胆道梗阻对肝线粒体功能损伤机制的初步研究

目的：初步探讨胆道梗阻对肝线粒体功能损伤的机制。方法：复制犬胆道梗阻模型,观察梗阻的不同时段肝线粒体呼吸功能、钙含量、钙摄取率、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）含量的变化。结果：胆道梗阻2周、3周、4周及5周各组（Ⅱ－V组）分别与假手术组（Ⅰ组）比较：①肝线粒体呼吸控制率、钙摄取率及SOD含量均明显下降（Ⅱ组P＜0.05,其余组P＜0．01）②线粒体钙含量均明显升高（Ⅱ组P＜0．05,其余组p＜0．01）③线粒体MDA含量明显升高（各组P＜0.01）。相关分析显示,线粒体钙含量、MDA含量与线粒体呼吸控制率变化之间均呈现显著的负相关（P＜0．01）。结论：胆道梗阻后肝线粒体呼吸功能受到明显损伤,钙超载及脂质过氧化反应是造成线粒体外能损害的可能机制。     

对血清中谷一丙转氨酶临床意义的一些讨论(摘要)

目前谷—丙转氨酶释放入血机理还不十分准确,一般认为胞浆中的转氨酶能为组织液正常交换较易逸出,故肝细胞损伤时S—GPT就明显升高,但有的学者认为:酶的释放不一定是肝细胞损伤,而是肝细胞膜改变了通透性是主要原因。亦有学者认为:当肝细胞受损时正常为线粒体结合的谷一丙酶转移到胞浆更易逸出,与细胞膜通透性改变关系不大。动物试验及临床观察,当胆道梗阻S—GPT也常有升高趋势,这就提示酶浓度变异与排法机能相关。血中谷一丙酶的清除与蛋白代谢,灭活作用,与尿和胆汁排泄速度有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过PI3K/AKT信号通路抑制胆道梗阻大鼠肝细胞凋亡改善肝功能

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对胆道梗阻大鼠肝功能影响,初步探讨其作用机制。方法 SPF级SD大鼠45只,随机分为胆道梗阻模型组(BO组)、EGCG干预组(EGCG组)及假手术组(Sham组),采用胆道双重结扎法建立胆道梗阻大鼠动物模型,用ELIESA法检测肝功能损伤标志物ALT、ASL、TB、DB表达,苏木精-伊红(HE)染色、免疫组化染色和Western blot检测肝脏Bcl-2、bax表达;Western blot检测蛋白表达情况。结果与Sham组比较,大鼠胆道结扎后,肝功能损伤明显,BO组血清ALT、ASL、TB、DB表达明显升高(P0.05),HE染色提示BO组大鼠肝细胞结构迷糊不清,广泛点状及局灶性坏死,大量炎性细胞浸润,可见肝索结构,血窦减少,部分颗粒样变性,整体呈肝淤血趋势,同时上调bax表达,下调Bcl-2表达(P0.05)。经EGCG干预后,大鼠功能损伤明显得到改善,血清ALT、ASL、TB、DB表达明显降低(P0.05),HE染色可见肝细胞结构清晰,肝细胞排列较为规则,部分可见点状坏死,少量炎性细胞浸润现象,整体肝淤血情况较轻,此外我们发现EGCG上调Bcl-2表达,下调bax表达(P0.05),促进AKT、PI3K磷酸化(P0.05)。结论 EGCG可能显著改善胆道梗阻大鼠肝损伤及病理形态改变,其作用机制可能与其调控PI3K/AKT信号通路抑制肝细胞凋亡来实现的。     

胆道梗阻再通后肝线粒体呼吸功能恢复的实验研究

本文通过复制犬胆道梗阻再通模型，观察了不同梗阻时段的各再通时相肝细胞线粒体呼吸功能损害的恢复情况。结果表明，各组再通后，Ⅲ态氧耗，呼吸控制率及Ｐ／Ｏ值明显下降，在梗阻３周再通组再通后３０天，呼吸控制率可恢复到正常对照组的８８％，Ｐ／Ｏ值于再通后２０天，即可恢复到正常对照组的８９％，而梗阻４周再通组财通后３０天，呼吸控制率及Ｐ／Ｏ值均不能恢复到与正常对照组无显著性差异的水平；在梗阻５周再通组再通后的     

