抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的影响

目的 :观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化时肝组织 型胶原 ( - C)、层粘蛋白 (L N)以及肝窦毛细血管化的影响。方法 :大鼠皮下注射 2 5 0 m l/ L CCl4 制备肝纤维化模型 ,并同时给于秋水仙碱、抗纤软肝颗粒小和大剂量治疗 ,用光镜和电镜观察肝组织病理变化 ,免疫组织化学法检测肝组织 - C、L N。结果 :抗纤软肝颗粒能有效抑制 - C、L N的生成和沉积 (P <0 .0 1) ,改善肝纤维化大鼠肝组织病理变化 (P <0 .0 1) ,减轻肝窦毛细血管化程度。结论 :抗纤软肝颗粒能抑制肝窦毛细血管化的形成 ,产生抗肝纤维化的作用。     

MMP-1、TIMP-1与实验性肝纤维化形成过程中基质转换的关系及抗纤软肝颗粒的干预作用

目的：动态观察肝纤维化形成过程中肝组织MMP-1、TIMP-1 mRNA及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达，以探讨MMP-1、TIMP-1与基质转换的关系，以及抗纤软肝颗粒对它们的影响。方法：将大鼠随机分为正常对照组、CCl4模型组与治疗组。采用250ml／L CCl4在大鼠皮下注射制备肝纤维化模型，并同时给与抗纤软肝颗粒治疗，各组分别于第3、5、7、9、11周分批处死大鼠，取肝脏标本。采用免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原，原位杂交的方法检测MMP-1 mRNA、TIMP-1 mRNA。结果：在肝纤维化形成过程中：①胶原持续增高，治疗组较同期模型组比较有不同程度的降低。②MMP-1 mRNA的表达先逐渐增强，后期有所下降；治疗组较同期模型组比较有不同程度的增强。③TIMP-1 mRNA的表达持续增强，治疗组较同期模型组比较有不同程度的减弱。TIMP-1 mRNA与Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达呈显著正相关（P〈0．01）。结论：在肝纤维化过程中TIMP-1通过对MMP-1活性的抑制，导致ECM在肝脏内的过度沉积；抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达，抑制TIMP-1的表达。促进肢原降解而产生抗肝纤维化作用。     

四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化的形成

目的：观察四氯化碳（CCl4）诱导的大鼠肝纤维化过程中肝窦毛细血管化的形成过程,探讨其与肝纤维化的关系。方法32只清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组,肝纤维化模型组,正常对照组大鼠腹腔注射0．9％氯化钠溶液2 mL/kg ,模型组大鼠腹腔注射50％ CCl4-蓖麻油混合液2 mL/kg ,每周2次,共8周;分别于造模第2、4、6、8周处死大鼠,观察肝组织炎症及纤维化程度,放射免疫法检测血清中透明质酸（HA）的含量,透射电镜观察肝窦窦壁结构,S-P 免疫组织化学检测各组大鼠肝组织CD31、层黏连蛋白（LN）、IV型胶原（Col-IV）的表达。结果肝脏组织学证实CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型构建成功,6周可见纤维间隔形成;透射电镜显示,CCl4诱导2周时,部分肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cells ,LSEC）窗孔减少,内皮下未见基底膜（Basement membrane,BM）,随着造模的进程,LSEC 窗孔进一步减少,部分甚至消失,第6、8周时局部肝窦内皮下形成连续的BM。同时,随着肝纤维化的进程,HA浓度逐渐升高,肝窦内皮细胞表面标志物CD31及基底膜主要成分Col-IV、LN表达逐渐增强。结论在CCl4诱导大鼠肝纤维化过程中,肝窦毛细血管化是逐渐形成的,LSEC失窗孔早于纤维间隔的形成,而肝窦内皮下基底膜出现在纤维间隔形成以后。     

肝窦毛细血管化在二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化门静脉高压形成中的作用

目的 研究肝窦毛细血管化在二甲基亚硝胺(DMN)大鼠肝纤维化门静脉高压形成中的作用。方法经4周12次腹腔注射DMN制备火鼠肝纤维化模型,应用电镜技术、免疫组织化学方法结合大鼠门静脉压力测定,24周动态分析肝纤维化形成过程中肝窦毛细血管化与门静脉压力变化的相关性。结果 大鼠门静脉压力随着造模的进行不断升高,造模4周时达(1.10 ±0.18)kPa,明显高于对照组(0.52±0.04)kPa(t=6.41.P<0.0 1)。造模停止后,大鼠门静脉压力逐渐恢复正常。其动态变化与电镜下肝窦毛细血管化的变化规律一致;与反映肝窦内皮表型改变的第Ⅷ因子相关抗原的动态变化成正相关(r=0.833,P<0.01);与反映肝窦内皮下基底膜形成的层黏连蛋白的动态变化成正相关(r=0.953,P<0.01);与反映肝窦壁星状细胞活化收缩的α-平滑肌肌动蛋白的动态变化成正相关(r=0.919,P<0.01)。结论 肝窦毛细血管化是DMN肝纤维化模型门静脉高压产生的主要原因。     

