云南民族中草药毛喉鞘蕊花中微量砷的形态分析

采用离子交换和溶剂萃取相结合的分离技术,利用电感耦合等离子体发射光谱,对云南民族中草药毛喉鞘蕊花中微量砷的四种形态化合物As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、一甲基胂(MMA)、二甲基胂(DMA)进行了分离和测定。     

离子交换树脂-原子荧光光谱法测定三七中的4种形态砷

目的 建立分析三七中的有毒砷形态的方法.方法 应用水-盐酸将三七中的形态砷原样提取后,采用阴、阳离子交换树脂成功分离了4种形态砷,无机的As(Ⅲ)、As(V)和有机的一甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA).再用氢化物发生原子荧光光谱仪,对各形态砷进行测定.结果 砷在0.5 ～40 μg/L范围内呈良好线形关系,方法的检出限为As(Ⅲ)0.20μg/L;DMA 1.25 μg/L;MMA 1.14μg/L.相对标准偏差为无机砷[As(Ⅲ)+As(V)]6.68％,As(Ⅲ)8.01％,As(V)13.42％,MMA13.95％,DMA2.71％,回收率无机砷As(Ⅲ)90.30％ ～92.24％,As(V )88.27％ ～90.91％,MMA 88.18％ ～90.82％,DMA90.54％～101.41％.结论 该方法克服了现行三七标准中将有机砷混入无机砷的缺点.     

当归补血汤含药血清对ox-LDL激活单核细胞p38 MAPK的作用

目的通过当归补血汤对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)激活单核细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号转导通路的作用研究,探讨当归补血汤早期阻断动脉粥样硬化(As)病变发展进程的可能性及其机理。方法制备当归补血汤血清,对兔血低密度脂蛋白(LDL)进行分离和氧化修饰,分离鉴定兔外周血单核细胞(MC),并分为空白对照组、ox-LDL组、单味黄芪组、单味当归组和当归补血汤组,除空白对照组外,其余各组分别予以ox-LDL刺激,应用免疫印迹法检测p38MAPK的活性。结果 p38 MAPK经ox-LDL刺激后活性明显增强,单味黄芪、当归对经ox-LDL刺激后增强的p38MAPK活性无明显影响,而当归补血汤却能明显下调经ox-LDL刺激后增强的p38MAPK活性。结论当归补血汤防治As及其相关疾病的作用机理主要是通过下调p38MAPK活性,避免了ox-LDL诱导单核细胞聚集到血管内皮,从而在As病变的早期发展阶段阻断其进程,又可缓解后期病变的发展。     

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法检测17种大宗常用中草药中砷元素形态

中草药中重金属与有害元素形态分析目前尚处于起步阶段。该研究首先采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法检测了17种大宗常用中草药(16种植物药、1种药用真菌)共103个批次中砷(As)总量;进而基于HPLC-ICP-MS建立了中草药中6种As形态的同时检测方法,选择AS7阴离子交换柱,系统分析了17种中草药中的As形态。结果表明微波消解法对药材进行前处理并用ICP-MS检测As总量的方法稳定可靠; As形态分析方面,采用高温超声提取法,6种As形态线性关系良好,相关系数R20. 999 9,6种As形态LOQ分别为:砷甜菜碱(As B) 0. 20μg·L~(-1),亚砷酸[As(Ⅲ)]0. 10μg·L~(-1),二甲基砷(DMA) 0. 15μg·L~(-1),砷胆碱(As C) 0. 10μg·L~(-1),一甲基砷(MMA) 0. 25μg·L~(-1),砷酸[As(Ⅴ)]0. 10μg·L~(-1)。加标回收率为84. 24%～121. 5%,相对标准偏差为2. 7%～11%。103批药材中,仅有1批样品As总量超出药典限量标准; 103批药材中As(Ⅲ)和As(Ⅴ)检出率高,其中多数以As(Ⅴ)为主要检出形态,无机As占比达到80. 90%～98. 73%;部分样品检出DMA,MMA和As B,在所有批次中As C均未检出。该研究建立了适合于中草药中As形态的分析方法,为中草药中As形态残留提供了基础数据,可为其风险评估和质量标准的制修订提供重要参考。     

刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷B的含量测定

目的：建立刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷B的含量测定方法。方法：用小鼠负重游泳实验，确定刺五加粗提物的抗疲劳活性部位；硅胶柱色谱，Sephadex LH-20柱色谱，制备液相色谱对活性部位分离纯化，并对分离所得化合物进行理化性质研究和结构鉴定；含量测定中高效液相色谱条件为Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)，流动相乙腈-水-醋酸(10∶90∶0.01)，流速1.0 mL·min-1，紫外检测波长344 nm。结果：从刺五加抗疲劳活性部位As1中分离得到一化合物，鉴定为刺五加苷B；刺五加苷B的线性范围为 0.104～20.8 μg，r=0.999 9；平均回收率为97.68%，RSD 1.4%(n=6)。结论：从刺五加抗疲劳活性部位As1中分离得到含量较高的刺五加苷B，作为质量控制的指标成分，并建立了刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷B含量测定方法。     

黄芪甲苷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡的保护作用及机制研究

目的研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,AsⅣ)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,研究AsⅣ对血清中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的影响,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,同时电镜观察心肌超微结构变化,Western blotting法检测心肌细胞胞浆内细胞色素C(Cyt C)蛋白表达。结果与模型组比较,AsⅣ可降低LDH漏出量(P0.05),并可明显降低MDA的量(P0.05),增强SOD活力(P0.05),TUNEL检测显示AsⅣ可降低缺血区周围心肌细胞的凋亡百分率;超微结构观察显示,与模型组比较,AsⅣ组的肌丝、线粒体和细胞核等细胞器形态有明显的改善;Westernblotting法检测结果显示,AsⅣ组的Cyt C释放量低于模型组(P0.05)。线粒体ATP敏感钾通道(mito KATPC)抑制剂5-羟癸酸钠(5-HD)减弱了AsⅣ的保护作用。结论 AsⅣ可以减少心肌缺血再灌注造成的心肌细胞凋亡,机制与其激活mitoKATPC,抑制细胞凋亡的线粒体信号转导途径有关。     

原子荧光光谱法测定丹参中砷和锑的含量

目的:建立丹参中药材的质量控制方法。方法:采用氢化物发生-双道原子荧光光谱法同时测定丹参药材中As(III),As(V),Sb(III)和Sb(V)的含量。结果:在最佳工作条件下As和Sb的最低检出限分别为90.31,57.82ng.L-1,RSD分别为2.01%和1.39%。丹参药材样品中As和Sb的形态分析,As(III)和As(V)的回收率分别为94.6%～97.2%和89.2%～102.0%,Sb(III)和Sb(V)的回收率分别为90.1%～93.5%和90.8%～98.4%。结论:本文提出的方法具有方便快捷、操作简单、精度高等特点,可作为丹参中药材的质量控制方法。     

龙牙楤木总皂苷抗心肌缺血作用研究

目的:观察龙牙楤木总皂苷(As)对心肌缺血动物及心肌细胞形态、搏动频率和存活率的影响。方法:采用异丙肾上腺素(Iso)致动物急性心肌缺血的方法,观察 As 对注射 Iso 后心肌组织结构、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、血清中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(Lev)含量的影响;采用原代培养大鼠心肌细胞技术,观察 As 对心肌细胞形态、搏动频率和存活率的影响。结果:As 对 Iso 所致大鼠心肌坏死有较好的防治作用,保护心肌组织中 SOD 活性,降低心肌组织中MDA 含量及血清中5-HT 和 Lev 含量;体外试验显示,加入 As 后心肌细胞搏动幅度明显增大,30.0μg/mL 组可增加心肌细胞的存活率。结论:As 对 Iso 所致的急性心肌缺血,具有明显保护作用;对心肌细胞具有正性肌力,负性变时效应,As 30.0μg/mL 时对心肌细胞具有明显保护作用。     

不孕不育症患者外周血EMAb、AsAb与AMH的检测价值研究

目的探讨外周血抗子宫内膜抗体(EMAb)、抗精子抗体(As Ab)与抗苗勒管激素(AMH)检测在不孕症患者中的检测价值。方法选取不孕症患者70例为不孕症组,另选取50例正常育龄妇女为对照组。采用酶联免疫吸附法检测2组外周血EMAb、As Ab、AMH水平。结果不孕症组外周血EMAb、As Ab、AMH水平及阳性率均高于对照组(P均0.05)。经受试者特异性曲线(ROC)分析,外周血EMAb、As Ab、AMH在不孕症患者中诊断灵敏性及特异性分别为81.4%和86.5%、82.3%和87.4%、82.2%和81.5%。结论 EMAb、As Ab、AMH与不孕症的发生有密切关系,外周血EMAb、As Ab和AMH检测对不孕症的诊断有一定的价值。     

川芎调节血脂防治家兔动脉粥样硬化症的研究

高脂血症是动脉粥样硬化症(As)的主要致病因素。笔者根据含有川芎的复方(参麝活络丸、大活络丸和脑脉通等)防治As,以及川芎兼治As的资料,研究了川芎对家兔高脂血症的影响及其机制。现报道如下。     

