蚯蚓纤溶酶部分质量标准的研究

采用亲和层析、凝胶层析对蚯蚓粗提液进行分离、纯化，得到蚯蚓纤溶酶纯化样品，并对其活性、含量、纯度等检测方法进行了试验研究，确定HPLC、SDS—PAGE电泳、280nm紫外吸收、琼脂糖-纤维蛋白平板法分别为蚯蚓纤溶酶的纯度、相对分子量、含量及活性的检测方法。同时又对纯化的蚯蚓纤溶酶进行了N-末端的测序，获得了重要的蚯蚓纤溶酶分子生物学的研究资料。     

蚯蚓纤溶酶分离及部分生化性质的研究

采用亲合层析法对蚯蚓纤溶酶进行初步纯化,并对其生化特性进行鉴定。结果表明：经纯化的蚯蚓溶酶其分子量在20KD－30KD之间,对人血纤维蛋白平板具有良好的溶解作用,并考察了其热稳定性。纤溶酶能激活血栓中的纤溶酶原,从而使血栓溶解,直接作用于血栓表面,使形成血栓的纤维蛋白溶解成小分子,达到抗血栓之目的。     

蚯蚓纤溶酶分离及部分生化性质的研究

采用亲合层析法对蚯蚓纤溶酶进行初步纯化,并对其生化特性进行鉴定.结果表明经纯化的蚯蚓纤溶酶其分子量在20KD-30KD之间,对人血纤维蛋白平板具有良好的溶解作用,并考察了其热稳定性.纤溶酶能激活血栓中的纤溶酶原,从而使血栓溶解,直接作用于血栓表面,使形成血栓的纤维蛋白溶解成小分子,达到抗血栓之目的.     

蚯蚓纤溶酶研究概述

对具有纤溶活性的物质研究已有多年的发展,但是血栓性疾病仍然是致人死亡或身体机能障碍的主要原因之一。从具有特殊生理功能的生物体中获取活性物质近来受到广泛关注,在蚯蚓消化腺的分泌物中纯化得到一组同工酶,表现出良好的溶栓效果,并被命名为蚯蚓纤溶酶（earthworm fibrinolytic enzyme,EFE）。本文在多层次上对蚯蚓纤溶酶作一综述,内容包括：蚯蚓纤溶酶的纯化、克隆表达,并详细介绍该酶结构与功能之间的关系以及临床应用等。     

蚯蚓纤溶酶去糖基化和免疫反应性分析

 目的对去糖基化的蚯蚓纤溶酶进行免疫反应性分析。方法①将变性的蚯蚓纤溶酶全组分与免疫佐剂混合,免疫家兔制得抗血清,酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和Western-blotting检测抗血清的效价。②三氟甲基磺酸去除蚯蚓纤溶酶全组分及6.5#,7#单组分的糖链,SDS-PAGE和ConA-HRP亲和印迹检测糖链的去除情况。③ELISA和Western-blotting检测糖链去除前后蚯蚓纤溶酶免疫反应性是否有变化。结果去除糖链后蚯蚓纤溶酶全组分及6.5#,7#单组分的免疫反应性基本没有变化。结论糖链的存在与否对蚯蚓纤溶酶组分免疫反应性的影响不大,提示蚯蚓纤溶酶分子上的寡糖链可能不构成其抗原决定簇。     

蚯蚓溶栓酶对大鼠凝血及纤溶指标的影响

低剂量的溶栓酶用于大鼠能引起纤维蛋白原（Ｆｂｇ）平均下降４５％，凝血酶时间（ＴＴ）由１１．１３秒延长到２２．６３秒（Ｐ＜０．０１），而凝血酶原时间（ＰＴ）及白陶土部分凝血活酶时间（ＫＰＴＴ）无显著性变化（Ｐ＞０．０５）。但高剂量的溶栓酶除能明显降低Ｆｂｇ和延长ＴＴ外，而且可使ＰＴ由１６．８２秒延长到７３．４４秒及ＫＰＴＴ由４６．６３秒延长到１２４．１３秒，并能使Ⅱ、Ⅷ因子降解，起到强的抗凝效果     

