子痫前期胎盘组织中CASR和MMP-2表达的研究

目的探讨CASR和MMP-2在子痫前期患者胎盘组织mRNA及蛋白表达水平变化及其与子痫前期发病的关系。方法采用免疫组化法和RT-PCR技术分别检测子痫前期患者42例（子痫前期轻度组21例,重度组21例）及健康足月孕妇32例（对照组）胎盘组织中CASR和MMP-2的mRNA及蛋白表达水平。结果①对照组胎盘CASR的蛋白表达水平与子痫前期轻度组、重度组比较,差异均有统计学意义。②子痫前期重度组中MMP-2蛋白表达,明显低于对照组、子痫前期轻度组,差异均有统计学意义。③胎盘组织中CASR的mRNA表达水平,子痫前期重度组与对照组、子痫前期轻度组比较,差异均有统计学意义。④胎盘MMP-2的mRNA对照组表达与子痫前期轻度组、重度组比较,差异有统计学意义。⑤胎盘组织中CASR蛋白和mRNA水平与MMP-2呈负相关关系。结论子痫前期患者胎盘组织中CASR表达增加,MMP-2表达降低,可能与子痫前期的发病有关。     

肿瘤坏死因子-α在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子-αmRNA(TNF-αmRNA)在子痫前期发病机制中的作用。方法采用RT-PCR技术检测45例正常晚期妊娠妇女及56例子痫前期患者(其中轻度子痫前期21例,重度子痫前期35例)胎盘组织中TNF-αmRNA的表达水平。结果1.轻、重度子痫前期胎盘组织中TNF-αmRNA表达水平分别为:0.371±0.12、0.892±0.347均明显高于正常妊娠组0.138±0.092(均P<0.01),重度子痫前期组高于轻度子痫前期组(P<0.01)。2.子痫前期胎盘组织中TNF-αmRNA与24小时尿蛋白、血压、新生儿体重及胎盘重量均有明显相关性。结论1.子痫前期胎盘组织中TNF-αmRNA表达水平明显升高,并且与子痫前期病情发展密切相关。2.胎盘组织TNF-αmRNA与子痫前期患者胎儿发育密切相关。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物在子痫前期患者胎盘中的基因表达

目的研究子痫前期患者胎盘组织中基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)及其组织抑制物(TIMP-1、TIMP-2)基因mRNA表达,探讨其与子痫前期发病、进展的关系.方法采用半定量RT-PCR方法对30例正常晚期妊娠和50例子痫前期患者(包括24例轻度和26例重度)胎盘组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的mRNA水平进行检测.结果子痫前期组胎盘组织的MMP-9基因表达水平显著下降(P＜0.01),重度子痫前期组MMP-9基因表达水平尤低(0.07±0.05).尽管随病情的加重MMP-2mRNA水平呈现逐渐下降趋势,但没有统计学差异(P＞0.05).子痫前期组胎盘组织中的TIMP-1mRNA水平明显高于正常晚期妊娠者(P＜0.01),重度子痫前期组更高(1.49±0.21).子痫前期组胎盘组织TIMP-2mRNA表达显著降低(1.14±0.36),P＜0.01),并有随病情加重逐渐下降的趋势.结论随子痫前期患者病情的加重,胎盘组织的促浸润基因(MMP-2和MMP-9)表达水平降低,抑侵润基因(TIMP-1)的表达水平升高.子痫前期患者浸润相关基因的表达水平与子痫前期病情密切相关.     

子痫前期病人胎盘组织可溶性endoglin表达及意义

目的 探讨可溶性endoglin(sEng)在子痫前期病人胎盘组织中的表达及其与子痫前期发病的关系.方法 2008年7月-2009年2月,选取在我科住院分娩的子痫前期病人67例,其中轻度31例(轻度子痫前期组),重度36例(重度子痫前期组).选取同期正常晚期妊娠妇女39例为对照组.酶联免疫吸附试验检测各组血清中sEng水平;采用RT-PCR、免疫印迹法分别检测各组胎盘组织中sEng mRNA以及蛋白表达水平.结果 轻度及重度子痫前期组血清sEng水平、胎盘组织sEng mRNA及蛋白表达水平明显高于对照组(F=133.54～779.63,q=13.26～53.88,P<0.01),且重度子痫前期组明显高于轻度子痫前期组(q=8.59～16.79,P<0.01).轻度及重度子痫前期组血清sEng水平与胎盘组织sEng mRNA及蛋白表达水平呈正相关(r=0.781～0.888,P<0.01).结论 子痫前期病人胎盘组织sEng mRNA及蛋白表达上调,导致血清sEng水平升高,从而参与子痫前期的病理生理过程.     

