6代全部变为长梭形。（3）传代细胞贴壁时间（2－3h)短于原代（4－7h)。玻璃瓶内贴壁率传代细胞为78．7％－85．5％，原代8．8％。（4）生长曲线表明，从原代到第4代都有高增殖力；到第8代时增殖降低；到第12代几乎丧失细胞增殖。结论：软骨块4度冷藏，3天内对细胞存活率无明显影响。第4代细胞壁壁快，增殖 ，适于作为组织工程用细胞，第8代以后不适合。     

人晶状体上皮细胞体外培养

白内障囊外摘除术后的远期并发症主要是后囊混浊 ,是导致视力下降的主要原因 ,其发生率可达50 %。现已明确后囊混浊发生的主要原因是由于残留的晶状体上皮细胞增生 ,并向后迁移所致。因此 ,抑制晶状体上皮细胞的增生 ,对于减少后囊混浊的发生十分重要。筛选有效的适合于临床应用的药物 ,需要在体外培养晶状体上皮细胞进行。由于晶状体材料组织块小 ,且无色透明 ,上皮细胞的体外培养具有一定的难度。为此 ,作者进行人晶状体上皮细胞体外培养实验 ,并对材料的处理和细胞培养条件进行了探讨。1　材料和方法1.1　材料 :人晶状体上皮细胞取材于年…     

不同理化因素条件下体外培养晶体上皮细胞的生物学特性

不同理化因素条件下体外培养晶体上皮细胞的生物学特性李朝辉综述何守志审校关键词晶体；细胞培养；体外；生物学；综述中国图书资料分类法分类号Ｒ７７６自从１９６９年Ｍａｙｅｒ首次报道晶体上皮细胞体外培养技术以来，牛、鼠、兔、鸡以及人的晶体上皮细胞体外培养相继...     

角膜上皮细胞体外培养技术的研究进展

体外重建组织工程角膜并将其用于角膜移植是使角膜盲患者复明的惟一有效途径,其中角膜上皮种子细胞的来源成为急需解决的关键问题。由于体外生长的角膜上皮细胞生命周期短,因此通过改进体外培养技术来获得增殖能力强的细胞成为解决角膜上皮种子细胞来源问题的首要任务。本研究从角膜上皮细胞的体外培养技术包括培养方法和培养条件这两方面进行了综述。     

体外培养人胎儿软骨细胞的生物学特性

目的 建立人胎儿软骨细胞分离培养、扩增技术体系,研究其体外单层培养条件下的生长特性,探讨胎儿软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法酶消化法获取胎儿软骨细胞,体外培养扩增,经测定细胞生长曲线、群体倍增时间及累计倍增数目,观察细胞生长动力学并确定体外生长规律。通过免疫组织化学检测Ⅱ型胶原分泌,阿利辛蓝比色法测定基质糖胺多糖(GAG)含量。P1细胞接种于聚羟乙酸(PGA)纤维支架,观察两者生物相容性及细胞体外成软骨能力。结果 关节软骨细胞形态呈典型的多角形,随着传代的次数增加,逐渐变成“成纤维细胞样”的条梭形。平均倍增时间为74 h。细胞连续培养5代,累计倍增数目为7.83±0.42。P1-P5间接免疫组化Ⅱ型胶原表达阳性,P6不表达。GAG含量P1细胞低于P0细胞,随体外培养时间延长逐渐增加。P1细胞接种于PGA纤维支架,体外培养14 d,组织学观察显示有软骨组织形成。结论 胎儿软骨细胞经常规体外培养,至第6代失去分泌软骨特异性基质的功能。P1细胞接种PGA纤维展现良好的生物相容性,初步证实胎儿软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。     

人鼻咽癌上皮细胞株：CNE3的建立和生物学特性

从１例鼻咽癌肝转移尸检者取出肝转移之癌组织，经裸鼠异种移植成功，然后又经离体培养建成细胞株，定名为ＣＮＥ３。对该细胞生物学特性进行观察，结果表明：细胞生长周期最大倍增时间为９６ｈ，最大增长倍数为２５倍；染色体为人类染色体核型，为三倍体和亚三倍体；有ＥＢ病毒基因组存在，以及ＥＢＮＡ－１及晚期末蛋白（Ｌｍｐ）表达；裸鼠体内回复试验仍具成瘤性，其组织结构与原标本相似，体外培养反复冻融细胞生物学特性不变；     