纤维蛋白酶谱检测蚯蚓纤溶酶组分

 目的建立鉴定蚯蚓纤溶酶粗酶液中活性组分的方法。方法根据蚯蚓纤溶酶能水解纤维蛋白的性质,建立了纤维蛋白-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Fibrin-SDS-PAGE),优化了电泳条件,电泳后酶所在部位为透明区带。结果分离胶中纤维蛋白终质量浓度为0.4×10^-3mg·L^-1,电泳后胶板用2.5% TritonX-100复性30min,PBS缓冲液(pH7.2)保温30min,考马斯亮蓝R-250染色,7%醋酸脱色,可以得到清晰的酶谱。结论该方法灵敏度高,用2μg样品,就能准确检测出粗酶液中所有纤溶酶组分。     

一种新型蚯蚓纤溶酶的研究

采用加提取剂的匀浆、盐析、超滤及层析方法从一种环毛蚓中获得一种新型纤溶酶。此酶分子量为22000,为单链蛋白。它不仅有强烈的直接溶解血栓及人纤维蛋白活性,而且还有纤溶酶原激活作用;动物试验表明此酶的毒副作用很小。本方法获得的酶的活性、纯度及得率都很高。     

蚯蚓纤溶酶抗肝癌转移作用的实验研究

目的 探讨蚯蚓纤溶酶(earthworm fibrinolytic enzyme,EFE)对人肝癌细胞转移的影响.方法 建立裸鼠人肝癌高转移原位移植瘤模型,造模后7 d将裸鼠随机分为模型对照组和EFE高、低剂量组,共3组,每组7只,每天分别给予生理盐水和1600,800 uku/kg EFE灌胃,连续30 d.实验结束时完整剥除种植瘤并称重;肉眼直接观察种植瘤的肝内播散及腹腔种植情况,计算肝内播散率及腹腔种植率;通过病理切片观察肺转移肿瘤灶的数目;采用RT-PCR及Western blot方法检测移植瘤中FAK(focus adhesion kinase)及β1-整合素蛋白的表达.结果 与模型对照组相比,EFE低、高剂量组原位种植瘤瘤重减轻(P＜0.05或P＜0.01);种植瘤肝内播散率和腹腔种植率降低,其中,EFE高剂量组与模型对照组比较,具有显著性差异(P＜0.05);肺转移灶数目明显减少,与模型对照组相比,具有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).在原位种植瘤和移植瘤中FAK及β1-整合素在mRNA及蛋白水平的表达方面,EFE高、低剂量组的表达均明显下降,与模型对照组比较具有非常显著性差异(P＜0.01).结论 EFE具有抗肝癌转移的作用,其机理可能与EFE能够抑制FAK及β1-整合素的表达有关.     

蚯蚓纤溶酶对肝癌细胞黏附性影响的研究

目的:研究蚯蚓纤溶酶(earthworm fibrinolytic enzyme,EFE)抑制肝癌细胞黏附性的作用并探讨其可能的机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析法、体外黏附试验分别观察EFE对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响以及EFE对肝癌细胞与纤维连接蛋白(FN)及人脐静脉内皮细胞ECV-304黏附性的影响;逆转录聚合酶链法(RT-PCR)、蛋白印迹(Western blot)技术分别检测药物干预后肝癌细胞内整合素β1 mRNA和蛋白表达量的改变。结果:EFE有抑制SMMC-7721细胞生长的作用,且能抑制肝癌细胞与FN及内皮细胞的黏附,同时EFE还能下调整合素β1 mRNA和蛋白的表达。结论:EFE具有降低肝癌细胞转移潜能的作用,其作用机制可能与EFE能在基因及蛋白水平下调整合素β1表达有关。     

蟛蜞菊内酯联合蚯蚓纤溶酶对Hhcy大鼠血管保护作用的研究

目的:探讨蟛蜞菊内酯联合蚯蚓纤溶酶对高同型半胱氨酸血症(Hyperhom Ocysteinemia,Hhcy)大鼠血管的保护作用.方法:将SPF级雄性SD大鼠60只,随机分为6组:正常对照组、模型对照组、阳性药物组、蟛蜞菊内酯(Wedelolactone,Wed)药物组、蚯蚓纤溶酶(Earthworm Fibrinol...     

