血管生成因子VEGF、bFGF、endostatin在胰腺癌细胞中的表达

目的 探讨胰腺癌细胞血管生成因子表达水平与其恶性生物学行为的关系.方法 通过RT-PCR及ELISA检测胰腺癌细胞株SW1990、Capan-1、Aspc-1、MiaPaCa-2、Panc-1及PCT-3中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)和内皮素(endostatin)的表达水平,同时通过Boyden Chamber趋化小室及CCK-8法进行6株胰腺癌细胞株的侵袭性及增殖检测. 结果 VEGF在6株细胞中均有表达,但是表达量存在显著差异,以侵袭性最强的Panc-1表达最强.bFGF在6株细胞中均有表达,但是表达量存在显著差异,增殖及侵袭性较强的Panc-1和PCT-3中的表达水平高于其他细胞株.6株胰腺癌细胞endostatin表达差异显著,在侵袭性最强的Panc-1中表达水平最高,其他细胞株不表达或表达量很低.胰腺癌细胞株胞外的VEGF及endostatin表达显著高于细胞内,bFGF细胞内表达显著高于细胞外.结论 血管生成因子VEGF、bFGF和endostatin的表达水平可能与胰腺癌细胞增殖与侵袭密切相关.     

碱性成纤维细胞生长因子小干扰RNA对胰腺癌细胞血管内皮细胞生长因子表达的调节作用

目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)小干扰RNA(siRNA)对胰腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响.方法 利用siRNA技术抑制VEGF及bFGF表达,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰腺癌细胞株VEGF表达变化.结果 Panc-1及PCT-3细胞VEGF mRNA表达受到显著抑制,Panc-1为0.20 ±0.05,PCT-3为0.23±0.02.sw1990及PCT-3分泌VEGF受到显著抑制,sw1990为(1940.67 ±93.84) ng/L,对照组为(2560.67±181.79) ng/L;PCT-3为(174.00±98.73) ng/L,对照组为(779.33 ±317.52) ng/L.结论 bFGFsiRNA能够抑制胰腺癌细胞VEGF核酸及蛋白水平表达.     

RNA干扰沉默促肝细胞再生磷酸酶-3基因对结直肠癌细胞基质金属蛋白酶2和9表达的影响

目的 探讨促肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)基因对结直肠癌细胞侵袭的影响和可能机制.方法 应用PRL-3基凶小干扰RNA(siRNA)转染处理结直肠癌细胞系HCT116后,分别采用实时定量PCR和Western印迹检测PRL-3基因和基质金属蛋白酶家族(MMP)-2、MMP-9的mRNA和蛋白水平;分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力;其次,将转染48 h的细胞接种裸鼠,观察其在体内生长情况.结果 体外实验结果显示,PRL-3 siRNA可有效抑制结直肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关(P＜0.05,P＜0.01));转染组细胞MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白水平明显下调(P＜0.05).体内实验结果显示,对照组裸鼠组织癌细胞侵袭横纹肌和血管,而转染组未见这些现象.结论 采用PRL-3siRNA转染可抑制结直肠癌细胞侵袭,其机制可能与下调MMP表达有关.     

CTHRC1在胰腺癌中的表达及其意义

目的:观察胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法:采用实时定量PCR(RT-PCR)方法检测40例胰腺患者癌组织与癌旁组织中CTHRC1的表达。胰腺癌Panc28细胞转染pcDNA3.1-CTHRC1或CTHRC1 siRNA后,以未转染的Panc28细胞为对照,采用克隆形成实验检测CTHRC1对胰腺癌Panc28细胞增殖,伤口愈合实验和Boyden小室检测细胞迁移和侵袭能力。结果:RT-PCR结果显示,胰腺癌组织CTHRC1 mRNA表达水平明显高于癌旁组织(P0.05)。与对照组Panc28细胞比较,转染pcDNA3.1-CTHRC1上调CTHRC1后,Panc28细胞克隆形成数明显增加、伤口宽度百分比明显减少、侵袭的细胞数明显增多,而转染CTHRC1 siRNA下调CTHRC1表达后,Panc28细胞以上指标呈反向变化,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:胰腺癌组织在CTHRC1表达升高,CTHRC1可能通过促进胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力而参与胰腺癌的发生与发展。     