抗纤合剂对血吸虫病肝纤维化的防治作用研究

目的 :观察抗纤合剂的抗肝纤维化作用。方法 :用日本血吸虫尾蚴感染新西兰兔 ,制成肝纤维化模型 ,病兔均以吡喹酮顿服杀虫治疗 ,继之中药组开始服用抗纤合剂治疗肝纤维化 ,并与秋水仙碱组及 0 .9%Na Cl组比较。RIA法检测血清 型前胶原 (PC )、透明质酸 (HA) ,苏木精 -伊红、天狼红染色观察胶原沉积 ,通过原位杂交检测基质金属蛋白酶 - 1(MMP- 1)和基质金属蛋白酶组织抑制剂 - 1(TIMP- 1)的表达 ,并作 、 型胶原和转化生长因子 β1 (TGF- β1 )免疫组化染色。结果 :中药组 PC 、HA水平降低 (P <0 .0 5 ) ,图像分析显示肝组织 、 型胶原和TGF- β1 表达减弱 (P <0 .0 5 ) ,肝组织 MMP- 1m RNA的表达增强 ,TIMP- 1m RNA表达减弱 (P <0 .0 5 ) ,肝纤维化程度减轻。结论 :抗纤合剂具有抗实验性血吸虫病兔肝纤维化的作用。     

抗纤软肝颗粒对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒(KXRG)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响。方法:传代培养的HSC-T6(肝星状细胞系)与KXRG(1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml)及其药物血清(5%、10%、20%)共同培养72小时后,应用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪测定HSC细胞周期各时相的DNA含量。结果:KXRG及药物血清均能显著抑制HSC的增殖,使细胞周期阻滞于S期,且2.5mg/ml药物和10%药物血清作用最强(P0.01)。结论:KXRG通过抑制HSC的活化,阻滞其细胞周期的正常进行,进而抑制HSC增殖,从而起到抗肝纤维化的作用。     

秋水仙碱对肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1及其抑制因子-1表达的影响

目的 观察秋水仙碱对纤维化肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响,从胶原降解的角度探讨秋水仙碱对肝纤维化有无逆转作用及可能存在的机制.方法 制备免疫性大鼠肝纤维化模型,并给予秋水仙碱治疗;通过RT-PCR检测MMP-1、TIMP-1的表达,并作Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化以及Masson胶原染色.结果 发现秋水仙碱对肝纤维化大鼠MMP-1的表达无明显影响(P>0.05),但可以抑制TIMP-1的表达(P<0.05),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P<0.05);然而在病理形态学的观察中,未发现秋水仙碱治疗组与肝纤维化模型组之间存在的显著性差异(P>0.05).结论 秋水仙碱可以抑制纤维化肝脏TIMP-1的表达,从而增强间质胶原酶的活性,促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用,但其作用有限.     

抗纤颗粒对肝纤维化大鼠肝组织胶原蛋白及血清TNF-α和γ-IFN含量的影响

目的 观察抗纤颗粒预防大鼠肝纤维化的疗效并探讨作用机理。方法 采用二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化模型，观察抗纤颗粒干预前后肝胶原蛋白含量、血清INF-α和γ-IFN含量的变化。结果 抗纤颗粒预防组较模型组肝胶原蛋白含量、血清INF-α含量下降（P〈0．05），γ-IFN含量上升（P〈0．05）。结论 抗纤颗粒对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化有预防作用，其部份机理为通过调节细胞因子的含量，而达到抗肝纤维化的目的。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖的影响

目的 :研究抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖的影响。方法 :传代培养的大鼠肝星状细胞系 (HSC- T6 )与中药复方抗纤软肝颗粒 (终浓度为 5 m g/ ml、2 .5 mg/ m l、1.2 5 mg/ ml)及药物血清 (5 %、10 %、2 0 %)共同培养 48h后 ,应用 MTT法及流式细胞仪测定细胞增殖。结果 :抗纤软肝颗粒无论是药物还是含药血清 ,均能显著抑制 HSC-T6增殖 ,并使细胞周期阻滞于 G1 期 ,在安全浓度范围内 ,5 m g/ ml组和 10 %药物血清组作用最强 (P <0 .0 1,<0 .0 5 )。结论 :抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制可能在于阻滞细胞周期的进行 ,从而抑制 HSC增殖。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞凋亡的影响

探讨抗纤软肝颗粒对肝星状细胞(HSC)凋亡的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测Bcl-2/Bax.结果:TUNEL法及流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物及含药血清均可诱导HSC凋亡(P＜0.05);并能下调凋亡抑制分子Bcl-2,上调促凋亡分子Bax(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒可下调Bcl-2/Bax比率,以增加细胞对凋亡的敏感性,从而促进HSC凋亡.     