蚯蚓纤溶酶活性影响因子的研究

目的 :对提取过程中影响蚯蚓纤溶酶活性的 5种因子进行了分析 ,以提高纤溶酶的提取活性。方法 :分别采用 0.9%NaCl抽提、10%蔗糖抽提、75%酒精抽提出粗酶。酶活测定方法采用尿激酶琼脂糖 纤维蛋白平板法。硒含量的测定方法采用 3,3′-二氨基联苯胺比色法 ;砷含量的测定方法采用二乙氨基二硫代甲酸银比色法。结果 :饲养在牛粪饵料中的蚯蚓纤溶酶活性比饲养于生活垃圾中的蚯蚓纤溶酶活性更高 ,蚯蚓体内砷的含量与纤溶酶活性呈正相关 ,而蚯蚓体内硒的含量对纤溶酶活性影响不大。在采用 3种不同的蚯蚓纤溶酶的抽提方法中 ,75 %酒精抽提效率最高 ,0.9%氯化钠次之 ,10%蔗糖最低 ;在蚯蚓纤溶酶纯化过程中 ,透析比超滤对蚯蚓纤溶酶的活性影响更小一些。结论 :通过将蚯蚓饲养在适宜的饵料中 ,使用合适的提取手段和提纯方法 ,可以提高蚯蚓纤溶酶的提取活性。     

豆豉纤溶酶的分离纯化及部分酶学性质研究

 目的 从豆豉中分离出具有强纤溶活性的菌株,从该菌株的发酵液中纯化出纤溶酶并对此纤溶酶的部分酶学性质进行研究。方法 利用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换色谱和Sephadex G-75凝胶过滤色谱等方法进行纯化;利用N-末端氨基酸序列测定及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对此酶进行鉴定。结果 从发酵液中获得了纤溶酶单一组分,表观相对分子质量为30×10³。该纤溶酶在50 ℃以下和pH 7.0~9.0之间保持稳定,最适温度为35 ℃;最适pH为8.6。N-末端氨基酸序列及飞行时间质谱测定结果都表明该酶与纳豆激酶氨基酸序列有着极高的相似性。结论 获得了纤溶酶单一组分,为纤溶酶发酵产品的大规模纯化和进一步研制开发新的溶栓药物提供重要理论依据。     

纤溶酶治疗进展型脑卒中15例

我院自2003年5月以来静脉滴注赛百注射用纤溶酶治疗进展型脑卒中15例，疗效显著，现报道如下。     

影响胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性因素初探及其纤溶活性失活研究

目的通过探讨影响胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性的因素及其纤溶活性失活方法,排除胃蛋白酶和胰蛋白酶对中药鼠妇Armadillidium vulgare活性粗蛋白纤溶活性检测的干扰,以在鼠妇活性粗蛋白酶解过程,获取相对分子质量更小、效价更高的蛋白质或多肽。方法采用纤溶蛋白平板法分别研究pH值、温度、金属离子、酶抑制剂和表面活性剂对胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性的影响,以获取较佳的酶失活工艺,并研究较佳酶失活工艺对尿激酶、蚓激酶、鼠妇纤溶酶纤溶活性的影响。结果 pH值、温度、金属离子、酶抑制剂和表面活性剂均可对胃蛋白酶和胰蛋白酶纤溶活性产生影响,其中胃蛋白酶的最优失活方案为pH 6.0~8.0;胰蛋白酶的最优失活方案为质量浓度25 mg/mL TLCK和浓度1 mmol/L EDTA的混合制剂。结论研究所获取的较佳酶失活工艺,可用于以纤维蛋白平板法检测胃蛋白酶、胰蛋白酶降解产物的纤溶活性,操作简单,重复性好,稳定性好。     