微波消解ICP-MS法对冬虫夏草不同部位5种重金属元素的分布研究

应用微波消解-ICP-MS法测定了20批冬虫夏草中5种重金属铜(Cu)、铅(Pb)、砷(As)、镉(Cd)、汞(Hg)元素的残留量,并分析了5种重金属在冬虫夏草不同部位的含量。结果表明,在《中医药-中药材重金属限量》ISO国际标准下,所有批次样品中Cu,Pb,Cd,Hg 4种重金属元素的残留量均符合要求,且该4种元素在子座中的含量均高于虫体中的含量;重金属As的超标率为88.24%,样品中As主要集中于虫体部分,虫体中As的含量是子座的7~12倍。该研究阐明了冬虫夏草中5种重金属的分布规律,同时分析了现行冬虫夏草重金属砷限量标准所存在的问题,并提出了相关建议,希望能为冬虫夏草重金属砷的限量标准制定提供参考。     

三氧化二砷联合维生素C抑制耐药性肺腺癌 裸鼠移植瘤生长机制的研究

目的:探索三氧化二砷(As2O3)联合维生素C(Vit C)对人耐药性肺腺癌裸鼠移植瘤抑制作用及其可能机制。方法:建立裸鼠人耐药性肺腺癌移植瘤模型,随机分为空白对照组,维生素C组(Vit C,250 mg.kg-1),As2O31组(1.5 mg.kg-1),As2 O3 2组(As2 O3 3 mg.kg-1),As2 O3联合Vit C组(As2 O3,1.5 mg.kg-1+VitC 250 mg.kg-1),ip 2周,观察并记录各组裸鼠移植瘤的生长情况及肿瘤体积和裸鼠体重的变化,计算肿瘤生长抑制率,用药2周后,取瘤组织进行病理学检查。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测移植瘤内生存素(Survivin)与血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果:Vit C组,As2O3 1,2组,As2O3联合Vit C组的抑瘤率分别为:3.42%,42.3%,66.25%,79.93%。与对照组相比,As2 O3各组和As2 O3+Vit C组治疗后肿瘤体积减少,瘤质量减轻,差异均有显著性(P<0.O1);与As2 O3单独用药组比较,As2 O3+Vit C联合用药组肿瘤体积,瘤质量明显减少(P<0.O1),抑瘤率明显增高;而Vit C组治疗后肿瘤体积及瘤质量没有明显减少。病理检查显示各As2O3组、As2O3+Vit C组治疗后可见肿瘤坏死增多。RT-PCR及Western,blot结果显示:联合组与As2O3组、Vit C组比较Survivin、VEGF条带强度显著减小。结论:As2O3与Vit C联合用药比As2O3单独应用抑制耐药性肺癌移植瘤生长的作用更强,二者具有协同抗肿瘤作用,其作用机制可能与下调Survivin及VEGF的表达有关。两者联用有望成为低毒高效的化疗组合。     

小儿化毒胶囊中雄黄药效和毒性成分的测定

目的测定小儿化毒胶囊(牛黄、珍珠、雄黄等)中雄黄药效(可溶性砷)和毒性成分(价态砷)的含有量。方法分别采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)法和HPLC-ICP-MS法,测定样品中可溶性砷和价态砷的含有量。结果 6种价态砷在样品中只检出了三价砷As(Ⅲ)和五价砷As(V),前者含有量更高。可溶性砷、As(Ⅲ)、As(V)的平均加样回收率分别为106.2%(RSD=8.3%)、108.0%(RSD=6.8%)、89.8%(RSD=5.1%),7批样品中可溶性砷含有量为0.31~0.90 mg/粒,价态砷含有量为0.12~0.52 mg/粒。结论该方法准确、重复性好,可为控制小儿化毒胶囊中雄黄的疗效和安全性提供依据。     

丹红注射液对动脉粥样硬化小鼠主动脉斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和甲基化转移酶的影响