人胚胎视网膜色素上皮细胞的体外培养和吞噬作用

目的探讨人胚胎视网膜色素上皮（RPE）细胞分离培养的特性及其吞噬作用。方法取发育至13-15周的新鲜人胚胎眼球,显微解剖后采用机械胰酶消化法分离培养RPE细胞,应用免疫荧光法观察人胚胎RPE细胞吞噬视网膜光感受细胞外节膜盘。结果人胚胎发育至13-15周后,RPE细胞可应用标准的培养方法进行体外培养和传代。根据测定的人胚胎RPE细胞生长曲线,取2—6代细胞用于实验培养的人胚胎RPE细胞具备吞噬功能。结论改进了人胚胎RPE细胞的培养方法,证明人胚胎RPE细胞在体外具有吞噬能力。     

软骨细胞与瑞福纳米人工骨复合物的体外构建

目的:评估瑞福纳米人工骨(胶原基纳米骨,nano-hydroxyapatie/collagen, nHAC) 作为软骨组织工程细胞支架材料的可行性.方法:选择骨性关节炎(OA)患者行髋关节置换手术后外观大致正常的关节软骨, 消化、分离、体外培养扩增后种植到nHAC中,复合物体外培养后进行Ⅱ型胶原免疫组织化学检测和扫描电镜观察.结果:软骨细胞可以长入nHAC支架材料中.同期软骨细胞保持了正常的外形且可分泌Ⅱ型胶原.结论:nHAC可以作为软骨细胞的载体.     

正常人黑素细胞的体外培养与观察

目的进一步探索人纯黑素细胞培养方法,观察黑素细胞体外培养后的形态与生物学功能性。方法在M2培养基条件下进行人纯黑素细胞培养,应用倒置显微镜观察细胞形态,采用TRP-75单克隆抗体检测生物学功能性。结果6例参与者进行了黑素细胞培养与研究,培养成功率为100%,培养后的黑素细胞形态正常,并显示良好的生物学功能。结论在M2培养基条件下进行人纯黑素细胞培养增殖,其培养效果好,培养后的黑素细胞具有良好的生物学功能。     

以兔去上皮浅层角膜为载体体外培养角膜缘上皮细胞的实验研究

目的 建立以兔去上皮浅层角膜为载体体外培养兔角膜缘上皮细胞的培养方法 ,观察细胞生物学特性。方法 用含5%胎牛血清的DMEM/F12（1∶1）培养液对兔角膜缘上皮细胞进行体外组织块法原代培养,待细胞形成单层后,传代种植于去上皮浅层角膜载体上。每天用倒置显微镜观察培养细胞的形态及生长情况,电镜观察培育细胞的超微结构并采用HE染色和抗增殖细胞核抗原（anti-proliferating cell nuclear antigen,PCNA）单克隆抗体免疫细胞化学染色对生长于去上皮浅层角膜载体上的细胞进行检测。结果 原代培养时,48小时后可见组织块边缘有细胞生长游出,10天左右,细胞汇合成单层。传代种植于载体上,细胞24小时贴壁伸展,第5天可见部分区域细胞逐渐融合成片,11天左右细胞形成良好单层。细胞呈卵圆形或多边形,类似角膜上皮细胞;电镜下,可见细胞表面有许多微绒毛,细胞间有桥粒连接;免疫细胞化学染色显示部分细胞PCNA单克隆抗体呈阳性反应。结论 含5%胎牛血清的DMEM/F12培养液适合角膜缘干细胞的体外培养,并能成功地在去上皮角膜浅层载体上培养出类似生理状态下的角膜上皮细胞。     

组织工程—体外重建人体组织

全部或部分重建皮肤、肝、骨髓、神经等组织一直是基础研究、临床医学和生物工程领域的科学家们所追求的目标，动物细胞与组织体外培养技术的发展使之成为可能。本文主要综述组织工程的研究现状，应用及存在的问题。     