p57kip2 基因在子痫前期患者胎盘表达的研究

目的 探讨p57kip2基因的核酸及蛋白水平在正常孕妇和子痫前期患者胎盘上的表达,探索p57kip2基因与子痫前期发病之间的关系.方法 运用免疫组织化学SP法对p57kip2基因在胎盘组织中的表达进行定位检测;通过逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)对37例重度子痫前期、22例轻度子痫前期及53例正常妊娠胎盘组织中的p57kip2基因的核酸水平进行检测;通过免疫印迹法对纳入对象的p57kip2蛋白表达水平进行检测.结果 免疫组化结果显示p57kip2基因选择性表达于胎盘滋养细胞的细胞核中.RT-PCR结果显示:与正常妊娠组比较,轻、重度子痫前期组p57kip2基因mRNA表达无明显变化(P＞0.05),重度子痫前期组p57kip2基因的mRNA表达水平低于轻度子痫前期组[P＜0.05,95％CI:(-0.736 9,-0.095 8)].免疫印迹结果显示:与正常妊娠组比较,轻、重度子痫前期组p57kip2蛋白表达无明显变化(P＞0.05),但重度子痫前期组p57kiP2蛋白的表达水平低于轻度子痫前期组[P＜0.05,95％CI:(-1.441 7,-0.162 4)].结论 p57kip2基因的核酸和蛋白在重度子痫前期患者胎盘中的表达水平均低于轻度子痫前期患者,提示p57kip2基因可能参与子痫前期的病理过程.     

STAT4、STAT6在子痫前期胎盘组织中的表达及意义

目的:探讨子痫前期患者胎盘组织中信号转导和转录激活因子(STAT)4以及STAT6的表达及意义.方法:采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SABC)法和Western blot法检测30名正常妊娠晚期孕妇(对照组)和50例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度22例、重度28例)胎盘组织中STAT4、STAT6的蛋白定位和表达.结果:STAT4主要表达于绒毛滋养细胞的胞质,胞核多数无明显着色;轻、重度子痫前期组胎盘组织中STAT4的表达均明显高于对照组(P<0.01);STAT6主要表达于绒毛滋养细胞的胞质,胞核多数无明显着色;轻度、重度子痫前期组均显著低于对照组(P<0.01),且轻、重度子痫前期组STAT4和STAT6表达水平差异均有统计学意义(P<0.01).子痫前期组和正常妊娠组绒毛组织中STAT4与STAT6的表达水平均呈负相关关系(r=-0.509,r=-0.617;P<0.01).结论:STAT4、STAT6共同参与子痫前期的病理生理改变,并与病情严重程度有一定关系.     

子痫前期和正常妊娠患者血清及胎盘组织中sFlt-1的表达研究

目的:探讨可溶性血管内皮细胞生长因子受体-1(sFlt-1)在子痫前期患者血清及胎盘组织中的表达及意义。方法:采用酶联免疫吸附试验法检测20例正常晚期妊娠孕妇(对照组)及40例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度20例、重度20例)血清中sFlt-1的表达;采用SP法检测两组胎盘组织中的sFlt-1蛋白的表达;应用RT-PCR技术检测两组孕妇胎盘组织中sFlt-1mRNA的表达水平。结果:1子痫前期组患者血清中sFlt-1水平显著高于正常妊娠组(P<0.05);2子痫前期组患者胎盘组织中sFlt-1蛋白表达强度明显高于对照组(P<0.05);3轻度及重度子痫前期患者sFlt-1mRNA表达水平则显著高于对照组(P<0.05)。结论:sFlt-1在子痫前期患者血清表达升高、胎盘组织中sFlt-1蛋白及mRNA的表达升高,sFlt-1可能参与了子痫前期的病理生理过程。     

