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1.
目的 研究凋亡抑制基因bcl 2硫代反义寡核苷酸 (S ODN)转染T2 4细胞后对顺铂药物敏感性影响。方法 将培养细胞分为 6组 :反义S ODN组 ,正义S ODN组 ,反义S ODN +顺铂组 ,正义S ODN +顺铂组 ,顺铂组和对照组。应用脂质体法介导bcl 2正义、反义S ODN转染T2 4细胞。通过免疫细胞化学方法观察细胞内BCL 2的蛋白表达 ,RT PCR方法检测细胞内bcl 2mR NA的相对表达量 ,MTT法测经顺铂 (cis platinum)处理的各组细胞的生成率 ,流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡率。结果 bcl 2反义S ODN处理过的T2 4细胞中BCL 2蛋白和bcl 2mRNA表达明显下降。顺铂对反义S ODN组细胞的半抑制浓度 (IC50 )为 (2 .2 5± 0 .0 9) μg/ml显著低于正义S ODN组 (5 .83± 0 .15 ) μg/ml和对照组 (6 .11± 0 .2 1) μg/ml(P <0 .0 1)。顺铂处理反义S ODN组细胞的凋亡率显著高于其它组。结论 bcl 2反义S ODN能显著抑制T2 4细胞中BCL 2蛋白的表达并增强T2 4细胞对顺铂的药物敏感性 相似文献
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bcl-2基因表达在人卵巢癌多药耐药现象中的作用 总被引:5,自引:0,他引:5
为探讨凋亡抑制基因bcl-2的表达在人卵巢癌顺铂耐药现象中的作用,采用DNA电泳,流式细胞仪技术及逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,分别对顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株COC1及耐药株COC1/DDP的细胞凋亡及其bcl-2基因表达进行研究.结果发现①不同浓度顺铂作用下敏感细胞株和耐药细胞株中均见凋亡梯度,且随顺铂浓度的增加凋亡梯度增大.②不同浓度顺铂作用下流式细胞仪分析结果显示耐药细胞株中凋亡率明显低于敏感细胞株(P<0.05).③耐药细胞株中bcl-2基因表达明显强于敏感细胞株.在顺铂作用下敏感细胞株和耐药细胞株中bcl-2基因表达下调.结果表明顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡;凋亡抑制基因bcl-2在人卵巢癌多药耐药细胞中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制的重要原因. 相似文献
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目的分析miR-130a在卵巢癌顺铂耐药细胞株中的表达,探讨miR-130a与卵巢癌对顺铂耐药的关系。方法以浓度梯度递增法构建卵巢癌耐顺铂细胞株,MTT法对耐药细胞株进行鉴定并测定耐药指数,应用荧光实时定量PCR检测并分析各细胞株中miR-130a的表达。结果成功构建卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/CIS1、A2780/CIS2和SKOV3/CIS(P<0.05),其耐药指数分别为30.2、5.3和24.5。荧光实时定量PCR结果显示miR-130a在卵巢癌耐药细胞株中存在稳定的异常高表达(P<0.05),A2780/CIS1、A2780/CIS2以及SKOV3/CIS中miR-130a表达分别较亲本细胞平均上调30.51倍、4.87倍和24.43倍。各耐药细胞中miR-130a表达上调倍数接近于各自的顺铂耐药指数。结论 miR-130a表达的上调可能与卵巢癌细胞株对顺铂的耐药性密切相关。推测抑制miR-130a的表达有助于逆转卵巢癌顺铂耐药性,miR-130a有望成为逆转卵巢癌顺铂耐药性的潜在基因治疗靶点。 相似文献
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目的探讨MDR1反义寡脱氧核苷酸(Antisense oligodooxynucleotide,ASODN)片段逆转人胃腺癌耐药细胞SGC7901/ADM耐药的可行性。方法经MDR1 ASODN转染SGC7901/ADM细胞后,采用MTT法检测瘤细胞对阿霉素抗癌药的敏感性;采用流式细胞术检测细胞周期的改变、细胞内Rh123的潴留状况;采用免疫细胞化学检测MDR1蛋白质表达水平的变化。结果SGC7901/ADM细胞经MDR1 ASODN转染48小时后,对阿霉素化疗药物的敏感性增强,细胞对阿霉素的半数抑制浓度(IC50)由转染前的16.82μg/ml降至2.66μg/ml;与未经转染的SGC7901/ADM相比,ASODN/LF转染后出现明显的细胞周期阻滞,大量细胞被阻滞于S期;瘤细胞内RH123的潴留量显著高于转染前;瘤细胞内P-gp、MRP的表达显著下降。结论转染MDR1 ASODN可部分逆转人胃腺癌耐药细胞SGC7901/ADM耐药。 相似文献