目的:研究丹红注射液对高脂喂养的ApoE基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化(As)斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和DNA甲基化转移酶(DNMTs)的影响。方法:将40只8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠高脂饲料喂养6周后随机分为模型组、阿托伐他汀钙片(商品名:立普妥)(阳性对照组)、丹红注射液低剂量组和高剂量组(n=10),给予药物腹腔注射6周后。检测其血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平。行HE染色,图像分析测量小鼠主动脉As斑块面积。采用高效液相色谱(HPLC)法检测小鼠血清基因组甲基化水平,采用ELISA法检测各组小鼠血清DNMTs水平。免疫组化染色,图像分析测量小鼠主动脉As斑块内DNMT1的表达。结果:与模型组相比,丹红注射液高剂量和低剂量组小鼠血清TG水平明显降低(P0.01)、丹红注射液高剂量组LDL-C水平明显降低(P0.01),丹红注射液低剂量组HDL-C水平明显升高(P0.05),丹红注射液高剂量组小鼠动脉粥样硬化指数显著降低(P0.01)。丹红注射液高剂量和低剂量组小鼠血清基因组甲基化和DNMTs水平显著降低(P0.01)。丹红注射液与模型组相比,丹红注射液组As小鼠的校正后主动脉As斑块面积显著降低,以及斑块内DNMT1表达显著降低(P0.01)。结论:丹红注射液可降低As小鼠血脂水平,减少As斑块面积,其机制可能与降低As小鼠血清基因组甲基化水平和整体DNMTs水平和抑制As小鼠主动脉斑块DNMT1表达有关。     

舒郁抑斑方对慢性心理应激促发动脉粥样硬化大鼠的保护作用

舒郁抑斑方(SYYB)对伴有慢性心理应激的冠心病患者有较好的治疗作用。为观察SYYB对慢性心理应激促发大鼠动脉粥样硬化(athero-sclerosis,As)早期病变形成及其炎症反应的影响,采用高脂饵食+维生素D3(VD3)腹腔注射建立大鼠As早期病变模型(As),在此基础上采用不可预知慢性应激刺激法(As+CUMS),观察慢性心理应激是否加重大鼠病变及SYYB(6.6,13.2,26.4 mg·kg~(-1))的干预作用。采用悬尾实验和新奇实验法观察大鼠行为学改变,检测血清应激激素促肾上腺素(adrenocortico-tropic hormone,ACTH)、皮质醇(cortisol,Cor)、去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)的含量,称量胸腺、肾上腺的质量,综合评价SYYB对模型大鼠心理应激的影响。取主动脉弓HE染色观察血管组织病理改变,测定血清甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(HDL-C),评价SYYB对大鼠As病变的影响。检测血清高敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs CRP)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),评价SYYB对As大鼠炎症反应的影响。实验结果显示,与空白组相比,As组TC,TG含量增高,HDL-C明显降低,HE染色可见主动脉壁增厚。As+CUMS组TC,TG含量显著增高,HDL-C明显降低,HE染色可见主动脉弓内膜增厚,泡沫细胞形成,行为学评价及血清应激激素检测结果显示动物存在慢性应激反应,该实验As+CUMS模型复制成功。SYYB可降低血清中TC,TG含量,减轻主动脉泡沫细胞、钙化灶及炎性细胞浸润,对血清中ACTH和Cor,NE有明显的降低作用,同时有效降低了血清中动脉粥样硬化相关的炎性标志物hs-CRP,IL-1和IL-6。提示SYYB对心理应激促发As大鼠的保护作用,其作用与改善神经-内分泌网络平衡及调节相关炎症反应有关。     

血管内皮功能障碍与动脉粥样硬化研究进展

对血管内皮功能障碍与动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)的关系、治疗方法及中药通过调节血管内皮功能障碍治疗As的研究进行文献整理和分析.以血管舒缩、内皮功能障碍、As等为主题词进行文献检索,总结血管内皮功能障碍与As的关系及近10年来国内外治疗血管内皮功能障碍的研究进展.总结了动脉粥样硬化与血管内皮功能障碍之间的关系,调节血管内皮功能障碍从而治疗动脉粥样硬化的方法大致有保护内皮的天然物质替代疗法、内皮种植及基因治疗、补充外源性一氧化氮(NO)、拮抗内皮素(ET)等;并总结了中药单味药、中药复方通过调节血管内皮功能治疗As的研究进展.结果表明:血管内皮细胞分泌的血管舒缩物质如NO/ET与As关系的深入研究治疗是防治As发生和发展的重要研究方向.中药在保护内皮功能、调节内皮活性物质分泌方面具有显著作用,但发挥调节血管功能障碍药效的物质基础和作用机制研究缺乏深度,进一步探讨中药抗As的作用机制,发挥中药复方多靶点调节的优势,开发基于调节血管功能障碍的抗As的中药,在中医药防治心脑血管疾病研究领域具有广阔前景.     

