体外培养大鼠骨髓基质细胞分化为成骨细胞新方法的建立和鉴定

目的 改进成骨细胞骨髓培养法并进行鉴定。方法 建立分离和培养大鼠骨髓基质细胞(MSC)的新方法，并用活细胞形态学观察、HE染色、组织化学和放射免疫测定等技术进行观察和鉴定。结果 MSC呈典型的成纤维样细胞，细胞生长旺盛，增殖能力强。体外培养第40d后碱性磷酸酶、骨钙素量达到最高峰，维持至第60d左右开始下降。结论改进后的成骨细胞骨髓培养法具有分离时间缩短、污染机会减少、工作效率提高等优点．并且有助干MSC分化和增殖为具有良好功能特件的成骨细胞。     

大鼠颅盖骨成骨细胞的体外培养及期货间性力学特性研究

本文以乳大鼠颅盖肌为材料，体外成功分离及培养了大鼠颅盖骨成骨细胞＾「１，２」，并对细胞形态、细胞内碱性磷酸酶（ＡＫＰ）染色、营养液中骨钙素检测等方面进行了鉴定。在此基础上利用微管吸吮技术和线弹性半无限体模型研究了大鼠成骨细胞的被动变形特性，测定了大鼠成骨细胞的杨氏模量，并研究了秋水仙素对成骨细胞弹性性质的影响，经秋水仙素处理后的成骨细胞与正常组成骨细胞相比，其杨氏模量没有显著性改变。这一结果将为进     

大鼠成骨细胞的原代培养和鉴定

背景：组织工程需要大量的种子细胞,成骨细胞已成为骨组织工程构建的重要种子细胞之一。但成骨细胞取材困难,获得的成骨细胞的纯度不一。 目的：建立大鼠新生乳鼠颅骨来源成骨细胞的分离培养纯化方法,观察颅骨来源成骨细胞生物学特点。 方法：采用二次酶消化法对SD大鼠乳鼠成骨细胞进行原代培养,扩增。通过差速贴壁法进行成骨细胞纯化。通过形态学、细胞碱性磷酸酶检测、茜素红染色、钙结节Von kossa法染色、超微结构以及细胞增殖曲线,确定其增殖与成骨活性。 结果与结论：二次酶消化法培养颅骨来源成骨细胞可获得原代细胞增殖,传代扩增细胞具有典型成骨细胞形态学和生物学活性。碱性磷酸酶、茜素红染色、钙结节Von kossa法染色均呈阳性结果。超微结构显示为高分化功能活跃成骨细胞,细胞增殖曲线显示细胞生长活跃。提示,新生SD大鼠颅骨来源成骨细胞具有良好的增殖与成骨活性,能连续传代增殖,纯度高,细胞生物学特征稳定,适用于做体外实验研究。     

骨组织块法和酶消化法联合培养人成骨细胞

背景：成骨细胞培养难度大,不同培养方法得到的成骨细胞数量、纯度、增殖及分化活性各有区别。 目的：探讨理想的人成骨细胞体外培养的方法。 方法：取人髂骨松质骨,同时结合骨组织块法和酶消化法分离培养人成骨细胞。 结果与结论：分离培养的人成骨细胞生长状态良好,纯度较高。细胞贴壁生长,形态多样化,多呈多边形、纺锤型、梭形、三角形,胞浆丰富向外伸展出生长突,具有典型的成骨细胞形态特征;细胞增殖良好,碱性磷酸酶染色及矿化结节茜素红染色阳性。说明联合骨组织块法和酶消化法可成功分离培养人成骨细胞,是进行人成骨细胞体外培养较为理想的方法。 关键词：成骨细胞;原代培养;碱性磷酸酶;组织块法;酶消化法 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.07.002     

Wistar大鼠成骨细胞体外分离、培养及初步研究

目的　研究体外分离、培养的Wistar大鼠成骨细胞的生物学物性。　方法　取Wistar大鼠双侧股骨 ,用胰酶冷热交替消化法收集细胞 ,以 1× 10 6 ml的细胞浓度培养 ,2周后得到贴壁生长的单层细胞。随后进入传代培养 ,通过倒置显微镜观察、HE染色、碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原检测等手段对所获得的细胞进行生物学特性研究。　结果　获得的细胞呈多种形态 ,有长短不一、粗细不均 ,互相连接的胞浆突起 ,细胞互相重叠呈复层生长 ,并形成细胞结节。细胞经连续传代 ,形态与功能不变。细胞富含碱性磷酸酶活性 ,Ⅰ型胶原染色阳性 ,这与典型成骨细胞的生物学特性相似。　结论　用骨组织在体外能培养出成骨细胞 ,可作为骨组织工程体外构建的种子细胞。     

新生兔颅骨成骨细胞的体外培养

新生兔颅骨成骨细胞的体外培养张炜真，于世凤，郑麟蕃，朱晓滨成骨细胞的分离方法多采用Ｌｕｂｅｎ［１］报道的酶消化分段收集法，但用多种酶对骨组织进行消化，分离收集成骨细胞时，步骤复杂，在消化分离过程中细胞损伤大，难以存活。我们改良了酶消化分离成骨细胞的方...     

