用生物测定法控制草乌类毒性的方法探讨

本文采用草乌及制草乌提取物,直接对小白鼠和青蛙给药,从动物的中毒症状,死亡情况来判断草乌类药材的毒性,估测双酯类生物碱的含量,具有简便,迅速、直观、可靠的特点。     

草乌毒性及解毒方法研究进展

文章从心脏、神经及胚胎三方面综述了草乌的主要毒性,详细介绍了目前主要采用的炮制及配伍两种解毒方法,并提出代谢组学方法将成为今后草乌毒性研究的有效方法。     

基于网络毒理学探讨草乌心脏毒性

目的:通过建立草乌活性成分-作用靶点、蛋白相互作用、靶点相应的生物功能和通路网络,以及利用分子对接技术探讨草乌心脏毒性的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库和分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)和毒性与基因比较数据库(Comparative Toxicogenomics Database,CTD)筛选出草乌有毒候选成分。依据反向药效团匹配(Pharm Mapper)方法预测草乌毒性候选成分的作用靶点,与从人类基因数据库(Gene Cards)中寻找到的心脏相关基因蛋白进行比对,筛选出重合的蛋白作为草乌的潜在的心脏毒性靶点。采用Cytoscape软件构建草乌毒性候选成分-作用靶点网络。通过String数据库结合Cytoscape软件绘制蛋白相互作用网络,用DAVID平台对靶点生物功能及涉及的通路进行分析,最后用Discover Studio软件对关键蛋白与草乌毒性候选成分的结合进行验证。结果:草乌中筛选得到6种有毒候选成分,涉及27个心脏毒性作用靶点,网络分析结果表明靶点主要是通过参与心脏磷代谢,磷酸化的监管等磷相关的代谢和调节,以及通过FKBP1A,TGFB2,INSR等靶点对心脏的代谢,发育及形态产生重要的影响,进而产生心脏毒性。结论:利用中药多成分-多靶点-多通路的特点,探究了草乌心脏毒性作用机制,并预测了其可能存在的毒性,为进一步开展草乌心脏毒性作用机制研究提供了新思路和新方法。     

草乌几种炮制品的毒性实验比较

比较性地研究了草乌润后加压蒸新炮制品和药典炮制品、生品的急性毒性及对心律和呼吸的影响。结果证明新法１炮制品（润４８ｈ，６８．６５ｋＰａ，１１５℃蒸２ｈ）具有毒性低，对心律影响小，抑制呼吸作用弱等优点。     

草乌几种炮制品的毒性实验比较

比较性地研究了草乌润后加压蒸新炮制品和药典炮制品、生品的急性毒性及对心律和呼吸的影响。结果证明新法1炮制品(润48h,68.65kPa,115℃蒸2h)具有毒性低,对心律影响小,抑制呼吸作用弱等优点。     

川乌草乌中毒死亡病例分析

目的：分析2例死亡病例的致死原因。方法：通过2例死亡病例的分析，讨论川乌草乌的毒性、导致中毒的原因和毒性表现。结果：此二例均为川乌草乌使用过量，煎煮时间过短导致中毒死亡。结论：为避免有毒中药中毒反应的发生，应因病施治，严格掌握用药剂量，并向患者交待使用注意事项。     

生草乌对小鼠MAPK信号通路毒性影响的研究

目的：探讨生草乌在基因层面的毒性及其毒作用机制。方法：根据ICH的要求,在SPF实验条件下采用生草乌水煎液灌胃KM种小鼠进行急性毒性实验,采用基因表达谱技术,对五种脏器的毒性进行全基因组描绘,应用Cluster、GO和Pathway等生物信息学手段对获取的数据进行综合分析并进行定量PCR验证。结果：生草乌明显地影响了小鼠MAPK通路,并影响了该通路的关键基因CACN、CrKⅡ、IKK、MKP、PPP3C、GADD45、MST1/2等基因。结论：生草乌可能是通过影响MAPK通路的关键基因而引起MAPK通路的毒性,最终导致药物毒性的产生。     

