单细胞凝胶电泳分析地黄提取物对仓鼠肺成纤维细胞DNA的损伤作用

目的 采用单细胞凝胶电泳（彗星实验）技术研究地黄提取物致仓鼠肺成纤维细胞（CHL细胞）DNA的损伤作用,为该药物临床前安全性评价提供参考。方法 采用0.2、1.0、5.0 mg/mL地黄提取物,用双氧水作为阳性对照药,处理细胞,24 h后收获细胞,进行彗星电泳实验。结果/b> 双氧水处理后造成CHL细胞产生明显的DNA损伤,呈现不同彗尾长度的彗星,与阴性对照组比较有显著差异。不同质量浓度的地黄提取物处理细胞后,彗星长、彗尾长度等各项指标与阴性对照组比较无显著差异。结论 单细胞凝胶电泳检测DNA损伤的敏感度较高,不同质量浓度的地黄提取物对CHL细胞未产生DNA损伤。     

硫芥对大鼠淋巴细胞毒性作用的研究

目的 探讨硫芥中毒对淋巴细胞的作用机制,为寻找硫芥中毒早期改变的敏感指标和提高中毒的防护水平奠定其础。方法 建立硫芥中毒淋巴细胞模型,分别用单细胞凝胶电泳法检测淋巴细胞DNA损伤;用镀铜镉还原法和一氧化氮合成酶试剂盒检测中毒后淋巴细胞培养上清液一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）的变化;用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳支检测细胞凋亡。结果 硫芥中毒后4h淋巴细胞DNA明显损伤,72h最明显,5d开始恢复;中毒后NO、NOS的变化相似,4h明显升高,1d达到峰值并于3d开始恢复。NOS的抑制剂（L-NAME）可明显降低NO的含量,但对实验组NOS的活性无明显影响。流式细胞仪检测结果显示4h淋巴细胞凋亡明显,而1、3d几乎无凋亡产生。琼脂糖凝胶电泳结果表明4h出现典型的细胞凋亡的征象,而1、3d则表现为细胞死亡。结论（1）SCG法敏感、经济、简便、可用于硫芥中毒细胞毒性、中毒程度的评价,在早期诊断上有良好的应用前景;（2）中毒后因NOS的活性升高导致NO的升高而产生细胞毒作用可能是硫芥的中毒机制之一;（3）细胞凋亡参与了硫芥的中毒过程,亦可能是其中毒机制之一。     

硫芥对大鼠淋巴细胞谷胱甘肽含量的影响

目的探讨硫芥中毒后淋巴细胞谷胱甘肽含量变化.方法用密度梯度离心法分离大鼠脾淋巴细胞,与硫芥共同进行体外培养.用MTT法测定细胞活力.以荧光分光光度计法测定细胞还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、氧化型谷胱甘肽(oxidizedglutathione,GSSG)含量变化,结果淋巴细胞活力在硫芥中毒后降低水平与细胞内GSH含量呈直线相关关系.硫芥中毒8 hGSH含量开始下降,8～12 h维持在低水平,24～48hGSH进一步下降;GSSG含量24～48h显著低于对照水平;GSH/GSSG比值在8 h后显著降低.结论硫芥中毒淋巴细胞活力与谷胱甘肽含量的变化存在显著相关性.     

硫芥中毒犬外周血IL-2、IL-6含量变化和淋巴细胞DNA损伤

目的 研究硫芥中毒犬外周血IL-2、IL-6变化和淋巴细胞DNA损伤的规律。方法 重庆家犬硫芥中毒(16mg/kg，sc)。中毒后不同时相点取血，分离血清和淋巴细胞。采用放射免疫方法测定血清中IL-2、IL-6含量，以单细胞凝胶电泳技术测淋巴细胞DNA损伤程度。结果 中毒后4h血清IL-2、IL-6含量开始下降，72h达最低值，120h开始恢复。单细胞电泳检测结果提示，硫芥导致明显的淋巴细胞彗星现象。受损细胞率、淋巴细胞DNA片段迁徙度于中毒4h即开始升高，24～72h持续升高。结论 硫芥中毒导致发生早且持续时间较长的犬外周血IL-2、IL-6含量下降和淋巴细胞DNA损伤。     

还原型谷胱甘肽对抗硫芥诱导大鼠脾淋巴细胞毒性作用

目的观察还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)对硫芥(sulfur mustard,SM)诱导大鼠脾淋巴细胞线粒体功能的保护作用.方法用密度梯度离心法分离大鼠脾淋巴细胞,与硫芥共同进行体外培养.用MTT法检测线粒体功能状态;用荧光分光法检测细胞内GSH含量和用琼脂糖DNA凝胶电泳观察DNA的损伤.结果硫芥作用的线粒体功能变化具有剂量和时间依赖性,它与细胞内GSH含量下降呈直线正相关(P＜0.01).使用GSH后,对不同剂量组的线粒体功能早期均有保护作用.保护效果最好时间的DNA断裂情况有所减轻,甚至可以逆转坏死向凋亡发展.结论GSH可部分保护线粒体功能.     

