超广谱β-内酰胺酶基因分型的初步研究

按质粒所携带编码基因同源性的不同 ,将超广谱 β 内酰胺酶 (Ｅｘｔｅｎｄｅｄｓｐｅｃ ｔｒｕｍ β ｌａｃｔａｍａｓｅｓ,ＥＳＢＬｓ)分为 4类 ,即ＴＥＭ型、ＳＨＶ型、ＴＥＭ ＳＨＶ混合型和非ＴＥＭ 非ＳＨＶ型 (包括ＰＥＲ、ＴＯＨＯ、ＣＴＸ Ｍ、ＯＸＡ型等 )。本文报告绍兴地区产ＥＳＢＬｓ细菌基因分型的初步结果。临床标本分离、并经纸片扩散法确证为产ＥＳＢＬｓ的细菌 42株 (其中大肠埃希菌 2 6株 ,肺炎克雷伯菌 16株 )。用ＰＣＲ进行酶基因分型。ＰＣＲ扩增引物 ,根据ＴＥＭ 1和ＳＨＶ 1编码基因序列设计 ,ＴＥＭ引物序列分别为…     

浙江省产超广谱β-内酰胺酶菌株SHV型β-内酰胺酶分布

随着三代头孢菌素如头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松和单环酰胺类抗生素在临床上的广泛使用 ,超广谱 β 内酰胺酶 (ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｓｐｅｃｔｒｕｍ β ｌａｃｔａｍａｓｅｓ ,ＥＳＢＬｓ)在革兰阴性杆菌中产生率不断增加 ,ＥＳＢＬｓ种类也不断增加 ,至 2 0 0 0年 6月 ,已发现近 10 0种ＥＳＢＬｓ亚型〔1〕,其中ＴＥＭ型有 6 7种 ,ＳＨＶ型有 2 4种 ,非ＴＥＭ非ＳＨＶ型有 2 0多种。ＴＥＭ和ＳＨＶ型分别由广谱酶ＴＥＭ 1、ＴＥＭ 2和ＳＨＶ 1编码基因中 1～ 5个位点发生点突变而来。各国各地区流行的ＥＳＢＬｓ亚型各不相同〔2〕。我们对…     

临床重要的β-内酰胺酶及其研究进展

β 内酰胺酶是细菌 ,尤其是革兰阴性菌对 β 内酰胺类抗生素耐药的重要介质。随着抗菌药物的广泛开发及应用 ,一些具有重要临床意义的新 β 内酰胺酶不断被发现 ,超广谱酶就是其中之一 ,熟悉或了解其特点 ,对指导治疗相应耐药菌株临床感染、研究耐药菌株感染的流行病学特征及规律、探讨分子耐药机制及研发新抗菌药物都有重要意义。1　超广谱 β 内酰胺酶 (Extended Spectrum β Lactam ses,ESBL)　是革兰阴性菌耐药的重要介质 ,以肠杆菌科中的克雷伯菌属及大肠埃希菌产生最为多见 ,也见于变形杆菌属、普罗菲登菌属、肠杆菌属细菌。该类酶…     

产质粒介导AmpC酶和ESBLs细菌的耐药性及β-内酰胺酶基因型研究

目的　了解我院同时产质粒介导AmpC酶和超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌的耐药性及其 β 内酰胺酶的基因型特征。方法　 110株临床分离无重复肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌耐药株 ,采用酶提取物三维实验检测AmpC酶 ,美国临床实验室标准委员会 (NCCLS)表型筛选和确认实验检测ESBLs ;琼脂二倍稀释法测定抗生素对同时产AmpC酶和ESBLs菌株的最低抑菌浓度 (MICs) ;等电聚焦实验测定 β 内酰胺酶等电点 (pIs) ;质粒接合实验定位耐药基因 ;PCR通用引物扩增AmpC酶与ESBLs基因及其序列测定以确定其基因亚型。结果　同时产AmpC酶和ESBLs菌株在肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌中的检出率分别为 7.7% (5 6 5 )、8.9% (4 4 5 )。该类产酶菌株产 2～ 3种pI5 .4～ 9.0 β 内酰胺酶 ,对第三代头孢菌素、氨曲南、头孢美唑和含酶抑制剂复合制剂的敏感性极低 ,但对亚胺培南均敏感。 9株质粒中均检出AmpC酶基因DHA 1亚型 ,其中 1株同时检出ACT 1亚型 ;ESBLs基因亚型分别为CTX M 14、CTX M 3、CTX M 9,各有 4、3、2株 ;有 3株还携带广谱酶TEM 1基因。结论　我院存在同时产质粒介导DHA 1、ACT 1型AmpC酶和CTX M型ESBLs肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌流行株 ,药敏检测结果显示对大多数新型广谱 β 内酰胺类抗生     