生草乌所致心脏毒性的毒代动力学/毒效动力学模型研究

目的:本文主要是探讨生草乌所致心脏毒性的毒代动力学/毒效动力学(TK-TD)的研究。创新性的应用了ADAPT 5建立了一个拥有间接响应毒效的整合TK-TD模型,作为一种新的定量框架来评估生草乌引起的异常心率合并QT间期的变化。方法:生草乌灌胃给药后大鼠体内的TK-TD模型研究:①血浆药物浓度的测定:雄性SD大鼠随机分为空白对照组和生草乌0.36 g/kg、0.42 g/kg、0.49 g/kg组,单次灌胃给药后0.5、1、1.5、2、3、5、7、10、12和24 h颈动脉取血,记录心率(HR)和QT间期指标,采用UPLC/Q Exactive MS技术测定血浆药物浓度(观测值)。②毒物代谢动力学模型建立:时间t与观测值做药时曲线关系,对4种备选TK模型进行ADAPT 5程序下的最大似然法(ML)测试分析,采用AIC和BIC较小原则选择最优拟合方法和模型,Maltab 2011b收敛和扩展数据后输出模型。③毒物效应动力学模型建立:时间t分别与HR和QT建立时效关系曲线,针对三种生物碱到达Emax的时间(t≈1.5 h～2 h)明显滞后于Cmax(t≈1 h),建立生草乌大鼠血药浓度依赖性的间接毒物效应响应模型,血药浓度-时间-毒效三者的变化速率由Hill's方程联系。④TK-TD整合模型建立。结果:TK模型为一房室线性一级消除动力学模型,0.49 g/kg生草乌QT间期存在一定剂量-时间依赖性,故对心率和生草乌0.36 g/kg QT间期建立间接毒物效应响应模型的生理相(Biophase)TD模型,对生草乌0.49 g/kg QT间期采用间接毒物效应响应模型的Jusko's间接响应(IDR)PD模型,输出TK-TD参数。结论:具有房室线性一级消除动力学和间接响应的整合TK-TD模型更适用于解释生草乌口服给药暴露与心脏毒性之间的关系,科学准确地预测生草乌对大鼠的心脏毒性。     

草乌中乌头类生物碱提取方法比较研究

目的优化草乌中乌头类生物碱提取方法,比较草乌、附子生品及市售炮制品中乌头类生物碱的含量,为相关中药中生物碱的测定和临床应用提供参考。方法分别用7种提取方法提取附子中乌头类生物碱,比较各方法对3种双酯型生物碱的提取效率,并测定乌头类生药及其炮制品中乌头类生物碱含量。结果10％氨水乙醚冷浸法对3种双酯型生物碱的提取效率最高。炮制品中的乌头类生物碱含量明显低于生药,各种炮制品中乌头类生物碱的含量差别也比较大。结论采用10％氨水乙醚冷浸法,高效液相色谱一紫外光谱（HPLC—UV）法对药材中乌头类生物碱进行提取和含量测定,能真实反映药材中药效和毒性成分。不同的炮制品中各生物碱含量差别较大,临床应用应有差别。     

草乌的蒙中医药用及浅析

本文通过祖国传统医学蒙医、中医及现代药学对草乌的形态、分布、分类、性味、功能、炮制、临床配伍、药理毒理等研究进行了罗列，较全面地展现了草乌目前研究应用的现状。以期为正在从事蒙医药应用开发、新产品研制的同道提供参考。     

诃子对草乌毒性生物碱含量影响的研究进展

目的从诃子汤制草乌及诃子草乌配对共煎两方面,综述诃子对草乌毒性生物碱含量影响的研究现状,并提出今后诃子解草乌毒的研究方向。方法检索中国知网、万方和维普数据库,收集20年来诃子炮制草乌与诃子草乌共煎的相关文献并进行整理分析。结果获得相关文献26篇,经整理分析发现此类研究集中在对诃子炮制草乌减毒的原理、工艺、方法和诃子与草乌配对共煎的减毒原理、配伍比例等方面。结论随着研究的深入,今后诃子鞣质对草乌各类生物碱的影响规律需深入挖掘,诃子炮制草乌的工艺需进行规范统一,诃子草乌共煎减毒存效的比例规律需研究探讨。     