正常妊娠妇女及子痫前期病人胎盘组织HIF-2а表达

目的 了解缺氧诱导因子2а(HIF-2а)在正常妊娠妇女及子痫前期病人胎盘组织中的表达及其在子痫前期发病机制中的作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法.检测30例子痫前期病人(子痫前期组,其中轻度11例,重度19例)胎盘组织中HIF一2a mRNA和蛋白的表达水平,并以37例正常妊娠妇女(其中早期妊娠组12例,中期妊娠组10例,晚期妊娠组15例)作为对照.结果 正常妊娠妇女早期妊娠组HIF-2аmRNA的表达水平较晚期妊娠组低,差异有统计学意义(F=5.323,q=4.574,P<0.01);其余各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05).正常妊娠早期妊娠组HIF-2а蛋白表达水平高于中期妊娠及晚期妊娠组,差异有统计学意义(F=11.862,q=6.230、5.672,P<0.01);中期妊娠组与晚期妊娠组比较差异无统计学意义(P>0.05).子痫前期胎盘组织HIF-2а蛋白表达水平高于晚期妊娠组(t=5.174,P<0.01).重度子痫前期与轻度子痫前期组比较差异无显著性(P>0.05).结论 胎盘HIF-2а在正常妊娠胎盘发育过程中发挥作用;胎盘HIF-2а蛋白表达参与子痫前期的病理生理过程.     

子痫前期胎盘床滋养细胞浸润程度及其螺旋动脉和微血管的变化

目的:研究子痫前期胎盘床滋养细胞的浸润程度及螺旋动脉和微血管的变化情况.方法:选择子痫前期轻度,子痫前期重度及正常妊娠产妇各20例.通过HE染色及免疫组织化学方法观察胎盘床底蜕膜和子宫浅肌层中滋养细胞的浸润程度及螺旋动脉和微血管的变化.结果3组滋养细胞的浸润程度的差异主要在子宫浅肌层,子痫前期重度组明显浅于子痫前期轻度组和正常对照组(均P＜0.01);滋养细胞浸润密度自＞1/2底蜕膜层及肌层内,子痫前期重度组明显低于子痫前期轻度组和正常对照组(均P＜0.01).胎盘床底蜕膜、子宫浅肌层螺旋动脉平均管腔面积在子痫前期重度组明显小于子痫前期轻度组及正常对照组,组间比较均有统计学意义(均P＜0.01).螺旋动脉平均管壁厚度在子痫前期重度组明显大于子痫前期轻度组及正常对照组(均P＜0.05).螺旋动脉生理性变化及病理性变化主要发生在子宫浅肌层:螺旋动脉有生理性变化的发生率在子痫前期重度组明显低于子痫前期轻度组和正常对照组(均P＜0.01);病理性变化的发生率在子痫前期重度组高于子痫前期轻度组和正常对照组(均P＜0.01).子痫前期组中螺旋动脉的生理性变化与滋养细胞浸润深度和密度呈正相关(均P＜0.05);病理性变化与滋养浸润深度及密度呈负相关(均P＜0.05).其生理性变化与子痫前期病情程度呈负相关(P＜0.05);病理性变化与子痫前期病情程度呈正相关(P＜0.05).胎盘床滋养细胞浸润子宫浅肌层的深度和密度与子痫前期的病情程度呈负相关(均P＜0.05).正常妊娠胎盘床子宫浅肌层有62.50%的螺旋动脉管壁中可见滋养层细胞浸润,而子痫前期重度组产妇仅见27.50%(P＜0.01).胎盘床底蜕膜及子宫浅肌层微血管密度在子痫前期重度组明显低于子痫前期轻度组和正常对照组(P＜0.01).结论:子痫前期产妇胎盘床存在滋养细胞浅浸润.子痫前期产妇胎盘床滋养细胞浸润改变及胎盘床螺旋动脉的病理形态学变化主要发生在子宫浅肌层中,且与其病情的严重程度相关.子痫前期产妇胎盘床微血管密度自底蜕膜开始减少,提示子痫前期胎盘床微血管发育受阻.     