抗纤软肝冲剂预防大鼠肝纤维化的实验研究

目的:观察抗纤软肝冲剂对肝纤维化的预防作用并探讨其机理。方法:采用四氯化碳、高脂、高胆固醇、低蛋白等复合因素制造肝纤维化模型,同时用抗纤软肝冲剂治疗,观察其对肝纤维化指标的影响,以秋水仙碱作为对照,结果:抗纤软肝冲剂对肝纤维化大鼠有升高白蛋白(Alb),降低谷丙转氨酶(ALT)和球蛋白(G)的作用;可调整机体免疫功能,降低血清免疫复合物(IC);具有显著降低血清透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、肝脏羟脯氨酸(Hyp)的作用;可以改善肝脏病理,抑制纤维化形成。结论:抗纤软肝冲剂具有确切的预防肝纤维化的作用。     

活血化瘀类中药对实验性血吸虫肝纤维化兔肝组织金属蛋白酶—1及其抑制因子—1mRNA表达的影响

目的观察活血化瘀类中药对肝组织金属蛋白酶-1(MMP-1)及其抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达的影响,以及对金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白质表达的影响,从胶原降解的角度探讨中药抗纤维化的机理.方法用血吸虫尾蚴120±1条经皮感染新西兰白兔,3个月后经病理证实已形成典型血吸虫肝纤维化,实验动物分4组,每组8只,一组灌服中药,一组灌服秋水仙碱,病理对照组和正常对照组灌服生理盐水.3个月后处死动物,取肝组织切片,采取原位杂交法检测MMP-1和TIMP-1mRNA的表达,用免疫组化法检测MMP-2蛋白的表达,并作Ⅰ、Ⅳ型胶原的免疫组化以及天狼红胶原染色.结果与病理对照组相比,活血化瘀类中药和秋水仙碱治疗组,肝组织胶原蛋白总合量,Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白含量均显著减少.活血化瘀类中药组,MMP-1mRNA表达明显增加,TIMP-1mRNA的表达明显减少,MMP-2蛋白表达无显著差异.秋水仙碱组,TIMP-1mRNA的表达明显减少,MMP-1、MMP-2的表达无明显差异.结论活血化瘀类中药抗纤维化的作用机理除了减少胶原蛋白的合成外,还与其降低MMP组织抑制因子的表达,增加金属蛋白酶的活性,促进问质胶原蛋白的分解有关.     

抗纤软肝冲剂的制备及质量研究

目的：介绍抗纤软肝冲剂的制备方法并对其进行定性定量的研究。方法：用水提醇沉法制备抗纤软肝冲剂;对方中山楂进行薄层定性鉴别;对方中主药丹参所含主要有效成份原儿茶醛的含量进行了双波长薄层扫描测定。检测波长为λｓ＝２８０ｎｍ,参比波长为λＲ＝４００ｎｍ;采用硅胶Ｇ薄层板,展开剂为氯仿－丙酮－甲酸（８：１：１）。结果：山楂薄层鉴别结果显示供试品色谱与对照品及对照药材色谱在相应的位置上,显示相同颜色斑点;双     

白藜芦醇对动脉粥样硬化兔心肌纤维化和基质金属蛋白酶2、组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达的影响

目的 观察白藜芦醇对动脉粥样硬化兔心肌间质胶原纤维变化和基质金属蛋白酶2及组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达水平的影响.方法 33只新西兰白兔随机分为对照组、模型组和白藜芦醇干预组.观察心肌间质胶原纤维的变化,测量心肌间质胶原容积分数.逆转录聚合酶链反应检测心肌组织基质金属蛋白酶2及组织型基质金属蛋白酶抑制剂2 mRNA水平.结果 与对照组相比,模型组胶原纤维明显增多、增粗、排列紊乱,呈不规则网状或粗块状沉积于心肌间质,胶原容积分数和基质金属蛋白酶2表达增多,组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达减少(P<0.01).白藜芦醇干预能显著减少上述指标的改变.结论 动脉粥样硬化进程中,存在着心肌纤维化、基质金属蛋白酶2表达增多和组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达减少等现象,白藜芦醇能减轻基质金属蛋白酶2/组织型基质金属蛋白酶抑制剂2表达的失衡,改善心肌纤维化.     

