原位末端标记检测重症肌无力大鼠中枢损害时脑改变

目的：探讨重症肌无力(MG)中枢(CNS)受损的可能机制．方法：将MG患血中提取的AChRab经侧脑室注射到大鼠脑室系统，建立CNS受损的MG大鼠模型．用原位末端标记(TUNEL)的方法观察脑细胞凋亡具体情况及不同病程变化，并和用健康人血清提取的IgG注入大鼠侧脑室建立的对照组进行比较．另一组不予任何处理作为空白对照．结果：模型大鼠表现出类似实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型样症状．TUNEL结果示：实验组大鼠脑组织切片标记后棕蓝混合染色的阳性细胞(因行苏木素复染)于注射后2wk出现且随时间逐渐增多，至3wk后数目最多．脑内多部位都有凋亡细胞出现，以皮层和海马区较明显．与对照组比较差别明显．结论：经侧脑室注入到大鼠脑室系统的MG患AChRak，可以引起大鼠CNS功能障碍，神经细胞发生凋亡，凋亡细胞数目随大鼠症状的加重而增加，提示细胞凋亡在MG、CNS功能障碍中可能起重要作用．     

大鼠重症肌无力中枢损害时c-fos基因表达

目的 探讨重症肌无力（MG）中枢神经系统（CNS）损害机制。方法 从AChRab阳性的全身型MG患血清中提取纯化IgG，然后注入大鼠侧脑室，应用免疫组织化学方法，观察即早基因c-fos的表达。结果 脑室内注入AChRab后，大鼠皮层、海马、下丘脑等部位出现显的Fos表达。结论 c-fos基因参与MG中枢损害过程。研究表明皮层、海马、下丘脑等部的神经元极可能涉及MG中枢损害时的病理生理过程。     

重症肌无力中枢神经系统受损模型下肢体感诱发电位

目的 本研究旨在进一步探索重症肌无力（MG）患的乙酰胆碱受体抗体（AChRab)是否对大鼠中枢神经系统（CNS）躯体感觉传导通路产生影响。方法 从AChRab阳性的全身型MG患血清中提取IgG，对其注入大鼠侧脑室，观察其对下肢体感诱发电位（SEP）的影响。结果 注入大鼠侧脑室内的AChRab可导致大鼠本体觉传导障碍，引起SEP异常，表现为N20波消失或潜伏期延长。结论 MG患的AChRa不仅可以作用于NMJ处的AChR，而且还可以作用于CNS并引起本体觉传导障碍，进一步证明了AChRab在CNS中的病理作用。     

Trim44敲除导致老年大鼠神经元凋亡和学习记忆能力下降

目的 本文利用Trim44条件敲除大鼠,分析Trim44基因敲除后大鼠行为学异常和脑组织的病理改变,探究Trim44基因在神经系统中的作用机制。方法 采用蛋白印迹法,免疫组化法检测TRIM44在脑组织的表达,利用TUNEL染色观察Trim44敲除大鼠神经元的凋亡,Y迷宫、水迷宫和食物迷宫等行为学测试观察敲除大鼠的行为学改变,蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白的表达异常。结果 TRIM44在脑皮质中表达,敲除大鼠大脑组织中Trim44敲除效率可达67%;Trim44敲除导致老年大鼠学习记忆能力下降,神经元凋亡,活性形式的caspase 3、caspase 9蛋白表达增加。结论 Trim44敲除促进神经元凋亡,损害大鼠学习记忆能力。提示了Trim44在神经系统的重要作用,敲除模型也可以用于深入的机制探索。     

慢性颞叶癫痫模型鼠海马结构形态学的变化

目的 在建立红藻氨酸(KA)慢性颞叶癫痫动物模型的基础上,观察其发展过程中海马结构形态学的变化,探讨该模型的病理机制和致痫机制.方法 应用立体定向技术,侧脑室内微量注射KA于SD大鼠制作慢性颞叶癫痫动物模型,通过动态监测该模型的行为学进行分期,在不同时期取海马结构的标本,行HE染色、Timm's染色、TUNEL染色和NSE标记,观察模型发展各阶段海马结构形态学的改变.结果 该模型组织学改变为神经元的减少和胶质细胞的增生;细胞计数可见海马结构神经元死亡主要发生于急性期,以海马CA3、CA4区最为显著,海马其他各区较轻,齿状回无明显神经元缺失;TUNEL染色显示海马结构的细胞死亡存在凋亡机制;Timm's染色显示从静止期开始出现MF发芽并进行性增加;NSE和BrdU双标发现齿状回区新生的神经元明显增加.结论 红藻氨酸所至慢性颞叶癫痫模型鼠海马结构形态学的变化主要是海马CA3、CA4区的神经元丢失、胶质细胞的增生及凋亡细胞增多,齿状回区新生神经元的增加和苔藓状纤维的发芽.     

匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型

目的：研究匹罗卡品致痫后大鼠行为、EEG及大脑组织学变化特征。方法：SD大鼠匹罗卡品腹腔注射，诱发急性癫痫持续状态（SE）后，观察慢性期自发性发作；描记EEG；Neo-Timm染色观察海马苔藓出芽，Nissl染色观察海马神经元损伤。结果：注射匹罗卡品后，87％的动物呈现SE，持续6－24h后这一部分大鼠均出现慢性自发发作，组织学检查发现海马有显著的神经元损伤，齿状回内分子层苔藓纤维出芽。结论：匹罗卡品模型基本复制了人类颞叶癫痫的临床病理特征；SE所致的海马结构性损伤及苔藓纤维重构是自发性发作形成的基础。     

被动免疫重症肌无力模型中枢神经系统损害的探讨

目的：探讨乙酰胆碱受体抗体（AchRab）与重症肌无力（MG）中枢神经系统（CNS）损害之间关系。方法：将MG患者血中提取的IgG注入大量鼠尾静脉，建立大鼠被动免疫重症肌无力模型，应用免疫细胞化学技术观察Fas在脑组织中的表达，结果：模型大鼠表现出类MG症状，在MG大鼠脑内Fas抗原主要表达于大脑皮质区和海马的神经元胞膜和突起上，而在正常和空白对照组脑内没有神经细胞呈Fas抗原阳性。结论：外周注入的AchRab可能造成模型处于免疫应激状态，改变血脑屏障通透性而入脑诱发CNS损害，Fas介导的细胞凋亡可能参与MG CNS损害。     

慢性综合应激对大鼠海马CA3区nNOS和BDNF表达及行为学表现的影响

目的：观察慢性综合应激引起的大鼠海马CA3区的病理变化及相应的行为学改变，探讨抑郁的发病机制。方法：观察在应激的不同时程内，Wistar大鼠海马CA3区神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的动态变化，同时观察大鼠行为学改变。结果：经慢性应激11d，海马CA3区nNOS蛋白表达增加，BDNF蛋白表达减少，探究行为减少，修饰行为受到抑制，排便量增加；应激21d，nNOS蛋白表达有逐渐降低的趋势，BDNF蛋白表达几乎消失，大鼠表现为抑郁状态。结论：慢性综合应激可能通过损伤大鼠海马引起大鼠的抑郁状态，提示脑损伤可能在抑郁发病机制中起重要作用，保护脑组织应成为抑郁新的治疗靶。     

腹腔注射利血平对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的：研究利血平导致的行为性抑郁大鼠海马神经细胞凋亡与神经元数量的改变。方法：腹腔注射利血平（4mg／kg）复制大鼠的行为性抑郁模型,用自发活动检测大鼠的行为性抑郁,以TUNEL法检测海马神经元凋亡,用尼氏染色观察海马神经元数量。结果：腹腔注射利血平48h后大鼠出现行为性抑郁。利血平可导致大鼠海马CA1区（P〈0．01）、CA3区（P〈0．05）和齿状回神经元（P〈0．001）数量减少,同时检测到此三个区域神经元凋亡的增加（CA1区P〈0．01,CA3区P〈0．001,齿状回区P〈0．001）。结论：利血平诱导的行为性抑郁大鼠可出现海马神经元数量减少,海马神经元凋亡增加是其原因之一。     

帕金森病大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元的改北

目的：探讨帕金森病（PD）大鼠中脑腹侧被盖区（VTA）多巴胺（DA）能神经元的改变.方法：20只3月龄Wistar雄性大鼠,随机分为模型组和对照组,每组10只.6-羟基多巴胺（6-OHDA）注射右侧黑质致密区（SNC）制作PD大鼠模型,腹腔注射阿朴吗啡后进行行为学观察;尼氏染色观察左侧中脑VTA神经元、酪氨酸羟化酶（TH）的改变;免疫组织化学ABC法观察其DA能神经元的改变并进行图像分析.结果：阿朴吗啡诱发PD大鼠模型异常旋转行为,尼氏染色见PD大鼠左侧中脑VTA有神经细胞肿胀、坏死等变化;VTA TH阳性神经元形态学改变,数量减少,与对照组相比,差异有统计学意义.结论：中脑VTA DA能神经参与PD模型大鼠的改变.     

