2005年苏州地区呼吸道感染儿童中流感病毒的检测与分析

目的对2005年苏州地区呼吸道感染儿童中流感病毒进行流行季节的监测和分析。方法用直接免疫荧光法（DFA）结合胶体金免疫技术对患儿鼻咽分泌物进行流感病毒A、B型抗原检测（DFA同时也检测呼吸道合胞病毒RSV等病毒抗原）;用一步法逆转录聚合酶链（RT-PCR）反应对上述两法同时检出流感病毒A型者标本进行亚型鉴定;同时对确诊流感患儿血清用酶联免疫吸附法（ELISA）进行肺炎支原体（MP）抗体滴度测定。结果746例标本共检出流感病毒58株,其中A型47株（H1亚型28株、H3亚型19株）,B型11株（1株为A与B混合）,总阳性检出率7.77%,与2001年（16.75%）比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;流感病毒与RSV等混合感染率为18.97%、与MP混合感染率为27.59%;2005年流感病毒检出率女童高于男童（P〈0.05）,高发年龄集中于3～7岁。结论2005年苏州地区儿童流感发病较稳定,10月份后优势株由H3亚型转为H1亚型;流感病毒易出现与MP、RSV混合感染现象;2005年苏州地区流感儿童发病以3岁以上女童占明显优势,与往年无明显性别差异。     

广州地区1998～2003年儿童流行性感冒病毒监测结果分析

目的研究1998-2003年广州地区儿童流感病毒(流感)感染的流行情况。方法对流感样症状的儿童取咽分泌物,接种到狗肾细胞(MDCK)上,在33℃温箱培养48-72h。MDCK细胞上清液进行血凝试验。结果3444例中264例分离出流感病毒,流感病毒分离总阳性率7.7%。1998、1999年流感阳性率分别为16.8%、7.4%,H3N2是强势株;2000年流感分离阳性率8.4%,出现H1N1亚型;2001年流感分离阳性率3馏%,未分离到H3N2亚型;2002年流感分离阳性率7.3%,B型流感病毒为强势株;2003年分离阳性率1.7%。1998-2001年广州地区儿童B型流感病毒流行为Yamagata型,2002-2003年流行为Victoria型。1999年发现禽流感H9N2亚型。结论1998年为流感流行较活跃年份,2001和2003年流感活动较平静;1998-2001年广州地区儿童B型流感流行Yamagata型,2002-2003年流行Victoria型。1999年发现儿童感染H9N2个案。     

2009 甲型H1N1流感流行期间北京急性呼吸道感染儿童常见呼吸道病毒的研究

目的 了解2009至2010年甲型H1N1流感大流行期间北京地区急性呼吸道感染患儿中,除流感病毒外的其他几种常见呼吸道病毒感染的流行情况。 方法 设计并建立检测包括呼吸道合胞病毒（RSV）A/B亚型,副流感病毒(PIV)1、2、3型,腺病毒(ADV)和人博卡病毒(HBoV)在内的多重实时荧光PCR方法,并应用该方法对2009年6月至2010年2月甲型H1N1流感大流行期间,对首都儿科研究所附属儿童医院就诊的急性呼吸道感染患儿中甲型H1N1流感病毒检测阴性的咽拭子标本进行上述呼吸道病毒的核酸检测。 结果 新建立的多重RT-PCR方法最低可检测的目标基因含量为10~300拷贝数,未见与其他非目标病毒的交叉反应。本研究共检测标本849份,病毒检测总阳性率为39.0%（331份）,5岁以下占87.6%（290/331份）。各病毒的检测阳性率分别为RSV-A亚型1.4%（12份）,RSV-B亚型8.4%（71份）,PIV-1型8.2%（70份）,PIV-2型0.5%（4份）,PIV-3型3.9%（33份）,ADV 13.9%（118份）,HBoV 2.7%（23份）。 RSV检出以B亚型为主（85.5%）,流行高峰在2009年11月至2010年2月。PIV检出以PIV-1型及PIV-3型为主,PIV-1型的流行高峰在2009年7月至2009年10月,PIV-2型及PIV-3型的流行高峰在2009年6～9月。ADV病毒在研究期间均有较高检出率（平均为13.9%）,HBoV的流行高峰在2009年9～12月。 结论 除流感病毒外,ADV、RSV-B及PIV可能也是2009甲型H1N1流感流行期间引起儿童急性呼吸道感染的重要病原。比较以往的资料可见各病原在2009甲型H1N1流感流行期间的流行季节性及检出率基本未受到新型流感病毒的影响。     