川乌、草乌中毒原因及救治方法

川乌为毛茛科植物乌头 (ＡｃｏｎｉｔｕｍｃａｒｍｉｃｈａｅｌｉＤｅｂｘ .)的干燥母根 ;草乌为毛茛科植物北乌头 (ＡｃｏｎｉｔｕｍｋｕｓｎｅｚｏｆｆｉｉＲｅ ｉｃｈｂ)的干燥根。二者为常用中药 ,均有剧毒 ,其主要功能为祛风除湿 ,温经止痛 ,用于风寒湿痹、关节疼痛及坐骨神经痛等。现中医临床往往二者相须为用 ,但对二者的毒性没引起足够的重视 ,近几年中毒死亡事故屡有发生。为了避免中毒事故的再次发生 ,现将中毒原因、预防及中毒救治分述如下。1　中毒原因川乌、草乌的剧毒成分主要为乌头碱 (双酯型二萜类生物碱 )。乌头碱动物实验…     

黄草乌炮制前后生物碱含量及心脏毒性差异研究

目的考察黄草乌炮制前后两种生物碱含量变化及其对心脏的毒性影响。方法采用UPLC法测定黄草乌炮制前后滇乌碱、8-去乙酰滇乌碱的含量;采用Bliss法测定黄草乌生品的大鼠半数致死量(LD50);连续ig给药14d,观察麻醉大鼠II导联心电图变化,检测血清中肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平,观察心肌病理组织形态学变化等。结果黄草乌炮制前后滇乌碱的含量分别为263.96μg/g、未检出,8-去乙酰滇乌碱的含量分别为未检出、568.47μg/g;生品LD50为生药4.2 g/kg,炮制品最大给药量为生药18.0 g/kg;连续ig给药14 d,生品组麻醉大鼠先后出现室性早搏、室性二联律和室颤等,炮制品组前期出现心动过缓,60 min恢复正常;与对照组比较,生品组血清LDH和CK水平均显著升高(P0.05),炮制品组只有LDH水平显著升高(P0.05);生品组心肌纤维之间间隙明显扩大,炎细胞浸润明显;炮制品组心肌纤维排列较整齐,间质中可见个别炎细胞浸润。结论在所给的剂量下,黄草乌生品对心脏毒性较强,炮制后毒性明显降低。     

草乌炮制新工艺的研究

本文研究了草乌润后加压蒸或常压蒸的炮制新工艺,其总生物碱的含量均高于药典法炮制品,而毒性成分酯型生物碱的下降幅度接近药典法炮制品,从化学成分的角度阐明了草乌炮制新工艺的优越性,认为采用115℃、0.5 kg/cm~2藻2h和蒸4h的方法为佳。     

草乌中毒引发心律失常的急救措施探讨

目的 探讨草乌中毒引发心律失常的治疗措施,为临床救治提供依据.方法 70例明确诊断草乌中毒的患者随机分为3组,分别给予常规治疗加抗心律失常治疗（A组）,常规治疗加抗心律失常治疗加血液灌注（B组）,常规治疗加抗心律失常治疗加参麦注射液（C组）,比较各组心律失常恢复时间.结果 A、B、C组患者的转律时间依次为（413.12±248.43）h、（250.90±155.94）h和（314.50±193.35）h,组间转律时间比较差异有统计学意义（P＜0.05）,两两比较A组和B间差异有统计学意义（P＜0.05）,B组转律时间低于A组,而A组与C组、B组与C组间差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 血液灌注治疗草乌中毒引发的心律失常可有效地减少转律时间.     