慈姑多糖通过TLR4/Myd88通路抑制炎症反应改善胆道梗阻大鼠肝损伤

目的观察慈姑多糖对胆道梗阻大鼠肝功能改善作用,初步探讨其作用机制,为临床开发新药治疗胆道梗阻提供理论依据。方法采用胆道结扎法建立胆道梗阻大鼠动物模型,模型建立成功后随即分为胆道梗阻模型组(BO组)、慈姑多糖干预组(WPP组),另建立假手术组(Sham组),WPP组于二次术后予以慈姑多糖,连续给药7 d,观察肝损伤标志物表达变化,苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏病理形态学变化,ELISA法检测各组大鼠血清炎性因子,Western blot及q PCR法检测TLR4/Myd88通路相关蛋白表达情况。结果与Sham组比较,BO组大鼠胆道结扎后发生显著的肝功能损伤及炎性反应,血清总ALT、ASL、TB、DB、TNF-α和IL-6升高,IL-10降低(P0.05),HE染色可见肝细胞结构模糊不清,胞浆疏松化变性,可见肝索结构,血窦减少,肝脏组织广泛灶性及点状坏死,大量炎性细胞浸润,部分细胞颗粒样变性。经慈姑多糖干预后,WPP组大鼠肝功能及病理形态得到明显改善,机体炎性反应得到抑制,与BO组比较,WPP组血清总ALT、ASL、TB、DB、TNF-α、IL-6降低,IL-10升高(P0.05),此外,与BO组比较,慈姑多糖显著下调TLR4、Myd88和NF-κB的表达(P0.05)。结论慈姑多糖可以显著改善胆道梗阻致肝功能损伤及病理形态学改变,其作用机制可能与其调控TLR4/Myd88通路抑制其炎性反应实现的。     

天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02细胞损伤的影响

目的:探讨天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02损伤的影响。方法:将人肝细胞株L02培养,加入不同浓度的乙醇,采用MTT比色法确定乙醇作用的浓度。用流式细胞仪测定细胞活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位的改变;采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析法检测细胞ATP含量。结果:乙醇(25 mL/L)作用36 h可损伤肝细胞,细胞内ROS的水平明显增加;而细胞线粒体膜电位及肝细胞中ATP的含量则显著降低(P0.01)。天麻素具有减轻细胞损伤的作用,并可降低损伤的肝细胞内ROS的含量,增加细胞线粒体膜电位和ATP的水平。结论:天麻素可抑制乙醇诱导的肝细胞损伤及脂质过氧化反应,改善线粒体功能,增加能量合成,发挥保护肝细胞的作用。     

低氧预适应对移植大鼠肝细胞线粒体超微结构的影响

目的 观察低氧预适应(HP)对移植大鼠肝细胞线粒体超微结构的影响. 方法 采用改良的自体肝移植模型模拟肝移植过程,将72只SD大鼠随机分为正常对照(NC)、自体移植(AT)和低氧预适应(HP)3个组,每组24只.HP为术前用8%氮氧混合气体处理90min,分别于术后1、6、24h处死大鼠取肝脏标本,透射电镜观察肝细胞及线粒体的形态学改变,并用图像分析系统定量评判线粒体超微结构的改变程度. 结果 透射电镜下见AT组线粒体肿胀明显,膜模糊不清,部分膜破裂,线粒体嵴疏松溶解,有空泡形成;而HP组线粒体结构基本正常,仅有轻度肿胀,线粒体排列整齐,膜基本完整,线粒体嵴密集,未见空泡形成;定量分析线粒体的面积、周长及直径均和AT组有显著性差异(P<0.05),HP组线粒体损伤程度较AT组有明显改善. 结论 线粒体超微结构的改变是移植后肝细胞损伤的早期变化,HP可改善这一变化以减轻肝细胞损伤.     

生川乌与不同比例生半夏配伍对大鼠肝细胞超微结构的影响

目的:观察生川乌与不同比例生半夏配伍对大鼠肝细胞超微结构的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、生川乌组、生川乌配生半夏组。电镜下观察肝细胞超微结构变化。结果:生川乌组肝细胞形态不规则,胞质溶解,粗面内质网明显减少,线粒体肿胀,溶酶体增多;生川乌配生半夏(1:0.25)组,肝细胞肿胀,核不规则,异染色质增多,胞质溶解减轻,粗面内质网较生川乌组增多,线粒体肿胀,溶酶体增多;生川乌配生半夏(1:0.5)组,肝细胞肿胀减轻,核异染色质较少、边集,粗面内质网增多,线粒体肿胀,次级溶酶体明显增多;生川乌配生半夏(1:1)组,肝细胞肿胀明显减轻,核接近正常,粗面内质网增多,线粒体肿胀减轻,糖原较少,溶酶体减少。结论:生川乌可明显损伤大鼠肝超微结构,与生半夏配伍后可减轻其损伤作用,配伍比例与损伤程度呈反比。     