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目的 研究脂质体莪术醇(LC)对人卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用及其机制。方法 采用卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP,细胞分为5组:空白对照组、阴性对照组(含12.5μg/ml脂质体)、顺铂组(4μg/ml)、LC组(20μg/ml)、联合组[顺铂(4μg/ml)+LC(20μg/ml)],CCK-8检测各组细胞增殖能力,高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内顺铂平均含量,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR检测P糖蛋白(P-gp)的mRNA相对表达量,免疫细胞化学和Western blot检测各组细胞P-gp蛋白的表达情况。结果 联合组细胞增殖能力最低,凋亡率最高(P<0.05);联合组细胞内顺铂平均含量大于顺铂组(P<0.05);联合组细胞的P-gp mRNA和蛋白相对表达量低于单用顺铂组(P<0.05)。结论 LC可通过抑制P-gp的表达,降低人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。 相似文献
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卵巢癌是严重威胁妇女健康的恶性肿瘤之一,近几年卵巢癌的发病率有增高的趋势,据报道,美国2007年有22430例卵巢癌新发病例。由于卵巢癌发病隐匿和缺乏完善的早期诊断方法,约70%患者确诊时已为晚期(FIGO分期,Ⅲ期和Ⅳ期),其死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。在细胞减灭术的基础上施以以顺铂为主的联合化疗方案已成为卵巢癌的常规治疗方案。但由于卵巢癌患者对顺铂的原发性(primary drug resistance)和(或)获得性(acquired resistance)多药耐药(multiple drug resistance,MDR)的存在, 相似文献
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目的采用一段人工合成的互补于人mdr1基因的反义硫代硫酸脱氧寡核苷酸(简称反义核酸)转染白血病多药耐药细胞株K562/ADM,来逆转白血病细胞的多药耐药。方法MTT法检测K562/ADM细胞对阿霉素的IC50,流式细胞仪分析细胞内的柔红霉素含量,免疫细胞化学染色方法确定P170的表达水平,RT-PCR检测mdr1-mRNA的相对水平(mdr1/β2-MG)。结果浓度为2μmol的反义核酸使K562/ADM细胞对阿霉素的IC50从处理前的25.72μg/ml降至处理后的6.97μg/ml,相对逆转效率为73.01%。反义核酸亦使K562/ADM细胞内的柔红霉素含量增加,P170表达阳性率从处理前的98.6%±1.0%降至处理后的18.3%±0.7%,mdr1/β2-MG下降了0.5,mdr1-mRNA相对水平有所下降。结论反义核酸通过下调mdr1基因,阻断P170的表达,从而降低K562/ADM的耐药性。 相似文献
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bcl-2反义寡核苷酸对膀胱癌BIU87细胞株的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨bcl-2反义寡核苷酸对培养的膀胱癌BIU87细胞株的影响.方法:采用bcl-2基因第1外显子的反义寡核苷酸,以硫代磷酸修饰(PS-ASON),序列为5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′,与膀胱癌细胞株BIU87共同孵育作为实验组.加入正义的bcl-2寡核苷酸,序列为5′-TACCGCGTGCGACCCTCT-3′(PS-SON)作为对照组,用流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死率,电镜观察细胞形态变化.结果:与对照组相比,实验组的细胞坏死率明显上调,电镜下细胞形态呈坏死改变.结论:bcl-2的反义寡核苷酸引起膀胱癌细胞大量坏死,可能成为膀胱癌的治疗方法之一. 相似文献
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目的:观察卵巢癌SKOV-3细胞转染chk2反义寡核苷酸后在顺铂作用下细胞凋亡的变化.方法:用MTT法检测不同浓度顺铂对SKOV-3细胞的抑制率,Western Blot法检测SKOV-3细胞中Chk2蛋白的表达. 流式细胞仪及TUNEL法检测转染chk2反义寡核苷酸后顺铂作用下SKOV-3细胞凋亡情况.结果:顺铂对SKOV-3细胞的生长抑制率随浓度增高和时间延长而升高. Western Blot法检测证实转染chk2反义寡核苷酸后SKOV-3细胞中Chk2蛋白表达受到明显抑制. 流式细胞仪检测抑制chk2基因表达后SKOV-3细胞凋亡率为(77.6±1.7)%,明显高于正常组(24.7±1.76)%,空脂质体组(35.6±1.4)%及转染正义寡核苷酸细胞组(47.6±1.2)%. TUNEL法检测结果与流式细胞法一致.结论:chk2可作为卵巢癌增敏治疗的有效靶点. 相似文献