1998～2002年广州地区儿童流感病毒检测与分析

目的：了解广州地区儿童是否有禽流感感染和近年流感病毒感染的流行情况。方法：对儿童采取咽拭子分泌物，接种到MDCK细胞。放33℃温箱培养。MDCK细胞上清液进行血凝试验。结果：2376例中210例分出流感病毒，流感病毒分离总阳性率为8.8%。1998年3月-1999年2月，年度流感病毒分离阳性率为15.1%，H3N2是优势株。1999年3月-2000年2月，年度流感病毒分离阳性率为7.2%，出现H3N2、H1N1和H9N2以及B型多种流感病毒感染亚型特点。2000年3月-2001年2月，年度流感病毒分离阳性率为6.9%。2001年3月-2002年2月，年度流感病毒分离阳性率为4.3%。1999年检出H9N2禽流感病毒1株，患儿血清对H9N2血凝抗体1：400抗体升高。结论：1998年3月-2002年2月，广州地区主要存在三种流感病毒，1998-2000年，以H3N2流感流行为主，但2000年起出现H1N1流感病毒，而H3N2呈逐年下降。B型流感病毒呈散发流行。1999年广州市儿童曾出现禽流感病毒感染个案。     

2000-2006年北京地区婴幼儿乙型流感病毒感染的监测

目的 通过连续的监测,了解北京地区婴幼儿乙型流感的流行规律.方法 采集2000年11月-2006年6月间因急性呼吸道感染到门诊就诊和住院患儿的呼吸道标本10 770份,分别经传代狗肾细胞(MDCK细胞)进行病毒分离和(或)间接免疫荧光进行流感病毒的检测,分离阳性的病毒进一步用血凝抑制试验进行流感病毒株的型别鉴定.结果 从10 770份呼吸道标本中,检测到乙型流感病毒阳性标本384份(其中有376份分离出病毒),总阳性率为3.57%.2000年11月-2006年6月,每年有一个乙型流感病毒的流行峰,几乎都出现在流感流行季节的后期.除2003-2004年流行季节乙型流感病毒的最高阳性检出率为2.91%(2004年4月)外,其余各年份的最高阳性检出率都高于10.00%.2005-2006年流行季节乙型流感病毒的最高阳性检出率达到历年的最高峰(23.69%,2006年3月).每年的乙型流感病毒的流行高峰检出的病例都以门诊患儿为主.乙型流感病毒阳性的门诊患儿中,＞3岁的患儿占77.6%(264/340),乙型流感病毒阳性的住院患儿中,＜3岁的患儿占66.0%(29/44).乙型流感病毒与其他呼吸道病毒的合并感染少见.监测期间乙型流感病毒与甲3型流感病毒的阳性检出率相差不大,但2005年9月-2006年5月期间,乙型流感病毒的阳性检出率明显高于甲3型(23.9%对1.1%).2000-2002年流行季节北京地区婴幼儿中流行的乙型流感病毒为B/Yamagata/16/168系,2002-2003年流行季节B/Victoria/2/87系乙型病毒占优势,2003年以后的流行季节同时流行着以上两个系的乙型流感病毒,但以B/Yamagata/16/168系为主.2005-2006年流行季节B/victoria/2/87系乙型病毒占优势.结论 2000年11月-2006年6月每年2-5月份都有一次乙型流感病毒的流行(除2002-2003年流行季节为2002年12月),检测阳性的患儿以门诊患儿为主;目前北京地区B/Yamagata/16/168系和B/Victoria/2/87系乙型流感病毒同时流行.     

2004年11月～2005年3月北京地区儿童流行性感冒病原学检测分析

目的对北京地区2004年11月～2005年3月流行性感冒患儿进行病原学检测及分析。方法狗肾传代细胞（MDCK）进行流感病毒分离，用血凝试验、血凝抑制试验进行型和亚型的鉴定；用快速酶联免疫法检测A型及B型流感病毒抗原试剂盒检测患儿咽拭子中的流感病毒抗原。结果217例患儿中111例检测出流感病毒，检出率为51％（111／217），流感病毒A型28例（28／111），占检出数的25．3％，流感病毒B型82例（82／tit），占检出数的73．8％，流感病毒A＋B型1例（I／111）。占检出数的0．9％。111例流感病毒检测阳性患儿中病毒分离与快速诊断二项同时阳性75例。二者阳性符合率67．5％。结论北京地区2004年11月～2005年3月流感流行季节流感病毒以B型为优势株。流感快速诊断试剂盒可快速、准确地检测出流感病毒及型别。     