附子乌头草乌及其炮制品的毒效比较

目的:从毒效角度出发,比较附子、乌头、草乌不同炮制品及提取物的毒性,为研究和应用这些生药提供相关实验依据。方法:以小鼠为主要研究对象,观察急性死亡率,心电影响阈剂量来观察毒性,以镇痛及其抗室颤来观察其药效。结果:从急性毒性看,白附片和黑顺片毒性较小,其最大给药剂量均为20.52 g.kg-1。盐附子毒性较大,LD50为11.301 g.kg-1。结合相关活性综合考察,临床安全指数由大到小依次为:黑顺片>白附片>盐附子。草乌毒性较大(LD50 292.38 mg.kg-1),经炮制后毒性明显减小,约降低70.32倍。结论:附子、乌头炮制后起到了减毒存效的作用,而草乌炮制后则表现为毒效同时降低。     

醋的种类对炮制草乌生物碱类成分的影响

目的：探讨醋的种类对醋制草乌生物碱类成分的影响,为筛选炮制辅料用醋提供依据。方法：采用不同类型的米醋炮制草乌,HPLC法测定炮制品中3种双酯型生物碱和3种单酯型生物碱的含量,比较采用不同类型的醋制备的草乌炮制品中生物碱的含量差异。结果：各炮制品中双酯型生物碱的含量：生草乌〉食用乙酸制草乌〉工业乙酸制草乌〉陈醋制草乌≈龙门米醋制草乌〉玫瑰醋制草乌〉药典法制草乌;单酯型生物碱的含量：药典法制草乌〉食用乙酸制草乌〉龙门米醋制草乌≈工业乙酸制草乌〉陈醋制草乌≈玫瑰醋制草乌〉生草乌。结论：醋制草乌可以达到炮制减毒的效果,食用醋比乙酸的减毒效果更佳。     

草乌类蒙药的红外光谱分析与鉴定

目的：对蒙药草乌根、草乌叶、草乌花、草乌芽的原药材及其总生物碱提取物进行分析。方法：采用红外光谱的三级鉴定方法（红外光谱、二阶导数谱以及二维相关谱）进行样品的全成分分析。结果：草乌根的谱图与淀粉的标准谱图相似,出现淀粉特征峰1 155、1070、1019cm^-1,故草乌根含有大量淀粉;叶、花、芽含芳香类物质较多（1600cm^-1）,糖苷类物质（1050-1070cm^-1）、酯类物质不明显;草乌花、草乌叶、草乌芽的红外谱图中能够观察到芳香环（1595cm^-1附近）和=C-O（1262cm^-1附近）有特征吸收,证明三者共有成分为二萜类生物碱。二阶导数谱图显示,根在1712cm^-1（C=O）附近的特征峰明显强于花、叶和芽,说明根中二萜类生物碱类成分含量高于花、叶和芽;二维谱图在800-1300cm^-1处根有6个自动峰1745、1650、1560 （最强）、1465、1400、1300cm^-1;叶、芽、花相似其自动峰有1680、1560（最强）、1465cm^-1。结论：红外光谱宏观指纹技术可提供大量整体信息,能够较准确的把握草乌类药材的整体质量。红外光谱法和二维相关光谱提供了大量草乌、草乌花、草乌叶、草乌芽的整体结构信息,验证了4种药材所含物质结构和含量的差异,为今后草乌的系统研究工作奠定基础。     

醋的用量对炮制草乌生物碱类成分的影响

目的：探讨醋的用量对醋制草乌生物碱类成分的影响。方法：采用不同用量的米醋炮制草乌,HPLC法测定炮制品中3种双酯型生物碱和3种单酯型生物碱的含量,比较生草乌、药典法制草乌、不同用量醋制草乌中生物碱的含量差异。结果：醋制草乌可以使双酯型生物碱水解,生物碱含量的变化与醋的用量有一定相关性;醋制草乌中单酯型生物碱的含量明显高于药典法制草乌。结论：醋制草乌可以作为一种新的草乌炮制方法,但应减少临床用量。