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目的:探讨克服肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistance,MDR)的有效方法。方法:用反义硫代磷酸寡聚脱氧核苷酸(asODN)对Hep-2v细胞进行多药耐药(MDR)逆转实验,(1)将Hep-2细胞经长春新碱(vcR)筛选建立Hep-2v耐药细胞株为靶细胞;(2)针对mdrl mRNA序列计算机辅助设计人工合成两个15mer反义寡聚脱氧核苷酸序列:asODN Ⅰ、Ⅱ,以硫代法修饰,其中序列Ⅰ和Ⅱ的作用位点相邻接,互补位点为MDR-mRNA的330~359碱基;(3)MDR逆转实验:两个反义序列分别或联合作用于Hep-2v细胞,MTT法测定反义核酸作用前后vcR对Hep-2v细胞IC50,比较其细胞毒作用;用流式细胞仪(FcM)检测反义核酸作用后各实验组细胞表面糖蛋白P-170的阳性率;RT-PCR法检测mdrl mRNA表达水平。结果:两个反义核酸均使Hep-2v细胞的P-170阳性率下降,mdrl mRNA水平低调,VCR对Hep-2v的细胞毒作用IC50从900nmol/L降至<200nmol/L。结论:两个反义核酸用于Hep-2v的MDR均获得明显的逆转效果,序列Ⅰ Ⅱ联合作用的效果更强,表明两个序列可能有协同作用。 相似文献
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目的研究COX-2反义寡核苷酸(AS-ODNs)对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响。方法体外设计、合成针对COX-2的反义寡核苷酸,并转染宫颈癌Hela细胞,应用细胞蛋白印记法(West-blot)测定转染COX-2反义寡核苷酸后Hela细胞COX-2基因蛋白的表达变化,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测(MTT)COX-2反义寡核苷酸转染后Hela细胞对顺铂敏感性的变化。结果转染针对COX-2的反义寡核苷酸后,在24、48和72h,Hela细胞COX-2蛋白的表达水平下降;在转染48h后,Hela细胞对顺铂的半数抑制量从(10.475±1.713)μg/ml提高到(0.194±0.021)μg/ml,Hela细胞对顺铂的敏感性增加了53.88倍。结论COX-2反义寡核苷酸能增加宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性。 相似文献
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目的:研究bcl-2反义寡核苷酸对肾细胞癌细胞的生长抑制作用及剂量一效应关系。方法:设计、合成与已知人类基因无同源性的bcl-2反义寡核苷酸(AS1翻译起始端,AS2编码区),以阳离子脂质体Lipofectin转染不同的肾癌细胞株,MTS比色实验测定细胞活率。结果:单纯Lipofectin、反义寡核苷酸及正义寡核苷酸处理,对肾癌细胞ACHN生长无抑制作用,而转染入细胞内的反义寡核苷酸可抑制多种肾癌细胞的生长(ACHN、RCW和OSRC-2),且抑制作用与剂量呈正相关。结论:bcl-2反义寡核苷酸可剂量依赖性抑制多种肾癌细胞的生长。 相似文献
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人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及其耐药机制的研究 总被引:24,自引:1,他引:23
目的 通过建立人卵巢癌体外耐药模型,研究卵巢癌对顺铂的耐药机制。方法应用顺铂连续作用并逐步提高药量的递增压力选择法,从人卵巢腺癌细胞COC1中分离出对顺铂耐药的细胞亚株(COC1/DDP),并比较耐药细胞和亲代细胞某些生物学特性差异。结果COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性是COC1的6.5倍,群体倍增时间较亲代细胞缩短了12.9%。对卡铂和丝裂霉素C有不同程度的交叉耐药性,对阿霉素和5-氟尿嘧啶则保持敏感。并且耐药细胞内铂离子含量及DNA链间交联指数均明显低于COC1细胞,但免疫细胞化学显示COC1及COC1/DDP细胞内均无P糖蛋白表达。结论COC1/DDP细胞对顺铂耐药的主要原因是细胞内药物浓度降低及DNA链间交联形成减少,与P糖蛋白关系不大。 相似文献
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Currently, surgery-oriented treatment plays a major role in the treatment of ovarian cancer patients. But 5-year survival rate of patients is still around 30%. One of the main reasons for the Iow survival rate is the drug resistance of tumor cells against chemotherapy.1,2 The function of antiapoptosis in the course of initiation and progress of cancer has a close relationship with drug resistance of tumor cells. Survivin is a new discovered anti-apoptosis gene, its expression levels correlating with more aggressive disease and poor clinical outcome in many of these tumors. It has been reported that survivin is expressed during fetal development and in cancer tissues.3 Furthermore,survivin overexpression, by disrupting