超广谱β-内酰胺酶TEM和SHV型全长基因PCR直接测序

超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)TEM和SHV型是最常见的基因型 ,并且呈全球性分布。TEM和SHV的衍生型不断出现。TEM和SHV型全长基因测序对亚型的区别、新亚型的确认和各衍生型的基因进化树分析以及分子流行病学研究具有重要意义。本文介绍TEM和SHV型全长基因PCR直接测序方法。产 β 内酰胺酶菌为 :TEM 1(Eco .j5 3R1)、TEM 2 (Eco .j5 3R4 )、TEM 6 (Eco .j5 3PMG2 2 6 )、TEM 2 6 (Eco .j5 3PMG2 2 5 )、HSV 2 (Eco.j5 3PMG2 2 9)、HSV 18(Kpn .ATCC70 0 6 0 3) ,分别由苏州大学儿童医院和浙江大学附属第一医院提供…     

产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的研究

目的 :了解四川大学华西医院产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌中CTX M基因的检出情况及产CTX M酶大肠埃希菌的耐药性和同源性。方法 :对 2 0 0 1年 1 0月～ 2 0 0 2年 5月我院临床分离的 30株产ESBLs大肠埃希菌采用琼脂平皿对倍稀释法和PCR方法进行耐药表型和 β 内酰胺酶基因型分析 ;对扩增的CTX M基因进行DNA序列分析 ;用脉冲场凝胶电泳 (PFGE)分型技术了解产CTX M酶大肠埃希菌同源性。结果 :1 3株菌携带CTX M基因 ,CTX M酶亚型为CTX M 3和CTX M 1 4。产CTX M酶菌株对第三代头孢菌素耐药率高 ,对头孢噻肟…     

肠杆菌科产CTX-M酶细菌耐药性与β-内酰胺酶基因型的关系

目的 :了解我院肠杆菌科产CTX M酶细菌耐药性与 β 内酰胺酶基因型的关系。方法 :对 2 0 0 1年 1 0月～ 2 0 0 2年 5月我院临床分离的 4 0株产ESBLs肠杆菌科细菌琼脂对倍稀释法测定 1 0种抗菌药物的最低抑菌浓度 :用针对SHV、TEM、CTX N基因的特异性引物进行PCR扩增确定 β 内酰胺酶基因型 :对扩增的CTX M基因进行DNA序列分析。结果 :产CTX M酶菌中有 93～ 75 %产 2种或 2种以上 β 内酰胺酶。产CTX M酶菌株多重耐药率为 1 0 0 % ,对头孢噻肟、头孢吡肟、头孢他啶、头孢哌酮 /舒巴坦的耐药率分别为 81 .2 5 %、75 %、31 .2 5…     

新四代头孢菌素β-内酰胺酶稳定性的研究

目的　研究第四代注射用头孢菌素头孢匹罗对 8株包括质粒介导与染色体介导产酶菌株 β -内酰胺酶的稳定性 ,并与其它 4种头孢菌素进行比较 .方法　采用超声波破碎法提取细菌 β -内酰胺酶 ,紫外分光光度法测定酶对抗生素的水解率 .结果　头孢匹罗对各产酶菌株 β -内酰胺酶的相对水解率 <5 % ,尤其对质粒介导的超广谱 β -内酰胺酶TEM - 3、SHV - 4及染色体介导Ⅰ型 β-内酰胺酶的稳定性明显优于头孢噻肟及其他头孢菌素 .结论　头孢匹罗对 β -内酰胺酶具有高度稳定性     