微波消解-原子荧光光谱法测定丹参中砷、汞的含量

目的:采用微波消解-原子荧光光谱法,建立丹参中重金属砷(As)、汞(Hg)的检测方法。方法:通过微波消解法处理丹参样品,提取As、Hg。采用原子荧光光谱法测定As、Hg的含量。结果:As和Hg的检测限分别为5.2和0.6μg/kg,标准曲线相关系数(r)分别为0.9996和0.9985,加样回收率均大于97%。结论:该方法样品处理简单,仪器操作简便,灵敏度高,可作为丹参中As、Hg的含量测定方法。     

基于毒性视角考察水飞雄黄的质量情况及其影响因素

对收集到的市售3个生产厂家的水飞雄黄采用HPLC-ICP-MS分析其砷的形态及不同形态砷的含量。结果发现,3家企业游离As(Ⅲ)均未超过药典限值,但按游离砷[As(Ⅲ)+As(Ⅴ)]的总值计算,1家企业超出药典限值。现有药典游离砷检定方法为古蔡氏检砷法,存在一定局限性,未能有效规避三价砷以外的其余价态砷伴生的毒性风险。随后考察了水分和温度对水飞雄黄中可溶性砷的含量及形态的影响。结果表明:(1)水分对水飞雄黄中可溶性砷的含量有显著影响,随着水分的含量的增加,可溶性砷的含量呈上升趋势,形态未发生改变,仅有As(Ⅲ)和As(Ⅴ);(2)单纯性的温度因素,样品中可溶性砷的含量变化存在增多趋势,最大增量分别是As(Ⅲ)2.489 mg·g~(-1),As(Ⅴ)0.546 mg·g~(-1);(3)当水分与温度共同作用时,样品中可溶性砷的增加量发生显著变化,最大增量分别是As(Ⅲ)23.690 mg·g~(-1),As(Ⅴ)0.468 mg·g~(-1)。综合分析认为:雄黄质量容易受到水分和温度的影响,单纯的水分,以及水分和温度共同作用均能显著改变雄黄中可溶性砷的含量,水分为高危因素。现行《中国药典》2015年版中游离砷的检测方法存在局限性,新的技术应当被引进;于此同时,现行药典中雄黄药材项下未设置水分检查项,应当补足。     

丹参活性成分在抗动脉粥样硬化中的作用与机制研究进展

心脑血管疾病是全球人类首要致死因素,动脉粥样硬化(As)是其主要病理基础。As发病机制复杂,临床使用的化学药物疗效单一,价格昂贵,不良反应较大。作用靶点多、不良反应少、价廉易得的中草药已成为防治心脑血管疾病的研究热点,丹参作为代表药物在As防治方面具有独特作用。该文章从中医与As关系以及丹参主要有效组分抗As活性方面,综述了丹参抗As的药理学研究进展,重点介绍了其水溶性组分丹酚酸B和丹酚酸A、脂溶性组分丹参酮ⅡA和隐丹参酮抗As活性与作用机制,以期为丹参抗As应用提供参考。     

基于HPLC-ICP-MS的冬虫夏草(繁育品)干品及鲜品中砷形态、价态研究及风险评估北大核心CSCD

该文首次对冬虫夏草(繁育品)干品和鲜品中砷形态、价态进行对比研究,以期明确冬虫夏草(繁育品)中砷的具体形态、价态及其安全性。采用仿生提取法结合HPLC-ICP-MS对干品和鲜品样品中砷甜菜碱(AsB)、亚砷酸根(AsⅢ)、二甲基砷(DMA)、砷胆碱(AsC)、一甲基砷(MMA)和砷酸根(AsⅤ)进行研究。HPLC色谱柱为DioncxIonPac^(TM)AS7阴离子交换柱,流动相为100 mmol·L^(-1)碳酸铵-水,室温下梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1);HPLC与ICP-MS联用进行测定;结合化学计量学对砷含量特征进行分析;采用暴露限值法(MOE)对样品中无机砷的健康安全风险进行评估。方法学验证结果表明,6种砷化合物在10~500 ng·mL^(-1)线性关系良好(R^(2)>0.999),精密度RSD为1.8%~3.0%,回收率(n=6)为84.15%~98.28%,重复性RSD为6.4%~7.7%,样品在10 h内稳定性RSD为8.3%~14%。30批次冬虫夏草(繁育品)干品及鲜品中检出痕量AsⅢ和AsⅤ,其他形态、价态砷均未检出,其中干品AsⅢ为0.019~0.040 mg·kg^(-1),AsⅤ为0.024~0.061 mg·kg^(-1);鲜品AsⅢ为0.0023~0.0061 mg·kg^(-1),AsⅤ为0.008~0.016 mg·kg^(-1)。风险评估结果表明,干品及鲜品无机砷的MOE均远大于1,无机砷潜在的健康安全风险较小。该研究建立的冬虫夏草(繁育品)中6种砷化合物HPLC-ICP-MS检测方法高效快速、准确性及稳定性较好,研究结果为冬虫夏草(繁育品)安全性及质量可控性奠定基础。