组织工程气管上皮组织体外构建的研究

目的：体外构建气管上皮组织，为气管组织工程奠定基础。方法：利用消化法获得气管上皮细胞、成纤维细胞，体外扩增后作为种子细胞，在胶原上接种气管上皮细胞、成纤维细胞，体外构建活性双层气管上皮组织，并行组织学检测。结果：复合培养的组织学苏木精-伊红（H-E）染色切片显示成纤维细胞构成的薄层结缔组织上有气管上皮细胞形成的上皮细胞层：结论：利用胶原成功地在体外构建出了气管上皮组织。     

一种新型的体外加载培养装置

目的设计一种能在体外培养条件下对离体组织块进行加载的应力装置。方法利用自行设计的体外加载系统，将6例因股骨颈骨折而行全髋关节置换术的老年患者股骨头关节软骨组织加工成一定几何形状，进行不同频率、不同载荷值的压应力，与螺旋测微仪定量施压法比较，行线性回归分析。结果用自行设计的加载系统加载后对关节软骨造成的形变率与传统的螺旋测微仪加载法结果基本相同，且前者反应数据的稳定性要明显优于后者。结论自行设计的加载系统对于体外软骨组织块的力学研究是一种较为理想方法。     

口腔粘膜上皮细胞体外培养的研究

目的 :探索口腔粘膜上皮细胞体外培养的技术和方法 ,为进一步采用组织工程技术构建口腔粘膜组织奠定基础 ,同时可为口腔粘膜的生理、药理、毒理学及微生态研究提供实验模型。方法 :取刚离乳的雄性新西兰幼兔口腔粘膜组织小块 ,酶消化成单细胞悬液 ,接种后静置培养 ,定期换液、传代。以相差显微镜每日动态观察细胞形态变化及生长增殖情况 ,细胞进行常规组化染色、免疫组化染色及流式细胞仪检查 ,并以电镜观察其超微结构。结果 :整个上皮细胞生长期内无成纤维细胞混杂生长 ,均为单一的上皮细胞 ,并证实为二倍体细胞。细胞可传11 13代 ,成活 5 0～ 60天。结论 :新西兰幼兔口腔粘膜上皮细胞可在体外进行培养 ,在一定时间内保持增殖能力。这不仅为组织工程化口腔粘膜构建奠定了基础 ,而且为口腔粘膜的体外研究提供了实验模型     

人大肠癌细胞体外分离与培养

目的:探讨人大肠癌细胞体外分离培养的方法.方法:采用组织块法和Ⅳ胶原酶消化法体外培养人大肠癌细胞,HE染色、免疫细胞化学判断细胞的组织来源、TEM观察细胞形态,MTT法绘制细胞生长曲线.结果:采用组织块法细胞培养成功,HE染色显示核大蓝染, 细胞角蛋白鉴定胞浆黄染,细胞角蛋白阳性;透射电镜下,见细胞内丰富的线粒体、表面微绒毛、细胞间连接复合体结构;细胞生长曲线为"S".结论:组织块法原代培养细胞成功率高,需注意在取材、分离操作过程中保持无菌,所培养的细胞进行初步鉴定证明为大肠癌细胞.     

小鼠睾丸支持细胞的体外分离、培养与鉴定

目的：用改良方法对小鼠睾丸支持细胞进行体外快速分离与培养,以期建立一种简单快捷纯度高的支持细胞原代培养方法。方法：用0．25％胰蛋白酶和0．1％胶原酶,对睾丸组织进行次第消化,用福尔根染色法和免疫细胞化学方法鉴定睾丸支持细胞。结果：细胞培养72h存活率超过90％,纯度在85％以上。福尔根染色和免疫细胞化学染色结果示,分离细胞有卫星核小体存在,且细胞中FasL阳性表达,表明分离培养的细胞确为睾丸支持细胞。结论：睾丸组织经曲细精管分离后进行胶原酶和胰蛋白酶次第消化,可快速高效分离睾丸支持细胞。