siRNA靶向沉默OCT4基因对前列腺癌DU145和PC3细胞等生物学行为的影响

目的 观察siRNA靶向沉默OCT4基因对前列腺癌DU145细胞和PC3细胞的生物学行为影响.方法 通过脂质体介导的方法将OCT4 SiRNA分别转染人前列腺癌细胞株DU145细胞和PC3细胞,采用RT-PCR和Western-blot方法分别检测特异性siRNA对0ct4基因在mRNA和蛋白水平上的沉默效果,CCK8法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制情况,运用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化.结果 转染OCT4 SiRNA的两组细胞OCT4的表达均低于阴性对照组(NC)与空白组(P＜0.05),OCT4SiRNA抑制两种细胞的增殖并降低细胞的侵袭能力.结论 OCT4-siRNA可以有效抑制DU45细胞和PC3细胞的OCT4基因的表达,从而抑制细胞增殖,抑制侵袭和迁移,表明OCT4基因在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用.     

RNA干扰REG1A基因抑制人膀胱癌EJ细胞增殖并降低其侵袭

目的 观察小干扰RNA(siRNA)抑制REG1A(REG1A)基因的表达对人膀胱癌EJ细胞增殖及侵袭的影响.方法 化学合成针对REG1A基因的3对siRNA,使用脂质体转染EJ细胞.实时定量聚合酶链反应( Real-time PCR)和免疫印迹(Western blot)法分别检测转染细胞REG1A的mRNA及蛋白表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染细胞的增殖,流式细胞术检测转染细胞的周期,Transwell侵袭小室检测转染细胞的侵袭能力.结果 REG1A siRNA转染组EJ细胞与空白对照Mock组比较,REG1A的mRNA及蛋白表达明显下调,分别下调了(75.58±1.17)％及(51.22±6.63)％ (P ＜0.01);REG1A siRNA转染组EJ细胞增殖速度较空白对照Mock组及阴性对照NC组明显减慢(P＜0.05),且G0/G1期细胞百分比明显增多,为(43.37±2.15)％(P＜0.01);REG1AsiRNA转染组EJ细胞穿过Transwell小室的数目为(95.84±6.49)个,明显少于空白对照Mock组的(179.93 ±8.38)个和阴性对照NC组的(186.96±6.28)个(P＜0.01).结论 REG1A siRNA能抑制体外培养的膀胱癌EJ细胞增殖并降低其侵袭能力.     

促肝细胞再生磷酸酶-1基因对肺癌细胞侵袭的影响

目的 探讨促肝细胞再生磷酸酶-1(PRL-1)基因对肺癌细胞侵袭的影响及其机制.方法 应用PRL-1基因小干扰RNA(siRNA)转染处理肺癌细胞株A549后,分别采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测PRL-1基因和基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-7和MMP-9 mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养实验和Boyden小室模型实验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力.结果 siRNA转染组PRL-1 mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性(P＜0.01).软琼脂集落形成实验显示,3.125、6.25和12.5 nmol/L siRNA组集落形成数分别为17.8±1.6、13.6±1.5、8.8±1.4,而对照组为22.6±1.8(P＜0.05);Boyden小室模型实验显示,3.125、6.25和12.5 nmol/L siRNA组穿过滤膜的细胞分别为33.6±2.1、19.5±1.9、8.1±1.8,而对照组为49.4±2.3(P＜0.05).同时发现,转染组细胞MMP-2、MMP-7、MMP-9基因mRNA和蛋白水平明显下调.结论 PRL-1 siRNA转染可抑制肺癌细胞侵袭,其机制可能与下调MMP-2、MMP-7、MMP-9表达有关.     

小干扰RNA沉默血管内皮生长因子对ACHN肾癌细胞黏附、侵袭及迁移的影响

目的 观察小干扰RNA (siRNA)沉默血管内皮生长因子(VEGF)对ACHN肾细胞癌细胞生物学行为的影响.方法 化学合成针对VEGF的小干扰RNA,实验分4组,转染后收集细胞,通过蛋白印迹方法检测VEGF的表达,噻唑蓝(MTT)比色法、细胞黏附实验、划痕实验及Transwell法测定细胞的增殖、黏附、迁移及侵袭能力.结果 siRNA 1～2组VEGF表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组;在24、48、72 h,siRNA 1～2的增殖抑制率均高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05),其中以siRNA2组最为显著;与空白对照组比较,siRNA 1～2组的细胞黏附数量明显下降[(81.5±3.1)％比(40.5±2.6)％、P＜0.05,(81.5±3.1)％比(22.5±2.4)％、P＜0.05],其中以siRNA2组最为明显;siRNA1～2组的细胞迁移数量明显下降(162±9比81±5,P＜0.05;162±9比38±4,P＜0.05);siRNA1～2组细胞侵袭能力明显下降(P＜0.05),且siRNA 2组的细胞侵袭能力明显低于siRNA 1组(P＜0.05).结论 VEGF基因在肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用;以靶向VEGF的siRNA转染肾细胞癌细胞,可抑制肾细胞癌细胞黏附、迁移和侵袭能力.     