内毒素血症时大鼠肝细胞线粒体损伤及其机制的研究

目的:观察急性感染性内毒素血症大鼠肝细胞线粒体呼吸链的损伤及其机制。方法:将体重在250-280g健康SD大鼠随机分为空白对照组、内毒素组。提取内毒素血症大鼠肝细胞线粒体,测定其超氧阴离子O₂生成量,同时测定线粒体呼吸链功能:复合体Ⅱ+Ⅲ的电子传递与质子转移定量关系(H⁺/2e^-)、ADP/O、呼吸控制率(RCR)。结果:内毒素血症大鼠肝细胞线粒体电子漏显著增加;大鼠肝细胞线粒体以琥珀酸为底物的态4和态3呼吸速率增加,ADP/O、RCR及复合体Ⅱ+Ⅲ的H⁺/2e^-显著降低。结论:在内毒素血症的发病机制中存在由于肝细胞线粒体内源性氧自由基生成增加对线粒体呼吸功能所造成的氧化损伤。     

医源性胆道损伤的治疗探讨

随着胆道外科手术的开展,以及近年来腹腔镜在胆道手术中广泛应用,医源性胆道损伤的发生率呈增长趋势,最常见的术式是胆囊切除术。国外回顾性资料表明,胆囊切除术并发胆道损伤的发生率为0.5％,LC的发生率为0.2％——3.4％[1-3]。胆道损伤后其并发症往往比较复杂,早期出现的胆漏,胆汁性腹膜炎是严重的并发症之一,病情险恶,死亡率高。晚期出现的胆道狭窄和梗阻在肝胆手术中治疗极为棘手,若处理不当可造成严重后果。故早期明确诊断和及时有效治疗显得极其重要。现将26例医源性胆道损伤的治疗总结如下。     

金属胆道支架在恶性胆道梗阻治疗中的临床应用

目的：探讨金属胆道支架置人结合肿瘤区域化疗在恶性胆道梗阻治疗中的应用价值。方法：46例不能根治切除的恶性胆管梗阻患者中，42例行经皮肝穿刺胆道引流（PTCD）后支架置放术，另4例行经腹胆道支架置放术。支架置放术后，36例采用皮下埋置化疗泵化疗药物注射，8例采用分次动脉插管化疗药物灌注。结果：经PTCD成功后支架置人成功率95．2％，经腹支架置人成功率100％。结论：金属胆道支架置人成功率高，手术损伤，支架通畅率高，结合肿瘤区域化疗，可进一步提高疗效。     

胆红素结石形成过程中氧自由基动态变化及与成石的关系

将兔随机分为胆道感染＋梗阻组、单纯胆道梗阻组及假手术组进行实验。结果发现：肝组织部分氧自由基与肝、胆汁的组织源性β－葡萄糖醛酸酶以及胆红素结石等的动态变化情况相似，它们之间呈显著正相关。同时，胆道感染＋梗阻组的上述指标均较单纯胆道梗阻组为高。提示：氧自由基可能通过脂质过氧化作用破坏溶酶体，致组织源性β－葡萄糖醛酸酶释放而参与结石的形成；单纯胆道梗阻可产生氧自由基经上述途径成石；加入大肠杆菌感染后可     

肝缺血再灌注对胆管细胞凋亡及胆汁淤积的影响

<正>缺血再灌注损伤是指缺血后的再灌注不仅不能使组织、器官功能恢复,反而加重了组织、器官功能障碍和结构损伤的一种病理生理过程,是影响移植肝存活率的一个重要因素。肝再灌注时不仅对肝细胞产生损伤作用,同时对肝内胆道的胆管细胞也有损伤,从而使胆道发生病变[1]。本文旨在讨论缺血再灌注损伤中Bcl-2通过对胆管细胞凋亡的保护作用,从而进一步探     

