MPTP诱导的小鼠PD模型中相关脑区TNF-α的表达变化

目的观察1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的小鼠急性损伤帕金森病（PD）模型中纹状体（CPu）、黑质致密部（SNpc）、额叶皮层联合区（FrA）和腹侧被盖区（VTA）中TNF-α基因和蛋白的时程表达变化。方法用RT-PCR和Western blot方法对MPTP诱导的小鼠PD模型中相关脑区TNF-α基因和蛋白的表达量进行检测。结果MPTP诱导的小鼠PD模型中SNpc和CPu脑区TNF-α基因在给药后6h和1d有显著性表达,TNF-α蛋白在给药后12h和1d有显著性表达,其中1d均是表达高峰;VTA和FrA脑区TNF-α基因和蛋白的表达不显著。结论表达增高的TNF-α可能对SNpc和VTA脑区DA能神经元及CPu和FrA脑区的DA能神经元末梢起了损伤作用,从而为深入研究PD的治疗过程提供一定的实验依据。     

The variability damage of dopaminergic neurons in SNpc and VTA regions of C57BL/6 mice induced by MPTP

目的:观察MPTP对小鼠黑质致密部(SNpc)和腹侧被盖区(VTA)多巴胺(DA)能神经元损伤的差异.方法:按20 mg/kg的剂量每2h腹腔注射MPTP 0.1 mL,共注射4次制作小鼠急性损伤模型.(1)行为学测试:通过爬杆实验和悬杆实验,分别检测给药后不同时间点小鼠运动迟缓症状和肢体僵硬症状的程度;(2)免疫荧光:检测小鼠SNpc和VTA脑区的DA能神经元标志物酪氨酸羟化酶(TH).结果:MPTP急性损伤后小鼠出现运动迟缓和肢体僵硬的表现;SNpc脑区的DA能神经元在各时间点均有减少,其中1d组减少最显著,达69％(P＜0.001),其DA能神经元突起亦变短或消失;VTA脑区的DA能神经元在各时间点亦有所减少,只是其幅度(23％)比SNpc脑区小.结论:小鼠急性损伤模型能选择性损伤SNpc和VTA脑区的DA能神经元,损伤快且严重,并在行为学上也有改变,能较好地模拟人类PD的神经病理学改变.     

磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病小鼠黑质iNOS表达的影响

目的 研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元丢失的可能机制.方法 建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;免疫组化和免疫印迹法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、iNOS和P-ERK1/2的阳性细胞数和蛋白表达水平的变化,并观察给予人参皂甙Rg1(Rg1)对上述变化的影响.结果 模型组小鼠出现典型PD行为学症状.在MPTP第5次注射后7 d,与对照组相比黑质区TH阳性神经元数量显著丢失77%(P<0.01),中脑黑质TH蛋白印记表达水平显著降低约75%(P<0.01);Rg1预处理后,PD小鼠行为学症状减轻,与对照组相比TH上述指标分别下降约44%和41%(P<0.01).MPTP第3次注射后1.5 h P-ERK1/2核内始见,至6 h iNOS有较高表达.Rg1预处理可显著阻抑P-ERK1/2和iNOS的表达(P<0.01).Spearman相关性分析,P-ERK1/2和iNOS的表达呈显著正相关(P<0.01).结论 P-ERK1/2可能通过捌控iNOS表达进而导致PD黑质DA能神经元丢失,Rg1可能阻抑此通路以保护DA能神经元.     

烟碱对帕金森病模型小鼠多巴胺释放的影响及机制探讨

目的：研究烟碱对帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型小鼠不同脑区多巴胺（dopamine,DA）的影响及其机制。方法:应用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP）制备PD小鼠模型,应用爬杆实验检测小鼠运动功能,应用酪氨酸羟化酶免疫组化观察小鼠中脑黑质致密部（substantia nigra pars compacta, SNpc）多巴胺能神经元数目,应用高效液相色谱法检测小鼠不同脑区（纹状体、海马、皮质）DA的含量,应用蛋白质免疫印迹检测小鼠纹状体多巴胺转运体（dopamine transporter,DAT）的变化。结果：①烟碱可显著改善MPTP导致的野生型小鼠运动功能障碍;②烟碱可显著改善MPTP诱导的野生型小鼠中脑SNpc多巴胺能神经元的丢失;③烟碱可显著减轻MPTP所致的野生型小鼠纹状体DA含量的减少,烟碱对α7-烟碱型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs）敲除型（knockout,KO）小鼠MPTP模型中纹状体DA含量的减少无明显恢复作用,烟碱对野生型小鼠或α7-nAChRs KO小鼠MPTP模型中海马和皮质中的DA含量无明显影响。④烟碱可显著增加野生型小鼠MPTP模型中纹状体DAT的含量,烟碱对α7-nAChRs KO小鼠MPTP模型中的纹状体DAT的减少无逆转作用。结论：烟碱可以激活α7-nAChRs抑制PD模型小鼠SNpc区多巴胺能神经元的死亡,提高纹状体DAT水平;促进纹状体DA含量增加,从而在PD模型小鼠中发挥神经保护作用。     