吲哚胺2,3-双加氧酶在子痫前期病人胎盘组织表达

目的探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)在胎盘组织表达与子痫前期发病的关系。方法采用免疫组化法分别检测30例轻度子痫前期病人、30例重度子痫前期病人和38例正常晚孕妇女胎盘组织IDO蛋白表达,并采用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统分析各组图片IDO阳性细胞的平均吸光度值;RT-PCR法检测各组孕产妇胎盘组织IDO mRNA的表达水平;彩色超声多普勒检测各组孕妇胎儿脐动脉血流阻力指数(RI),并分别测量各组新生儿出生体质量。结果各组孕产妇胎盘组织均有IDO蛋白表达,且主要表达于胎盘合体滋养细胞的胞质中,胎盘间质细胞及血管内皮细胞胞质中也可见少量表达。轻度子痫前期组及重度子痫前期组孕产妇胎盘组织IDO阳性细胞平均吸光度明显高于正常晚孕组,差异有显著性(F=462.895,q=3.474、11.002,P<0.01);重度子痫前期组高于轻度子痫前期组,差异有统计学意义(q=22.491,P<0.01)。轻度及重度子痫前期组胎盘组织IDOmRNA表达水平较正常晚孕组显著降低,差异均有统计学意义(F=90.032,q=8.457、16.913,P<0.01);且重度子痫前期组胎盘组织IDO mRNA表达水平明显低于轻度子痫前期组,差异有统计学意义(q=8.000,P<0.01)。子痫前期组孕产妇胎盘组织IDO mRNA表达水平与其胎儿脐动脉RI呈负相关(r=-0.445,P<0.01),与其新生儿出生体质量呈正相关(r=0.449,P<0.01)。结论子痫前期病人胎盘组织IDO表达下降可能是子痫前期发病的原因之一。     

调控RECK基因表达对早孕绒毛外滋养细胞MMP-2活化及细胞侵袭力的影响

目的观察RECK基因过表达对人早孕绒毛外滋养细胞系TEV-1的MMP-2活化比例及细胞侵袭力的影响。方法以脂质体Lipofectamine^TM 2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入TEV-1细胞，以获得稳定转染目的基因的TEV-1细胞株。RT-PCR、流式细胞术检测目的基因的表达；明胶酶谱法、Transwell侵袭小室实验分别检测TEV-1细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和细胞生长曲线法观察质粒DNA转染的细胞毒性情况。结果目的基因RECK在TEV-1细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达；明胶酶谱显示重组质粒pcDNA3-RECK转染组活化的MMP-2比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组（均P〈0.05），Transwell侵袭实验显示重组质粒pcDNA3-RECK转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组（均P〈0.01）；MTT法测重组质粒pcDNA3-RECK转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异。结论RECK过表达可显著减少绒毛外滋养细胞的MMP-2活化及其侵袭能力，可能参与了早孕绒毛外滋养细胞侵蚀机制。     

Correlation of RECK with Matrix Metalloproteinase-2 in Regulation of Trophoblast Invasion of Early Pregnancy

Trophoblast invasion into maternal decidualized endometrium and the proximal one third of the myo-metrium is one of the keys of successful human preg-nancy. At present, the mechanisms of trophoblast inva-sion regulation are still not fully understood. Many re-searches showed that matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) was closely correlated with trophoblastic inva-sion[1]. RECK gene is a newly discovered endogeneous inhibitor of MMPs in recent years[2]. Researches found that RECK is one of n…     

基质金属蛋白酶抑制基因RECK在早孕自然流产绒毛组织中的表达及意义

目的观察早期自然流产患者绒毛组织中RECK基因（基质金属蛋白酶（MMP）抑制基因）的表达及其与MMP-2、-9之间的关系。方法采用半定量RT-PCR和Western blotting法检测20例早期自然流产患者和20例正常早期妊娠绒毛组织中RECK、MMP-2和MMP-9基因的表达情况。结果①早期自然流产患者绒毛组织中MMP-2及MMP-9的mRNA表达水平低于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）;RECKmRNA的表达高于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）。②自然流产患者绒毛组织中MMP-2、MMP-9蛋白表达低于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）;RECK蛋白表达高于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）。③RECK蛋白与MMP-2、MMP-9蛋白之间存在明显的负相关。结论RECK表达的增加进而抑制MMP-2、MMP-9的活化,致使滋养细胞侵袭能力下降,可能与孕早期自然流产的发生有关。     