复方黄芪颗粒抗肝纤维化机制的实验研究

目的:探讨复方黄芪颗粒(FFHQKL)有无抗肝纤维化作用及作用机制.方法:应用Chevallier半定量计分系统,病理组织学观察,结合细胞外基质(ECM)特殊染色动态观察高、低剂量FFHQKL治疗猪血清诱导肝纤维化模型后各时间段肝组织学及ECM量的变化,评估复方黄芪颗粒的抗肝纤维化疗效;应用免疫组织化学染色方法观察造模结束时以及药物治疗各时间段肝组织内基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及其抑制剂(TIMP-1)表达量的变化.结果:与模型组比较,高、低剂量FFHQKL治疗2个月、3个月结束时,肝组织Chevallier纤维化评分均明显减少(P＜0.01).FFHQKL高、低剂量治疗组在治疗第2个月结束时,TIMP-1蛋白表达明显减弱,MMP-13蛋白表达明显增强,治疗第3个月结束时,上述改变更加显著,与模型组比较差异有显著性意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:FFHQKL可在蛋白水平增强MMP-13酶蛋白的表达,同时抑制TIMP-1酶蛋白的表达,促进ECM的降解,从而达到逆转肝纤维化之疗效.     

抗纤软肝颗粒对血小板源生长因子诱导的肝星状细胞增殖的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对血小板源生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞(HSC)增殖的影响.方法:采用无血清培养,不同浓度的KXR温育HSC 24 h后,PDGF-BB(10 ng/ml)刺激24 h,再加入上述浓度的KXR 3 h后,又加入PDGF-BB(10 ng/ml)作用5 min,然后收集细胞.采用细胞计数法及流式细胞仪测定细胞增殖及细胞周期.结果:无血清培养显示该方对于PDGF诱导的细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.01).流式细胞术分析提示KXR能抑制PDGF诱导的HSC DNA合成期及合成后期和分裂期DNA百分含量,阻断细胞由静止期/DNA合成前期向DNA合成期转化,呈剂量依赖性(5 mg/ml组作用最显著,P<0.01).结论:KXR能抑制PDGF诱导的HSC增殖.     

黄酒多酚对LDLR－/－小鼠MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达和动脉粥样硬化斑块的影响

目的　观察黄酒是否可以通过黄酒多酚发挥对动脉粥样硬化斑块的抑制作用并探讨其可能机制。方法　40只6周龄雄性低密度脂蛋白受体敲除（LDLR^－/－）小鼠,高脂饲料喂养诱导形成动脉粥样硬化模型,随机分为高脂对照组、瑞舒伐他汀组、黄酒多酚10　mg/（kg·d）组、黄酒多酚30　mg/（kg·d）组和黄酒多酚50　mg/（kg·d）组,每组8只,分别予以无菌水、10　mg/（kg·d）瑞舒伐他汀和10、30、50　mg/（kg·d）黄酒多酚干预。16周后处死小鼠,检测血脂,观察胸腹主动脉粥样硬化情况,Western　blot测定胸主动脉组织内基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）及组织型基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP-2）的表达,明胶酶谱法测定主动脉弓动脉粥样硬化处MMP-2和MMP-9的活性。结果　与高脂对照组相比,总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）在黄酒多酚组和瑞舒伐他汀组明显下降（P<0.01）,甘油三酯（TG）在瑞舒伐他汀组明显下降（P<0.01）,在黄酒多酚组差异不明显（P>0.05）,在黄酒多酚组与瑞舒伐他汀组差异明显（P<0.05）;5组间高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）水平差异无统计学意义（P>0.05）。与高脂对照组相比,主动脉粥样硬化面积在瑞舒伐他汀组和黄酒多酚10、30、50　mg/（kg·d）组分别减少74.14%、18.51%、40.09%、38.42%（P<0.01）,不同浓度黄酒多酚组主动脉粥样硬化面积与瑞舒伐他汀组比较差异显著（P<0.01）。黄酒多酚和瑞舒伐他汀均能明显抑制MMP-2、MMP-9的表达和活性（P<0.01）,增强TIMP-1、TIMP-2的表达（P<0.01）。结论　黄酒多酚具有类似瑞舒伐他汀的作用,能够调节血脂,在抑制MMP-2、MMP-9表达和活性的同时增强TIMP-1、TIMP-2的表达,减轻动脉粥样硬化斑块的形成,这可能是黄酒对心血管系统的保护机制之一。