Smad4 siRNA对乳腺癌细胞侵袭力和MMP-9表达的影响

目的:探讨Smad4特异性小分子干扰RNA(siRNA)对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭力及MMP-9表达的影响。方法:构建Smad4 siRNA,将细胞分为空白对照组,Smad4 siRNA转染组,TGF-β处理组,Smad4 siRNA转染+TGF-β处理组。首先用Western blot法检测转染Smad4 siRNA后细胞中Smad4蛋白的表达,以及用荧光素酶报告基因法检测TGF-β处理后细胞Smad结合元件(4xSBE)的活性;然后用Transwell小室模型和Western blot法检测各组细胞的黏附侵袭能力以及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达水平。结果:转染Smad4 siRNA后,乳腺癌细胞的Smad4蛋白表达及其TGF-β诱导的4xSBE活性增强均被明显抑制(均P<0.05);与对照组细胞比较,细胞经TGF-β刺激后的侵袭能力及MMP-9的表达量均明显增加(均P<0.05),但预先转染Smad4 siRNA的细胞的上述TGF-β刺激作用被明显抑制(均P<0.05),单纯Smad4 siRNA转染对细胞的侵袭能力及MMP-9的表达量无明显影响。结论:Smad4 siRNA能减弱TGF-β诱导的MDA-MB-231细胞的侵袭能力,该作用可能与其抑制MMP-9的表达有关。     

微管不稳定蛋白Stathmin对胰腺癌侵袭转移的影响及其相关甲基化调控

目的 探讨微管不稳定蛋白Stathmin在胰腺癌侵袭转移中的作用及其与甲基化调控的关系.方法 免疫组化检测40例胰腺癌组织和15例正常胰腺组织中MBDI和Stathmin的蛋白表达,分析其与胰腺癌临床病理特征的关系.利用RNA干扰技术将Stathmin-siRNA转染BxPC-3细胞,将细胞分为Stathmir-siRNA组和空质粒对照组.Transwell小室侵袭实验测定细胞迁移侵袭能力的变化,将两组细胞接种裸鼠,观察肿瘤转移的情况.去甲基化药物5-Aza-2’-dC( AZA)处理人胰腺癌细胞BxPC-3,定量RT-PCR和Western blot检测AZA处理前后Stathmin mRNA与蛋白的表达变化.结果 免疫组化显示,MBDI和Stathmin蛋白在40例胰腺癌标本中分别有28例(70.0％)和24例(60.0％)阳性表达,明显高于正常胰腺组织(P＜0.05).MBDI和Stathmin蛋白的阳性表达呈正相关(r=0.356,P=0.037,MBDI的表达与淋巴结转移有关(P=0.023),Stathmin的表达则与临床分期、淋巴结转移有关(P=0.002,0.001).Transwell小室侵袭实验显示,与对照组相比,Stathmin-siRNA组细胞的侵袭能力明显减弱(P＜0.05);动物实验显示,Stathmin-siRNA组细胞接种于裸鼠后,肝转移发生率明显低于空质粒对照组(P＜0.05);AZA处理BxPC-3细胞后,Stathmin mRNA 和蛋白表达明显下降.结论 微管不稳定蛋白Stathmin在胰腺癌中存在高表达,并与胰腺癌的侵袭转移特性有关;Stathmin的表达受到DNA甲基化调控,去甲基化可降低胰腺癌中Stathmin的表达.     

