变性高效液相色谱检测恶性肿瘤患者血浆DNA p53突变

目的 探讨扩增恶性肿瘤患者血浆DNA的可行性，建立一种快速检测血浆DNA突变的新方法。方法 选取恶性肿瘤患者共40例，采用Qiagen column柱抽提法提取血浆DNA，采用聚合酶链反应（PCR）扩增p53基因外显子7，用变性高效液相色谱法（DHPLC）对产物进行突变分析，并与测序结果比较。结果 40例恶性肿瘤患者血浆提取的DNA均能扩增出目的片断，DHPLC检测到有8例突变，随机送检的8份DHPLC未检测到突变者测序也未发现突变存在，与DNA直接测序结果相一致。结论 对恶性肿瘤患者血浆DNA行PCR扩增是可行的，DHPLC可作为一种快速，简便和经济的突变筛选方法，运用此方法检测血浆中p53等基因的突变有望应用于恶性肿瘤高危人群的预警和早期诊断以及作为预后参考。     

变性高效液相色谱技术检测qnr阳性肺炎克雷伯菌染色体突变位点

目的 检测质粒介导喹诺酮耐药基因(quinolone resistance,qnr)阳性肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)染色体旋转酶GyrA和拓扑异构酶ParC的突变位点.方法 应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)对有异常峰型的菌株进行DNA测序.结果 qnr阳性Kpn GyrA亚基...     

应用部分变性高效液相色谱技术检测胃癌组织、血清中基因突变的研究

目的:探讨部分变性高效液相色谱(DHPLC)在检测胃癌组织、血浆中基因突变中的应用.方法:应用DHPLC对39例胃癌组织及血清中p53基因突变进行检测,并测序验证.结果:本研究中p53基因的突变率为21%(8/39);其中肠型胃癌突变率40%(6/15)明显高于弥漫型胃癌8.33%(2/24)(P＜0.01);发现既往未见报道突变3例.血清标本中50%(4/8)可扩增出目的片段,但均未检出突变.结论:DHPLC是一项较好的检测胃癌组织中基因突变的筛查方法,在血清中的应用仍需探讨.     

变性高效液相色谱检测IRS-2基因3′-非翻译区单核苷酸多态性

目的：探讨变性高效液相色谱(DHPLC)在胰岛素受体底物-2(IRS-2)基因3′-非翻译区单核苷酸多态性(SNP)检测中的应用。方法：采用聚合酶链式反应(PCR)，DHPLC，单链构象多态性(SSCP)和DNA序列分析对30例正常对照和30例2型糖尿病患者IRS-2基因3′-非翻译区进行SNP和突变检测。结果：PCR-DHPLC检测出4例PCR-SSCP分析未能发现的2型糖尿病患者IRS-2基因3′-非翻译区的SNP，并得到测序验证。结论：DHPLC是一种快速、自动化程度高、操作简单、检测片段长、准确率高的SNP检测技术。它为进一步研究IRS-2基因3′-非翻译区的变异与2型糖尿病的关系奠定了基础。     

应用悬浮点阵和变性高效液相色谱技术检测β地中海贫血基因的比较

目的比较悬浮点阵技术(suspension array,SA)及变性高效液相色谱技术(DHPLC)在β-地中海贫血及基因分型诊断中的应用。方法通过分析100例正常人标本和69例经PCR反向斑点杂交技术(PCR-RDB)确认的β-地中海贫血患者外周血DNA标本,经PCR扩增并分别运用SA及DHPLC两种方法对其进行基因分型诊断。结果100例正常人标本结果为阴性,69例β-地中海贫血标本经两种方法检测其缺失和突变的基因型别完全一致,其中单位点基因突变65例,多位点基因突变4例。结论两种检测技术在β-地中海贫血基因分型诊断中准确性完全一致,具有快速、高效、检测平台的通用性的共同点;但悬浮点阵技术在临床标本检测具有更高的优势,变性高效液相色谱技术则可检测未知突变,在基础研究方面具有优势。     

变性高效液相色谱法在肾上腺脑白质营养不良分子诊断中的应用

目的：目的对4个肾上腺脑白质营养不良（ALD）家系进行基因突变分析。方法：应用变性高效液相色谱（DHPLC）技术检测了4个ALD家系的A／3091基因，并通过核苷酸序列分析确证突变位点。结果：所有患儿的母亲，患儿2、患儿3、患儿4弟弟及其表弟与正常对照的PCR产物混合物。均出现DHPLC洗脱双峰。而正常对照均为单峰，提示相应基因片段存在突变位点。上述出现异源双峰的PCR产物经直接测序．证实了相关突变的存在：患儿1母亲为fs Glu 471突变携带者；患儿2存在S108X突变；患儿3存在R617C突变；患儿4弟弟和表弟均存在A141T突变。结论：DHPLC能有效地检测ABCD1基因突变。并为进—步地基因突变筛查与产前诊断提供依据。     

变性高效液相色谱法在FALS突变位点检测中的应用

目的检测一个肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)家系的铜、锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn su-peroxide dismutase,SOD1)基因的突变位点,同时观察变性高效液相色谱法(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)的实用价值.方法对PCR-SSCP检测阴性的外显子,应用DHPLC法及DNA直接测序技术,再次进行SOD1基因的突变位点检测.结果经DHPLC检测,家系成员Ⅲ1SOD1基因的第4外显子有突变峰,DNA直接测序证实存在杂合子,发生了GAA→GGA错义突变,使编码的氨基酸由谷氨酸变为甘氨酸.结论DHPLC技术与PCR-SSCP相比有更高的敏感性,可作为大样本筛查突变位点的一种便捷可靠手段.     