阿莫西林与舒巴坦联合的抗菌作用及对β-人酰胺酶稳定性的研究

目的 :评价阿莫西林钠 /舒巴坦钠 (AMOX/SBT)的体内、外抗菌活性及对 β 内酰胺酶的稳定性 ,并与其他抗菌药比较。采用琼脂二倍稀释法对临床分离鉴定的产酶菌株 (2 0 0株 )及标准产酶株 (1 6株 )进行体外抑菌实验 ;体内抗菌实验按Bliss法用NDST软件计算半数有效量ED50 值及 95 %可信限 ;对标准产 β 内酰胺酶菌株用超声波碎法提取粗酶 ,比较各药的相对水解率。结果不同配比AMOX/SBT对 2 0 0株临床分离产 β -内酰胺酶菌株的抗菌活性较AMOX单用强 2～ 64倍 ,以 2∶1为最佳。对 1 6株国际标准产酶株的体外抗菌试验显示 :AMOX的MI…     

嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β-内酰胺酶的特性

嗜麦芽寡养单胞菌 (Stenotroph omonasmaltophilia)是一种条件致病菌 ,对临床常用抗菌药物耐药。产金属 β 内酰胺酶 (MBL)使其对卡巴培南类及头孢菌素类耐药。我们采用纸片协同法筛选出产MBL的可疑菌株 ,以等电聚焦确定其等电点 ,并对MBL基因进行克隆、测序 ,从生化及分子水平了解嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β 内酰胺酶的特性。收集 1998年 1月～ 2 0 0 2年 10月重庆医科大学第一附属医院从院内感染病人标本分离的嗜麦芽寡养单胞菌共 30株 ,用E试验法筛选产金属 β 内酰胺酶菌株 ,以等电聚焦和酶抑制剂对酶等电点的影响实验确定MBL的…     

头孢哌酮钠/舒巴坦钠的药理、毒理与临床研究概述

头孢哌酮钠 /舒巴坦钠是头孢哌酮钠 (ｃｅｆｏｐｅｒａａ ｚｏｎｅ ,ＣＰＺ)与舒巴坦钠 (ｓｕｌｂａｃｔａｍ ,ＳＢＴ)以 1∶1混合制成的供注用 ,最初由美国辉瑞公司开发 ,商品名为舒普深 (ｓｕｌｐｅｒａｚｏｎｅ)。ＳＢＴ对金葡菌和多数革兰阴性菌产生的 β 内酰胺酶有很强的、不可逆的抑制的作用。ＳＢＴ仅对淋球菌、脑膜炎球菌及不动杆菌有较强作用外 ,对其他的细菌作用极差。ＳＢＴ与青霉素类及头孢菌素类合用 ,通过ＳＢＴ对 β 内酰胺酶的抑制可出现明显的协同抗菌作用 ,并拓宽抗菌谱。本文综合介绍头孢哌酮钠 /舒巴坦钠的临床前药理…     

泛耐药肺炎克雷伯菌株的医院内流行特性的研究

目的 了解华山医院泛耐药肺炎克雷伯菌株及其流行的特点.方法 收集2006年8月-2009年12月对CLSI推荐常规检测药物均耐药的肺炎克雷们菌临床分离株,共57株.所有菌株都进行药物敏感试验、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)初筛及表型确证试验、改良Hodge试验、等电聚焦电泳,聚合酶链反应及其产物测序、接合试验、肠杆菌基因间重复共有序列PCR(ERIC-PCR)和多位点序列分型(MLST).结果 所有菌株都携带blaKPC-2、blaCTX-M-14、blaSHV12和blaTEM-1及qnrB和aac(6')-I b-cr基因.57株细菌中ST423型5株,MIST ST11型52株.ST423型散发,而ST11型呈医院内流行.57株细菌都对替加环素耐药,对多黏菌素、米诺环素和多西环素部分敏感.结论 本次泛耐药肺炎克雷们流行主要为ST11型菌株;不同的肺炎克雷伯菌株,播散能力不同;检出泛耐药肺炎克雷伯菌时应增加检测药物的种类.     