多药耐药相关基因及其蛋白在介导胰腺癌细胞原发性耐药中的作用及调控

目的 检测多药耐药相关基因（MDR1）及其蛋白（P-gP）在胰腺癌细胞株的表达,初步探讨胰腺癌发生先天性耐药的机理。方法 选择8株人胰腺癌细胞株,采用RT-PCR方法检测MDR1mRNA在胰腺癌细胞中的表达;通过免疫细胞化学方法检测P-gP的表达;以流式细胞仪检测胰腺癌细胞对罗丹明的外排情况,评价P-gP泵功能;最后通过P-gP抑制物维拉帕米与化疗药物联合应用,检测其对胰腺癌细胞的杀伤作用。结果 MDR1mRNA在胰腺癌细胞株SW1990中的表达最高,除PCT-2未检测到MDR1的表达外,其余6株细胞均有MDR1的微弱表达;免疫细胞化学染色结果证实P-gP在SW1990中的表达明显高于其他细胞株。57．9％±5．4％的SW1990细胞内有罗丹明蓄积,而在P-gP阴性对照细胞中,99．5％±3．3％的细胞内存在罗丹明的积聚,两者差异有统计学意义（P〈0．05）。P-gP抑制物维拉帕米与阿霉素或表阿霉素联合应用时可以部分逆转肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。结论 MDR1及P-gP在人胰腺癌细胞中存在一定量的表达;维拉帕米联合阿霉素可以明显抑制P-gP阳性细胞的生长。     

长链非编码RNA XIST在胰腺癌中的表达及意义

目的:探讨长链非编码RNAXIST在胰腺癌组织中的表达及其作用。方法:实时定量PCR检测56对胰腺癌及癌旁正常胰腺组织标本中XIST的表达,以及XIST在人胰腺导管上皮细胞(HPDE)及7种胰腺癌细胞系(sPC-3、Bx PC-3、Capan-1、CFPAC-1、Hs766T、Panc-1、SW1990)中的表达,分析XIST表达与胰腺癌患者临床病理因素的关系;在XISTsi RNA干扰XIST高表达的胰腺癌细胞后,分别用MTT法和Brd U实验检测细胞的活力和增殖情况,Westernblot检测细胞中Ki-67、PCNA的蛋白的表达。结果:胰腺癌组织中XIST的表达量明显高于癌旁正常胰腺组织(2.452vs.0.9729,P0.001),且XIST高表达与胰腺癌患者的肿瘤分期(P=0.016)、淋巴结转移(P=0.032)有关。7种胰腺癌细胞系中XIST的表达量均明显高于HPDE细胞(均P0.05),其中SW1990细胞XIST表达量约为HPDE细胞的2.5倍。XISTsi RNA干扰SW1990细胞48h后,与未处理的SW1990细胞比较,细胞的活力(0.812vs.1.215)和增殖能力(0.708vs.1.007)均明显降低,Ki-67(0.467vs.1.027)与PCNA(0.600vs.0.997)的表达均明显下调(均P0.05)。结论:XIST在胰腺癌组织中表达升高,其高表达能促进胰腺癌细胞的生长,机制可能与其上调Ki-67、PCNA表达有关。     

重组腺相关病毒载体表达抗表皮生长因子受体抗体对胰腺癌细胞株抑制作用的研究

目的 构建能在体内长期表达抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体的重组腺相关病毒(rAAV)载体,观察其对人胰腺癌细胞株的抑制作用.方法 将抗人EGFR单链抗体可变区(SCFV)基因插入腺相关病毒载体的Kpn Ⅰ和BglⅡ位点,构建成含抗EGFR单链抗体基因的重组腺相关病毒载体(rAAV-anfiEGFR).设立对照组(rAAV1-EGFP组)和实验组(rAAV1-anti EGFR组),观察抗EGFR单链抗体蛋白的表达情况.采用Western blot检测抗体蛋白的表达、CCK-8法和流式细胞仪检测6种人胰腺癌细胞株(PCT-3、SW1990、Capan-1、ASPC-1、MiaPaCa-2及PANC-1细胞)的抑制率和凋亡率.两组比较采用t检验.结果 抗EGFR单链抗体蛋白能在6种人胰腺癌细胞株中表达,对照组和实验组胰腺癌ASPC-1细胞抑制率分别为1.1%±2.4%和15.1%±3.5%,两组比较,差异有统计学意义(t=6.598,P＜0.05).对照组和实验组PANC-1细胞凋亡率分别为7.0%±3.0%和11.4%±2.5%,两组比较,差异无统计学意义(t=1.952,P＞0.05);对照组和实验组SW1990、ASPC-1、Capan-1、PCT-3、MiaPaCa-2细胞凋亡率分别为1.1%±0.8%、1.5%±0.7%、1.7%±1.2%、1.1%±0.7%、2.2%±1.1%和17.6%±2.2%、46.9%±3.9%、20.0%±2.8%、12.1%±1.6%、31.1%±2.5%,两组比较,差异均有统计学意义(t=12.208,19.846,10.405,10.909,18.327,P＜0.05).结论 成功构建了携带抗EGFR单链抗体基因的rAAV载体,其表达的抗EGFR单链抗体蛋白对人胰腺癌细胞株有明显的抑制作用.     