血必净注射液对急性梗阻性黄疸大鼠心肌损伤的保护作用

目的：观察血必净注射液对急性梗阻性黄疸大鼠心肌损伤的保护作用。方法：采用结扎SD大鼠胆总管的方法制作急性梗阻性黄疽动物模型。将54只SD大鼠随机均分为胆总管结扎（BDL）组、胆总管结扎血必净治疗组（XBJ）、假手术组（SO）3组。XBJ组在胆总管结扎后48h开始尾静脉注射血必净注射液,BDL组和SO组同样方法注射等量生理盐水。分别于给药后第3、7、14天各取6只大鼠采样,观察血清胆红素（TBIL）、肌酸激酶同工酶（CK—MB）、内毒素（ET）含量,心肌组织丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量,以及光镜下观察心肌病理变化。结果：急性胆道梗阻后,血清TBIL、CK—MB、ET水平及心肌组织MDA含量随梗阻时间延长逐渐增高,心肌组织SOD含量减少。XBJ组与同时相BDL组比较,血清TBIL、CK—MB、ET水平及心肌组织MDA含量减少,心肌组织SOD含量增高。光镜下可见随胆道梗阻时间延长,心肌损伤加重,XBJ组与同时相BDL组比较,心肌损伤减轻。结论：血必净注射液对急性胆道梗阻所致心肌损伤有保护作用,作用机制可能与其抗内毒素血症、TNF—α作用及对抗氧自由基有关。     

内毒素休克时自由基对肝脏细胞和亚细胞器的损伤

本文探讨氧衍生的自由基在内毒素休克时对肝脏细胞和亚细胞的损伤作用。给大鼠静注内毒素(3mg/kg体重)0.5小时后,尽管肝组织MDA没有明显升高(P>0.05),但线粒体和溶酶体悬液中MDA以及肝组织、线粒体、溶酶体SOD较对照已明显升高(P<0.05)。休克后2小时,肝组织、线粒体、溶酶体MDA均显著升高(P<0.01～0.001),以后升高更甚(P<0.001)。线粒体、溶酶体SOD在休克后2小时明显下降(P<0.05),休克后4小时肝组织和亚细胞器SOD均明显受抑(P<0.01～0.001)。血浆,溶血液MDA、SOD和溶酶体酶在休克后均有程度不同的改变。实验结果表明氧衍生的自由基在内毒素休克时引起肝细胞和线粒体、溶酶体等亚细胞器的脂质过氧化损伤,而亚细胞器的损伤似乎早于组织损伤。     

细胞外半胱氨酸/胱氨酸氧化还原电位对NAFLD肝细胞线粒体功能的影响

目的:研究细胞外半胱氨酸/胱氨酸氧化还原电位(EhCys/Cy SS)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)肝细胞线粒体功能的影响。方法:用EhCys/Cy SS分别为0 m V(氧化)、-80 m V(正常)和-150 m V(还原)的氧化还原培养基培养肝细胞株LO2并采用油酸诱导细胞建立NAFLD模型。荧光探针DCFH-DA和Mito SOX分别检测细胞整体水平和线粒体活性氧簇(ROS)生成,使用apocynin(NADPH氧化酶抑制剂)和Mito Q10(靶向线粒体抗氧化剂)、rotenone(线粒体呼吸链复合体I抑制剂)和antimycin A(线粒体呼吸链复合体Ⅲ抑制剂)作用细胞检测线粒体复合体活性从而探究ROS的来源,JC-1检测细胞线粒体膜电位。结果:油酸诱导的NAFLD细胞模型使肝细胞内ROS增多,线粒体膜电位下降;氧化的EhCys/Cy SS加剧了NAFLD肝细胞ROS的生成以及线粒体膜电位的下降,而还原的EhCys/Cy SS能清除ROS并逆转线粒体膜电位的下降。线粒体ROS清除剂Mito Q10能显著地减少氧化的EhCys/Cy SS所增加的ROS,而apocynin效果不明显。Rotenone作用于细胞后,ROS的增长率与细胞外EhCys/Cy SS有关,氧化状态下ROS增长率最小且复合体I活性减弱,即氧化的EhCys/Cy SS能通过抑制线粒体复合体I增加ROS的生成。结论:氧化的EhCys/Cy SS能通过抑制线粒体复合体I,从而加剧NAFLD肝细胞ROS的生成,并使线粒体膜电位进一步下降,而还原的EhCys/Cy SS能减少高脂所致ROS生成并减轻线粒体损伤。     