碳青霉烯类药物耐药的弗劳地枸橼酸杆菌耐药机制研究

目的 对耐碳青霉烯类弗劳地枸橼酸杆菌进行同源性分析及多种耐药基因的检测.方法 用琼脂稀释法测定其最低抑菌浓度( MIC)值,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析耐碳青霉烯类弗劳地枸橼酸杆菌的同源性,以聚合酶链反应(PCR)检测β-内酰胺酶、膜孔蛋白的缺失等多种耐药基因.结果 PFGE显示1、2、4、5号菌株均有19个条带,具有同源性;PCR试验检测结果1、4号菌携带blaCTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs);2、3、5号菌携带携带blaDHA,3号携带bla ACT/MIR型AmpC 基因,1、2、4、5号菌携带bla KPC-2碳青霉烯酶基因;2号、4号菌株缺失膜孔蛋白基因ompF,3号菌株同时缺失ompC和ompF;其中3号菌株的16S rRNA基因定量确定AmpC基因的表达为阴性菌的106.7倍.结论 宁波市第一医院碳青霉烯类耐药的弗劳地枸橼酸盐杆菌具有同源性,其耐药机制由KPC酶、AmpC酶、ESBLs、膜孔蛋白缺失等共同作用所形成,多数耐药基因定位在质粒上易引起耐药性的播散,临床应引起高度重视.     

泛耐药肺炎克雷伯菌株的医院内流行特性的研究

目的 了解华山医院泛耐药肺炎克雷伯菌株及其流行的特点.方法 收集2006年8月-2009年12月对CLSI推荐常规检测药物均耐药的肺炎克雷们菌临床分离株,共57株.所有菌株都进行药物敏感试验、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)初筛及表型确证试验、改良Hodge试验、等电聚焦电泳,聚合酶链反应及其产物测序、接合试验、肠杆菌基因间重复共有序列PCR(ERIC-PCR)和多位点序列分型(MLST).结果 所有菌株都携带blaKPC-2、blaCTX-M-14、blaSHV12和blaTEM-1及qnrB和aac(6')-I b-cr基因.57株细菌中ST423型5株,MIST ST11型52株.ST423型散发,而ST11型呈医院内流行.57株细菌都对替加环素耐药,对多黏菌素、米诺环素和多西环素部分敏感.结论 本次泛耐药肺炎克雷们流行主要为ST11型菌株;不同的肺炎克雷伯菌株,播散能力不同;检出泛耐药肺炎克雷伯菌时应增加检测药物的种类.     

ICU耐药黄杆菌携带β-内酰胺酶基因的研究

目的 :探讨ICU临床分离黄杆菌耐药株携带 β 内酰胺酶的类型及基因介导方式。方法 :研究对象为从ICU分离所得的三株黄杆菌临床耐药株。产 β 内酰胺酶情况采用纸片法定性检测 ;细菌质粒和染色体以市售试剂盒抽提 ;酶编码基因用PCR检测分析。结果 :3株菌均产 β 内酰胺酶 ,PCR分析在其染色体和质粒上共发现 6种酶基因。其中菌株 0 2 2 0 3存在染色体和质粒共同介导的PSE 1 ,0 2 2 4 4存在质粒介导的TEM、AmpC、PSE 1 ,而 0 2 2 5 8除由质粒介导的SHV、OXA 1、CTX M 1外 ,尚由染色体介导编码SHV、TEM。结论 :ICU分…     

头孢他啶舒巴坦钠合用的抗菌增效作用

目的 :确定注射用头孢他啶舒巴坦钠复方的有效性。方法 :用琼脂二倍稀释法测定了CAZ与舒巴坦钠(SBT)分别以 1∶1、2∶1、4∶1联用的体外抗菌作用(MIC及MBC) ,采用小鼠实验性细菌感染全身败血症模型的观察体内疗效 ,采用分光光度法测定 β 内酰胺酶在体外对CAZ的水解作用。结果 :对临床分离42 5株致病菌 (其中需氧菌 3 99株 ,厌氧菌 2 8株 ;产酶菌 2 95株 ,非产酶菌 1 3 0株 )的体外抗菌活性结果显示 ,对革兰阴性菌产 β 内酰胺酶的大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单孢菌、不动杆菌及阴沟杆菌等 ,酶抑制剂 (SBT)加入CAZ能明显提高C…     