白细胞介素6促进人胰腺癌细胞的侵袭及机制探讨

目的 应用白细胞介素6(IL-6)作用于人胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2,观察侵袭能力的变化并探讨其机制.方法 使用IL-6处理人胰腺癌细胞株SW1990和Capan-2,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学和Western印迹检测P-STAT3的表达,荧光定量PCR、Western印迹检测VEGF、MMP-2 mRNA和蛋白表达,体外侵袭检测细胞的侵袭能力.结果 IL-6 100 μg/L作用人胰腺癌细胞株后,细胞增殖能力增强(P＜0.05);Western印迹和免疫细胞化学显示P-STAT3的表达增加;荧光定量PCR、Western印迹显示VEGF、MMP-2的mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.05);细胞侵袭能力增强.结论 IL-6通过激活STAT3信号转导通路,上调MMP-2和VEGF表达,增强胰腺癌细胞侵袭能力.

Abstract：

Objective To investigate the effects and mechanism of IL-6 on invasion and metastasis of human pancreatic cancer cells. Methods IL-6 was added into the culture media of human pancreatic cancer cells Capan-2 and SW1990. Cell growth was measured by MTT assay. Western blot and immunocytochemistry were performed to detect Phosphorylated STAT3 (P-STAT3) protein. VEGF and MMP-2 mRNA and protein expression were examined using fluorescence quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blot, respectively. The invasion ability of SW1990 and Capan2 cells was determined by cell invasion assay in vitro. Results 100 ng/mL IL-6 significantly promoted growth and invasion ability of Capan-2 and SW1990 cells (P＜0.05). The use of IL-6 not only markedly increased the protein expression of P-STAT3, VEGF and MMP-2, but also greatly increased the mRNA expression of MMP-2 and VEGF. Conclusions STAT3 signal transducer pathway activation with IL-6 can promote the invasion ability of pancreatic cancer cells in vitro through up-regulation of MMP-2 and VEGF expression. STAT3 signal transducer may provide a novel therapeutic target for the treatment of pancreatic cancer.     

AMD3100抑制胰腺癌细胞增殖和侵袭的体外实验

目的 探讨CXCR4 特异性受体阻滞剂AMD3100 对胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能的作用机制.方法 用CCK-8 检测经不同浓度AMD3100 处理后人胰腺癌细胞株SW1990 的增殖.Matrigel 胶铺设的transwell 小室检测经AMD3100 处理后SW1990 的侵袭能力.RT-PCR 法检...     

Slug在胰腺癌中的表达及干扰Slug对胰腺癌转移的影响

目的 探讨Slug和E-CADHERIN(E-cadherin)表达与胰腺癌转移的关系以及干扰Slug转录因子对胰腺癌转移的影响.方法 采用免疫组化和RT-PCR技术分别检测36例胰腺癌组织中Slug、E-cadherin和mRNA表达.将肝脏高转移潜能的胰腺癌细胞株SW1990H4,分为3组:对照组、空载体质粒(shRNA-1)和转染干扰S1ug质粒(Slug-shRNA-1),观察Slug对E-cadherin mRNA表达的逆转作用,及对SW1990H4体外侵袭、运动的抑制作用.结果 胰腺癌组织中Slug高表达,而E-cadherin低表达.转移组胰腺癌组织中Slug蛋白和mRNA表达明显高于非转移组,差异分别有统计学意义(P＜0.05),而E-cadherin在转移组胰腺癌中无表达.PCR产物凝胶电泳结果显示,Slug mRNA在空白对照组SW1990H4中表达为0.985±0.016,E-cadherin mRNA表达为0.120±0.001.shRNA-1时转染48 h时,Slug mRNA的表达水平为0.973±0.014,E-cadherin mRNA表达水平分别0.160±0.001,与对照组比差异分别无统计学意义(P＞0.05).转染Slug-shRNA-1组瞬时转染48 h时,Slug mRNA的表达水平为0.554±0.011,E-cadherin mRNA表达水平为0.36±0.002,与对照组和shRNA-1组比差异分别有统计学意义(P＜0.05).SW1990H4稳定转染后,shRNA-1和Slug-shRNA-1组Slug mRNA表达水平分别为0.968±0.015,0.206±0.017,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而E-cadherin mRNA表达水平分别为0.18±0.002,0.727±0.006,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).体外细胞运动实验表明,对照组、转染shRNA-1和SlugshRNA-1组跨膜细胞数393±28、352±24、96±13,差异有统计学意义(P＜0.01).重组细胞基底膜(Matrige1)侵袭实验显示,3组穿透基底膜细胞数分别为223±69、202±64、65±19,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Slug高表达,E-cadherin低表达与胰腺癌的转移相关.胰腺癌细胞中存在Slug mRNA与E-cadherin mRNA表达的逆转关系,抑制Slug mRNA的表达对胰腺癌细胞的侵袭和运动有抑制作用,可能为胰腺癌转移的基因治疗提供新的靶点.