2016—2019年苏州大学附属儿童医院呼吸道感染住院患儿流感监测分析（附742例报告）

目的　探讨苏州大学附属儿童医院呼吸道感染住院患儿流感监测情况。方法　分析2016年1月至2019年12月在苏州大学附属儿童医院呼吸科7322例因急性呼吸道感染（ARTI）住院患儿流感病毒感染资料。采用RT-PCR法进行流感病毒的检测,并进行A/H1N1及A/H3N2、B/Victoria及B/Yamagata的亚型鉴定。结果　（1）7322例住院患儿中,共检出流感病毒阳性742例（10.1％）,2016—2019年各年分别为10.4%、8.6%、6.0%、15.2%。（2）流感病毒-A检出阳性率（6.7%）高于流感病毒-B（3.6%）,以A/H1N1亚型最常见（45.0%）,其他依次为B/Victoria（26.4%）、A/H3N2（19.1%）、B/Yamagata（7.5%）,有4例A/H1N1+B/Yamagata混合感染、10例A/H3N2+ B/Victoria混合感染。（3） ＞3～5岁组流感病毒阳性率最高（14.3%）,其次是＞1～3岁组（12.0%）,流感病毒-B发病年龄［38.0（13.0,56.0）个月］大于流感病毒-A［16.0（7.0,38.0）个月］（Z＝-6.456,P＜0.001）。（4）以冬季阳性检出率最高,占流感总检出率的54.9%,其次是春季（36.0%）,2017年12月至2018年2月有一流行高峰。（5）流感病毒易发生混合感染（64.4％）,最常见的混合感染病原是流感嗜血杆菌（21.2%）,其次是肺炎链球菌（17.5%）和肺炎支原体（15.0%）。（6）95.8%的住院患儿流感合并肺炎,最主要的症状是发热（86.7%）、咳嗽（98.1%）,其次是消化道症状（51.5%）。结论　流感病毒是苏州大学附属儿童医院呼吸道感染住院患儿的重要病原,以A/H1N1亚型最常见,不同年份、季节、月份及年龄流行的流感病毒亚型存在一定差异。＞3～5岁年龄组最多,冬季发病率最高,以肺炎为主要疾病表现,主要临床表现是发热和咳嗽,流感病毒易发生混合感染,多数患者预后良好,均未发生死亡。     

应用实时聚合酶链反应技术检测儿童呼吸道标本中的呼吸道合胞病毒

目的建立实时聚合酶链式反应（PCR）技术检测儿科呼吸道标本中呼吸道合胞病毒（RSV）的方法.方法（1）根据RSV N基因序列设计合成分别用于扩增RSV A亚型和B亚型的TaqMan探针和引物,建立实时PCR方法,进行灵敏度和特异性检测.（2）采用实时PCR检测61例RSV检测阳性的冻存标本和103例新收集的呼吸道标本,并与病毒分离、间接免疫荧光、巢式PCR结果相比较.结果（1）实时PCR对A亚型RSV检测的灵敏度为5.25 pfu,B亚型为3.75 pfu,与巢式PCR相同.（2）实时PCR检测其他呼吸道病毒阳性标本,结果均为阴性;A亚型和B亚型之间无交叉.（3）实时PCR检测其他方法检测过的RSV阳性的冻存标本61例,A亚型（30例）阳性为27例（90%）,B亚型（31）阳性为27例（87.1%）.（4）103例新鲜标本中,实时PCR检出RSV 35例（A亚型7,B亚型28）,阳性率34.0%,其中巢式PCR阳性31例,阳性率30.1%;间接免疫荧光阳性22例,阳性率21.4%;病毒分离阳性9例,阳性率8.7%.实时PCR阴性的68例,其他方法均为阴性.实时PCR与三种方法的一致性检验,一致率在74.76%～96.12%（P均＜0.01）;差异性检验结果说明,实时PCR阳性检出高于间接免疫荧光和病毒分离（P均＜0.01）,而与巢式PCR差异无统计学意义（P＞0.05）.结论实时PCR检测儿科鼻咽分泌物标本中RSV的方法,敏感性、特异性和可重复性好,可用于急性呼吸道感染患儿标本中的RSV检测.     

肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中肺炎支原体耐药基因和13种病原检测结果分析

目的了解肺炎支原体肺炎(MPP)患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺炎支原体(MP)耐药基因和13种呼吸道病原的分布情况。方法回顾性选择2018年1月至2019年1月北京大学第三医院和北京大学第一医院100例MPP患儿的BALF标本, 采用荧光定量PCR法检测MP核酸及其耐药基因, 采用多重PCR核酸检测技术测定甲型流感病毒、甲型流感病毒H1N1、甲型流感病毒H3N2、乙型流感病毒、人副流感病毒、腺病毒、人博卡病毒、人鼻病毒、肺炎衣原体、人偏肺病毒、MP、人冠状病毒和呼吸道合胞病毒核酸, 采用χ2检验进行分析。结果 100例BALF标本, 荧光定量PCR法检测MP及耐药基因, 83例(83.00%)MP阳性, 其中78例(93.98%)耐药, 均为23S rRNA结构域V区A2063G的点突变。多重PCR法检测13种呼吸道病原, 89例(89.00%)阳性。79例(79.00%)检测到MP, 其中74例(74.00%)仅检出MP, 5例(5.00%)同时检出MP合并其他病原。10例(10.00%)检测出其他病原。0～4岁组病毒检出率高于>4～6岁组(P=0.042)和>6岁...     

多重PCR检测方法在儿童流感样病例病原检测中的临床价值（附94例报告）

目的　探讨多重聚合酶链反应（PCR）检测方法在儿童流感样病例病原检测中的临床应用价值,了解儿童流感样病例病原情况。方法　收集2018年11月至2019年2月北京地区94例儿童流感样病例咽拭子标本,采用多重PCR核酸检测技术测定甲型流感病毒（InfA）、 甲型流感病毒H1N1（InfA-H1N1）、 甲型流感病毒H3N2（InfA-H3N2）、 乙型流感病毒（InfB）、 人副流感病毒、 呼吸道合胞病毒（RSV）、 人腺病毒（HADV）、 人鼻病毒（HRV）、 人博卡病毒、 人偏肺病毒（HMPV）、 人冠状病毒（HCoV）和肺炎支原体（MP）、 衣原体13种病原核酸。结果　94例标本中78例（82.98%）可测出病原,其中69例（73.40%）检出1种病原,9例（9.57%）检出2种病原; 94例标本中52例（55.32%）检出流感病原,26例（27.66%）检出非流感病原。单一病原检出由多到少为InfA-H1N1 31例,InfA-H3N2 10例,RSV 9例,HMPV 7例,InfA、 HRV、 HADV各3例,InfB、 HCoV及MP各1例。9例检出2种病原的标本中,6例检出流感分别合并其他病毒（HRV、 HADV、 RSV、 HCoV、 HMPV）,1例检出甲流H1N1和H3N2,2例分别检出RSV、 HRV及HCoV、 HADV。结论　非流感病原微生物引起流感样病例并不少见,多重PCR检测有助于全面了解流感样病例的病原和混合感染情况。     

2006至2014年北京单中心儿童乙型流感病毒流行的监测

目的 了解北京单中心儿童乙型流感病毒的流行趋势,为流感的防控提供数据支持。方法 2006年9月至2014年5月对首都儿科研究所附属儿童医院门诊和急诊采集流感样病例的咽拭子标本,采用传代狗肾细胞(MDCK细胞)行流感病毒和副流感病毒的分离,并用特异性血清对分离到的流感病毒进行凝集抑制试验鉴定型别。同时接种人喉癌细胞（HEp-2）行呼吸道合胞病毒和腺病毒的分离。分为8个监测年度,以2006年9月至2007年8月（2006至2007年）为1个监测年度,余7个年度类推。对8个监测年度乙型流感病毒的流行特征行描述性分析,并与同期甲型流感病毒的流行特点进行比较。结果 6 150份咽拭子标本检测了流感病毒,分离到乙型流感病毒345株（5.6％）,其中166株（48.1%）B/V系毒株和179株（51.9%）B/Y系毒株。①8个监测年度,出现5个乙型流感病毒的流行高峰。除2006至2007年外, 2007至2008、2009至2010、2011至2012和2013至2014年的流行高峰呈隔年流行的特点,月阳性率最高可达46.2%（2008年1月和2012年2月）。2006至2007、2009至2010、2010至2011和2013至2014年,甲型流感病毒阳性率高于乙型流感病毒,且乙型流感流行高峰均出现在甲型流感流行高峰后;2007至2008和2011至2012年,乙型流感病毒阳性率高于甲型流感病毒,且乙型流感病毒流行高峰均出现在甲型流感流行高峰前。②8个监测年度中2006至2007、2007至2008、2010至2011和2011至2012年B/V系和B/Y系乙型流感病毒同时流行,余4个年度为其中之一流行株流行。2009至2010、2011至2012和2013至2014年的流行株与WHO推荐的流感疫苗中的乙型流感病毒型别相匹配。③345例乙型流感病毒阳性患儿中,～12岁以下组中随着患儿年龄增大而乙型流感病毒阳性率增高。结论 2006年9月至2014年5月北京地区儿童乙型流感病毒的流行基本呈现隔年出现高峰的流行趋势。在2个谱系同时流行的4个流行季中,分别以B/V或B/Y系乙型流感病毒为主要流行株。     