ISEcp1-like插入序列与CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的水平播散

20世纪90年代后，中国多个地区不断发现产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（CTX-M-ESBL）肠杆菌科细菌的流行。近年，在4组CTX-M-ESBL（CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9和CTX-M-25）基因上游均发现存在ISEcp1-1ike插入序列，其对CTX-M-19、CTX-M-2以及氨基糖苷类耐药基因rmtC的转移能力亦得到证实。目前CTX-M-ESBL在我国临床菌株中的传播与ISEcp1-like插入序列的关系尚不清楚。本文旨在探讨ISEcp1-like序列与CTX-M-ESBL在肺炎克雷伯菌临床株中传播的关系进行研究。     

舒氨西林的酶稳定性试验研究

舒氨西林 (Unasynvial,sultamicillin ,SBTPC ,U1 )为舒巴坦钠与氨苄青霉素以 1∶2比例混合而成的制剂。本试验应用国产 (哈尔滨制药厂 )舒氨西林 (U1)对标准产酶耐药菌株 ,即质粒介导的 β 内酰胺酶(TEM 1 ,OXA 2 ,SHV 1 ) ,染色体介导的 β 内酰胺酶(K 1 ,D31 ) (其中PSE 2为绿脓杆菌 ,K 1为肺炎杆菌 ,其余为大肠杆菌 ) ;及临床分离的产酶耐药菌株(产酶大肠杆菌、产酶伤寒杆菌 )的酶稳定性做了测定。并与进口同种药品 (U2 )及其他 β 内酰胺类抗生素即氨苄青霉素 (ampicillin ,AMPC ) ,舒巴坦钠(CP4 5 899) ,伊米配能 (…     

微生物耐药的分子检测现状

因临床工作和畜牧业过度使用抗菌素、抗生素 ,耐药微生物逐年增加。使得一些临床常见的感染性疾病成为难治性疾病 ,甚至一些耐药菌在医院内或局部区域内造成流行。2 0世纪 80年代以来 ,国外学者首先推出微生物耐药快速分子检测新技术 ,为患者能在第一时间明确诊断、合理治疗和疫情控制提供了有效手段。以下就微生物耐药分子检测的现状扼要简述。1.产超广谱 β-内酰胺酶菌产超广谱 β -内酰胺酶菌主要表现为对青霉素 ,头孢菌素Ｉ至ＩＩＩ类抗菌素的广泛耐药。常见为肺炎克雷伯氏菌和大肠埃希氏菌以及变形杆菌。由于头孢菌素已占医疗单位处方…     

肠杆菌科细菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的研究

目的 调查我院院内肠杆菌科细菌中产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）菌株的发生率以及ESBL的表型和基因型。方法 对1999年2月-5月临床分离的162株肠杆菌科细菌,采用美国临床实验室标准化委员会规定的ESBL表型筛选和确证试验确定ESBL的发生率;等电聚集电泳,抑制试验,接合试验确定ESBL菌株中酶的表型;质粒的提取,脉冲场凝胶电泳（PFGE）、TEM-、SHV-、CTX-M-3特异引物的PCR和测序确定ESBL的基因型。结果 11.4%（5/44）的大肠杆菌、39.5%(17/43)的肺炎克雷伯菌、6.0%（3/50）的阴沟肠杆菌和8.0%(2/25)的弗劳地枸橼酸菌产ESBL。对于这27株菌,头孢噻肟的MIC明显高于头孢他啶,除1株阴沟肠杆菌外,其它26株菌对亚胺培南敏感,大多数菌株产2-6种酶,70.3%(19/27)的菌株产生CTX-M-3型的ESBL（等电点为8.6)。这种酶能被克拉维酸抑制,其编码的耐药性能够转移至敏感株,并且对头孢噻肟的耐药高于头孢他啶,对小部分菌株用PF-GE分型发现存在多个克隆。结论 产ESBL的肠杆菌科在院内较普遍;CTX-M-3型的ESBL最为常见。