动态观察红藻氨酸致痫大鼠海马神经细胞凋亡与wtp53表达的意义

目的：探讨红藻氨酸(KA)致痫大鼠海马神经细胞凋亡与野生型p53(wtp53)蛋白表达的关系。方法：采用KA诱导痛痫发作大鼠模型。以TUNEL方法标记DNA片段，原位检测凋亡细胞；免疫组化SP法检到wtp53蛋白。结果：注射KA72h后，癫痫发作大鼠海马CAl区凋亡神经细胞达高峰及wtp53蛋白表达在24h大量出现；wtp53蛋白表达与细胞凋亡呈正相关。结论：癫痫神经细胞凋亡与wtp53表达密切相关；痫性发作使wtp53表达上调，从而诱导神经细胞凋亡。     

中枢神经元烟碱型乙酰胆碱受体的显示方法

目的 用重症肌无力（MG）患的乙酰胆碱受体抗体（AChRab)选择性地显示神经元烟碱型乙酰胆碱受体。方法 用Elisa法测定MG患血中的AChRab滴度,然后用硫酸铵盐析和免疫亲和层析法提取纯化AChRab,再用免疫组化法探讨AChRab与大量CNS神经元－nAChR之间的免疫结合反应。结果 首次表明AChRab与神经-nAChR之间的阳性免疫结合反应广泛分布于鼠CNS许多部位,如大脑皮层、脑干各颅神经运动核团、脊髓运动神经元等部位,与用其他方法显示其分布一致或类同。结论MG患AChRab可与大鼠和猴CNS神经－nAChR交叉结合,可用于选择性地显示CNS神经－nAChR。     

海洛因成瘾大白鼠脑内神经元凋亡的超微结构观察

目的：研究海洛因成瘾大白鼠脑内神经元凋亡的超微结构变化。方法：采用递增法人为建立海洛因成瘾动物模型．设对照组和模型组，取两组动物多部位脑组织电镜下观察超微结构改变。结果：电镜下清晰观察到海洛因成瘾大白鼠脑内多部位神经元凋亡各期的超微结构变化。正常对照组电镜超微影像正常。结论：海洛因成瘾大白鼠脑组织广泛出现神经元凋亡．这是海洛因成瘾致脑神经元死亡的主要形式．神经元凋亡的超微结构改变既具有细胞凋亡的一般形态特征也呈现一定的特异性。     

肌苷对阿尔茨海默病模型大鼠认知功能改善作用及机制研究

目的 研究肌苷对β-淀粉样蛋白1-40(beta-amyloid protein,Aβ_(1-40))所致的模拟阿尔茨海默病大鼠神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠30只,用随机数字表法随机分为对照组、模型组和治疗组各10只,经左侧侧脑室微量注射Aβ_(1-40)建立阿尔茨海默病模型,腹腔注射肌苷(100mg·kg~(-1))干预治疗,采用Y型电迷宫检测大鼠学习和记忆功能,HE染色观察神经细胞的结构变化,原位TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学检法测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 模型组大鼠认知能力[(79.84±6.46)次,(4.83±3.14)次]较对照组[(59.13±7.52)次,(7.94±2.21)次]明显下降(t=5.67,2.25,P＜0.05),神经细胞结构异常,TUNEL阳性细胞数明显增多、Bcl-2和Bax蛋白表达增加(P＜0.05).肌苷组大鼠认知能力[(68.54±8.86)次,(7.11±1.13)次]和细胞结构较模型组[(81.22±3.92)次,(4.61±1.61)次]显著改善(t=3.46,4.64,P＜0.05),相对于模型组(20.24±1.32,41.82±3.71,35.51±2.30),肌苷组Bcl-2蛋白表达(33.52±5.68)明显增强、Bax蛋白表达(25.11±2.45)明显减弱、细胞凋亡数量(23.40±7.07)明显减少(t=6.04,9.94,4.30,P＜0.05).结论 肌苷能促进Bcl-2表达、抑制Bax表达,降低凋亡率,从而改善阿尔茨海默病大鼠大学习和记忆能力.     