硫芥对大鼠淋巴细胞DNA及白细胞介素的影响

目的　探讨硫芥中毒动物淋巴细胞的损伤特点及中毒早期白细胞介素的浓度变化作为硫芥毒性损伤诊断的可能性 .方法　分离大鼠脾淋巴细胞培养 ,经 10～ 10 0 0 μmol·L- 1 芥子气染毒 30 min,以单细胞凝胶电泳法 (SCG )检测DNA损伤 ;同时测定硫芥中毒大鼠血液 IL- 2和 IL- 6浓度 .结果　中毒后淋巴细胞 DNA迁移率和受损细胞百分率呈时间和剂量依赖关系 (r=0 .6 3,P<0 .0 1) ;培养液中 IL- 2和IL- 6浓度明显降低 ,IL- 6含量为 (46 8± 16 ) μg· L- 1 ,4 h开始下降 ,72 h降至 (177± 16 )μg· L- 1 (P<0 .0 1) ,12 0 h有所回升 ,但仍然明显低与对照 (P<0 .0 1) .其中 IL- 2几乎难以检出 .结论　硫芥中毒早期机体免疫系统受到明显抑制 ,SCG检测 DNA损伤用作评价硫芥细胞毒性指标在诊断方面具有一定价值     

中国仓鼠肺成纤维细胞和HeLa细胞DNA氧化损伤的自身修复能力与比较

目的:研究不同氧化相关因素对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)和HeLa细胞DNA损伤的自身修复情况.方法:将CHL细胞和HeLa细胞用不同氧化相关因素处理一定时间[CHL细胞:过氧化氢(H2O2)25 min,重铬酸钾(K2Cr2O7)105 min,阿霉素(Dox)75 min;HeLa细胞:H2O2 25 min,K2Cr2O7 105 min],随后立即去毒培养0、0.5、1、2、3 h,以碱性单细胞凝胶电泳技术检测DNA链断裂情况.结果:①CHL细胞经H2O2、K2Cr2O7、Dox作用后引起DNA链断裂,去毒培养1 h链断裂修复明显(P<0.01);去毒培养2～3 h,前两毒剂的损伤组完全修复,而Dox组链断裂仍高于未损伤组;②HeLa细胞经H2O2、K2Cr2O7作用后引起DNA链断裂,去毒培养0.5 h链断裂明显修复(P<0.01),去毒培养1 h则完全修复;③CHL细胞和HeLa细胞损伤后修复的拖尾率与修复时间的回归系数显著不同(P<0.05).结论:两种细胞在氧化性DNA损伤后均迅速启动自身修复,但HeLa细胞比CHL细胞有更快的修复能力;同时这两种细胞由Dox所致损伤修复能力均较H2O2、K2Cr2O7所致的差.     

成纤维细胞生长因子对组织损伤保护作用的研究进展

成纤维细胞生长因子(FGF)在体内分布广泛,对中胚层和神经外胚层来源的组织细胞具有促进分裂增殖和损伤修复的作用。目前已发现的有24种,外源性的aFGF、bFGF、MaFGF是目前应用研究的主要形式,它们通过与组织细胞的表面受体结合,抑制脂质过氧化,拮抗自由基损伤,稳定细胞酶活性,在心血管、肾、神经及肠等器官的机械性或药物性损伤方面发挥保护作用。这提示FGF在组织损伤保护作用方面将有广阔的临床应用前景。     

硒抑制镍诱导的人肺成纤维细胞的DNA损伤

目的　探讨三氧化二镍(Ni2O3)对人肺成纤维细胞(human lung fibroblasts,HLF)的DNA损伤作用以及Na2SeO3的保护作用。方法　应用单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)检测DNA损伤。结果　Ni2O3 处理HLF细胞4 h,SCGE检测出DNA损伤程度高于对照组,差异有显著性(P<0.01)。而Ni2O3 Na2SeO3 处理组DNA损伤程度低于Ni2O3 组,差异有显著性(P<0.01)。结论　硒可抑制镍诱导的人肺成纤维细胞的DNA损伤。     

成纤维细胞生长因子对海马神经元损伤保护作用的研究进展

成纤维细胞生长因子(FGFs)对中枢神经系统神经细胞的发育、成熟和存活有着极为重要的影响,对于促进海马神经元和胶质细胞的生长也有很强的作用,并且能促进海马神经元损伤的修复与再生。FGFs通过抑制胞内钙超载、抑制海马神经元凋亡和抗氧化应激等3个方面对海马神元损伤起保护作用。     