the balance between cell proliferation/differentiation and apoptosis, may relate with the resistance to a variety of apoptotic stimuli, including chemotherapy.4,5 We designed antisense oligonucleotides of survivin to treat the drug-resistant human ovarian carcinoma cell line COC1/DDP, and studied its effects on inducing COC1/DDP apoptosis. The purpose of this study was to find a novel approach to improve the sensitivity of ovarian carcinoma chemotherapy. 相似文献
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目的探讨土贝母皂苷甲(tubeimoside 1,TBMS1)促进人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂(cisplatin,DDP)的增敏作用。方法采用MTT法分别检测顺铂和TBMS1对A2780/DDP细胞作用的半抑制浓度值(IC50),将实验分为对照组:只加等量生理盐水;顺铂组:给予6μmol/L顺铂处理;联合用药Ⅰ组:6μmol/L顺铂+3μmol/L TBMS1;联合用药Ⅱ组:6μmol/L顺铂+6μmol/L TBMS1。按上述方法处理细胞后,MTT法检测细胞活力;电泳法检测细胞内DNA损伤;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期;Western blot分析周期蛋白A(Cyclin A)和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果 TBMS1(3、6μmol/L)与顺铂(6μmol/L)联用使人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性增强;细胞的DNA损伤随TBMS1浓度的增加而明显增多;细胞周期被阻滞在S期,联合用药Ⅰ和Ⅱ组S期所占比例分别为(51.23±3.53)%、(77.34±2.80)%;细胞凋亡率为(5.19±0.78)%、(7.11±1.06)%;Cyclin A的表达为1.89±0.28及2.91±0.43,CyclinD1为0.66±0.09及0.28±0.05(P<0.05,P<0.01)。结论 TBMS1显著增加顺铂对A2780/DDP细胞增殖抑制作用,Cyclin A、Cyclin D1可能参与其调节。 相似文献
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目的:探讨转录激活因子-2(ATF-2)、切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达在卵巢上皮性癌顺铂化疗耐药中的意义。方法:应用SP法检测56例石蜡包埋卵巢癌标本及RT-PCR方法检测34例卵巢癌新鲜组织ATF-2、ERCC1蛋白及mRNA的表达,分析其与顺铂耐药的关系以及二者的相关性。结果:ATF-2表达与患者年龄、组织学类型及有无腹水无关,不同手术分期其表达差异有统计学意义(P〈0.05)。ERCC1表达与卵巢上皮性癌患者年龄、手术分期、病理组织学类型及有无腹水无关(P〉0.05)。顺铂化疗耐药组ATF-2、ERCC1蛋白的阳性表达率分别为69.23%、73.08%,高于化疗敏感组33.33%、46.67%,组间差异有统计学意义(P〈0.05)。RT-PCR结果显示34例卵巢上皮性癌新鲜组织ATF-2/β-actin mRNA、ERCC1/β-actin分别波动于0.181~2.276、0.294~3.060,化疗耐药者ATF-2 mRNA、ERCC1 mRNA相对表达量分别为1.132±0.645、1.565±0.714,亦高于敏感组0.651±0.461、0.594±0.268,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:ATF-2、ERCC1表达与卵巢上皮性癌顺铂耐药有关,可能成为预测卵巢癌顺铂敏感性指标。 相似文献
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脂质体介导Bcl-2反义寡核苷酸对胆管癌细胞株QBC939的作用 总被引:4,自引:2,他引:2
目的:观察Bcl-2反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(ASODN)对人胆管癌QBC939细胞的作用及对Bcl-2蛋白表达的影响。方法:脂质体LipofectamineTM2000介导Bcl-2 ASODN转染QBC939细胞,应用台盼篮拒染实验检测细胞存活率、克隆形成实验检测克隆形成率、Western blot检测Bcl-2蛋白表达。结果:Bcl-2 ASODN转染后Bcl-2蛋白免疫印迹条带光密度显著低于对照组(P<0.01);台盼篮拒染实验和克隆形成实验均显示Bcl-2 ASODN可以部分抑制QBC939细胞增殖,经ASODN作用,细胞的存活率和克隆形成率均显著低于对照组(P<0.05)。结论:Bcl-2 ASODN通过封闭人胆管癌QBC939细胞bcl-2基因表达抑制人胆管癌QBC939细胞的增殖。 相似文献