热休克蛋白70对大鼠心肺复苏后神经细胞凋亡的影响

目的:研究热休克蛋白70(HSP 70)对大鼠心肺复苏后神经细胞凋亡的影响,探索HSP对脑复苏的可行性。方法:将46只成年Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组与干预组,假手术组不进行模型制作及治疗干预;模型组仅制作心搏骤停(SCA)并心肺复苏动物模型,不进行治疗干预;干预组大鼠在SCA并心肺复苏模型制作后静脉注射HSP 70。分别于6、12 h后检测各组大鼠脑海马区神经细胞凋亡数目、Bcl-2蛋白表达量,对比分析各组大鼠神经细胞凋亡情况的差异,验证HSP 70对大鼠心肺复苏后神经细胞凋亡的保护作用。结果:HSP 70对大鼠心肺复苏后神经细胞具有保护作用,能减少神经元细胞凋亡数目,增加Bcl-2蛋白表达。结论:HSP 70对大鼠心肺复苏后神经细胞有保护作用,对脑复苏具一定的治疗前景。     

蛇床子素对AD大鼠神经元凋亡及细胞周期的影响

目的：观察蛇床子素对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)模型大鼠神经元凋亡及细胞周期的影响,探讨蛇床子素的神经保护作用及其作用机制。方法：采用一次性侧脑室注射聚集态β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ_25-35)建立AD大鼠模型,腹腔注射12.5,25.0 mg·kg^-1蛇床子素进行干预,观察大鼠认知功能、神经元凋亡及细胞周期变化。结果：蛇床子素能明显改善AD模型大鼠空间学习记忆能力,减少神经元凋亡,增加S期细胞百分率,促进G₂/M期细胞进一步分裂,增强细胞增殖活性,调节细胞周期,有利于维持神经元正常的生理功能。结论：蛇床子素可通过减少神经元凋亡、调节细胞周期,具有神经保护作用,这可能是其改善AD大鼠学习记忆障碍的作用机制之一。     

重组异种骨材料对神经元的安全性评价

目的 探讨重组异种骨材料对Wistar大鼠神经元细胞活力和细胞凋亡的影响,以验证其在临床使用中对神经系统的安全性.方法 采取重组异种骨浸提液培养大鼠海马和皮层神经元(依据医疗器械生物学评价国际标准ISO10993.12-2012,进行重组异种骨浸提液的制备),分为重组异种骨样品组和阴性对照组.采用MTT掺入法和流式细胞术分别对不同接触时间、不同培养时间神经元的细胞活力和细胞凋亡进行实验.结果 重组异种骨材料对Wistar大鼠神经元细胞活力和凋亡的影响与阴性对照组相比均无显著差异(P >0.05).结论 重组异种骨材料对Wistar大鼠神经元的细胞活力和凋亡无明显影响,为重组异种骨的临床安全应用提供实验及理论依据.     

重症肌无力中枢损害脾脏改变及细胞凋亡相关蛋白表达

目的 :探讨在重症肌无力 (MG)中枢损害模型中脾脏变化和细胞凋亡相关蛋白改变及其意义 .方法 :分别将自MG患者血中提取的IgG和健康人血中提取的IgG注入大鼠脑室系统 ,建立大鼠MG模型和健康对照组模型 ,一组大鼠不予任何处理作为空白对照组 .脾常规HE染色 ,并用免疫细胞化学方法观察FasL和Bag 1在脾脏中的表达 .结果 :模型大鼠表现出类似实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)动物模型样症状 .在MG组脾脏淋巴细胞增生明显 ,淋巴小结及生发中心数目增多 ,Bag 1抗原阳性细胞弥漫分布于白、红髓区 ,FasL仅偶见或无 .在健康对照组脾脏中可散见Bag 1和FasL表达 (P <0 .0 5 ) ,两种对照模型镜下改变相似 .结论 :脑室注射抗神经肌接头 (NMJ)处的AchRab能够同中枢神经系统的AchR结合 ,引起外周免疫的变化 ,脾淋巴细胞增生 ,Bag 1表达增加 ,Fas/FasL表达受抑制 .这些可能导致EAMG脾脏中激活免疫细胞的正常凋亡过程抑制 ,并参与MG病变进展     

缺氧缺血型脑病与细胞凋亡

目的：观察7d龄大鼠缺氧缺血性脑病（HIE）模型中脑细胞凋亡的规律。为寻求最佳治疗时间提供一定的动物实验依据。方法：利用7d龄SD大鼠建立HIE动物模型,用流式细胞仪测定缺氧缺血（HI）后2h-7d内不同时间脑细胞凋亡率,结果：7d龄正常新生大鼠HI后48h细胞凋亡达高峰,结论：早期用药（24h-48h内）将是抑制细胞凋亡,提高疗效的关键。