Abstract：

Objective To investigate expression of slug and E-cadherin in pancreatic cancer tissues and determine the inhibitory effects of anti-Slug, an anti-sense plasmid, on the invasion of pancreatic cancer cell lines in vitro. Methods Slug and E-cadherin protein and mRNA was analyzed by IHP and RT-PCR in 36 cases of pancreatic cancer. Then anti-Slug plasmid was transfected into herin and Slug expression. The inhibitory effects of anti-sense Slug were also detected by Transwell motility assay and Matrigel invasion assay. Results The expression of Slug and mRNA in metastatic pancreatic cancer tissue was higher than that in non-metastatic tissue. E-cadherin and mRNA was lower in metastasis tissues(P＜0.05). The inverse relationships were further observed by transient transfection of anti-Slug into SW1990H4 cells. The downregulated expression of Slug and re-expression of E-cadherin were found. The Slug mRNA levels were 0.985±0.016,0.973±0.014, 0. 554±0. 011 after 0, 48 h of transfection of anti-sense Slug, and that of E-cadherin were 0.120±0.001, 0.360±0.002, 0. 727±0. 006, respectively. The diference was significant between different time points (P＜0.05). The Slug mRNA levels were 0. 206±0.017, 0.968±0.015, and that of E-cadherin were 0. 18±0.002,0.727±0.006 after stable transfection of anti-sense Slug, and control plasmid, respectively. The diference was significant (P＜0.05). The motility activity(393±28, 352±24, 96 ±13 )and the invasion activity (223 ± 69, 202 ± 64, 65 ±19) of1 antisense Slug transfectant cells were significantly decreased as compared with those of control cells (P＜0.05). Conclusions Higher expression of slug and lower expression of E-cadherin is related to the invasion and metastasis in pancreatic cancer. A reverse corelation of E-cadherin and Slug expression exists in pancreatic cancer. Slug is possibly a potential target for cancer gene therapy blocking invasion and metastasis in human pancreatic cancer.     

miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及其作用

目的:探讨miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR检测miR-519d在胰腺癌细胞系AsPC-1、BxPC-3、Capan-2、Panc-1及正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7中的表达。将Panc-1细胞分别转染miR-519d过表达质粒(miR-519d组)与阴性对照质粒(阴性对照组),以无处理的Panc-1细胞为空白对照组,用MTT法、Transwell实验、Western blot分别检测转染后细胞的增殖和侵袭能力、凋亡情况以及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达。结果:各胰腺癌细胞系中miR-519d相对表达量均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);与空白对照组比较,miR-519d组细胞增殖能力降低(培养72 h后明显降低)、凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱、XIAP蛋白表达量明显降低(均P0.05);阴性对照组各项指标与空白对照组差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:miR-519d在胰腺癌细胞中表达下调,miR-519d表达下调有增强胰腺癌细胞增殖和侵袭能力、降低凋亡的作用,该作用可能与其调节XIAP蛋白的表达有关。     

畸胎瘤细胞源性生长因子shRNA增强胰腺癌细胞株Panc-1对健择敏感性的研究

目的 通过转染针对畸胎瘤细胞源性生长因子(PCDGF)shRNA至胰腺癌细胞株Panc-1中,观察对健择敏感性的变化,分析PCDGF因子对化疗药物敏感性的影响.方法 免疫组织化学和定量聚合酶链反应(PCR)测定PCDGF在胰腺癌组织中的表达,构建含2条shRNA的RNAi质粒,脂质体转染PCDGF shRNA至Panc-1,测定转染前后细胞对健择敏感性的变化.结果 PCDGF表达于多数胰腺癌细胞的细胞质中(阳性率为84.5%),显示胰腺癌组织PCDGF的表达明显高于胰腺囊腺瘤和胰腺炎(t=11.41,P<0.05),构建PCDGF shRNA质粒经脂质体转染后PC-DGF的表达显著受到抑制(抑制率为82.3%),在较高浓度时,健择的细胞毒作用明显增强.结论 针对PCDGF的shRNA能显著增加Panc-1对健择的敏感性.