2004年北京婴幼儿中甲3型流感病毒血凝素基因特性对其抗原性改变的提示

目的了解2004年流感流行季节（2004年8月—2005年4月）北京地区婴幼儿急性呼吸道感染患儿中分离到的甲3型流感病毒是否存在抗原性的改变以及其变异程度。方法提取1株于2004年3月和32株于2004年流感流行季节从北京地区急性呼吸道感染患儿中分离到的甲3型流感病毒的病毒RNA,经RT—PCR扩增得到HA1区基因片段并进行核苷酸序列测定,使用生物信息软件分析HA1区基因序列。结果所测定的血凝素HA1区基因均为987bp,编码一个含329个氨基酸的蛋白质。将33株甲3型流感病毒流行株的血凝素（HA1）氨基酸序列与近年WHO推荐的参考疫苗株比较,我们发现一致的多处位点的氨基酸突变,而且突变位点涉及2个抗原决定簇（A、B）和受体结合部位。而2004年3月分离到的毒株在进化分析和氨基酸变异上均不同于2004年流行季节的毒株。结论对血凝素基因HA1区的序列分析结果提示2004-2005年流行季节的甲3型流感病毒较春季的流行株和2004年疫苗株出现了较大的漂移,提示其抗原性可能出现了改变。这种变异对于病毒抗原性的影响以及对于疫苗效果评价的意义值得密切关注。     

流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用

目的 对一种流感病毒快速检测方法在儿童流感样病例病原诊断中的应用效果进行评估。方法 2010年12月至2011年4月采集流感样病例患儿咽拭子标本350例,使用甲型及乙型流感病毒抗原检测试剂盒（QuickNaviTM-Flu,胶乳免疫层析法）进行抗原检测,并与病毒分离法进行比较。对于抗原检测和病毒分离法结果不相符的标本采用RT-PCR验证。结果 QuickNaviTM-Flu抗原快速检测流感病毒的结果与病毒分离法的一致性好,其检测甲型流感病毒的敏感度为89.9%,特异度为94.4%。经RT-PCR验证,14例抗原检测与病毒分离法结果不相符样本中13例结果为阳性(与抗原检测一致),使得该抗原检测方法的敏感度和特异度升至91.0%和99.6%。抗原检测乙型流感病毒经RT-PCR验证前后的结果一致,敏感度和特异度分别为87.5%和100%。该方法检测出的阳性标本中包括了甲3型、乙型（Victoria和Yamagata系）流感病毒和新发的2009甲型H1N1,并与常见的呼吸道病毒之间无交叉反应。结论 QuickNaviTM-Flu作为流感病毒抗原检测的试剂盒,可一次同时检测出甲型和乙型流感病毒,耗时短,操作简便,具有良好的敏感度和特异度,适用于流感样病例病原的快速诊断。     

The 1985 influenza epidemic in a pediatric practice

Because it is not possible to distinguish clinically influenza from other respiratory infections, virological methods have to be used to establish the influenza etiology. Nasopharyngeal swabs from 202 children with respiratory symptoms were taken. Influenza A virus (H3N2) was isolated from 44 children, influenza A virus (H1N1) from 61 children and influenza B virus from 13 children. The maximal activity of the two influenza A virus subtypes was different. The following features permitted the classification of 3 groups; monophasic fever greater than or equal to 38.5 degrees C (81.35%), biphasic fever (14.41%), and pseudocroup (4.24%). 16.1% of the children with fever also had gastrointestinal symptoms. No relation between influenza type/subtype and type of manifestation could be established.