去卵巢山羊成骨细胞的体外培养

选用摘除双侧卵巢的百颅盖骨，体外分离培养成骨细胞，并对分离的成骨细胞做多方面生物学特性鉴定。结果表明：体外培养的去卵巢山百成骨细胞具有典型成骨细胞的形态特征、碱性磷酸酶活性以及在体外发生钙化的功能；证实了体外培养的去卵巢百成骨细胞具有体内成骨细胞的功能特性。为骨代谢的研究提供了新的实验手段。     

成年大鼠成骨细胞体外培养及细胞凋亡的观察

目的　为研究骨重建过程中成骨细胞的关键作用 ,建立成年大鼠成骨细胞体外培养方法并进行细胞凋亡的观察。方法　 1 5周龄SD大鼠 ,在无菌条件下取颅盖骨置于培养瓶中DMEM培养液 ,内含体积分数为 1 0 %的胎牛血清 (FCS) ,在体积分数为 5 %的CO2 、37℃孵箱内培养。按原位DNA末端标记 (TUNEL)检测试剂盒方法染色 ,以荧光显微镜观察凋亡。结果　经活体观察、ABC法Ⅰ型胶原染色和碱性酸酶染色 ,显示培养细胞为成骨细胞。结论　本实验建立了成年大鼠成骨细胞体外培养方法并进行细胞凋亡的观察     

大鼠颅盖骨成骨细胞的体外培养及其弹性力学特性研究

本文以乳大鼠颅盖骨为材料,体外成功分离及培养了大鼠颅盖骨成骨细胞［１ ,２］ ,并对细胞形态、细胞内碱性磷酸酶（ＡＫＰ） 染色、营养液中骨钙素检测等方面进行了鉴定。在此基础上利用微管吸吮技术和线弹性半无限体模型研究了大鼠成骨细胞的被动变形特性,测定了大鼠成骨细胞的杨氏模量,并研究了秋水仙素对成骨细胞弹性性质的影响,经秋水仙素处理后的成骨细胞与正常组成骨细胞相比,其杨氏模量没有显著性改变。这一结果将为进一步研究成骨细胞的离体及在体的主动变形机制,提示成骨细胞的生命活动机理提供了有价值的实验数据     

SD大鼠成骨细胞培养方法的改良

目的:建立大鼠成骨细胞的分离、培养方法,并进行改良。方法:分别应用酶消化法、传统的植块法和采用胶原酶消化结合骨片贴附法进行成骨细胞原代培养,通过细胞形态学、Von Kossa钙结节染色和免疫印迹对细胞纯度进行鉴定,通过生长曲线对3种方法取得的原代细胞生长情况进行比较。结果:3种培养方式均可获得高纯度成骨细胞,应用胶原酶消化结合骨片贴附法可以长期获得具有稳定生物学特征的成骨细胞。结论:胶原酶消化结合骨片贴附法可以较长期获得高纯度成骨细胞。     

动物成骨细胞骨髓培养法的建立和鉴定

为评价改进的成骨细胞骨髓培养法,我们采用密度梯度离心新西兰大白鼠(SD)股骨骨髓中的单个核细胞,分散在含30%马血清的RPMI1640培养液中,按5×105/cm3细胞数量接种于96孔培养板内,置于含5%CO2、37℃饱和湿度培养箱中培养,每3d换培养液1次.细胞鉴定方法用活细胞形态学观察、瑞氏-姬姆萨染色和碱性磷酸酶(ALP)染色,为避免ALP的假阳性率,在破坏细胞内ALP后又作对照染色.结果显示从第5d开始,在倒置显微镜下可见培养细胞从原来的圆形逐渐变成多角形、梭形或鳞形,瑞氏-姬姆萨染色显示成骨细胞的特征性表现,ALP染色阳性在"2+”～"3+”之间,破坏ALP后对照染色阴性.提示,含30%马血清的RPMI1640培养液在体外能把骨髓的单个核细胞培养成为成骨细胞,同时,改进后的成骨细胞骨髓培养法具有培养时间短、污染机会少、工作效率高的优点.     