活血化瘀中药的纤溶和纤溶抑制作用

分别用尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)激活纤溶酶原的纤溶试验,观察了20余种常用活血化瘀药对纤溶的影响。结果表明,11味中药的水浸液在含纤溶酶原和不含纤溶酶原的纤维蛋白板上都出现同样程度的纤溶活性,按由强到弱的排列是益母草、三棱、水蛭、五灵脂、炮山甲、姜黄、川穹、红花、土鳖虫、桃仁、元胡,但未发现对t-PA、u-PA激活纤溶的增强作用。部分药物不同程度抑制t-PA、u-PA激活纤溶。其中,完全抑制t-PA激活纤溶的前10味由强到弱是大黄、复方丹参片、毛冬青片、丹参、赤芍、泽兰、丹参注射液、牛膝、红花、炮山甲;不完全抑制t-PA激活纤溶的前10味由强到弱是毛冬青片、赤芍、复方丹参片、丹参、桃仁氯仿液、牛膝、大黄、泽兰、丹参注射液、益母草;不完全抑制u-PA激活纤溶的前10味由强到弱是毛冬青片、赤芍、复方丹参片、丹参、大黄、桃仁氯仿液、牛膝、泽兰、丹参注射液、益母草。推测抑制纤溶系统活性的活血化瘀药也能调节其它丝氨酸蛋白酶的活性,从而对控制凝血、纤溶平衡、抗炎症、抗肿瘤的生长与转移都可能发挥作用。     

中药影响纤溶系统活性的实验研究

中药影响纤溶系统活性的实验研究谢文光魏钰书王会信周良玉周承富蒋滋慧(四川川北医学院附属医院南充637000)为了探讨中药对纤溶系统的调节作用,我们分别用尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA),组织型纤溶酶原激活剂(tPA)激活纤溶酶原的纤溶试验,观察了20种常用活血化瘀中药和27种其它类药物对纤溶的影响。1材料与方法1.1材料被测药品均来源于本院药剂科,由本院中药室主管药剂师鉴定,符合《中国药典》规定。6542(5mg/ml)、氨....     

纤溶酶治疗急性脑梗死的临床疗效观察

目的:观察纤溶酶治疗急性脑梗死(ACI)的疗效和不良反应。方法:将82例急性脑梗死患者按住院顺序随机分为对照组和治疗组进行对比研究,对照组采用常规内科治疗,治疗组在此基础上加用纤溶酶静滴,1次/d,连用10天;分别对两组治疗前、治疗后11天神经功能缺损评分及临床疗效进行评估和血液流变学比较,观察药物不良反应。结果:两组治疗后的神经功能缺损较治疗前均有显著改善(P<0.01),治疗组与对照组比较有显著性差异(P<0.01),治疗后临床疗效评价治疗组总有效率92.8%,与对照组62.5%比较有明显差异(P<0.01);两组血液流变学检查结果,治疗组明显要优于对照组,有统计学意义(P<0.05)。两组均未发现药物不良反应和毒副作用。结论:纤溶酶作为治疗急性脑梗死,安全有效且价格适中,值得医院推广应用。     

蝎毒纤溶活性肽对血管内皮细胞分泌纤溶因子的影响

目的　研究蝎毒纤溶活性肽 (SVFAP)对血管内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂 (t -PA)和纤溶酶原激活剂抑制物 (PAI - 1)的影响。方法　将不同浓度SVFAP与脐静脉内皮细胞共同孵育 10min及 4h后 ,分别收集培养液 ,以发色底物法测定培养液中t-PA和PAI -1的活性。结果　SVFAP在用药后 10min及 4h各浓度大多使t-PA活性增强 ,PAI - 1活性降低 ,t-PA/PAI - 1比值升高。结论　SVFAP的纤溶作用与抑制内皮细胞分泌PAI - 1和促进t-PA释放有关。