末端脱氧核苷酸转移酶在白血病及淋巴瘤分型中的应用

白血病和淋巴瘤的精确分型对临床诊断、选择治疗方案及评价疗效等具有重要意义。目前,除传统的形态及组织化学分类外,又发展了一些新的技术,如细胞表面标志及生化标志。末端脱氧核苷酸转移酶(以下简称TdT)作为一种细胞内生化标志已受到广泛重视。 TdT 简介 DNA在进行自身复制时,双链解开为两条单链,在DNA聚合酶的催化下,以每条单链为模板,各自     

小牛胸腺制剂对狗急性放射病实验治疗的初步观察

为了加强军事医学的科学研究,兹将我院1977年以来,用小牛胸腺制剂对照射动物进行抗放实验研究情况,总结如下: 一、实验条件与方法: (一)动物选择:实验动物为陕西狗,以雄性为主,年龄1～5岁,体重10～20kg,照前训养2周,一般情况与化验检查正常,并经驱虫治疗,选用动物随机分组。 (二)照射条件:钴~(60)丙种射线双侧均匀照射,剂量率50.18～60.91R/min,照射剂量为300rad,动物照射后立即由西安某军医大学用汽车运回我院(200公里),     

新CpG寡聚脱氧核苷酸体内抗肿瘤与增强免疫活性研究

目的:探讨新设计CpG寡聚脱氧核苷酸(ODN)在小鼠体内的抗肿瘤作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法:建立C57BL/6小鼠腹腔、皮下荷黑素瘤肿瘤模型,腹腔注射CpG ODN,观察荷瘤鼠生存时间、肿瘤生长曲线,计算抑瘤率.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中白细胞介素(IL)12和免疫球蛋白E(IgE)含量;3H-TDR掺入法检测脾脏B细胞、T细胞增殖活性;51Cr释放法检测NK细胞杀伤活性;中性红法检测腹腔巨噬细胞吞噬功能.结果:CpG10,CpG11能明显延长腹腔接种肿瘤小鼠的生存时间,与阳性对照CpG1826相比P＜0.01;二者平均抑瘤率(皮下荷瘤鼠)分别为(55.2±2.3)%与(40.7±1.7)%,显著高于CpG 1826 [抑瘤率(17.8±7.6) %](P＜0.05,P＜0.01).CpG10/CpG11可促使荷瘤小鼠血清IL-12含量显著升高( P＜0.01),IgE含量显著下降( P＜0.01);明显刺激B细胞、T细胞增殖能力以及NK细胞的杀伤活性( P＜0.01),对腹腔巨噬细胞的吞噬功能有显著提高( P＜0.01).CpG10免疫增强活性较CpG1826更强( P＜0.05).结论:CpG ODN能激活荷瘤鼠抗肿瘤免疫反应,从而抑制小鼠黑素瘤的生长,新结构寡核苷酸的CpG10呈现优于阳性对照的良好抗肿瘤免疫效应.     

小牛胸腺DNA、DNP受照射后转录RNA的蛋白质合成

一些文献报导,照射可引起DNA转录能力的变化,从受照射的DNA所合成的RNA,其链长及核苷酸组成都有改变。作者设想这种改变可能影响RNA的转译活力。本文报告了体外照射的小牛胸腺DNA及DNP所转录的RNA的转译能力。作者采用Nirenberg的大肠杆菌无细胞的蛋白质合成系统来研究从小牛胸腺DNA或DNP合成的RNA的转译活力。在此系统中,随RNA合成之后进行蛋白质合成,~3H标记的氨基酸掺入到蛋白质中。若在此系统中除去模板或RNA聚合酶,则标记氨基酸的掺入量降到很低。说明这种蛋白质合成确实是依赖于体外合成的RNA的。从小牛胸腺DNA或DNP合成的     

λDNA的分离纯化

报道了λ噬菌体在大肠杆菌Ｗ１４８５中增殖，裂解的条件。用５’－磷酸二酯酶与Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００凝胶过滤纯化的λＤＮＡ，在琼脂糖凝胶呈一条带。经自行纯化的ＥｃｏＲⅠ限制性内切酶切割后，琼脂糖凝胶电泳出现了６个片段，证明了该酶对它具有５个切点。     