硫芥诱导小鼠染色体畸变和微核形成作用的研究

目的　研究硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞 (chinesehamsterfibroblastcellline ,CHL)染色体的诱变作用及对小鼠骨髓微核率的影响。方法　培养CHL细胞 (±S9) ,以不同浓度硫芥处理 2 4h后常规方法制备染色体 ,观察畸变类型并计算畸变率。KM小白鼠皮下注射硫芥染毒 ,2 4h后处死动物 ,取双侧股骨 ,行骨髓涂片和姬姆萨染色 ,计数含微核嗜多染红细胞(polychromaticerythrocyte ,PCE)数。结果　硫芥处理的CHL细胞染色体畸变率显著增加 ,出现裂隙、断裂、缺失、多倍体等多种类型畸变 ,并呈量效依赖趋势。S9不影响硫芥诱导的CHL细胞染色体畸变形式和畸变率。与对照组比较 ,注射硫芥小鼠骨髓PCE微核率显著增加 (P <0 .0 1) ,硫芥剂量越大 ,微核形成率越高。结论　硫芥能直接诱发细胞染色体损伤。     

硫芥诱导大鼠小肠上皮细胞凋亡的研究

目的：观察硫茶对大鼠小肠上皮细胞（IEC－6）生长的影响及其引起的细胞死亡的方式。方法：透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳定性硫芥中毒的IEC－6细胞形态变化及DNA的改变。采用Cell Death DetectionELISA试剂盒研究IEC－6细胞凋亡与硫芥浓度之间的关系。结果：0．1－1000μmol/L硫芥对IEC－6细胞的毒性作用与硫芥的深度和作用时间呈正相关。电镜观察到细胞凋亡的形态学改变。细胞膜完整,染色质固缩并聚集于核膜边缘,凋亡小体形态;DNA电泳有“DNA Ladder”出现,0．1－100μmol/L硫芥处理的细胞的凋亡量随硫芥 度的升高而增加,超过100μmol/L测凋亡量反降低。结论：硫芥可诱导大鼠小肠上皮IEC－6细胞凋亡,在低浓度时以凋亡为主,高浓度时则出现坏死。     

番茄红素对CHL细胞DNA氧化损伤的影响

目的研究番茄红素对CHL细胞氧化损伤的影响。方法在CHL细胞培养液中分别加入0.5、1、5及10μmol/L番茄红素,给予H2O2作用30min,用单细胞凝胶电泳方法测定细胞DNA损伤情况。结果加入不同剂量番茄红素的CHL细胞经过24h培养后自发性DNA损伤(拖尾率和DNA迁移长度)与溶剂对照组相比没有明显差异。而加入0.5、1、5μmol/L番茄红素后H2O2诱导的CHL细胞DNA损伤率明显低于H2O2组(P<0.05);但10μmol/L番茄红素对H2O2诱导的DNA损伤的保护作用丧失。结论0.5、1、5μmol/L番茄红素对H2O2诱导的细胞DNA损伤有保护作用,10μmol/L番茄红素的抗氧化能力丧失。     

硫芥诱导L5178Y细胞tk基因突变的研究

目的　检测硫芥对小鼠淋巴瘤L5 178Y3 .7.2c tk - 细胞的诱变性。方法　采用 96孔微孔板接种法检测平板接种效率和突变频率。结果　硫芥可诱导L5 178Y3 .7.2c tk - 细胞tk位点的突变 ,诱发突变是自发突变的 2～ 15倍。在tk位点诱发了大克隆和小克隆两种不同表型的突变集落 ,以小克隆为主。结论　硫芥有明确的致突变性和较强的细胞毒性 ,产生了大范围的DNA损伤     

晶状体上皮细胞DNA损伤的SCGE测定法

目的 研究晶状体上皮细胞DNA的损伤.方法 应用单细胞凝胶电泳(SCGE)法测定氧化、辐射及细胞外高糖、高钙环境对晶状体上皮细胞DNA的损伤.结果 对照组中晶状体上皮细胞呈圆形无拖尾,表明其DNA未受损伤.各处理组细胞呈不同程度的典型彗星图像,头尾分明,与对照组相比差异具有显著性(P＜0.001).结论 以SCGE法测定出多种因素均可导致体外培养的晶状体上皮细胞DNA损伤,考虑其可能与白内障的形成有关.     

应用单细胞凝胶电泳技术检测K562细胞 DNA损伤的研究

目的用单细胞凝胶电泳技术来探讨一种能方便检测细胞DNA损伤的方法。方法在Singh等人的方法的基础上，加入过氧化氢作为DNA致突变剂来观察K562细胞的DNA损伤。结果在培养K562细胞的过程中，加入了下同浓度的过氧化氢，我们发现了DNA损伤与过氧化氢剂量之间存在着线性相关关系。结论这种在本实验室建立起来的用于检测细胞DNA损伤的方法易于操作，结果令人满意，并更具实用性。