Genistein对MPTP致帕金森病去势模型小鼠多巴胺能神经元保护作用及其机制研究

目的研究大豆异黄酮活性成分genistein对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)制备的去卵巢(OVX)帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法雌性C57BL6小鼠行双侧去卵巢手术(OVX)后,分为对照组、MPTP组、genistein预处理组和雌激素预处理组。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫组织化学染色以及图像分析等技术分别对黑质致密带(substantial nigra pars compacta,SNpc)多巴胺转运蛋白(dopaminetransporter,DAT)、bcl-2等指标的mRNA及蛋白质的表达水平进行考察。结果 Genistein及雌激素用药组SN内DAT、bcl-2 mRNA及其蛋白的表达水平较MPTP组显著升高(P<0.01),差异有统计学意义。结论 Genistein对MPTP制备的PD模型小鼠黑质DA能神经元有明显的保护作用,其作用机制可能与抗凋亡有关。     

染料木黄酮对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的 探讨染料木黄酮对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备的帕金森病(PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用.方法 将C57BL6雄性小鼠随机分为正常对照组、MPTP模型组及染料木黄酮预处理组.用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)及多巴胺转运体(DAT) 基因的表达水平.应用高效液相色谱法检测纹状体(Str)内DA及其代谢物二羟基苯乙酸(DOPAC)含量.结果 MPTP模型组黑质TH和DAT基因的表达较正常对照组明显降低,染料木黄酮预处理组可逆转上述改变(F=20.31、13.19,P<0.01).MPTP模型组Str内DA及其代谢产物DOPAC的含量较对照组明显减少,应用染料木黄酮后可逆转上述改变(F=63.58、16.12,P<0.01).结论 染料木黄酮对MPTP制备的PD模型小鼠黑质纹状体DA能神经元有明显的保护作用.     

氨基胍对帕金森病小鼠黑质内多巴胺能神经元的保护作用

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)特异性抑制剂氨基胍(AG)对帕金森病模型小鼠黑质内多巴胺(DA)能神经元的影响。方法:采用Lau法制作PD小鼠模型,通过行为学观察和免疫印迹法,观察PD小鼠模型的行为学表现,及腹侧中脑(包括VTA和SN)iNOS、酪氨酸羟化酶(TH)表达水平的变化。并观察给予iNOS抑制剂AG后对上述变化的影响。结果:与对照小鼠相比,PD小鼠出现PD典型的行为学表现,腹侧中脑TH含量下降约77%,同时i-NOS含量大幅度升高。经iNOS抑制剂AG处理的PD小鼠行为表现明显减轻,腹侧中脑TH含量仅下降约41%,腹侧中脑iNOS含量也较模型组明显为低。结论:iNOS的表达与PD模型小鼠黑质内DA能神经元的丢失有关;AG可能对PD模型小鼠黑质内DA能神经元有保护作用。     

MPTP诱导影响亚急性与慢性帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元

目的:探索1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的亚急性与慢性帕金森病(PD)模型小鼠的黑质多巴胺能神经元改变.方法:采用MPTP诱导亚急性与慢性PD小鼠模型,分析小鼠酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目和小鼠行为学悬挂评分.结果:慢性与亚急性PD模型小鼠TH阳性神经元计数分别降至正常水平的21.02％与17.94％;且TH阳性神经元计数下降均早于行为学改变.结论:小鼠慢性模型比亚急性模型更接近帕金森病的病理与病程.     