用Percoll法分离小鼠胸腺细胞

在生化实验中可以利用细胞的比重、体积、表面电荷及对某种材料的粘附性等性质的差异达到分离细胞的目的。常用的方法有蔗糖密度梯度法、Ficoll法、Percoll法等。有人报道用Percoll方法可分离死细胞与活细胞。我们对此进行了试验。1.试剂(1) 瑞典产Percoll。(2) 5mM Tris-HCl～5mM CaCl_2。(3) 1.25M蔗糖Tris缓冲液:取21.3g蔗糖用(2)液溶解至50ml。1MTris调pH至7.2～7.4。(4) 0.25M蔗糖缓冲液:取1.25M蔗糖液用(2)液稀释5倍即成。1MTris调pH至7.2～7.4。     

应用超过滤技术对小牛胸腺素组份_5的分离

近年来胸腺素在临床上作为一种免疫调节剂,已用于儿童免疫缺陷病,恶性肿瘤,自身免疫性疾病,某些细菌、病毒和霉菌感染以及老年性疾病的防治等。 我院根据Goldstein、Hooper及刘士廉等的方法,改用超过滤方法,提取出小牛胸腺素组份_5(THF_5),现介绍如下:     

从麦胚中快速分离纯化麦胚凝集素(摘要)

用改良的鸡卵类粘蛋白-Sepharose 4B亲和层析法从麦胚中纯化的麦胚凝集素有较高的血凝活性;每100g麦胚丙酮粉的麦胚凝集素平均产率为58.74±6.56ms;纯化的麦胚凝集素在SDS-聚丙烯酰胺凝胶     

组蛋白甲基转移酶SET7的原核表达及纯化鉴定

目的：原核表达并纯化组蛋白甲基转移酶 SET7。方法以乳腺文库为模板,PCR 扩增 SET7基因,克隆到 pGEX-KG 载体,构建 pGEX-KG-SET7;经酶切鉴定后转化进行小量诱导,通过 SDS-PAGE 检测融合蛋白 GST-SET7的纯化效果。结果DNA 测序结果表明,pGEX-KG-SET7原核表达载体构建成功。SDS-PAGE 检测显示获得相对分子质量为72×103的融合蛋白。结论纯化得到原核表达的 GST-SET7融合蛋白,为进一步研究 SET7在乳腺癌中的功能奠定了基础。     

淋巴瘤细胞株Raji摄取18F-氟脱氧葡萄糖和18F-氟脱氧胸腺嘧啶核苷的体外实验研究

目的研究测定人淋巴瘤细胞株Raji摄取18F-氟脱氧葡萄糖（18F—FDG）和18F-氟脱氧胸腺嘧啶核苷（18F—FLT）的方法并比较两者的差异。方法在不同条件下测定淋巴瘤细胞株Raji对18F—FDG和18F—FLT的细胞结合率：细胞数量1×10^5-1×10^7/瓶;18F-FDG和18F—FLT的放射性活度1．85—29．6kBq;反应时间20—120min;葡萄糖浓度0～11．1mmol／L。结果每瓶1×10^7个细胞、加入3．7kBq18F．FDG、葡萄糖浓度在0—2．78mmol／L、作用100min,18F-FDG细胞结合率达到（50．42×1．07）％;每瓶1×10^7个细胞、加入3．7kBq 18F—FLT、作用100min,18F—FLT细胞结合率达到（59．48±0．77）％;18F—FDG和18F-FLT的细胞结合率之间具有统计学差异（F=1192．805,P〈0．001）。结论Raji细胞与18F—FDG的结合率与细胞数量、作用时间及葡萄糖浓度有关,与18F-FDG的放射性活度无关;Raji细胞与18F-FLT的结合率与细胞数量和作用时间有关,与18F-FLT的放射性活度及葡萄糖浓度无关;同等条件下,Raji细胞对18F-FLT的细胞结合率高于18F—FDG。     