败血症休克肝细胞线粒体损伤机制的实验研究

目的:探讨败血症休克肝细胞线粒体损伤的机制。方法:30只SD大鼠随机分为3组,假手术组,12h手术组,16h手术组。采用盲肠结扎穿孔术(cecalligationandpuncture)制作败血症休克模型,比较手术前后肝细胞线粒体呼吸功能和氧化磷酸化功能的变化及线粒体膜ATP酶的活性改变与大鼠死亡率和血压变化的关系。结果:12h手术组平均动脉压(9.54±1.26)kPa明显低于假手术组(14.58±1.32)kPa(P<0.05),死亡率明显高于假手术组(P<0.05),12h手术组肝细胞线粒体Ⅲ态(1.28±0.25)、P/O比值(1.67±0.34)、呼吸控制率(1.27±0.25)、线粒体膜Ca²⁺-ATP酶(58.00±2.43)、Na⁺-K⁺-ATP酶(40.80±3.45)、Mg²⁺-ATP酶(78.30±4.16)、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶(2.70±2.25)活性与假手术组相比较,具有显著差异(P<0.05)。术后16h组更低于12h组,与大鼠死亡率增加呈显著正相关。结论:肝细胞线粒体摄氧功能和氧化磷酸化功能减弱,膜流动性降低,能量代谢功能障碍,线粒体内钙镁平衡紊乱是败血症休克肝细胞线粒体损伤的主要机制。     

胆道梗阻后胆汁中自由基反应及其在胆石形成中的作用

作者通过临床标本及动物实验,观察胆汁中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)、β-葡萄糖醛酸苷酶(β-G)、总胆红素(TB)及总蛋白(P)等的变化,对胆道梗阻后胆汁中自由基反应及其在胆石形成中的作用进行了研究。结果发现:原发性肝胆管结石和/或胆道梗阻病人术中胆汁的SOD和LOP升高,显示自由基反应增强,切除病灶或解除梗阻后则逐渐下降。动物实验证明,兔胆道梗阻后,同样使胆汁中SOD和LPO显著上升,并伴随有组织性β-G,TB,及P的含量明显增加。组织性β-G和TB变化与SOD相关。提示胆道梗阻,胆管内压增高,可通过增强自由基反应途径使胆汁成份发生变化,导致胆石形成。     

间充质干细胞条件培养基治疗肝氧化应激损伤中部分miRNA的变化

目的:研究采用人脐带间充质干细胞条件培养基(MSC-CM)治疗肝细胞氧化应激损伤中微小RNA(miRNA)的差异性表达并探讨其调控机制。方法:制备人正常肝细胞株L02氧化应激损伤模型,体外分离培养健康人脐带间充质干细胞并制备MSC-CM。损伤模型经MSC-CM治疗,用凋亡、细胞活力、细胞周期及线粒体膜电位等实验验证其治疗效果。定量RT-q PCR筛选差异性表达miRNA。应用生物信息学预测其靶蛋白后使用Western blot实验验证。结果:MSC-CM治疗可以显著减少H2O2氧化应激损伤所致的细胞凋亡比率,增加细胞活力,调节细胞周期。经RT-q PCR筛选出显著差异表达的miR-143、miR-145、miR-301a与let-7a,均在损伤后表达升高,而在MSC-CM作用后表达降低。Western blot实验结果显示miR-143的预测靶蛋白HK2和ADRB1的表达在肝细胞损伤后降低,MSC-CM作用后升高,与miR-143调控趋势一致。结论:MSC-CM治疗可能通过调节相关miRNA及其靶蛋白逆转H_2O_2所致肝细胞氧化应激损伤。     

低张饮水MRCP技术在低位胆道梗阻诊断中的应用

目的探讨低张饮水MRCP技术在低位胆道梗阻诊断中的价值。方法180例低位胆道梗阻患者均进行了低张饮水MRCP与常规MRCP检查,所有病例均经手术或内镜活检病理证实。比较两种方法对低位胆道梗阻性病变的显示及正确诊断率。结果低张饮水MRCP对低位胆道梗阻性病变的显示明显优于常规MRCP（P〈0．05）;低张饮水前后MRCP对低位胆道梗阻的定性诊断准确率分别为72．8％（131／180）、92．8％（167／180）。结合MR其它成像序列,对低位胆道梗阻的定性诊断准确率分别为91．1％（164／180）、96．1％（173／180）。两位诊断医师之间的意见一致性明显提高（K=0．687、0．812）。结论低张饮水MRCP对低位胆道梗阻的诊断具有一定的优势,可作为低位胆道梗阻MRI诊断与鉴别诊断的一种补充手段。