子痫前期患者胎盘组织中内皮分化基因2的表达

目的:探讨子痫前期患者胎盘组织中内皮分化基因(Edg)2蛋白和mRNA的表达及意义。方法:应用免疫组化SP和RT-PCR方法检测20例正常晚孕妇女、20例子痫前期轻度和20例子痫前期重度患者胎盘组织中Edg2蛋白和mRNA的表达。结果:3组胎盘绒毛滋养和蜕膜细胞中Edg2蛋白以及胎盘组织Edg2mRNA的表达差异有统计学意义(F/χ2=19.063、19.063和2232.999,P<0.001),子痫前期轻度和重度组高于正常晚孕组,子痫前期重度组高于子痫前期轻度组。结论:胎盘组织中Edg2的异常表达可能与子痫前期的发生和发展有关。     

RECK基因在前列腺癌组织中的表达及其与基质金属蛋白酶的关系

目的:通过检测RECK基因以及基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)在前列腺癌组织及正常前列腺中的表达,探讨RECK基因在前列腺癌发生及转移过程中的作用。方法:抽取组织总RNA,应用RT PCR方法检测RECK及MMP2、MMP9mRNA的表达;抽取组织总蛋白,应用Westernblot方法检测RECK蛋白的表达。结果:前列腺癌组织RECKmRNA的含量较正常组织明显降低(P<0.05),MMP2、MMP9mRNA含量则明显升高,RECK蛋白的表达亦较正常组织明显降低。结论:RECK是一种抑癌基因,可抑制MMP2、MMP9的表达,从而抑制前列腺癌的发生和转移。     

前列腺癌细胞株中RECK基因的表达及其与MMP的关系

目的:检测RECK基因及MMP-2、MMP-9在不同前列腺细胞株BPH-1、DU-145、LNCap以及PC-3中的表达,探讨其表达差异及其意义.方法:应用RT-PCR检测4种不同前列腺细胞株RECK及MMP-2、MMP-9 mRNA的表达;应用Western印迹法检测不同前列腺细胞株中RECK蛋白的表达.结果:前列腺癌细胞株DU-145、LNCap以及PC-3中RECK mRNA的表达较良性前列腺增生细胞株BPH-1中明显降低(P<0.01),MMP-2、MMP-9 mRNA表达则明显升高(P<0.01).另外,DU-145、LNCap以及PC-3细胞株中RECK蛋白的表达较正常组织明显降低(P<0.01). 结论:RECK基因在前列腺癌中的表达量明显下降,而MMP-2、MMP-9的表达量明显升高,RECK基因可能通过抑制MMP-2、MMP-9的表达起到抑癌基因的作用.     

RECK及MMP-2在膀胱移行细胞癌中的表达及其与侵袭复发的关系

目的:探讨RECK及MMP-2在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义.方法:采用免疫组化法检测42例膀胱移行细胞癌及13例正常膀胱黏膜组织中RECK及MMP-2的表达.结果:在肿瘤组织中RECK的表达阳性表达率为52%(22/42),明显低于正常膀胱黏膜组织(85%,11/13),而MMP-2在癌组织中的阳性表达率为74%(31/42),明显高于正常膀胱黏膜组织(23%,3/13)(P<0.05).RECK随临床病理分期升高及复发而表达降低(P<0.05),MMP-2表达随肿瘤组织学分级、病理分期和肿瘤复发显著升高(P<0.05).RECK与MMP_2表达旱负相关.结论:RECK和MMP-2的表达与膀胱移行细胞癌的侵袭、转移和复发密切相关,可作为膀胱移行细胞癌预后判断的生物学指标.     

VEGF蛋白在子痫前期胎盘中的表达及意义

目的：检测子痫前期胎盘的VEGF蛋白表达水平,探讨子痫前期的发病机制。方法：采用免疫组织化学方法结合病理图像分析技术,定量分析10例正常妊娠组、17例轻度子痫前期组和13例重度子痫前期组胎盘VEGF蛋白表达。结果：VEGF蛋白主要表达与胎盘绒毛滋养细胞的胞膜及胞浆内。与正常妊娠组比较,子痫前期组胎盘VEGF蛋白表达显著减少,轻度、重度子痫前期组比较,有显著性差异。结论：子痫前期患者胎盘滋养层细胞VEGF蛋白表达减少可能是子痫前期的发病机制之一,从而为临床治疗子痫前期提供新的方向。