HLA—DR分子的分离纯化

目的：纯化HLA－DR。方法：纯化抗HLA－DR单克隆抗体1243并与CNBr活化的Sepharose4B偶联亲和柱,应用免疫亲和层析方法纯化HLA－DR分子。结果;从5g HLA-DR阳性的人B淋巴瘤细胞系RAJI裂解液中得到20μHLA-DR分子。它们以二聚体形式存在,能与构象依赖型单抗L243进行结合,煮沸变性后分开为α和β两条单链。这为MHCⅡ类分子抗原表位研究奠定了基础。     

重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶的表达纯化和鉴定

目的对重组人甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶（recombinant human betaine-homocysteine S-methyltrans-ferase,rhBHMT）进行表达纯化和鉴定。方法采用基因重组技术在原核系统表达BHMT蛋白,镍螯合亲和层析和Sephacryl S200层析进行纯化。产物经SDS-PAGE、HPLC、N端氨基酸序列检测与活性验证。结果终产物rhBHMT纯度达97.9%。相对分子质量为45 000,N端氨基酸序列与理论序列一致。结论从工程菌中获得具有活性的高纯度rhBHMT,产物均一,工艺稳定,为中试放大提供可靠依据。     

人心与人脑肌酸激酶同工酶的分离纯化

肌酸激酶(CK,EC2、7、3、2)是参与机体能量代谢的主要酶之一,其同工酶包括MM、BB、MB及线粒体(Mi-CK)等几种类型。MM主要存在于骨骼肌,BB存在于脑及平滑肌中,MB为心肌梗塞病人血清中出现的异聚体同工酶,临床上血清CK-MB的检测在     

限制性内切酶BamHI的分离纯化

1975年 Wilson 和 Young 首先从解淀粉芽孢杆菌 Bacillus amyloliquefaciens H 菌株分离出限制性内切酶 Barn HI。目前,它已是 DNA 分子体外重组中,泛应用的一种工具酶,其碱基识别序列为:5′GGATCC-3′。我们参照中国科学院生物物理所三室四组的方法,并做了某些修改,从 Bacillus     

限制性内切核酸酶EcoRI的分离纯化

限制性内切核酸酶EcoRI是分子生物学和遗传工程研究工作中重要的工具酶之一。从六十年代末发现以来,人们在其分离纯化方法的简化上曾做过不少的努力,力图使之简化,但效果不显著。1978年Greene等人报导,在盐离子强度足够的情况下,将酶的粗提液直接上磷酸纤维素柱时,其中的核酸不能同纤维素相结合,直接流出或洗柱时被除掉;核酸的存在不影响酶蛋白的分离纯化。我们参照Greene等人据此原理所设计的一种简便快速制备限制性内切核酸酶的方法制备了EcoRI,所得的酶制品比标准情况下使     

大鼠胰岛分离与纯化的实验研究

为探讨胰岛移植物的制备方法，采用胰管注射胶原酶、胰腺静止消化方法，分离成年大鼠胰岛，葡聚糖离心纯化。纯化后胰岛收获量为６１０～８２０个／胰腺，纯度达９２％；胰岛形态结构完整，内分泌细胞超微结构保持良好；对葡萄糖刺激反应胰岛素释放量是基础分泌水平的８倍；异种移植可逆转实验性糖尿病小鼠的高血糖达１周。结果表明：胰管注射胶原酶胰腺静止消化可获得高产量、高纯度、功能良好的胰岛。为临床胰岛移植开辟了新的途径。     

Dextran分离纯化大鼠胰岛的生物学特性

目的探讨一种分离纯化大鼠胰岛的方法,并评价该法分离得到的胰岛的生物学特性。方法常规外科手术分离胰腺。然后将其剪为1mm3左右碎块,置于0·9mg/ml胶原酶V37℃振荡消化10~17min,以含10%胎牛血清的Hank’s液终止消化。60目筛网过滤。Dextran T40非连续密度梯度离心纯化胰岛。纯化后的胰岛经DTZ染色,吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色、放射免疫分析检测胰岛素分泌量,纯化后的胰岛进行异种移植,检测降糖效果。结果胰岛分布于11?xtran和1640及11%和22?xtran界面之间,平均每只Wistar大鼠消化后可获得2181±14个胰岛,纯化后回收1826±24个胰岛,胰岛收获量达(85·7±5·9)%,纯度高达95%以上。胰岛对葡萄糖刺激有良好的反应性,纯化后胰岛异种移植,可逆转实验性糖尿病SD大鼠血糖7~10天。结论胶原酶消化,Dextran T40纯化是一种简单、高效的胰岛分离纯化方法,获得的胰岛有良好的生物学特性。     