变性高效液相色谱法筛选鼻咽癌相关基因单核苷酸多态性

目的 利用变性高效液相色谱法（DHPLC）结合测序筛选和鉴定鼻咽癌基因的单核苷酸多肽性（SNPs)。方法 PCR扩增30例鼻咽癌患者和28例正常对照者6p21.3区域基因PPP1R11，PP1R10，FLOT1，KIAA0170的4个外显子与1个内含子片断，采用DHPLC技术对扩增片断进行基因变异检测，将不同的类型PCR片断进行全序列测定并与参考序列对照分析。结果 在5个片断中初步鉴定出4个未见报道的新SNP位点，验证了4个已知的SNPs位点和基因型。结论 DHPLC预测结合全序列测序是一种高效，经济，简便，可靠的SNP筛选方法。     

高效液相色谱在中草药研究中的应用

绪论中草药化学研究主要是利用化学方法研究中草药的化学组成，寻找具有药用价值的活性化合物和其它具有开发价值的新化合物。经典的分离方法大多基于各种化合物溶解度的不同而采用不同溶剂由低极性到高极性分步提取，用溶剂结晶法纯化所提制得到的物质。由于中草药中化合...     

高效液相色谱在中药研究中的应用进展

中药制剂多为复方制剂，且所含成分复杂，给分析研究带来很大困难。高效液相色谱法是6O年代末发展起来的一项新技术，具有分离效能高，准确性好，分析速度快等优点、随着HPLC技术的不断发展，在中药分析研究方面的应用也日益广泛，并为中药分析研究工作提供了条件。近些年，HPLC在中药研究中的应用综合有以下几个方面。1HPLC在中药制剂分析研究中的应用中药制剂的质量，直接影响到药物的疗效，密切关系着病人的安危，应确保中药制剂、中成药的质量。但由于中药成分复杂，特别是复方制剂，除被测定的活性成分外，还含有其他许多成分，…     

高效液相色谱法测定甲硝唑的血药浓度

用高效液相色谱法,采用乙腈：水（１８：８２）为流动相,呋喃妥因为内标,检测波长为３４０ｎｍ,建立了甲硝唑血药浓度测定方法,并做了线性关系、精密度和回收率试验。应用本法测定了家兔口服甲硝唑的血药浓度,并得到了平均药—时曲线。     

应用DHPLC筛查黑白头发mtDNA控制区的异质性研究

目的 探讨黑头发和白头发线粒体DNA(mtDNA)控制区的异质性.方法 将人头发mtDNA控制区扩增成5个部分互相重叠的片段,利用已建立的DHPLC技术分析中国汉族正常人与Alzheimer病同个体黑头发和白头发mtDNA控制区的异质性.结果 50例中国汉族正常人同个体中黑头发和白头发mtDNA控制区的异质性为10...     

高效液相色谱法测定科安乳膏中6-姜辣素含量

目的 采用高效液相色谱法建立科安乳膏中6-姜辣素含量的测定方法。方法 色谱柱为C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水（70〖DK〗∶30),检测波长为280 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃,进样量为20 μL。结果 6-姜辣素浓度在1.02～20.4 μg/mL范围内与峰面积的线性关系良好(r＝0.999 9);平均加样回收率为98.83%,RSD为1.08%(n＝6)。结论 所建立的高效液相色谱法简便、准确、可靠,可用于科安乳膏的含量测定。     

高效液相色谱法测定主产区天麻中天麻素含量

目的测定全国5个主要产地天麻中天麻素含量,比较不同产地天麻质量。方法采用高效液相色谱法测定天麻中天麻素含量,采用Wondasil C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),检测波长220nm,柱温25℃,流动相:乙腈-0.05%硫酸水溶液(3∶97),流速0.6mL/min。结果天麻素在0.20~3.20μg内呈良好的线性关系,平均回收率为100.87%,RSD=2.89%(n=5)。结论 5个主要产地天麻中天麻素含量有所差异。     