人尿道黏膜上皮细胞的分离培养与鉴定

目的探讨人尿道粘膜上皮细胞的体外培养技术与鉴定方法,为构建组织工程尿道提供种子细胞。方法取尿道下裂患者尿道粘膜,经消化离心后,接种于培养基中连续培养,观察细胞形态变化及生长、增殖过程,并绘制生长曲线;对细胞进行角蛋白免疫细胞化学染色和Giemsa染色。结果体外培养的细胞呈典型的铺路石样外观,可传至8代;角蛋白免疫细胞化学染色呈阳性;8代细胞为正常2倍体核型。结论人尿道粘膜上皮细胞可在体外进行连续培养,本实验培养的细胞可用于构建组织工程尿道。     

体外器官培养法评价四种高分子材料毒性

本文应用玻璃管架法培养鸡胚股骨的体外器官培养法评价了指关节、Ⅴ型节育环、男性依赖性假体修复件和宫颈帽四种硅橡胶材料,并进行了组织学观察和电镜的超微结构变化检查。结果显示:组织学观察,阴性对照毒性分级为0级,阳极对照毒性分级Ⅳ级,男性依赖性假体修复件硅橡胶的毒性分级为Ⅱ级,余为Ⅰ级。超微结构电镜观察,阴性对照软骨细胞呈双核,核大,核膜完整,胞浆中的内质网丰富,有少量空泡。阳性对照细胞明显变性,胞膜破裂,细胞器溶解,部分核膜破裂,核内有空泡变性。男性依赖性假体修复件硅橡胶所致细胞浆内部分区域细胞器结构不清楚,粗面内质网数目较少,显示了轻微的毒性反应,其它三种材料未见异常,四种材料中以男性依赖性假体修复件材料对组织器官的影响较为明显,但均属轻度毒性反应。     

CIK细胞的体外培养与细胞毒作用

CIK(cytokine-induced killer)细胞在体外可以快速扩增,具有高效的非MHC限制性杀瘤活性,被认为是抗肿瘤过继细胞免疫治疗的新希望。随着细胞操作及基因修饰技术的日益精进,人们正逐渐改进CIK细胞的体外培养和处理方法,以便进一步提高CIK细胞的增殖率及特异杀伤力,使其更好地应用于临床。     

人角膜缘干细胞的体外原代培养和生物学鉴定

目的　建立人角膜缘干细胞体外培养方法,观察其生物学特性。方法　用含20%胎牛血清1640培 养液对人角膜缘干细胞进行体外培养,进行形态学观察和免疫细胞化学鉴定。结果　植块3～4d后细胞开始贴壁 生长,10～15d形成良好的单层,细胞呈圆形、卵圆形,类角膜上皮细胞;免疫细胞化学染色显示,培养第11d,少量 细胞表达AE5,大量细胞表达p63。结论　应用20%胎牛血清1640培养液组织培养的方法获得的原代培养细胞具 有与正常角膜缘干细胞相一致的生物学特性。     

成骨细胞和支架材料复合的研究进展

应用骨组织工程技术修复大的骨缺损成为近年来的研究热点。而成骨细胞和支架材料在体外的复合，是组织工程研究的重点和难点之一。通过对材料的改性处理，增强其亲水性，提高骨诱导性；改进细胞种植方法等促进细胞复合后的增殖、分泌基质；引进应力应变作用，模拟体内微环境，促进蛋白质分泌等。就此方面的研究进展作一综述。     

成骨细胞和支架材料复合的研究进展

应用骨组织工程技术修复大的骨缺损成为近年来的研究热点。而成骨细胞和支架材料在体外的复合,是组织工程研究的重点和难点之一。通过对材料的改性处理,增强其亲水性,提高骨诱导性;改进细胞种植方法等促进细胞复合后的增殖、分泌基质;引进应力应变作用,模拟体内微环境,促进蛋白质分泌等。就此方面的研究进展作一综述。     

中药含药血清对体外成骨细胞增殖和分化影响的实验研究进展

近年来不少学者从细胞分子生物学角度开展了中医药对成骨细胞(OB)影响的实验研究,为中医药防治骨质疏松提供了分子生物学理论依据,其中运用体外成骨细胞培养和中药血清干预实验,研究骨质疏松的中药防治是常用的方法之一,也是中药防治骨质疏松症研究热点之一,本文主要回顾了含药血清对成骨细胞的增殖与分化方面的相关文献,这些研究对中药防治骨质疏松症奠定了基础。     

中空纤维生物反应器的构建及其体外灌流实验

设计原代培养的乳猪肝细胞构建生物反应器,并观察肝细胞生长特点,进行体外灌流实验。采用改良的原位胶原酶灌流法分离乳猪肝细胞及间质细胞,在中空纤维舱的纤维外间隙中共培养,并间断旋转抑制细胞贴壁。用该生物反应器建立人工肝系统,对肝硬化病人的腹水进行体外灌流实验。结果表明,乳猪原代肝细胞平均产量为(6.29±0.37)×108细胞,肝细胞的活性为84%;在纤维外间隙内间断转动培养3 h后肝细胞聚合成球。电镜可见,多个肝细胞聚合成团生长,培养的肝细胞有功能性结合,并向组织型转化。测定中空纤维舱内连续48 h培养液尿素浓度,证实肝细胞聚合体有很好的尿素合成功能。体外灌流后,生物反应器组腹水总胆红素下降,A ST升高,与对照组相比有显著性差异。生物反应器组葡萄糖浓度下降,对照组无显著变化,两组间有显著性差异。通过本组实验,证实了我们设计的生物反应器所构成的生物型人工肝(BAL)是有效的。