姜黄素对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元作用的研究

目的探讨姜黄素（Curcumin,Cur）对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）制备的帕金森病（PD）模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法将C57BL6雄性小鼠随机分为正常对照组、MPTP模型组及姜黄素预处理组。用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测黑质酪氨酸羟化酶（TH）及多巴胺转运体（DAT）基因的表达水平。应用高效液相色谱法检测纹状体（Str）内DA及其代谢物二羟基苯乙酸（DOPAC）含量。结果MPTP模型组黑质TH和DAT基因的表达较正常对照组明显降低,姜黄素预处理组可逆转上述改变（P〈0.01）。MPTP模型组Str内DA及其代谢产物DOPAC的含量较对照组明显减少,应用姜黄素后可逆转上述改变（P〈0.01）。结论姜黄素对MPTP制备的PD模型小鼠黑质纹状体DA能神经元有明显的保护作用。     

β-catenin在MPTP致C57BL/6小鼠多巴胺能神经元损伤模型腹侧中脑的表达变化

目的 探讨在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenvl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致C57BL/6小鼠多巴胺能神经元损伤模型中β-catenin在腹侧中脑不同时间点的表达变化.方法 采用腹腔注射MPTP制备C57BL/6小鼠帕金森病模型.40只雄性C57BL/6小鼠,随机分为8组(n=5):对照组、MPTP 0 d组、MPTP 1 d组、MPTP 2 d组、MPTP 4 d组、MPTP 7 d组、MPTP 14 d组、MPTP 21 d组.在末次注射MPTP后的相应时间点将动物处死,Western blot法检测腹侧中脑磷酸化β-catenin(phosphorylated β-catenin,p-β-catenin)以及总β-catenin蛋白的表达;免疫组化法检测腹侧中脑β-catenin蛋白阳性细胞表达.结果 MPTP致伤显著增加了C57BL/6小鼠腹侧中脑总β-catenin蛋白的水平,然而p-β-catenin蛋白并没有明显的改变.免疫组化检测显示MPTP处理后第7天β-catenin蛋白在腹侧中脑各区域黑质网状部(SNr),黑质致密部(SNpc)以及被盖腹侧区(VTA)的表达增多并发生了核转移.结论 MPTP所致腹侧中脑区β-catenin蛋白表达增加与帕金森病发生发展的病理机制有关.     

6-OHDA诱导大鼠不同脑区星形胶质细胞反应差异的研究

目的：观察大鼠不同脑区中的星形胶质细胞对6-羟多巴（6-OHDA）局部注射反应的差异。方法：将6-OHDA局部注入大鼠脑内黑质致密部（SNc）、纹状体（CPu）、腹侧被盖区（VTA）和额叶联合皮层（FrA）,用免疫组织化学方法观察这些脑区中星形胶质细胞的变化。结果：6-OHDA注入1d后各脑区星形胶质细胞反应较轻,7d后反应明显,并持续至14d;各组相比较以SNc组和VTA组反应明显,而CPu组和FrA组反应较轻。结论：大鼠不同脑区中的星形胶质细胞对6-OHDA局部注射后的反应存在差异。     

Genistein对MPTP致帕金森病去势模型小鼠多巴胺能神经元保护作用及其机制研究

目的研究大豆异黄酮活性成分genistein对1一甲基一4一苯基一1,2,3,6一四氢吡啶（1一methy-4-phenyl一1,2,3,6一tetrahydropyridine,MPtP）制备的去卵巢（OVX）帕金森病（Parkinson’sdisease,PD）档型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法雌性C57BL6小鼠行双侧去卵巢手术（OVX）后,分为对照组、MPTP组、genistein预处理组和雌激素预处理组。     

丹参酮ⅡA对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其机制

目的：探讨丹参酮ⅡA对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱发的帕金森病（PD）模型小鼠中脑黑质区多巴胺能神经元损伤的影响,阐明其对多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。 方法：将60只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、PD模型组和丹参酮ⅡA组,每组20只。PD模型组和丹参酮ⅡA小鼠采用MPTP制备PD小鼠模型,丹参酮ⅡA组制备PD模型后腹腔注射丹参酮ⅡA,观察各组小鼠行为学表现,采用免疫组织化学、免疫蛋白印迹和免疫荧光双标法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）、整合素超家族成员Ⅰ型跨膜蛋白（cd11b）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化酶、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性细胞数和蛋白表达水平。 结果：与对照组比较,PD模型组小鼠出现典型的PD样症状;PD模型组小鼠中脑黑质区TH阳性神经元数和蛋白表达水平较对照组减少约45%和50%,cd11b、p47-phox和iNOS阳性细胞数和蛋白表达水平增加（P<0.01）。与PD模型组比较,丹参酮ⅡA组小鼠PD样症状减轻,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,cd11b、p47-phox和iNOS阳性细胞数明显减少（P<0.01）,蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论：丹参酮ⅡA可在一定程度上阻抑MPTP诱导的PD模型小鼠中脑黑质区多巴胺能神经元的丢失,其神经保护作用机制可能与抑制小胶质细胞激活、NADPH氧化酶和iNOS表达有关。     