遗传性非息肉病性结直肠癌患者的临床特点及hMSH2与hMLH1种系突变的筛查

目的　分析我国遗传性非息肉性结直肠癌 (HNPCC)患者的临床特点 ,报告hMSH2和hMLH1基因突变筛查结果。方法　共收集了 2 8个家系 ,其中 15个家系符合阿姆斯特丹Ⅰ标准 ,13个家系符合日本临床诊断标准。记录的数据包括患者性别 ,结直肠癌发生的部位 ,诊断年龄 ,是否具有同时和 /或异时结直肠癌及结肠外癌 ,肿瘤的组织病理特点等。通过PCR及变性高效液相色谱分析(DHPLC)筛查hMSH2和hMLH1基因的突变 ,然后对DHPLC图形异常的样本进行测序。结果　 12 6例患者共诊断 170例次恶性肿瘤 (2 3例患有多原发癌 )。 98例 (77 8% )的患者患有结直肠癌 ,且发病年龄早 (平均 4 5 9岁 ) ,右侧癌多见。共在 12个家系中发现 8种hMSH2或hMLH1基因序列改变 ,其中hMSH2基因的第 3个外显子的无义突变即G2 0 4X是发现的首例我国蒙古族家系错配修复 (MMR)基因突变。结论　HNPCC患者是恶性肿瘤 (尤其是结直肠癌 )的高发人群。DHPLC是一种非常有效的筛选hMSH2和hMLH1基因突变的方法。在我国hMLH1基因尤其是其前九个外显子的突变较hMSH2基因的突变更常见。     

用高效液相色谱电化学检测器测定大小鼠脑内单胺类物质的研究

应用反相高效液相色谱法和电化学检测器对单胺类物质如去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺及酸性代谢产物3,4二羟基苯乙酸、5-羟吲哚醋酸和高香草酸的色谱条件及样品的制备进行了研究.结果表明:降低流动相的pH及甲醇含量或增加离子对B_8的含量可使样品的保留时间延长,而增加二正丁胺的含量可缩短保留时间。当pH=3.7,甲醇10％,二正丁胺1.3mmol,离子对B_81.2 mmol时,分离效果最好,能在25 min内将七种物质完全基线分离.在样品的制备方面,用高氯酸沉淀蛋白提取单胺类物质,45,000g×20 min一次离心取上清液20μl直接进样,所含杂质少且不干扰单胺类物质的测定.本实验方法简单,快速、灵敏,比较实用.     

高效液相色谱-蒸发光散射法检测芪白平肺胶囊中3种人参皂苷含量

目的采用高效液相色谱仪-蒸发光散射检测器(high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HPLC-ELSD)建立芪白平肺胶囊中人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量测定方法。方法采用色谱柱为Hypersil ODS XB-C8柱(4.6mm×250mm,5μm)和Hypersil ODS XB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈为流动相A、以水为流动相B进行梯度洗脱;洗脱程序(0~40min,A 19%;40~55min,A 19%~40%),流速为1.2ml/min,柱温为30℃。ELSD参数优化:漂移管温度分别设为50、70、90、110℃,载气流量分别为1.0、1.2、1.4、1.6L/min。结果通过对比研究,最终采用Hypersil ODS XB-C8柱作为分析柱,漂移管温度为90℃,载气流量为1.2L/min时,3种人参皂苷的含量检测结果最佳。人参皂苷Rg1、Re和Rb1的加样回收率分别为98.3%、99.1%、101.8%,RSD分别为0.67%、1.03%、1.22%。结论所选择的色谱柱和优化的ELSD参数可准确测定芪白平肺胶囊中3种人参皂苷的含量,且重现性好。     

高效液相色谱法测定通塞脉片中黄芪甲苷的含量

目的　建立通塞脉片中黄芪甲苷含量的测定方法。方法　采用HPLC法 ,Lichrospher5 -C18( 2 5 0mm× 4.6mm)色谱柱 ,流动相为甲醇 :水 ( 76∶2 4) ,流速为 0 .8mL/min ,柱温为 30℃ ,ELSD检测器检测 ,ELSD温度 90℃ ,气体流量 1.5 0SLPM。结果　平均加样回收率为 96 .87%,RSD为 1.71%。结论　方法准确、可靠 ,可用于通塞脉片的质量控制。     

凝胶过滤高效液相色谱法测定鼠肝中金属硫蛋白

使用Superdex 75高效凝胶过滤柱的高效液相色谱法分离并测定了大鼠肝中的金属硫蛋白。在测定前,先将肝匀浆上清液进行镉饱和以及加热的简单前处理。大鼠肝中的金属硫蛋白在短时间内被彻底分离,并在250nm的紫外吸收下直接定量测定。本方法简便易行、精密度好(CV=1.4%,n=10)、回收率高(90%以上)。金属硫蛋白的检测限为0.265μg。本方法与镉饱和法作对照,显示有良好的相关关系(r=0.99)。     

T细胞受体基因与疾病研究概况及进展

T细胞受体(TCR)基因与疾病的发生、诊断及治疗密切相关,弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征、IgA肾病中TCR有其不同基因型的表达特点。在弥漫性大B细胞淋巴瘤中,TCRVβ13和TCRVβ15亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高;在慢性非细菌性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征中,外周血TCRVβ20基因优势克隆;在IgA肾病中,TCRCα-575A/G及TCRCα-560C/T基因多态性与疾病的发生相关。现就TCR基因在肿瘤治疗上的研究现状以及通过TCR基因修饰的T细胞在治疗恶性肿瘤等疾病方面的巨大发展潜能予以综述。