限制性内切酶EcoRI的分离纯化

以大肠杆菌ＲＹ＿（１３），Ｋ＿（１２１１００）为酶源菌株，采用聚乙烯亚胺分离纯化了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ，并对λ－ＤＮＡ有５个专一的切割位点，将λ－ＤＮＡ切割成６个分子量不同的片段，经琼脂糖凝胶电泳后，可得６个迁移位置不同的条带。这些特性使它特别适合于作为ＤＮＡ结构功能等方面研究的工具酶。在遗传工程研究中，限制酶更起了决定性作用。     

双链寡聚脱氧核苷酸／载体复合物在急性肺损伤肺泡巨噬细胞中的体外转染效率研究

目的：利用圈套dsODNs／载体基因技术,通过体外实验研究NF-кB decoy dsODNs／载体复合物在急性肺损伤肺泡巨噬细胞中的体外转染效率,为进一步的体内试验提供依据,从而在细胞分子水平为临床防治全血性炎症反应综合征／急性肺损伤（ SIRS／ALI）筛选精确药物靶点和寻求高效合理的治疗方案提供前瞻性的实验依据。方法制备失血性休克致ALI的实验动物模型,以Lipofectamine2000为载体,对巨噬细胞分组进行dsODNs干预：对照组、脂多糖（ lipopolysaccharide ,LPS）组、Lipofectamine2000组（ Lipo2000组）、NF-κB dsODNs／Lipofectamine2000组（ dsODNs组）。乳酸脱氢酶（ LDH）试剂盒检测巨噬细胞（ AM）毒性;观察并测定巨噬细胞的转染活性、最佳转染浓度和转染效率。结果 dsODNs／Lipofectamine2000浓度比率为1∶5,体外转染6h时,转染效率、荧光强度和细胞状态最佳,细胞毒性适中。结论 NF-кB圈套dsODNs与Lipofectamine2000在一定浓度范围内能有效提高圈套dsODNs的转染效率,并且最大限度降低各种刺激对细胞造成的损伤,为SIRS／ALI的临床防治提供了新的思路和途径,为临床治疗ALI筛选特异性的炎症治疗药物和开发临床药物确定了精确靶点。     

血管内皮生长因子反义寡聚脱氧核苷酸与碘油混合栓塞治疗大鼠肝癌的实验研究

目的　观察血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)反义寡聚脱氧核苷酸 (antisenseoligodeoxynucleotides,asODN)抑制体外培养的Walker 2 5 6瘤细胞VEGF表达的情况 ,评价其与碘油混合行肝动脉栓塞对大鼠肝癌的治疗效果。方法　将反义和正义VEGF寡核苷酸加入无血清培养的Walker 2 5 6瘤细胞的培养液中 ,4 8h后酶联免疫吸附试验 (ELISA)法测定上清VEGF含量 ,并观察上清刺激血管内皮细胞 (ECV 30 4 )生长受抑情况。 30只Walker 2 5 6移植性大鼠肝癌模型数字法随机分成 3组 ,分别经肝动脉注入超液态碘油 (UFLP) 0 2ml(UFLP组 ,n =10 ) ,UFLP 0 2ml+VEGFasODN 3OD混合物 (UFLP +asODN组 ,n =10 ) ,生理盐水 0 2ml (对照组 ,n =10 )。于术前及术后第 7天行MR检查观察肿瘤的体积 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测瘤内及瘤周VEGFmRNA含量 ,免疫组织化学法检测肿瘤组织VEGF的表达及微血管密度 (microvesseldensity ,MVD)。结果　VEGFasODN可以明显抑制培养的Walker 2 5 6瘤细胞VEGF的表达。动脉栓塞实验中 ,UFLP +asODN组肿瘤生长率明显低于UFLP组和对照组 [分别为 (14 0 1± 33 8) %、(177 9± 6 4 9) %和 (4 0 3 9±6 9 4 ) % ;F =6 0 0 2 ,P <0 0 1]。瘤内及瘤周VEGFmRNA含量