PD鼠尾壳核内GAD67 mRNA的表达及L-Dopa的影响

目的 观察6-OHDA毁损黑质及L-Dopa处理对大鼠尾壳核（CPu)和苍白球（GP）功能活动的影响。方法 6-O-HDA损毁大鼠单侧中脑黑质制备PD模型大鼠，用位杂交的方法分别观察PD鼠、L-Dopa处理PD鼠及对照组鼠CPu及GP中GAD67mRNA表达水平的变化。结果 GAD67mR-NA的表达在PD鼠CPu中明显升高（76%）。在GP无明显变化，服用L-Dopa后 ,GAD67mRNA的表达水平在CPu明显下降（31%）而在GP则升高（42%）。结论 CPu和GP功能活动的改变在PD的发病机制中起着重要作用。     

胰高血糖素样肽-1类似物对帕金森病模型小鼠运动及多巴胺能神经元的影响

目的 研究胰高血糖素样肽-1类似物（Val8） GLP-1-Glu-PAL对MPTP诱导的帕金森病小鼠模型黑质区多巴胺能神经元的保护作用.方法 取10～12周健康雄性C57/BL6小鼠56只,采用随机数字表法随机分为对照组（Control组）,模型组（MPTP组）,单纯注药组（Val8组）与治疗组（MPTP＋Val8组）.MPTP组腹腔注射MPTP （30 mg/kg＆#183;d）,同时Control组给予等体积0.9％生理盐水,Val8组腹腔注射（Val8） GLP-1-Glu-PAL（25 nmol/kg）,MPTP＋Val8组注射完MPTP后1h后注射（Val8） GLP-1-Glu-PAL,连续8d.每天药物注射完2h后进行游泳实验及转棒实验以观测小鼠行为变化.第8天行为学测试完1h后处死小鼠,免疫组化法检测小鼠黑质致密部酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase,TH）阳性细胞数.结果 MPTP成功诱导了帕金森病模型,第1天到第8天,MPTP组与Control组相比,小鼠的游泳评分[（1.715±0.143）分]及掉落潜伏期[（68.048±7.823）分]明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,而黑质致密部TH阳性细胞也明显减少（P＜0.01）;MPTP＋Val8组小鼠的游泳评分[（1.120±0.143）分]及掉落潜伏期[（20.546±7.823）分]则优于MPTP组,差异有统计学意义（P＜0.05）,并且TH阳性细胞数显著增多（P＜0.01）.结论 （Val8） GLP-1-Glu-PAL对MPTP所致的帕金森病小鼠黑质区多巴胺能神经元具有保护作用.     

囊泡单胺转运体在帕金森病小鼠脑组织中的分布特征

目的：探讨囊泡单胺转运体(VMAT2)在帕金森病(PD)小鼠模型脑组织中的分布特征与帕金森病的关系。方法：使用利血平、MPTP及联合利血平和MPTP分别造成C57BL小鼠的PD模型，应用免疫组织化学方法观察VMAT2和TH在黑质致密部、纹状体、腹侧被盖和蓝斑分布的变化。结果：免疫组织化学分析显示，帕金森病小鼠较对照组小鼠VMAT2和酪胺酸羟化酶(tvrosine hvdmxvlase，TH)阳性神经元细胞数目在黑质致密部明显减少，腹侧被盖和蓝斑中的阳性神经元细胞数无明显变化；VMAT2和TH在纹状体区域阳性神经元纤维明显减少；同时发现在正常对照组中VMAT2在黑质致密部中的分布既少于腹侧被盖也少于蓝斑。结论：这种对多巴胺神经元具有保护作用的VMAT2在黑质致密部中的分布少于腹侧被盖和蓝斑，黑质致密部保护作用薄弱是帕金森病黑质选择性受损的重要原因。     

灵芝孢子油对MPTP处理小鼠行为学及黑质区病理变化的影响

OBJECTIVE: To investigate the oil from the spores of ganoderma lucidum, a rare Chinese herb, on the behaviors and pathological changes in the substantia nigra pars compacta (SNpc) in mouse models of Parkinson's disease (PD) induced by MPTP. METHODS: C57BL mice were divided into 3 groups, and the ganoderma spores oil + MPTP group were treated with ganoderma spores oil for 8 days, together with subcutaneous injection of MPTP (30 mg/kg) starting on the third day for 6 days; MPTP group were pretreated with normal saline before subcutaneous MPTP injection, and the normal control group received pretreatment with normal saline before subcutaneous normal saline injection. The behavioral changes of the mice in different groups were observed by pole test, dopamine and its metabolic products in the striatum determined by HPLC, tyrosine hydroxylase (TH) positive cells detected by immunofluorescence method, and expression of TH protein by Western blotting. RESULTS: The mice in the ganoderma spores oil + MPTP group presented significantly less involuntary movement of the limbs in the pole test than the mice in MPTP group. The levels of dopamine and DOPAC in the striatum of ganoderma spores oil-treated mice were increased as compared with those in MPTP group. The number of surviving TH-positive neurons in SNpc of mice in ganoderma spores oil + MPTP group was significantly greater than that in MPTP group, with also significantly increased TH protein expression. CONCLUSION: Ganoderma spores oil has neuroprotective effect for preventing doparminergic neuron from impairment by MPTP.     

人参皂苷Rg1对帕金森病小鼠黑质中酪氨酸羟化酶及ephrinB2和磷酸化c-Jun表达的影响

目的观察人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(TH)mRNA、ephrinB2和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)蛋白表达的影响,探讨人参皂苷Rg1对PD的治疗作用及其可能机制。方法将27只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组9只。模型组和人参皂苷Rg1组小鼠腹腔注射MPTP构建PD模型。注射MPTP前,对照组和模型组小鼠腹腔注射生理盐水(1 mL·kg-1·d-1),人参皂苷Rg1组小鼠腹腔注射人参皂苷Rg1(10 mg·kg-1·d-1),连续3 d。通过爬杆实验观察小鼠行为学变化,2周后采用反转录聚合酶链反应检测小鼠黑质中TH mRNA的表达,免疫组织化学法检测小鼠黑质中ephrinB2及p-c-Jun蛋白的表达。结果不同时间点模型组小鼠的爬杆时间均显著长于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组小鼠脑黑质中TH mRNA表达水平显著低于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);模型组小鼠脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun阳性表达细胞数显著高于对照组和人参皂苷Rg1组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MPTP可能通过促进小鼠中脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun的表达及诱导多巴胺能神经元细胞凋亡导致PD;人参皂苷Rg1可能通过降低小鼠中脑黑质中ephrinB2、p-c-Jun的表达并缓解多巴胺能神经元凋亡而改善PD症状。     

核因子NF—kB对帕金森病MPTP模型小鼠黑质区iNOS表达的影响

①目的观察核因子NF—KB（nuclearfactorkappaB）对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPrrP）制备的帕金森病（PD）小鼠模型黑质区诱导型一氧化氮舍酶（induciblenitricoxide,iNOS）表达的影响,以及给予人参皂甙Rgl（GinsenosideRgl,Rgl）后表达的变化,探讨在PD发病过程中NF—KB对iNOS的表达调控作用以及人参皂甙Rgl对PD可能的防治作用。②方法采用MPl．P制备PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质区酪氨酸羟化酶（tyrosinehydroxylase,TH）、NF—KB和iNOS的表达变化;并观察给予人参皂甙Rgl后对上述变化的影响。③结果与对照组相比,模型组小鼠出现典型PD症状,黑质区TH阳性神经元明显丢失、蛋白水平下降,NF—KB和iNOS表达也明显增加,二者表达呈正相关关系;经人参皂甙Rgl处理后,上述变化均明显减轻。④结论在MPllP所致PD模型小鼠中,核因子NF—KB对黑质区iNOS表达可能起重调控作用,人参皂甙Rsl可能通过影响NF—KB表达从而发挥对多巴胺能神经元的保护作用。